HPCE法同時檢測果蔬及肉制品中硝酸鹽和亞硝酸鹽含量

李秀明，馬儷珍*

（天津農(nóng)學院食品科學與生物工程學院，天津 300384）

硝酸鹽和亞硝酸鹽與人類生活密切相關，常應用于腌肉制品中，具有防腐、發(fā)色等作用，而蔬菜作為人體日常維生素和纖維素的主要來源，含有較多的硝酸鹽，且硝酸鹽會在一定條件下還原為亞硝酸鹽[1]。大量的亞硝酸鹽進入人體后，將攜氧的肌紅蛋白轉變?yōu)楦哞F肌紅蛋白，使人體組織缺氧，出現(xiàn)腸源性青紫癥，引發(fā)急性中毒，同時也會和人體內的胺類結合生成亞硝胺等致癌物[2]，在給食品帶來良好色澤和貨架期的同時也給人體健康帶來了危害。根據(jù)國家限量標準，在肉制品中，硝酸鹽最大添加量為0.5 g/kg，亞硝酸鈉（鉀）最大殘留量均為30 mg/kg；亞硝酸鹽最大添加量為0.15 g/kg，除西式火腿類亞硝酸鈉最大殘留量不超過70 mg/kg，肉罐頭類不超過50 mg/kg，其他肉制品均不應超過30 mg/kg[3]。

硝酸鹽常用的檢測方法有鎘柱還原法、紫外分光光度法[4]、離子色譜法[5-6]等，亞硝酸鹽常使用鹽酸萘乙二胺法[7]。但操作過程耗時較長，操作相對繁瑣，對于需要快速檢測的樣品不適用。特別是測定硝酸鹽時常用的鎘柱還原法，實驗過程繁瑣，不易控制鎘柱的還原率，導致測定結果不準確。快速檢測技術雖已經(jīng)在逐漸發(fā)展[8]，但其靈敏度和精確度仍得不到保證，因此尋找一個簡便、快捷、高效的檢測方法具有十分重要的意義。

高效毛細管電泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE）是近幾年發(fā)展最快的分析方法之一，其利用高壓電場，以電滲流（electro-osmotic flow，EOF）為驅動力，毛細管為分離通道，根據(jù)各組分淌度及分配上的差異對樣品進行分離[9]。進樣端無死體積，分離過程中也無傳質阻力的影響，其EOF為平流，在分離中不發(fā)生峰展寬的現(xiàn)象，分離效率高；分離模式和檢測方式靈活多變；具有分析速度快、高選擇性、樣品及試劑消耗量少等優(yōu)點[10]；若使用緩沖容量較大的分離緩沖液，只需少量即可多次使用；環(huán)境友好方面，HPCE通常只需簡單的緩沖鹽即可實現(xiàn)分離，如硼酸鹽、磷酸鹽。目前HPCE多數(shù)用于蛋白質、氨基酸等的檢測[11-12]，在硝酸鹽和亞硝酸鹽檢測方面的研究應用相對較少。有部分學者將HPCE用于一些含鹽量低的樣品，如任紅星等[13]利用自組裝毛細管電泳裝置實現(xiàn)3 min內測定水中的和，李珊等[14]利用HPCE在6 min內使蔬菜樣品中和分離；Merusi等[15]考慮到硝酸鹽與亞硝酸鹽進入人體食物的來源，利用極低pH 2.5的緩沖液在5 min內實現(xiàn)對糖類及纖維素中硝酸鹽、亞硝酸鹽和草酸根的測定；Attila等[16]則將HPCE用于對唾液的測定中，為進一步研究提供基礎，且體現(xiàn)出HPCE分離效率高的優(yōu)點。對于基質較為復雜的肉類樣品，ztekin等[17]利用涂有聚乙烯亞胺的毛細管實現(xiàn)肉制品中和分離，重復性好且分離速度快，但同時也增加了實驗成本；Jastrz?bska[18]用毛細管區(qū)帶電泳法實現(xiàn)了肉中和的測定。但對于高鹽含量的樣品，如咸菜、腌肉類制品中硝酸鹽和亞硝酸鹽的毛細管電泳檢測方法研究則鮮有報道，且由于Cl-容易對的測定產(chǎn)生干擾[19]，亦是測定高鹽含量樣品中和存在的難點。本研究目的在于利用HPCE的優(yōu)點解決常規(guī)測定果蔬和肉制品中硝酸鹽與亞硝酸鹽過程繁瑣、耗時長的問題，特別是肉制品中硝酸鹽的測定，以達到便捷、快速的目的；同時也對排除Cl-干擾方式進行了研究，使HPCE不局限于低鹽含量的樣品，亦能測定常見的高鹽，且由于硝酸鹽與亞硝酸鹽含量較高容易引發(fā)食品中毒的樣品如咸菜、腌肉等，具有較強的實際意義，使得快速準確的檢測成為可能，簡化了實驗步驟，提高了實驗效率，為食品的安全監(jiān)測提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

P/ACE MDQ HPCE（配備紫外檢測器） 美國貝克曼庫爾勒公司；熔融石英毛細管柱（總長度40 cm，有效長度30 cm，內徑50 μm） 河北永年光導纖維廠；PB-10酸度計 德國賽多利斯科學儀器有限公司；LLJ-A10T1攪拌機 廣東小熊電器有限公司；HS07-314恒溫水浴鍋 天津華北實驗儀器有限公司。

1.2 儀器與設備

硝酸鈉、亞硝酸鈉、氫氧化鉀 天津市北方天醫(yī)化學試劑廠；硼酸、氯化鈉、氫氧化鈉、鹽酸 天津市風船化學試劑科技有限公司；無水硫酸鈉 天津市津東天正精細化學試劑廠；十六烷基三甲基溴化銨（cetyltrimethyl ammonium bromid，CTAB） 北京索萊寶科技有限公司；分析過程所有用到的水均為Mili-Q超純水。

1.3 方法

1.3.1 電泳條件

毛細管柱活化程序：1 mol/L NaOH溶液沖洗20 min；1 mol/L HCl溶液沖洗20 min；超純水沖洗10 min。

每次進樣前沖洗程序：1 mol/L NaOH溶液沖洗3 min；超純水沖洗2 min；分離緩沖液沖洗2 min。

條件：紫外波長214 nm，正極端進樣，進樣壓力0.5 psi（即3 447.4 Pa），進樣時間5 s，分離溫度25 ℃，分離電壓-5 kV，工作電流約62 μA。

分離緩沖液：400 mmol/L硼酸（2 mol/L KOH溶液調pH 9）+100 mmol/L Na2SO4+0.5 mmol/L CTAB。

準確稱取0.247 g的硼酸于50 mL離心管中，加入少量超純水溶解，用2 mol/L KOH溶液調pH 9，分別加入2.5 mL 400 mmol/L Na2SO4、0.5 mL 10 mmol/L CTAB溶液，用超純水定容至10 mL。

1.3.2 樣品制備及前處理

水果、蔬菜及肉制品（C l-含量均應小于500 mmol/L）通過攪拌機粉碎勻漿以備用。

果蔬及肉制品樣品：取1 g樣品，加入超純水約5 mL，于50 ℃恒溫水浴鍋中水浴15 min后，取出冷卻至室溫，用超純水定容至10 mL，用濾紙過濾，濾液用0.22 μm孔徑濾膜過濾即可上機（可適當調整試樣的稀釋倍數(shù)）。

1.3.3 加標回收率

采用樣品加標回收的方法，分別稱取4 份質量為1.000 g的樣品，一份不加入混標，另外3 份分別加2、4、6 μg/mL硝酸鈉和亞硝酸鈉混標，按照樣品前處理方法進行，然后用優(yōu)化的實驗方法檢測，計算加標回收率。

1.3.4 標準曲線的繪制

將硝酸鈉與亞硝酸鈉干燥至質量恒定，分別準確稱取1.000 g和0.100 g，加水溶解并定容至500 mL，配制為2 000 μg/mL和200 μg/mL質量濃度的硝酸鈉與亞硝酸鈉標準儲備液。對于肉類樣品，可將兩種儲備液均梯度稀釋為0.2、0.5、1、5、10、20、40 μg/mL質量濃度的標準混合使用液；對于果蔬類含硝酸鹽較高的樣品，可將硝酸鈉標準儲備液梯度稀釋為2、5、10、50、100、200、400 μg/mL，亞硝酸鈉標準儲備液梯度稀釋為0.2、0.5、1、5、10、20、40 μg/mL，將兩者混合制得標準使用液。按照最適分離條件分析，制作以峰面積為橫坐標，硝酸鈉和亞硝酸鈉質量濃度為縱坐標的標準曲線。

1.3.5 檢出限的確定

最低檢出限指某種分析方法能從待測樣品中檢測到的最低質量濃度。參照劉威[20]的方法進行測定，將一個已知濃度接近于空白的標準品多次測定，得到測量讀數(shù)的標準偏差與平均值，以信噪比為3時，確定儀器檢出限。用相應于儀器檢出限3～5 倍的質量濃度配制標準溶液，根據(jù)樣品所有分析過程進行操作，且多次測定計算方法的檢出限。計算公式如下：

式中：k為置信因子，取3；Sb為空白標品多次測定讀數(shù)的標準偏差；C為測量質量濃度/（μg/mL）；X為空白多次測量讀數(shù)平均值，即峰面積。

1.3.6 精密度檢測

取10 μg/mL的硝酸鈉和亞硝酸鈉標準品，分別在日內和日間進行平行測定3 次，計算兩個被測物日內和日間3 次測定峰面積的相對標準偏差（relative standard deviation，RSD），RSD越低，說明方法的精密度越高，實驗結果越準確。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用32 Karat Software、SigmaPlot 10.0作圖，Statistix 8.1對結果進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 分離緩沖液pH值的選擇

由于亞硝酸鹽不穩(wěn)定，在酸性條件下易被分解，因此在選擇分離緩沖液時需考慮到其pH值，應選用緩沖范圍為堿性的緩沖鹽。根據(jù)弱酸和弱堿的pKa，估算得到常用緩沖鹽如磷酸鹽的緩沖范圍為pH 1.12～3.12、pH 6.2～8.2、pH 11.36～13.36，硼酸鹽的緩沖范圍為pH 8.24～10.24[21]，結合Frazier等[22]研究的未涂層熔融石英毛細管內EOF和pH值的關系曲線可知，若要獲得良好的定量及重復性，應盡量使用pH值小于3和pH值在8～10的分離緩沖液，當pH值大于10時，將會很容易吸收空氣中的CO2，因此本實驗選擇了硼酸為分離緩沖液。但硼酸初始值為酸性，選擇一種堿調節(jié)劑是至關重要的。根據(jù)王茜等[23]對不同堿調節(jié)緩沖鹽pH值時電導率的測定，得到電導率從大到小順序為CsOH＞KOH＞NaOH＞LiOH，其中CsOH電導率最大。在選擇分離緩沖液時，需要注意分離緩沖液的電導應大于樣品緩沖液的電導，且電導差異越大，樣品分離度越高，因此電導率最大的CsOH應是不錯的選擇，但出于實驗條件及成本的考慮，本實驗選用了電導率較大的KOH作為堿調節(jié)劑。

由于本實驗選用硼酸作為分離緩沖液，其pH值緩沖范圍為8.24～10.24，因此本實驗對pH值為8.5、9、9.5、10的背景電解質進行篩選，同時保證其他實驗條件相同。圖1表明，隨著pH值的升高，EOF會逐漸增加[21]，電子遷移速度加快，被測物出峰時間縮短，分離電流不斷變大，響應值卻逐漸變小，但均能實現(xiàn)較好的分離，其中的峰先到達檢測窗口。這是由于本實驗采用了電極反向的方式，同時添加了EOF改性劑，被分析物為帶相同電荷的陰離子，相對分子質量大的陰離子向正極移動的速度較慢，而EOF的方向同陰離子移動的方向一致，因此相對分子質量小的則先被推送至窗口。由于分離過快導致響應值變低，同時為了避免電流過高，并未對pH 10進行篩選，最終選擇最佳pH 9，分離時間相對較快，且響應值高。

圖1 不同pH值分離緩沖液對硝酸鈉與亞硝酸鈉混標分離的影響Fig.1 Effect of buffer pH on the separation of sodium nitrate and sodium nitrite

2.2 分離緩沖液濃度對分離的影響

分離緩沖溶液的濃度對待測物的分離度、檢測靈敏度、工作電流都有著重要影響。當分離緩沖液濃度較低時，會與樣品緩沖溶液不匹配，兩者電導差異不大，無法實現(xiàn)有效分離，且緩沖容量不足，導致測定結果不穩(wěn)定，需勤換分離緩沖液[24]；若濃度過高，會產(chǎn)生大量的焦耳熱，EOF降低，使被測物的分離度、響應值、檢測靈敏度下降，因此在探索方法時有必要對分離緩沖液的濃度進行篩選，以得到最佳分離條件。本實驗預將對500、400、300、200、100 mmol/L濃度的硼酸進行篩選，其余條件均保持一致。如圖2所示，當硼酸緩沖液濃度為300～500 mmol/L范圍時，硼酸濃度越低，出峰時間越早，響應值越低，分離度變小。觀察緩沖液濃度為300 mmol/L時的峰形變化，的峰形已經(jīng)變差，峰展寬且響應值急劇降低，因此未繼續(xù)對100 mmol/L和200 mmol/L濃度的硼酸進行比較。從圖2可以看出，400 mmol/L和500 mmol/L均能實現(xiàn)較好的分離，但是為防止產(chǎn)生過多的焦耳熱，應選擇能夠有效分離并且濃度相對較低的緩沖鹽濃度，因此本實驗選用400 mmol/L為分離緩沖液中硼酸的最適濃度。

圖2 硼酸濃度對硝酸鈉與亞硝酸鈉混標分離的影響Fig.2 Effect of boric acid concentration on the separation of sodium nitrate and sodium nitrite

2.3 EOF反向劑濃度的選擇

和均為無機陰離子，帶負電，在電離時，陰離子總是向正極移動，在電極正向時EOF由正極走向負極，而檢測窗口靠近負極，故會導致陰離子到達檢測窗口的時間延長，并且和的淌度較大，更容易出現(xiàn)不能在合理時間內出峰的現(xiàn)象[25]。故為快速有效地分離，應選用EOF改性劑CTAB[26]，在改變EOF方向的同時，又采用反向電壓，使得待測離子與EOF移動方向一致，縮短了分離時間。根據(jù)Reinhard等[27]的研究結果，當CTAB濃度為0.35 mmol/L時，可達到EOF反向的作用，因此本實驗分別對0.4、0.5、0.6、0.7 mmol/L添加量的CTAB進行篩選。如圖3A所示，隨著CTAB濃度的增大，兩個陰離子峰的分離度逐漸變大；對比0.4 mmol/L濃度的電泳圖，另外3 個濃度的出峰時間稍微提前，三者出峰時間差異不大；而響應值變化如圖3B所示，在CTAB為0.5 mmol/L濃度時達到最大，且隨濃度的繼續(xù)增大，響應值呈降低趨勢。綜合來看，0.5 mmol/L的CTAB為最適添加量。

圖3 CTAB濃度對硝酸鈉與亞硝酸鈉混標的分離（A）和與峰面積（B）的影響Fig.3 Effect of CTAB concentration on the separation of sodium nitrate and sodium nitrite (A), and peak areas of and (B)

2.4 排除Cl-干擾方法分析

將上述優(yōu)化出的最適分離緩沖液（400 mmol/L硼酸+2 mol/L KOH溶液調pH 9+0.5 mmol/L CTAB）應用于實際樣品（如洋白菜和紅腸）的測定，結果如圖4所示，發(fā)現(xiàn)兩者的峰形較好，但在紅腸樣品圖4B中出峰位置有雜峰干擾現(xiàn)象，無法得到亞硝酸鹽的含量。經(jīng)查閱文獻資料，如在陸瑩等[19]研究得到當質量濃度小于0.5 mg/L時，干擾會隨著Cl-、質量濃度比的增大而增加；肖雙等[28]提到Cl-和與固定相的親和力相近，保留時間相似，而當Cl-含量較高時，會干擾的測定，同時還介紹了可以采用過Ag柱和Na柱的方式去除Cl-；姜廷福等[29]在測定腌菜中硝酸鹽與亞硝酸鹽時通過在分離緩沖液中添加2 倍樣品NaCl的方式降低高濃度鹽對的干擾。根據(jù)以上資料結果，并且經(jīng)過加標驗證，得到該雜峰的確是由Cl-造成的。究其原因，是由于樣品中的高濃度鹽破壞了電堆積效應，使樣品溶液的電導與分離緩沖液的電導差異變小，兩者電導值不匹配，而一些樣品中含鹽量較高，不能通過簡單改變分離緩沖液濃度或者電壓使其較好地分離。經(jīng)查閱資料，可從以下兩個方面探索消除Cl-干擾：1）對樣品進行前處理（如過固相萃取小柱Ag柱）去除Cl-[30]；2）在分離緩沖液中添加中性鹽[19]，從而保持其離子強度，增大電導差異。為降低成本，實驗分別通過在樣品濾液中添加AgNO3和在分離緩沖液中添加Na2SO4測定含鹽樣品硝酸鹽和亞硝酸鹽的方法。

圖4 分離洋白菜（A）和紅腸（B）中硝酸鹽與亞硝酸鹽的毛細管電泳圖譜Fig.4 Capillary electrophoresis chromatograms of nitrate and nitrite in cabbage (A) and red sausage (B)

2.4.1 添加AgNO3的影響

圖5 向含有40 mmol/L NaCl的10 μg/mL硝酸鈉與亞硝酸鈉混標中添加50 mmol/L AgNO3的毛細管電泳圖譜Fig.5 Capillary electrophoresis chromatograms of 50 mmol/L AgNO3 added to the mixture of 10 μg/mL sodium nitrate and sodium nitrite containing 40 mmol/L NaCl

通過添加AgNO3的方式排除Cl-干擾。根據(jù)Ag+可以和Cl-反應生成AgCl沉淀，猜想通過添加硝酸銀的方式去除Cl-，以此降低Cl-對的干擾，雖然同時加入了，但可通過檢測到的總量減去加入量來獲得實際含量。但實驗結果表明，當AgNO3添加量大于Cl-含量時，如圖5所示，能夠改善Cl-干擾，但Ag+的強氧化性，將部分氧化，響應值變低，峰面積增大且峰展寬，兩者峰形均不好。若將此方法應用于實踐中，需先測出樣品中Cl-含量，再根據(jù)所需等比例將AgNO3加入樣品中以去除Cl-，否則當添加量低時，不能完全被Ag+沉淀的Cl-仍會干擾的測定；添加量多時，多出的Ag+可能會氧化，使結果不準確。因此，該方法并不適用也不實用。

2.4.2 添加Na2SO4的影響

配制10 μg/mL含有20 mmol/L NaCl的硝酸鹽與亞硝酸鹽混標，向分離緩沖液中分別加入20、40、80 mmol/L的Na2SO4，但隨著其濃度的增加，為避免工作電流超過100 μA，分離電壓也應當相應降低，因此將電壓均設為-7 kV。如圖6所示，隨Na2SO4添加量的增大，緩沖液濃度增加，分離時間逐漸增加，其中由Cl-產(chǎn)生的干擾峰逐漸與的峰分離，且分離度逐漸變大，同時不對出峰產(chǎn)生干擾，可見通過添加Na2SO4的方法可行。根據(jù)Na2SO4添加量和NaCl含量的比例可以看出，當Na2SO4、NaCl濃度比為2時，已經(jīng)能夠排除Cl-的干擾，但當Na2SO4添加量較高時，被測物出現(xiàn)峰展寬的現(xiàn)象，這是由于分離電壓與分離緩沖液濃度不匹配，分離電壓相對較高，此時分離電流已經(jīng)達到84.3 μA。因此在添加高濃度Na2SO4時，需要對分離電壓進行進一步篩選。

圖6 Na2SO4添加量對含有20 mmol/L NaCl的硝酸鈉與亞硝酸鈉混標分離的影響Fig.6 Effect of Na2SO4 addition on the separation of sodium nitrate and sodium nitrite containing 20 mmol/L NaCl

2.5 分離電壓的選擇

結合以上優(yōu)化結果、參考文獻中高鹽含量樣品[26]的含鹽量以及本實驗中樣品前處理方式，以最大能夠檢測含500 mmol/L NaCl的樣品為例，即在分離緩沖液中添加100 mmol/L的Na2SO4，并對分離電壓進行優(yōu)化。當-7 kV時，添加20、40、80 mmol/L Na2SO4的電流分別為52.4、63.1、84.3 μA，預估添加100 mmol/L的Na2SO4電流不會超過100 μA，因此分別對-7、-6、-5、-4 kV電壓進行篩選。結果如表1和圖7所示，隨著分離電壓降低，分離時間逐漸延長，響應值逐漸變大，但當分離電壓為-4 kV時，兩峰峰展寬，不利于分離較低濃度的樣品；-7 kV條件下雖出峰時間快，但響應值偏低，且工作電流較大；對比-5、-6 kV分離效果，-5 kV工作電流較低，且響應值較大，峰形好，故確定-5 kV為最適分離電壓。

表1 不同電壓下分離與時的工作電流、保留時間及峰面積Table1 Operating currents, retention times and peak areas of NO－2 and at different separation voltages

表1 不同電壓下分離與時的工作電流、保留時間及峰面積Table1 Operating currents, retention times and peak areas of NO－2 and at different separation voltages

分離電壓/kV工作電流/μA NO2- NO3-保留時間/min 峰面積 保留時間/min 峰面積-7 89.5 3.354 5 374 3.575 6 320-6 75.5 3.962 6 075 4.225 7 239-5 61.8 4.629 7 868 5.150 8 980-4 48.4 6.088 9 528 6.496 10 940

圖7 電壓對硝酸鈉與亞硝酸鈉混標分離的影響Fig.7 Effect of different voltages on the separation of sodium nitrate and sodium nitrite

2.6 方法的回收率、線性、檢出限和精密度

經(jīng)過加標檢測得到方法的加標回收率、標準曲線和檢出限如表2所示，優(yōu)化出的實驗方法加標回收率在81.82%～100.91%之間，線性相關系數(shù)均在0.99以上，檢出限則分別為0.69 μg/mL和0.50 μg/mL。經(jīng)日內和日間3 次平行測定，得到方法日內和日間的精密度如表3所示，相對峰面積的RSD在1.4%～3.2%之間，說明該方法的精密度良好。

表2 方法的加標回收率、標準曲線和檢出限Table2 Recoveries, standard curve equations and LODs of the method

表3 方法的精密度Table3 Precision of the method

2.7 樣品檢測結果

用最適實驗條件，對一些常見的含有硝酸鹽和亞硝酸鹽的樣品進行測定，對比國標方法，采用鹽酸萘乙二胺法檢測肉制品中的亞硝酸鹽，但用來測定肉類中硝酸鹽的鎘柱還原法難以實現(xiàn)，還原率不穩(wěn)定，因此未對肉制品中硝酸鹽進行測定；結合紫外分光光度法對蔬菜中硝酸鹽的測定結果，如表4所示，本方法與國標法的測定結果基本一致，說明該方法具有可行性。其中芹菜和自制香腸的毛細管電泳圖譜分別如圖8所示。由測定結果看出，芹菜葉中硝酸鹽含量很高，達到（3 115.49±1.41）mg/kg；對于次新鮮狀態(tài)的圓生菜，部分硝酸鹽已經(jīng)轉化為亞硝酸鹽，直接威脅人們的健康，同時也說明生活中應盡量食用新鮮蔬菜；自制香腸中的亞硝酸鹽達到了（74.13±1.20）mg/kg，已經(jīng)遠超過了國家限量標準，存在著食品安全隱患。可見，對食品中硝酸鹽和亞硝酸鹽含量的監(jiān)控是十分必要的，而本研究所建立的方法能夠快速準確測定對食品安全有著重要的實際意義。

表4 5 種樣品的硝酸鹽與亞硝酸鹽含量測定結果Table4 Determination of nitrate and nitrite contents in fi ve samples

圖8 分離芹菜（A）和自制香腸（B）中硝酸鹽與亞硝酸鹽的毛細管電泳圖譜Fig.8 Capillary electrophoresis chromatograms of nitrate and nitrite in celery (A) and sausages (B)

3 結 論

本研究排除Cl-的干擾，建立了一種能夠同時快速檢測高鹽含量的果蔬及肉制品中硝酸鹽和亞硝酸鹽的方法，即使用內徑50 μm，總長40 cm，有效長度30 cm的毛細管柱，在214 nm條件下，以400 mmol/L硼酸（2 mol/L KOH溶液調pH 9）+100 mmol/L Na2SO4+0.5 mmol/L CTAB為分離緩沖液，分離電壓-5 kV，操作溫度25 ℃，0.5 psi（即3 447.4 Pa）壓力下進樣5 s時，可將含鹽量500 mmol/L以下的樣品在6 min內硝酸鹽和亞硝酸鹽達到分離，該方法的加標回收率在81.82%～100.91%之間，對于肉類和果蔬類樣品，硝酸鹽的線性范圍分別為0.2～40 μg/mL 和2～400 μg/mL，亞硝酸鹽質量濃度的線性范圍均為0.2～40 μg/mL，相關系數(shù)均在0.99以上，檢出限分別為0.69 μg/mL和0.50 μg/mL，精密度不高于3.2%。該方法回收率高、精密度良好、操作簡便、快速準確、靈敏度高、成本低，不僅增強了食品安全快速準確監(jiān)控的可能性，同時利用了HPCE的優(yōu)點，使其不僅局限于對蛋白、肽、氨基酸等的測定，亦提高了它的實用價值。

[1] 王豫. 淺談食品中硝酸鹽和亞硝酸鹽對人體危害及預防[J]. 青海農(nóng)技推廣, 2010(4)∶ 31-32. DOI∶10.3969/j.issn.1008-7117.2010.04.018.

[2] 仝瑩瑩, 王璐, 李栓栓, 等. 亞硝酸鹽在肉制品加工中的作用及其替代物的研究[J]. 河南科技, 2015(21)∶ 64; 66. DOI∶10.3969/j.issn.1003-5168.2015.21.044.

[3] 衛(wèi)生部, 國家標準化管理委員會. 食品添加劑使用標準∶ GB 2760—2014[S]. 北京∶ 中國標準出版社, 2014∶ 93; 95.

[4] 衛(wèi)生部, 國家標準化管理委員會. 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定∶GB 5009.33—2016[S]. 北京∶ 中國標準出版社, 2016∶ 1-13.

[5] 朱富強, 李海洋, 賈會美, 等. 離子色譜法測定蝦醬中的亞硝酸鹽和硝酸鹽[J]. 食品工業(yè), 2016, 37(7)∶ 255-257.

[6] 廖楠. 離子色譜法測定地表水中硝酸鹽和亞硝酸鹽[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2017(3)∶ 160-161. DOI∶10.3969/j.issn.1007-5739.2017.03.107.

[7] 顧翔宇, 郭軍. 硝酸鹽/亞硝酸鹽檢測方法的研究進展[J]. 中國食物與營養(yǎng), 2016, 22(3)∶ 24-28. DOI∶10.3969/j.issn.1006-9577.2016.03.005.

[8] 張翠芬. 食品添加劑硝酸鹽、亞硝酸鹽檢測方法研究進展[J]. 中國食品添加劑, 2014(6)∶ 152-155. DOI∶10.3969/j.issn.1006-2513.2014.06.022.

[9] 羅國安, 王義明. 毛細管電泳的原理及應用∶ 第一講 毛細管電泳簡介[J].色譜, 1995(4)∶ 254-256.

[10] ALTRIA K D. Analysis of pharmaceuticals by capillary electrophoresis[M]. Lengerich∶ Lengericher Handels-Druckerei, 2012∶3. DOI∶10.1007/978-3-322-85011-9.

[11] 趙凱, 王偉. 毛細管電泳在工業(yè)領域中的應用[J]. 現(xiàn)代鹽化工, 2017,44(4)∶ 72-74.

[12] 牛夏夢, 勾新磊, 趙新穎. 毛細管電泳技術的發(fā)展與應用[J]. 食品安全質量檢測學報, 2016, 7(11)∶ 4341-4345.

[13] 任紅星, 吳明嘉. 天然水中NO-2和NO-3的毛細管電泳分離測定[J].環(huán)境科學, 1996(5)∶ 53-55; 94.

[14] 李珊. 某些農(nóng)藥殘留及硝酸鹽_亞硝酸鹽的毛細管電泳和電化學分析研究[D]. 福州∶ 福州大學, 2003∶ 57-69.

[15] MERUSI C, CORRADINI C, CAVAZZA A, et al. Determination of nitrates, nitrites and oxalates in food products by capillary electrophoresis with pH-dependent electroosmotic flow reversal[J]. Food Chemistry, 2010, 120∶ 615-620. DOI∶10.1016/j.foodchem.2009.10.035.

[16] ATTILA G, PETER J, KINGA B. Application of capillary zone electrophoresis to the analysis and to astability study of nitrite and nitrate in saliva[J]. Journal of Chromatography A, 2005, 1065∶ 327-331. DOI∶10.1016/j.chroma.2004.12.085.

[17] ?ZTEKIN N, NUTKU M S, ERIM F B. Simultaneous determination of nitrite and nitrate in meat products and vegetables by capillary electrophoresis[J]. Food Chemistry, 2002, 76(1)∶ 103-106.DOI∶10.1016/S0308-8146(01)00287-4.

[18] JASTRZ BAKA A. Application of capillary isotachophoretic method to the determination of nitrate and nitrite ions in meat products[J]. Journal of Analytical Chemistry, 2010, 65(11)∶ 1170-1175.DOI∶10.1134/S1061934810110134.

[19] 陸瑩, 張忠山. 離子色譜法測定時Cl-的干擾及消除[J]. 色譜,1996(3)∶ 229-230.

[20] 劉威. 實驗分析檢出限計算與確定的探討[J]. 硅谷, 2014, 7(5)∶102-103. DOI∶10.3969/j.issn.1671-7597.2014.05.091.

[21] 丁曉靜, 郭磊. 毛細管電泳實驗技術[M]. 北京∶ 科學出版社, 2015∶114-126.

[22] FRAZIER R A, AMES J M, NURSTEN H E. Capillary electrophoresis for food analysis method development[M]. Tyne and Wear∶ The Royal Society of Chemistry, 2000∶ 5; 20. DOI∶10.1016/S0924-2244(99)00031-X.

[23] 王茜, 丁曉靜, 王心雨, 等. 毛細管電泳法快速測定保健食品中免疫球蛋白G[J]. 分析化學, 2006, 34(8)∶ 1161-1164. DOI∶10.3321/j.issn∶0253-3820.2006.08.027.

[24] 朱健萍, 胡昌勤, 劉文英. 毛細管電泳遷移時間重現(xiàn)性影響因素的探討[J]. 色譜, 2006(4)∶ 396-401. DOI∶10.3321/j.issn∶1000-8713.2006.04.018.

[25] XIE N, DING X J, WANG X Y, et al. Determination of thioglycolic acid in cosmetics by capillary electrophoresis[J]. Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 2014, 88∶ 509-512.DOI∶10.1016/j.jpba.2013.10.003.

[26] SIEGEL J A, PEKKA J S. Encyclopedia of forensic sciences[M]. 2nd ed. Amsterdam∶ Elsevier Ltd., 2013∶ 553. DOI∶10.1016/B978-0-12-382165-2.00241-5.

[27] KUHN R, HOFFSTETTER K S. Capillary electrophoresis∶ principles and practice[M]. Berlin∶ Springer-Verlag, 1993∶ 19-88; 115-244.DOI∶10.1007/978-3-642-78058-5.

[28] 肖雙, 王丹琪, 顏星. 離子色譜法測定亞硝酸鹽中干擾消除的研究進展[J]. 科技風, 2015(21)∶ 84. DOI∶10.3969/j.issn.1671-7341.2015.21.071.

[29] 姜廷福, 李菊白, 李辰, 等. 毛細管離子電泳法同時測定腌菜中硝酸根和亞硝酸根[J]. 分析實驗室, 2004, 23(5)∶ 34-36. DOI∶10.3969/j.issn.1000-0720.2004.05.010.

[30] ALTRIA K D. Capillary electrophoresis guidebook: principles,operation, and applications[M]. Totowa: Human Press, 1996: 11-71.DOI:10.1385/0896033155.