登革熱檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用及發(fā)展

蔣力云 狄飚 楊智聰

登革熱（dengue fever，DF）是由登革病毒（den?gue virus）引起的急性傳染病，廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)，臨床表現(xiàn)以高熱、頭痛、肌肉關(guān)節(jié)疼痛為主，有時(shí)伴有皮疹、淋巴腺腫大和白細(xì)胞減少等癥狀，重癥患者會(huì)出現(xiàn)登革出血熱（dengue hem?orrhagic，DHF），甚至登革休克綜合征（dengue shock syndrome，DSS）。在我國(guó)，登革熱自1978年在廣東佛山暴發(fā)流行以來(lái)，主要流行于廣東、廣西、福建、浙江及海南等省［1?2］，已經(jīng)成為我國(guó)面臨的嚴(yán)峻的公共衛(wèi)生問(wèn)題。由于半數(shù)以上的登革熱病例無(wú)癥狀或者僅出現(xiàn)普通的發(fā)熱癥狀［3?4］，因此僅從臨床癥狀上來(lái)判斷登革熱比較困難，實(shí)驗(yàn)室的輔助診斷顯得尤為重要。只有盡早快速準(zhǔn)確地診斷疾病，才能對(duì)急性期患者進(jìn)行早報(bào)告、早隔離、早就地治療，并且及時(shí)開(kāi)展蚊媒的滅殺工作，才有利于登革熱疫情的控制。這也促使登革熱檢測(cè)技術(shù)不斷進(jìn)步和提高，檢測(cè)方法更加簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確。近年來(lái)在免疫學(xué)檢測(cè)、病原檢測(cè)、病毒分離培養(yǎng)技術(shù)等方面取得了一定進(jìn)展，為臨床檢測(cè)不同發(fā)病階段的登革熱提供了更多的選擇和有效的檢測(cè)方法，有效地提高了登革熱檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。

1 登革病毒檢測(cè)程序新進(jìn)展

登革病毒感染后，患者除了出現(xiàn)白細(xì)胞降低、血小板減少、血液濃縮和低蛋白血癥等非特異性的血象改變外［5］，還能從相關(guān)臨床標(biāo)本中檢測(cè)到特異性抗體、病毒抗原、病毒核酸甚至分離到病毒。登革熱檢測(cè)所采集的臨床病例標(biāo)本可以包含血液、腦脊液、腦組織和肝［6］。因?yàn)樵跇?biāo)本采集過(guò)程中，血液的采集和處理最方便，對(duì)患者造成的創(chuàng)傷和損害最小，幾乎在整個(gè)感染期間血液都能用于檢測(cè)，因此登革熱檢測(cè)中采集的病例標(biāo)本普遍以血液為主。腦組織和肝主要是在尸檢或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)采集，通常需要在研磨破碎后用于病毒分離或者核酸檢測(cè)，或者冰凍切片后進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)。在國(guó)內(nèi)外一些相關(guān)研究中，也有采集唾液和尿液進(jìn)行檢測(cè)，但是由于受到排毒量少和排毒時(shí)間短的限制，很少在日常檢測(cè)中采用［7］。在臨床檢測(cè)中，采用血清檢測(cè)登革病毒及抗體的步驟如圖1所示。根據(jù)血清采集時(shí)對(duì)應(yīng)的發(fā)病時(shí)間，選擇靈敏度較高的檢測(cè)方法，有利于提高登革熱檢測(cè)效率。如在發(fā)病早期，通常是7天內(nèi)，特別是出現(xiàn)發(fā)熱癥狀的5天內(nèi)［8］，使用NS1檢測(cè)、核酸檢測(cè)或者病毒分離的方法相較于通過(guò)抗體檢測(cè)的方法檢測(cè)更有優(yōu)勢(shì)。而在發(fā)病后期，我們更傾向于通過(guò)檢測(cè)血清中抗體滴度的變化，特別是IgG的4倍增高來(lái)判斷登革病毒的感染。

圖1 血清中檢測(cè)登革病毒及抗體流程圖［9］Figure 1 Procedure of dengue virus and antibody detection in serum［9］

2 登革病毒快速檢測(cè)技術(shù)的運(yùn)用

2.1 抗體檢測(cè)

由于抗體檢測(cè)技術(shù)操作簡(jiǎn)便，所需儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，商品化試劑易于購(gòu)買，是目前診斷登革熱的重要手段。但是登革病毒抗體與其他黃病毒抗體存在交叉反應(yīng)，加之我國(guó)將乙型腦炎預(yù)防接種作為計(jì)劃免疫的一部分，因此在檢測(cè)過(guò)程中需要注意非特異性反應(yīng)，同時(shí)結(jié)合患者臨床癥狀和流行病學(xué)史對(duì)抗體陽(yáng)性結(jié)果加以區(qū)分。

抗體檢測(cè)樣品以血液為主，主要是針對(duì)IgM和IgG進(jìn)行檢測(cè)。在首次感染時(shí)，出現(xiàn)發(fā)熱后大概5天，IgM就能被檢測(cè)到并且能在體內(nèi)持續(xù)2～3個(gè)月；而IgG則出現(xiàn)在發(fā)熱后的8～10天，并能在體內(nèi)持續(xù)存在4個(gè)月。而在二次感染時(shí)，IgG在發(fā)熱后快速升高，某些病例中甚至無(wú)法檢出IgM，而IgG在10 個(gè)月后仍然能檢測(cè)到，甚至持續(xù)終身［3，8］。有報(bào)道通過(guò)IgM/IgG的比值來(lái)判定病例是首次感染或是二次感染，但該比值無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，并且受采樣時(shí)間的影響較大，因此在判定時(shí)需謹(jǐn)慎，以免造成誤判［10?11］。也有文獻(xiàn)研究通過(guò)檢測(cè)血液、唾液和尿液中IgM、IgG、IgE和IgA，以此來(lái)診斷登革病毒感染［7］。但是總體來(lái)說(shuō)，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍然是以檢測(cè)血清中IgM和IgG為主要方法。并且我國(guó)《登革熱診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS216?2008）也包括以血清中特異性IgM或IgG陽(yáng)性或雙份血清特異性IgG的4倍增高為診斷依據(jù)。

抗體檢測(cè)方法包括血凝抑制試驗(yàn)（hemaggluti?nation?inhibition test，HI）、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（comple?ment fixation test，CFT）、中和試驗(yàn)（neutralization test，NT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immu?nosorbent assay，ELISA）、膠體金免疫層析快速試驗(yàn) （immunochromatographiccolloidalgold test，ICT）、免疫斑點(diǎn)法（dot immunobinding assay，DI?BA）和間接免疫熒光試驗(yàn)（indirect immunofluores?cence assay，IFA）等。

其中，HI和CFT是較古老的血清學(xué)檢測(cè)方法。前者是根據(jù)登革病毒能使鵝的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，但在特異性抗體存在的情況下凝集現(xiàn)象會(huì)被抑制的原理來(lái)檢測(cè)樣本中登革病毒抗體。用HI試驗(yàn)檢測(cè)抗體時(shí)，登革病毒和其他黃病毒之間存在較高的交叉反應(yīng)。用CFT檢測(cè)抗體的時(shí)間，較用HI檢測(cè)抗體的時(shí)間晚，且持續(xù)時(shí)間不長(zhǎng)。在初次感染時(shí)，CFT有較好的特異性，而二次感染時(shí)的特異性不好。CFT參與反應(yīng)的成分較多，影響因素比較復(fù)雜，較難操作，操作者需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格培訓(xùn)和具備豐富的經(jīng)驗(yàn)。因此，現(xiàn)在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)放棄將HI和CFT作為登革熱的診斷試驗(yàn)。NT能檢測(cè)出樣品中保護(hù)性抗體的水平，是抗體檢測(cè)中的一種敏感方法。但是，標(biāo)準(zhǔn)病毒顆粒的完整性、宿主細(xì)胞的敏感性等各因素的變化都會(huì)影響其結(jié)果的準(zhǔn)確性，判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果所需時(shí)間也較長(zhǎng)，故不適用于快速診斷。同時(shí)，NT操作技術(shù)要求較高、操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，因此多在研究性工作中使用，不適用于臨床大規(guī)模檢測(cè)。IFA是先將病毒感染的細(xì)胞固定在玻片上，制備成抗原片，然后加入患者血清，再加上熒光素標(biāo)記的二抗，作用一定時(shí)間后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。該方法可區(qū)分感染病毒的血清型，但由于需要使用熒光顯微鏡，且在結(jié)果的判定上對(duì)檢測(cè)人員的經(jīng)驗(yàn)有一定依賴，因此難以在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)建立。

ELISA、ICT和DIBA是目前臨床檢測(cè)登革病毒抗體最常用的方法［12］，在檢測(cè)過(guò)程中需要注意類風(fēng)濕因子的影響和其他黃病毒的交叉反應(yīng)。ICT操作簡(jiǎn)單，人員只需簡(jiǎn)單培訓(xùn)即可使用，反應(yīng)所需時(shí)間短，不需酶標(biāo)儀等試驗(yàn)設(shè)備，因此特別適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)［13］。ICT法檢測(cè)登革病毒IgM抗體適合在登革熱暴發(fā)流行期間用作疫區(qū)基層醫(yī)療單位的早期初篩試驗(yàn)。而ICT法檢測(cè)登革病毒IgG抗體的靈敏度偏低，可以通過(guò)對(duì)有持續(xù)臨床癥狀的患者再次采樣來(lái)提高檢出率。ELISA由于操作簡(jiǎn)便，所需儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，可同時(shí)檢測(cè)大量標(biāo)本，并且有多種品牌的商品化試劑提供，因而得到了廣泛的推廣和應(yīng)用。ELISA法檢測(cè)登革病毒IgM/IgG抗體適合在普查及大批量標(biāo)本檢測(cè)時(shí)使用。在登革熱散發(fā)期間，ELISA法檢測(cè)登革病毒抗體會(huì)與其他黃病毒抗體產(chǎn)生廣泛的交叉反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，需要結(jié)合臨床癥狀或其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出判斷。DIBA法操作費(fèi)時(shí)，成本比較昂貴，檢測(cè)IgM抗體不適合作為初篩試驗(yàn)，但DIBA法檢測(cè)IgG抗體敏感性和特異性好，與其他黃病毒交叉反應(yīng)少，適合在登革熱散發(fā)期間使用，可作為登革病毒感染的確證實(shí)驗(yàn)。

2.2 抗原檢測(cè)

登革抗原檢測(cè)方法有HI、CFT、NT、免疫熒光（immunofluorescence，IF）、ELISA 和 ICT 等，主要是針對(duì)樣品中病毒蛋白或病毒進(jìn)行檢測(cè)。登革病毒的基因組結(jié)構(gòu)可以分為5′末端非編碼區(qū)、結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)、非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)和3′末端非編碼區(qū)。

目前，對(duì)病毒蛋白的檢測(cè)主要是針對(duì)非結(jié)構(gòu)蛋白NS1檢測(cè)。血清中的NS1在發(fā)病第一天出現(xiàn)，第3天達(dá)到峰值，4天內(nèi)的敏感性為88%～95%，并可持續(xù)到第9天［14］。NS1產(chǎn)生于感染早期甚至早于IgM的出現(xiàn)，但是在抗NS1?IgG出現(xiàn)后就無(wú)法檢測(cè)。因此，NS1的檢測(cè)主要是在登革病毒感染早期使用。在發(fā)病早期檢測(cè)NS1和用PCR檢測(cè)核酸的一致性高達(dá) 95%以上［15?16］，而 NS1 檢測(cè)的成本和技術(shù)要求都低于PCR檢測(cè)。因此，在無(wú)法開(kāi)展PCR檢測(cè)的基層單位開(kāi)展NS1檢測(cè)，有利于患者的早期發(fā)現(xiàn)和診斷。然而在二次感染時(shí)，由于IgG的存在，NS1很快與抗體形成抗原?抗體免疫復(fù)合物，使得NS1難以檢出。不過(guò)，通過(guò)37℃孵育1 h的方法，使抗原?抗體復(fù)合物分離開(kāi)來(lái)，可以提高NS1的檢出率［17］。主要的商品化檢測(cè)試劑有酶聯(lián)免疫吸附試劑和膠體金快速試劑，都有較高的敏感性和特異性［18?20］。在廣州市，NS1 膠體金快速試劑已經(jīng)在各大醫(yī)院推廣開(kāi)展，針對(duì)發(fā)病早期的檢測(cè)效果良好［21］。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)，進(jìn)口試劑的準(zhǔn)確率明顯高于國(guó)產(chǎn)試劑［22］。所以，在資金充足的情況下，優(yōu)先推薦使用進(jìn)口試劑。

FA是目前實(shí)驗(yàn)室鑒定登革病毒的另一種常用方法。FA是將待測(cè)樣品與登革病毒型特異性單克隆抗體反應(yīng)，隨后加入熒光素標(biāo)記的抗體，通過(guò)熒光顯微鏡觀察結(jié)果。研究人員用免疫熒光檢測(cè)外周血單核細(xì)胞登革抗原，發(fā)現(xiàn)在退熱前陽(yáng)性率較高［23］。該技術(shù)最大優(yōu)點(diǎn)為敏感性和特異性高，特別是單克隆抗體的問(wèn)世大大提高了免疫熒光測(cè)定的效果，主要應(yīng)用于快速診斷。

2.3 核酸檢測(cè)

在登革熱發(fā)病后2～7天時(shí)，登革病毒能在患者血液、血細(xì)胞甚至組織，特別是免疫系統(tǒng)組織中檢測(cè)到，這個(gè)時(shí)期基本與患者的發(fā)熱期相吻合。最適宜使用這段時(shí)期采集的標(biāo)本進(jìn)行登革病毒核酸檢測(cè)、病毒分離。核酸檢測(cè)主要是根據(jù)登革病毒的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)體系和條件下進(jìn)行擴(kuò)增，最后用儀器設(shè)備檢測(cè)判斷。由于不同血清型的登革病毒有不同的基因序列，因此通過(guò)核酸檢測(cè)可以區(qū)分登革病毒的血清型。相較于病毒分離，核酸檢測(cè)的反應(yīng)時(shí)間短、特異性強(qiáng)、敏感性高。但是，由于對(duì)儀器設(shè)備和操作人員的要求較高，花費(fèi)大，不適用于大批量的調(diào)查監(jiān)測(cè)［24］。特別是核酸檢測(cè)敏感度較高，因此在操作中需要小心避免因污染造成假陽(yáng)性。將實(shí)驗(yàn)室正確分區(qū)，注意陽(yáng)性對(duì)照和陽(yáng)性樣品的妥善保存，以及謹(jǐn)慎地處理核酸擴(kuò)增產(chǎn)物可以有效降低污染的可能性。又由于登革病毒是RNA病毒，需要避免實(shí)驗(yàn)中核酸降解造成假陰性。使用去除RNA降解酶和DNA降解酶的實(shí)驗(yàn)器材可以有效地避免RNA降解。這些要求都限制了核酸檢測(cè)方法在基層工作中的開(kāi)展和運(yùn)用。

核酸檢測(cè)常用的方法包括，核酸雜交檢測(cè)（hy?bridization）、逆轉(zhuǎn)錄?聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)（reverse transcription?polymerase chain reaction，RT?PCR）、實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄?聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)（real?time fluorescence quantitative reverse transcription?polymerase chain reaction，RT?qPCR）、基因芯片（gene chip）和核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（nucleic acid se?quence?based amplification，NASBA）等。

核酸雜交檢測(cè)的原理是雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下解開(kāi)，在條件恢復(fù)后又可依堿基配對(duì)規(guī)律形成雙鏈結(jié)構(gòu)。雜交通常在一支持膜上進(jìn)行，因此又稱為核酸印跡雜交。但由于該方法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，已基本不用于登革病毒的核酸檢測(cè)。在目前臨床檢測(cè)中，最常用的是RT?PCR和RT?qPCR。在RT?PCR檢測(cè)中，通過(guò)對(duì)登革病毒不同位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行片段擴(kuò)增，不僅可以檢測(cè)樣品中是否含有登革病毒核酸，還可以判斷病毒的血清型，通過(guò)進(jìn)一步的序列測(cè)定可以獲得病毒的核苷酸序列，從分子生物學(xué)角度對(duì)病毒的流行和傳播進(jìn)行分析。而使用RT?qPCR檢測(cè)則無(wú)法獲得病毒的核苷酸序列。但是，RT?qP?CR相對(duì)RT?PCR可以實(shí)時(shí)地觀察結(jié)果，檢測(cè)時(shí)間短，有更高的靈敏度，并且可以定量測(cè)定，加之反應(yīng)在一個(gè)密封的體系里進(jìn)行，大大地減少了污染的可能性。因此，在對(duì)患者的急性期臨床標(biāo)本檢測(cè)中應(yīng)用更加廣泛。

NASBA是在恒溫條件下對(duì)病毒核酸進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)電發(fā)光設(shè)備用探針雜交的方法檢測(cè)出來(lái)。NASBA可以擴(kuò)增在人血中含量低至1～10 PFU/mL 的登革病毒［25］。相較于 RT?PCR，NASBA在41℃的恒溫下進(jìn)行，不需要溫度循環(huán)裝置；產(chǎn)物是單鏈RNA，可以直接用于雜交檢測(cè)，而且RNA較DNA容易降解，減少了陽(yáng)性產(chǎn)物可能帶來(lái)的污染問(wèn)題。在NASBA反應(yīng)體系中加入分子信標(biāo)探針，可以實(shí)時(shí)觀測(cè)反應(yīng)結(jié)果。相較于RT?PCR和RT?qPCR，NASBA的簡(jiǎn)便和快捷更有利于在基層開(kāi)展和運(yùn)用。但是，NASBA需要進(jìn)一步提高其靈敏度。基因芯片的發(fā)展時(shí)間較短，但是它操作簡(jiǎn)便、成本低、體積小、高通量，具有廣泛的應(yīng)用前景，并有待進(jìn)一步研究和推廣［26］。

在臨床檢測(cè)中，血清、全血或者血漿是登革病毒核酸檢測(cè)的常見(jiàn)標(biāo)本。有研究顯示，組織、尿液或者唾液也可以作為臨床檢測(cè)標(biāo)本。在發(fā)病0～5天時(shí)，用RT?qPCR檢測(cè)尿液中登革病毒核酸的陽(yáng)性率低于血清中的陽(yáng)性率。但是，在發(fā)病6～16天，RT?qPCR檢測(cè)尿液中登革病毒核酸的陽(yáng)性率大幅增加，并且高于血清檢測(cè)的陽(yáng)性率。甚至在血清中出現(xiàn)IgM和IgG，在利用血清無(wú)法檢測(cè)出病毒核酸的情況下，尿液檢測(cè)的陽(yáng)性率依然保持較高水平［27］。還有報(bào)道稱，用 RT?qPCR 能從唾液中檢測(cè)出登革病毒核酸［28］。這些都為登革病毒核酸檢測(cè)提供了更多可能的檢測(cè)樣本。

2.4 病毒分離

由于登革病毒分離的時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)樣品的要求較高，加之核酸檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，在臨床檢測(cè)中已經(jīng)逐步被核酸檢測(cè)所取代。但是，病毒分離作為判定登革病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，能獲得毒株進(jìn)行進(jìn)一步研究病毒的病原學(xué)、表型特征和抗原漂移等，仍然是登革病毒檢測(cè)的一項(xiàng)重要技術(shù)。

登革病毒分離的方法包括乳鼠分離、蚊蟲(chóng)分離和細(xì)胞分離。乳鼠分離實(shí)驗(yàn)成本較高，對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備要求也較高，并且敏感性不高，因此大多實(shí)驗(yàn)室不采用。可以用于蚊蟲(chóng)分離的蚊媒種類有：埃及伊蚊、白紋伊蚊、漢安巨蚊和華麗伊蚊等。登革病毒能在4～5天內(nèi)在蚊體內(nèi)復(fù)制達(dá)到高滴度水平。雖然蚊蟲(chóng)分離是分離登革病毒最敏感的方法，但需要昆蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)室培育大量的蚊蟲(chóng)用以分離，并且要注意防止感染蚊蟲(chóng)逃逸，因此也是最少使用的方法［29］。

目前最常用的登革病毒分離的方法是細(xì)胞分離，常用細(xì)胞有：恒河猴腎細(xì)胞（Ganges River mon?key kidney cells，LLC?MK2）、非洲綠猴腎細(xì)胞（Af?rican green kidney cells，Vero cells）、金黃地鼠腎細(xì)胞（Baby Hamster Syrian kidney cells，BHK21）、白紋伊蚊細(xì)胞（Aedes albopictus cells，C6/36）和偽盾伊蚊細(xì)胞（Aedes pseudoscutellaris cells，AP61）等。樣品中的病毒載量是影響登革病毒分離率的關(guān)鍵因素；樣品中抗體滴度越低，分離率越高；DHF患者樣本比DF患者樣本的病毒分離率更低；在發(fā)熱期間采集樣本分離病毒能獲得更高的分離率；發(fā)病天數(shù)與病毒分離率也密切相關(guān)，采取發(fā)病5天前的樣本能提高病毒分離率［30］。因此，盡量采集發(fā)病早期的標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，可以有效提高病毒分離率。由于某些毒株不能引起明顯的細(xì)胞病變，因此可以結(jié)合IFA、RT?PCR等方法來(lái)鑒定病毒分離結(jié)果。隨著細(xì)胞培養(yǎng)和病毒分離技術(shù)的發(fā)展，有研究通過(guò)在同一細(xì)胞瓶中培養(yǎng)不同細(xì)胞，可以同時(shí)分離鑒定不同病毒，或者使用基因改造的細(xì)胞來(lái)分離病毒［31］。雖然這些方法尚未在病毒分離中推廣運(yùn)用，但為登革病毒分離提供了借鑒。

3 結(jié)語(yǔ)

登革熱檢測(cè)方法多種多樣，商品化的檢測(cè)試劑也琳瑯滿目。近年來(lái)，使用膠體金免疫層析快速試驗(yàn)檢測(cè)登革病毒抗原和抗體，由于其具有操作簡(jiǎn)便、價(jià)格相對(duì)低廉、無(wú)需專用儀器、無(wú)需特殊培訓(xùn)、檢測(cè)結(jié)果直觀和現(xiàn)場(chǎng)使用方便等優(yōu)點(diǎn)，在基層單位得到了廣泛的應(yīng)用和推廣。同時(shí)，隨著對(duì)病毒的研究更加深入和細(xì)致，檢測(cè)方法和技術(shù)不斷更新，檢測(cè)樣品更加多樣化。在患者的不同時(shí)期，采用不同的檢測(cè)方法，甚至是聯(lián)合使用多種檢測(cè)方法，既有助于排除假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果，避免交叉反應(yīng)結(jié)果，又有利于提高檢測(cè)結(jié)果的靈敏度。同時(shí)，從檢測(cè)結(jié)果的靈敏度和特異性上對(duì)我國(guó)市場(chǎng)上存在的登革熱檢測(cè)商品化試劑進(jìn)行比較，不同品牌的試劑存在差異。比如，在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，進(jìn)口NS1檢測(cè)試劑的特異性高于國(guó)產(chǎn)NS1檢測(cè)試劑，但是國(guó)產(chǎn)試劑的靈敏度高于進(jìn)口試劑［32?33］。然而，國(guó)家缺乏相關(guān)的規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)對(duì)試劑的選擇進(jìn)行指導(dǎo)，這就可能造成采用相同檢測(cè)方法卻使用不同試劑的醫(yī)院對(duì)臨床標(biāo)本做出不同的判斷。因此，希望國(guó)家能制定相關(guān)的工作標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)檢測(cè)工作中試劑的選用進(jìn)行指導(dǎo)，用以規(guī)范檢測(cè)診斷。

通過(guò)對(duì)各種方法進(jìn)行比較，筆者認(rèn)為根據(jù)不同時(shí)期和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同的實(shí)驗(yàn)方法，才能有效地檢測(cè)和發(fā)現(xiàn)登革熱。NS1檢測(cè)、核酸檢測(cè)和病毒分離在發(fā)病早期的敏感度較高，而在血液中抗體存在的時(shí)間較長(zhǎng)，有利于進(jìn)行大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查。在患者的早期檢測(cè)中，我們傾向于選用敏感性高、快速、簡(jiǎn)便、價(jià)廉以及能將登革熱與其他具有相似臨床癥狀的疾病區(qū)分開(kāi)來(lái)的實(shí)驗(yàn)方法，如NS1和核酸檢測(cè)。而在疫情暴發(fā)和流行中的監(jiān)測(cè)，我們則傾向于選擇特異性高，高通量，能在疫情的早期發(fā)現(xiàn)患者以及確定流行毒株血清型的方法。在2014年登革熱流行中，廣州市在基層醫(yī)院使用膠體金快速試劑篩查登革病毒NS1和IgM/IgG，廣州市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)一步對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)、核酸檢測(cè)和病毒分離，都取得較好結(jié)果，有力地支持了全市的疫情防控工作。相信隨著科技的發(fā)展和研究的深入，復(fù)合運(yùn)用多重手段，準(zhǔn)確、快速地檢測(cè)登革病毒，及早發(fā)現(xiàn)登革熱患者，將會(huì)極大地提升登革熱防控的成效。

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