軟皮熱敷散的醇提工藝優(yōu)選*

李佰成 ，任 慧 ，張 紅 △

1陜西省中醫(yī)醫(yī)院，陜西 西安 710003；2陜西省中醫(yī)藥研究院

硬皮病是一種病因不明的結(jié)締組織病，臨床表現(xiàn)為皮膚硬化和內(nèi)臟器官的纖維化［1］。軟皮熱敷散是陜西省中醫(yī)醫(yī)院皮膚科用于治療硬皮病的經(jīng)驗(yàn)處方，療效顯著。該方由艾葉、桂枝、陳皮、山豆根、威靈仙、劉寄奴、紅花等中藥組成，具有活血通絡(luò)，散寒祛濕的功效，用于治療皮痹、凍瘡、雷諾氏病、蛇串瘡后遺神經(jīng)痛等病。由于該藥使用前需用布包上籠屜加熱30分鐘后熱敷，操作繁復(fù)，為了方便使用，考慮將其改為軟膏劑［2-3］。處方中山豆根、威靈仙等藥材的活性成分為生物堿、黃酮、三萜、酚酸等小分子物質(zhì)［4-5］，故而考慮以乙醇提取為宜。因此，重點(diǎn)考察乙醇濃度、提取次數(shù)、溶劑量及提取時(shí)間，以苦參堿含量和干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，借助正交試驗(yàn)優(yōu)選其醇提工藝［6-7］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津2010A-UV型高效液相色譜儀(工作站：CLASS-VP，島津公司)；Innoval NH2 色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司)；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)；HSY-2MB型電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；HZ2001A型稱量天平(慈溪紅鉆衡器設(shè)備有限公司)；BT25S型電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。

1.2 試藥 山豆根、威靈仙等藥材購(gòu)自陜西省中醫(yī)醫(yī)院；苦參堿(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110721-200613)；色譜純乙腈(美國(guó)FISHER公司)，純化水，無(wú)水乙醇、氯仿、甲醇、磷酸、氨水均為分析純。

2 方法與結(jié)果

軟皮熱敷散中醇提藥材的提取工藝，以山豆根的活性成分苦參堿的含量及干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)考察乙醇濃度、提取次數(shù)、溶劑量、提取時(shí)間對(duì)該工藝的影響，優(yōu)選出最佳醇提工藝。

2.1 樣品制備 按軟皮熱敷散處方比例稱取山豆根、威靈仙等藥材，共9份，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)安排提取、過(guò)濾，合并濾液，備用。

2.2 苦參堿測(cè)定

2.2.1 色譜條件［8-9］Innoval NH2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相：乙腈 - 無(wú)水乙醇 -3%磷酸(86∶7∶7)，檢測(cè)波長(zhǎng)；220 nm，流速：1 mL/min，柱溫：25℃，進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1 mL含苦參堿75 μg的對(duì)照品溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液制備［10］取1/30體積的提取液，置水浴鍋蒸干，用氯仿-甲醇-濃氨試液(40∶10∶1)轉(zhuǎn)移至 25 mL 容量瓶中，超聲處理 20 分鐘，冷卻至室溫后定容，濾過(guò)，精密吸取5 mL，蒸干，用甲醇轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶，定容，即得。

2.2.4 陰性對(duì)照品溶液制備 按照處方比例稱取軟皮熱敷散藥材(去除山豆根)［11］，按軟皮熱敷散醇提藥材的提取工藝制備提取液，制得陰性對(duì)照提取液，再取與供試品相同的量，按供試品溶液的制備方法處理，得陰性對(duì)照品溶液。

2.2.5 專屬性試驗(yàn) 吸取上述對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品色譜與苦參堿對(duì)照品色譜相比在相同時(shí)間處有色譜峰，陰性對(duì)照品溶液與苦參堿對(duì)照品色譜相比在相同時(shí)間處無(wú)吸收峰，表明處方中其他藥材對(duì)該方法測(cè)定苦參堿含量無(wú)干擾［12］。

2.3 干膏得率測(cè)定 精密量取醇提液100 mL，置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后將其置于105℃烘箱干燥3小時(shí)［13］，取出后放置在干燥器中30分鐘冷卻至室溫，迅速稱定重量，直至恒重，計(jì)算干膏得率。

2.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按處方量比例稱取山豆根、威靈仙等藥材，隨機(jī)取樣編為1～9個(gè)試驗(yàn)號(hào)。以乙醇濃度、提取次數(shù)、溶劑量、提取時(shí)間為考察因素，以苦參堿含量和干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)分別為 70%、30%，根據(jù)權(quán)重系數(shù)計(jì)算綜合評(píng)分［14］。按正交表L9(34)中每個(gè)試驗(yàn)號(hào)要求進(jìn)行試驗(yàn)，篩選最佳醇提條件，因素水平安排見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表1 正交試驗(yàn)因素水平

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

借助直觀分析正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)，最佳醇提條件為 A2B3C1D2；由方差分析結(jié)果判斷因素 A、B、C、D 對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響程度為B＞D＞C＞A，4個(gè)因素均無(wú)顯著影響；而因素B在水平2、3的均值接近，綜合考慮該醇提工藝的最佳條件為A2B3C1D2，即加6倍量的70%乙醇提取2次，每次1.5小時(shí)。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 按照軟皮熱敷散處方比例平行稱取藥材3份，分別加6倍量的70%乙醇提取2次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)、合并濾液。通過(guò)“2.2”“2.3”項(xiàng)下方法分別測(cè)定其苦參堿含量和干膏得率，計(jì)算綜合得分，結(jié)果表明優(yōu)選出的醇提工藝條件合理，穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好。

3 討論

軟皮熱敷散中山豆根、威靈仙中主要活性成分為生物堿、黃酮類、三萜等，依據(jù)這些活性物質(zhì)的性質(zhì)，本試驗(yàn)分別考察了50%、60%、70%乙醇提取軟皮熱敷散藥材的效果。而生物堿類成分是山豆根的主要活性物質(zhì)，也是其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)［15］，故本醇提工藝研究以山豆根中苦參堿的含量為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)軟皮熱敷散70%醇提液中苦參堿的含量最高，因此醇提工藝的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)中乙醇濃度分別設(shè)置為60%、70%、80%。試驗(yàn)過(guò)程中流動(dòng)相的變化對(duì)苦參堿測(cè)定結(jié)果影響較高，為使測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠，將流動(dòng)相配制好后采用等度洗脫測(cè)定苦參堿的含量［9］。

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