NF-κB和pAKT在卵巢癌組織中的表達(dá)及與病理學(xué)特征的關(guān)系

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(邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲 056001)

卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，是導(dǎo)致現(xiàn)階段臨床上育齡期女性病死率增加的重要因素。流行病學(xué)研究顯示，卵巢癌的發(fā)病率可達(dá)(6.1～7.1)/10萬人，特別是在具有卵巢家族性疾病的人群中，其發(fā)病率更高[1-2]。在探討卵巢癌發(fā)病機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)因子的改變，可以通過影響到卵巢上皮細(xì)胞的異常增殖、凋亡或者分化等病理生理過程，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞核異常分裂風(fēng)險(xiǎn)的增加[1-3]。細(xì)胞核因子-kappaB(phosphorylated protein kinase B，NF-κB)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B，pAKT)等，能夠影響到乳腺癌、甲狀腺癌或者肝癌等惡性腫瘤的發(fā)生，但在卵巢癌中的研究不足。本次研究選取了82例卵巢上皮性癌標(biāo)本，探討了相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)，并揭示了其與患者臨床病理特征間的關(guān)系，報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2012年1月至2017年1月在邯鄲市中心醫(yī)院病理科收集的82例卵巢上皮性癌標(biāo)本(卵巢癌組)、40例卵巢上皮良性腫瘤組織標(biāo)本(良性組)、正常卵巢組織(正常組)20例。卵巢癌組，年齡36～72歲，平均55.2±10.3歲，臨床分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期22例、Ⅲ期31例、Ⅳ期9例；病理學(xué)類型：漿液性癌41例、黏液性癌41例。良性組，年齡37～71歲，平均54.0±11.3歲，其中漿液性囊腺瘤23例、黏液性囊腺瘤17例。正常組，年齡32～62歲，平均52.1±9.0歲。三組研究對(duì)象的年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)

①卵巢上皮性癌標(biāo)本、卵巢上皮良性腫瘤組織標(biāo)本均經(jīng)過術(shù)后病理學(xué)檢查證實(shí)；②正常卵巢組織來源于因子宮肌瘤手術(shù)的患者；③卵巢癌患者均為初發(fā)、術(shù)前未接受放化療、免疫治療；④研究方案取得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)

①轉(zhuǎn)移性卵巢癌患者；②手術(shù)前具有放化療史；③患者的病理學(xué)資料、臨床資料不完整，難以進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3檢測(cè)方法

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時(shí)間為5min，加入NF-κB、pAKT抗體(鼠來源，ABCUM公司)， 37℃孵育 2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體(購自abcum公司)，37℃ 孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色，封片，鏡下觀察。

1.4免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化結(jié)果判定：pAKT蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，NF-κB蛋白陽性著色主要表達(dá)于細(xì)胞漿及細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，①根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；②根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽性?？偡?3分： “-”表達(dá)；為3～5分，“+”表達(dá)；為6～9分，“++”表達(dá)；>9分，“+++”表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1不同卵巢組織標(biāo)本中的NF-κB、pAKT蛋白表達(dá)程度比較

在卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率為53.66%、69.51%，在良性卵巢腫瘤組織中NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率分別為12.50%、22.50%，正常卵巢組織中NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率分別為10.00%、30.00%，卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率顯著的高于卵巢良性腫瘤組織及正常的卵巢組織(P<0.05)，見表1。

表1不同卵巢組織標(biāo)本中的pAKT、NF-κB蛋白表達(dá)程度(n)

Table 1 The expressions of pAKT and NF-κB protein in different ovarian tissues(n)

2.2卵巢癌組織標(biāo)本中的NF-κB、pAKT蛋白表達(dá)與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

Ⅲ期+Ⅳ期卵巢癌組織、低分化卵巢癌組織、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率顯著的高于Ⅰ期+Ⅱ期、高+中分化、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織(P<0.05)；卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率與患者的年齡、病理學(xué)類型及腫瘤直徑大小無關(guān)(P>0.05)，見表2。

表2 卵巢癌pAKT蛋白、NF-κB蛋白表達(dá)程度與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系[n(%)]

3討論

3.1卵巢癌發(fā)生的生物學(xué)機(jī)制背景研究

隨著病情的進(jìn)展，卵巢癌可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致了病死率的顯著上升[4]。臨床上包括化療、放療或者手術(shù)等綜合性的治療措施，治療后的患者的臨床病情緩解率仍然較低，患者的五年生存率或者近期臨床治療效果仍然無明顯的改善[5]。而通過對(duì)于卵巢癌發(fā)生過程中基因水平或者蛋白生物學(xué)水平的相關(guān)研究，可以為卵巢癌的治療提供新的思路。

pAKT蛋白是蛋白激酶家族成員，其可以促進(jìn)腫瘤相關(guān)蛋白信號(hào)通路pi3k/akt、P53、P16等的激活，加劇多種信號(hào)通路的交聯(lián)式激活作用，促進(jìn)患者體內(nèi)卵巢上皮細(xì)胞的交界性病變或者惡性病變的發(fā)生。pAKT蛋白同時(shí)能夠影響卵巢癌膜表面蛋白的糖蛋白配體的活性，降低癌細(xì)胞間的粘附能力，為卵巢上皮細(xì)胞惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移提供條件[6]；kappaB的表達(dá)能夠顯著促進(jìn)卵巢上皮細(xì)胞核的異常轉(zhuǎn)錄，增加癌細(xì)胞的持續(xù)性增殖或者異常分化的風(fēng)險(xiǎn)，特別是kappaB在結(jié)合細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的同時(shí)，抑制了細(xì)胞核內(nèi)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，抑制程序性凋亡的發(fā)生[7]。回顧國內(nèi)外相關(guān)已有的研究，認(rèn)為異常表達(dá)的kappaB或者pAKT蛋白能夠影響到卵巢癌的化療敏感性，同時(shí)對(duì)于評(píng)估卵巢癌的遠(yuǎn)期生存預(yù)后方面同樣具有一定的價(jià)值，但缺乏對(duì)于kappaB或者pAKT的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系研究。

3.2 NF-κB和pAKT在卵巢癌組織中的表達(dá)及與病理學(xué)特征的關(guān)系

本次研究通過免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，卵巢癌病灶組織中的NF-κB、pAKT蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于卵巢良性病變組或者正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示NF-κB、pAKT蛋白的異常表達(dá)可能參與到了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中，NF-κB、pAKT蛋白的高表達(dá)可以通過影響到下列幾個(gè)方面的因素，進(jìn)而促進(jìn)患者的病情進(jìn)展：①NF-κB的高表達(dá)，能夠影響癌細(xì)胞對(duì)于臨床正常卵巢皮質(zhì)層細(xì)胞的浸潤，促進(jìn)卵巢癌對(duì)于基底膜層的突破作用；②pAKT蛋白的高表達(dá)，是影響到卵巢癌增殖調(diào)控相關(guān)抗原磷酸化修飾的重要因素，蛋白水平的pAKT的上升能夠增加癌細(xì)胞通過血管轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。陶方方等于2014年探討了34例樣本量的不同病情的卵巢癌患者的資料后發(fā)現(xiàn)，在卵巢漿液腺細(xì)胞癌或者透明細(xì)胞癌中，NF-κB等的陽性表達(dá)率可平均上升25%～55%，且患者的臨床預(yù)后越差、遠(yuǎn)期生存預(yù)后指標(biāo)越低，相關(guān)癌相關(guān)蛋白的表達(dá)陽性率越高。在分析不同的臨床分期與卵巢癌患者相關(guān)分子生物學(xué)因子的表達(dá)關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn)，Ⅲ期+Ⅳ期卵巢癌組織、低分化卵巢癌組織、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中的NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率顯著的增加，這可能是由于[8]：①臨床分期的進(jìn)展主要認(rèn)為與分子生物學(xué)因子的改變對(duì)于卵巢癌細(xì)胞的變形、侵襲能力的增加有關(guān)；②細(xì)胞分化程度的下降或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的增加，則主要考慮與NF-κB、pAKT蛋白對(duì)于淋巴結(jié)誘導(dǎo)因子或者癌細(xì)胞分化凋亡調(diào)控因子a的激活作用有關(guān)。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)相關(guān)生物學(xué)因子的表達(dá)與患者卵巢癌細(xì)胞病理來源類型的關(guān)系， 提示細(xì)胞來源類型可能具有一定的遺傳保守性。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了NF-κB、pAKT蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系，綜上所述，卵巢癌組織中NF-κB、pAKT蛋白陽性表達(dá)率顯著的升高，并且與臨床分期、組織學(xué)分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

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