銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、抗氧化及血清生化指標(biāo)的影響

任小杰 李祥明 楊在賓 丁 曉 姜淑貞

(山東省動(dòng)物生物工程與疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院1，泰安 271018)(山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所2，濟(jì)南 250022)

長(zhǎng)期以來(lái)，抗生素對(duì)于降低畜禽死亡、促進(jìn)生長(zhǎng)起到了積極作用，但其藥物殘留及食品安全問(wèn)題逐漸顯現(xiàn)，使得多國(guó)立法禁止使用抗生素[1]。天然植物及其相應(yīng)提取物因具有純天然、無(wú)毒副作用和無(wú)抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，日益成為抗生素替代品的研究熱點(diǎn)。銀杏葉又名白果葉，是中國(guó)特有的植物，具有較高的應(yīng)用價(jià)值，被用作藥物已有500多年的歷史，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、食品等領(lǐng)域[2]。銀杏葉提取物(Ginkgobilobaextract, EGB)是用乙醇提取法從銀杏葉中提取的一種物質(zhì)，含有黃酮、萜內(nèi)酯和酚類(lèi)等多種生物活性成分，具有抗血小板活化因子、提高機(jī)體免疫功能及清除自由基等多種功效。桿菌肽鋅作為一種畜禽專(zhuān)用抗生素飼料添加劑應(yīng)用廣泛，它能抑制腸道內(nèi)有害微生物的繁殖，減少與宿主爭(zhēng)奪養(yǎng)分，增進(jìn)食欲，提高采食量，進(jìn)而提高肉雞的生長(zhǎng)性能[3]。以往的研究中有關(guān)于銀杏葉及其提取物在畜禽應(yīng)用上的報(bào)道，主要用于提高生長(zhǎng)性能[4-5]、改善胴體品質(zhì)[6]、增強(qiáng)機(jī)體免疫[7-8]及抗氧化能力[9-10]。但是，關(guān)于銀杏葉及其提取物的作用效果的對(duì)比鮮有研究。本課題組在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，愛(ài)拔益加(AA)肉雞飼糧中添加20、40、60 g/kg的銀杏葉及0.4、0.8、1.2 g/kg的EGB，60 g/kg的銀杏葉和0.8 g/kg的EGB添加組肉雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率效果最好。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在飼糧中添加60 g/kg銀杏葉和0.8 g/kg EGB，研究其對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、抗氧化和血清生化指標(biāo)的影響，旨在為銀杏葉及其提取物EGB在肉雞生產(chǎn)上的推廣提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

肉仔雞(愛(ài)拔益加，Arbor Acres)購(gòu)自山東省泰安市寧陽(yáng)西嶺家庭農(nóng)場(chǎng)。銀杏葉：臨沂瑞康盛生物有限公司，粉碎過(guò)50目篩。采用waters alliance 2695高效液相色譜儀測(cè)定銀杏葉及其提取物中總黃酮醇苷和萜內(nèi)酯含量。采用外標(biāo)法計(jì)算，總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.54%，萜內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.18%。銀杏葉提取物(Ginkgobilobaextract, EGB)：臨沂瑞康盛生物有限公司，采用乙醇提取法從銀杏葉中提取的一種提取物?？傸S酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30.96%，萜內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.91%。桿菌肽鋅(Bacitracin Zinc, Bacitracin)：15%的桿菌肽鋅預(yù)混劑：由福建省蒲城縣綠康生化股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

選取健康的1日齡愛(ài)拔益加(AA)混合雛雞640只，隨機(jī)分為4個(gè)處理，每個(gè)處理8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只雞。實(shí)驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，實(shí)驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上分別添加60 g/kg的銀杏葉、0.8 g/kg的EGB和0.02 g/kg的桿菌肽鋅，用銀杏葉等量替代基礎(chǔ)飼糧中的麩皮。基礎(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平參照NRC(1994)肉仔雞標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)期為42 d，分2個(gè)階段飼養(yǎng)：前期1～21 d和后期22～42 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))/%

注：1)預(yù)混料為每千克飼糧提供：VA 8 050 IU，VD33 000 IU，VE 30 mg，VK35 mg，VB12.58 mg，VB212.5 mg，VB64.5 mg，VB120.018 mg，氯化膽堿800 mg，泛酸鈣13 mg，煙酸45 mg，生物素0.20 mg，葉酸1.20 mg，Mn 100 mg，F(xiàn)e 80 mg，Zn 58 mg，Cu 8.8 mg，I 0.374 mg，Se 0.28 mg。2)代謝能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。

1.3 飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)雞采用舍內(nèi)籠養(yǎng)，自由采食和飲水，持續(xù)光照，第一周溫度保持在32 ℃，隨后每周降低3 ℃，直至26 ℃為止。按照肉雞正常免疫程序進(jìn)行免疫。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)雞每天以重復(fù)為單位記錄采食量， 0、21、42 d，空腹稱(chēng)重。計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。

1.4.2 抗氧化指標(biāo)

肉雞21 d和42 d，每個(gè)重復(fù)選取1只體重接近平均體重的健康雞，空腹12 h，翅靜脈采血，分離血清，-20 ℃保存，用以測(cè)定血清抗氧化指標(biāo)。隨后折頸處死，分離肝臟，-20 ℃保存，測(cè)定肝臟抗氧化指標(biāo)。

采用752型紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)測(cè)定血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及組織蛋白質(zhì)。測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒并按說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。

1.4.3 血清生化指標(biāo)

采用日立HITACHI7600～020全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總蛋白(TP)、白蛋白(Albumin)、甘油三酯(TG)及總膽固醇(TCHO)。TP含量采用雙縮脲法測(cè)定；白蛋白含量采用溴甲酚綠法測(cè)定；TG水平采用甘油磷酸氧化酶法測(cè)定；TCHO水平采用氧化酶法測(cè)定。均采用日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社的試劑盒測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SAS8.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，方差分析使用單因素方差分析(One-way ANOVA)，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長(zhǎng)性能

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，肉雞生長(zhǎng)健康，無(wú)死亡情況。飼糧中添加銀杏葉和EGB對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表2。相比于對(duì)照組，飼糧中添加銀杏葉、EGB和桿菌肽鋅均能顯著提高21 d體重(P<0.05)，但是，各組之間42 d 體重、1～21 d 及1～42 d ADG、22～42 d ADFI和F/G差異不顯著(P>0.05)。同時(shí)，與對(duì)照組和銀杏葉組相比，EGB和桿菌肽鋅顯著提高1～21 d和1～42 d ADFI(P<0.05)、降低1～21 d和1～42 d F/G(P<0.05)。

表2 銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，余同。

2.2 血清抗氧化能力

銀杏葉及EGB對(duì)血清抗氧化能力的影響見(jiàn)表3，相比于對(duì)照組及桿菌肽鋅組，肉雞飼糧中添加銀杏葉和EGB能顯著提高(P<0.05)21 d血清T-SOD，而銀杏葉和EGB添加組42 d血清T-SOD較桿菌肽鋅組顯著提高(P<0.05)。同時(shí)，相比于對(duì)照組，飼糧中添加銀杏葉、EGB和桿菌肽鋅能顯著提高21、42 d血清GSH-Px活性(P<0.05)，且以EGB添加組效果最為明顯。各組間21、42 d血清MDA含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞血清抗氧化性能的影響

2.3 肝臟抗氧化能力

飼糧中添加銀杏葉和EGB對(duì)肉雞肝臟抗氧化能力的影響見(jiàn)表4，與對(duì)照組相比，飼糧中添加銀杏葉、EGB和桿菌肽鋅對(duì)肉雞21 d肝臟T-SOD無(wú)顯著影響(P>0.05)，而21 d肝臟T-SOD、GSH-Px活性以及42 d肝臟GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)。與對(duì)照組相比，EGB添加組21 d肝臟MDA含量顯著降低(P<0.05)，銀杏葉、EGB和桿菌肽鋅添加組42 d MDA含量降低(P<0.05)。

表4 銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞肝臟抗氧化性能的影響

2.4 血清生化

與對(duì)照組和桿菌肽鋅組相比，飼糧中添加銀杏葉和EGB能顯著提高肉雞21 d血清TP水平(P<0.05)，而降低21 d血清TG和TCHO水平(P<0.05)，見(jiàn)表5。EGB和桿菌肽鋅添加組42 d血清TP和白蛋白含量增加，而EGB添加組42 d血清TP水平較銀杏葉組顯著提高(P<0.05)。同時(shí)，與對(duì)照組和桿菌肽鋅組相比，銀杏葉和EGB添加組42 d血清TG及TCHO水平顯著降低(P<0.05)。

表5 銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，銀杏葉及EGB對(duì)肉雞生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，曹福亮等[11]在1日齡黃羽肉雞飼料中添加5～15 g/kg銀杏葉生物飼料添加劑，到42日齡時(shí)，能顯著提高肉雞的ADG，其中以10 g/kg為最佳。楊小燕等[4]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加8 g/kg EGB顯著提高肉雞后期增重和飼料轉(zhuǎn)化率，顯著降低肉雞腹脂率。臧素敏等[12]研究表明，添加0.3～1.2 g/kg EGB對(duì)肉雞有一定的促生長(zhǎng)作用，尤其以0.6 g/kg促生長(zhǎng)明顯，添加4.8 g/kg明顯降低肉雞的腹脂率。本研究結(jié)果顯示，飼糧中添加60 g/kg銀杏葉和0.8 g/kg EGB能夠提高肉雞21 d體重和1～42 d ADFI，降低肉雞1～42 d F/G，這與楊小燕等[4]、臧素敏等[12]研究結(jié)果一致，這可能與銀杏葉與EGB能保護(hù)腸道黏膜，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)有關(guān)[5,12]。陳強(qiáng)等[13]研究表明，飼糧中添加EGB能降低肉雞的平均日采食量和料重比。EGB中含有的萜內(nèi)酯是天然強(qiáng)活性的PAF拮抗劑，可抑制PAF誘導(dǎo)的腸道黏膜損害，因此EGB能很好的保護(hù)胃黏膜，增加肉雛雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收量，改善肉雞的生長(zhǎng)性能[14-15]。同時(shí)，銀杏葉及EGB中含有黃酮和萜內(nèi)酯等多種活性物質(zhì)，黃酮可作用于動(dòng)物的下丘腦-垂體-靶器官生長(zhǎng)軸，促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)[16-17]，這可能是銀杏葉和EGB改善肉雞生長(zhǎng)性能的另一原因。另外，不同實(shí)驗(yàn)條件下，銀杏葉及EGB在肉雞飼糧中具有不同的添加劑量，可能是由于其有效成分含量不同及不同的提取工藝所致，同時(shí)，不同的飼養(yǎng)環(huán)境以及管理制度也會(huì)造成添加量的差異，因而有待進(jìn)一步研究。

3.2 銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞抗氧化性能的影響

機(jī)體的抗氧化性能是影響機(jī)體健康的重要因素。GSH-Px和SOD是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶，GSH-Px可以清除在細(xì)胞呼吸代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化物和羥自由基，SOD可以清除超氧陰離子自由基，有保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用[18-19]。MDA的含量，反映體內(nèi)自由基的數(shù)量[20]，自由基性質(zhì)活潑，有極強(qiáng)的氧化反應(yīng)能力，對(duì)機(jī)體有很大的危害性[21]。吳沁等[22]研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉片能明顯提高血漿SOD的活力，減少血漿中MDA的含量，表現(xiàn)出抗氧化作用。Zhao等[23]在腸胃內(nèi)注射銀杏葉針劑的小鼠中發(fā)現(xiàn)，其體內(nèi)的GSH-Px、SOD和CAT含量明顯升高，表明銀杏葉通過(guò)提高機(jī)體內(nèi)抗氧化酶的活性減少氧化損傷。Zhou等[19]研究發(fā)現(xiàn)，EGB能夠顯著改善機(jī)體的組織損傷，提高SOD活性，降低MDA含量。EGB能夠阻礙活性氧發(fā)揮作用，清除超氧陰離子自由基、羥基自由基、過(guò)羥基以及含氮氧化物[24]。陳強(qiáng)等[13]研究報(bào)道，EGB可通過(guò)提高血清SOD活性、降低MDA含量等作用對(duì)四氯化碳致兔氧化損傷起到保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，銀杏葉及其提取物對(duì)肉仔雞血清MDA含量無(wú)顯著影響，但不同程度的提高了血清和肝臟T-SOD和GSH-Px活性，降低肝臟中MDA含量。前人研究結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果類(lèi)似，銀杏葉及EGB提高肉雞抗氧化性能的作用與其所含的有效成分密切相關(guān)。銀杏葉黃酮具有多酚羥基結(jié)構(gòu)，能夠提供活潑的氫質(zhì)子，與油脂氧化產(chǎn)生的自由基結(jié)合成較穩(wěn)定的產(chǎn)物，從而阻止油脂的自動(dòng)氧化過(guò)程[10,25]。同時(shí)，機(jī)體抗氧化性能的提高，影響機(jī)體健康，從而促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)性能的提高。

3.3銀杏葉及其提取物對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

血清中TP和白蛋白的含量反映了機(jī)體蛋白質(zhì)的吸收和代謝狀況[26]。血清中TCHO和TG是反映機(jī)體脂類(lèi)代謝水平的重要指標(biāo)，TG是機(jī)體內(nèi)存在最多的脂類(lèi)，其含量升高與動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病密切相關(guān)，TCHO是血液中所有脂蛋白所含膽固醇之和[18]，可以說(shuō)明體內(nèi)膽固醇的清除情況[27]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉及EGB能夠降低血清TCHO和TG、提高血清TP，并且作用效果好于桿菌肽鋅組。何玉琴等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加銀杏葉超細(xì)粉，血清中TCHO含量明顯減少，TG含量呈下降趨勢(shì)。孫繼輝等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼糧中添加2、2.5 g/kg的EGB使血清TP升高、TCHO和TG降低，并且作用效果好于抗生素組。陳梅霞等[28]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，5 g/kg EGB和0.1 g/kg銀杏黃酮均能降低小鼠血清TCHO和TG含量，說(shuō)明EGB和銀杏黃酮有調(diào)節(jié)血脂、脂蛋白-膽固醇代謝的作用。這些研究結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果一致。大量資料表明：銀杏葉含有黃酮類(lèi)、萜內(nèi)酯類(lèi)、長(zhǎng)鏈酚類(lèi)等化學(xué)成分，其制劑或提取物的有效成分有降低血清膽固醇、改善血黏度的作用[9]。銀杏葉改善肉雞血清生化指標(biāo)的作用效果沒(méi)有EGB明顯[29]，這可能是因?yàn)镋GB的有效成分被分離出來(lái)，純度更高，作用更明顯。銀杏葉及EGB能夠降低膽固醇，調(diào)節(jié)血脂，增強(qiáng)肉雞機(jī)體健康，與對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響相互呼應(yīng)。

4 結(jié)論

4.1 飼糧中添加銀杏葉及EGB可以不同程度的改善肉雞的生長(zhǎng)性能，提高肉雞21 d體重、降低料重比。

4.2 銀杏葉及EGB可以不同程度的改善肉雞的抗氧化性能，使血清和肝臟中T-SOD和GSH-Px含量提高，MDA含量降低。

4.3 銀杏葉及EGB可以降低肉雞血清TG和TCHO含量，具有調(diào)節(jié)血脂作用。另外，銀杏葉及EGB作為一種新型植物性生長(zhǎng)促進(jìn)劑，在一定條件下可以替代桿菌肽鋅。

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