脂多糖引起炎癥反應(yīng)的表觀遺傳學(xué)機制及其營養(yǎng)調(diào)控

陳靜波 董國忠 孫雅望 張 翥

(西南大學(xué)動物科技學(xué)院，重慶市牧草與草食家畜重點實驗室，重慶 400716)

炎癥反應(yīng)對于機體是一種防御行為，在受傷、應(yīng)激或病原體入侵時都可以促使機體發(fā)生炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生一些促炎因子，同時也會產(chǎn)生一些抗炎因子。促炎因子和抗炎因子的平衡對維持機體的健康非常重要，一旦失衡將會造成急性系統(tǒng)性炎癥等癥狀，對機體組織造成損傷。脂多糖(LPS)引起的炎癥反應(yīng)的免疫學(xué)機制已有許多研究，但是在基因?qū)用娴难芯肯鄬^少，特別是近年來興起的表觀遺傳學(xué)方面的研究不多。要想真正透徹了解炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展機制，從表觀遺傳學(xué)方面去研究必不可少。同時，研究飼糧對炎癥反應(yīng)的表觀遺傳學(xué)調(diào)控具有重要實踐意義。

1 LPS與炎癥反應(yīng)

LPS又稱內(nèi)毒素或熱原，是革蘭氏陰性菌細胞壁的組成成分。正常情況下細菌的LPS沒有毒性，當(dāng)受到刺激或細菌死亡時釋放出的游離LPS具有毒性，能引起機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。LPS非常穩(wěn)定，只有在160 ℃以上的溫度下加熱2～4 h，或者用強酸、強堿或強氧化性物質(zhì)在沸水中煮30 min才能破壞其生物活性。而且LPS存在廣泛，空氣、水、飼料和糞便中都可以檢測到不同濃度的LPS[1]。另外，熱應(yīng)激和反芻動物的高精料飼糧等都可造成胃腸道中產(chǎn)生較多的LPS[2]。LPS一旦進入血液循環(huán)或是淋巴系統(tǒng)將會跟單核細胞、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和中性粒細胞等作用，刺激炎癥因子的產(chǎn)生。LPS首先與LPS結(jié)合蛋白(LBP)結(jié)合成LPS-LBP復(fù)合物，這使LPS的生物活性顯著增強[3]。LPS-LBP復(fù)合物能夠被細胞表面的CD14和髓樣分化蛋白2(MD2)受體識別并結(jié)合，接著CD14將LPS-LBP復(fù)合物遞呈給Toll樣受體(TLR)，激活髓樣分化因子88(MyD88)依賴性信號通路和TLR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TRIF)依賴性信號通路，激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)，并激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)，從而活化MAPK/NF-κB信號通路，激活的NF-κB進入細胞核內(nèi)，與相關(guān)基因的啟動子作用，從而促進炎癥因子或趨化因子的釋放，如腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素(IL)-1和IL-6等，引起炎癥反應(yīng)[4-9]。

2 LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與表觀遺傳學(xué)

表觀遺傳學(xué)是研究在DNA堿基序列不變的情況下，由于DNA狀態(tài)或是染色質(zhì)形態(tài)發(fā)生變化，影響了相關(guān)基因的表達，使機體表型發(fā)生變化的一門科學(xué)。表觀遺傳學(xué)中可以通過組蛋白修飾、DNA甲基化和microRNA的調(diào)控來影響炎癥反應(yīng)中相關(guān)信號通路物質(zhì)和炎癥因子的表達，從而影響炎癥反應(yīng)。

2.1 組蛋白修飾與LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)

組蛋白是真核生物染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)，是與DNA結(jié)合最為密切的蛋白質(zhì)。哺乳動物的組蛋白有5種成分，即H1、H2A、H2B、H3、H4。其中H2A、H2B、H3、H4各有2個單體并共同形成八聚體，在八聚體外纏繞著長度為146個堿基對的DNA；H1則線性連接八聚體而形成1個個串聯(lián)的核小體。組蛋白的N端由于伸出核小體外，因此極不穩(wěn)定，尤其是組蛋白H3和H4。因此，組蛋白經(jīng)常受到不同的化學(xué)修飾，如乙?；?、甲基化、磷酸化和泛素化等[10-11]。甲基化一般抑制基因表達，乙?；话愦龠M基因表達。

最早發(fā)現(xiàn)由LPS誘導(dǎo)炎癥基因染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的證據(jù)是1999年的小鼠試驗，該試驗發(fā)現(xiàn)由于LPS的刺激，巨噬細胞IL-12基因啟動子區(qū)域發(fā)生快速的核小體移位，從而改變了染色質(zhì)形態(tài)，導(dǎo)致IL-12的釋放[12]。環(huán)氧化酶2(COX-2)是參與LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的一種關(guān)鍵酶。在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中發(fā)現(xiàn)COX-2調(diào)控區(qū)域的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，LPS能引起COX-2基因處組蛋白H4第12位的賴氨酸(H4K12)乙?；?，促進COX-2基因的表達；增加乙?；笍?fù)合物也能提高COX-2的活性[13]。巨噬細胞中COX-2基因啟動子處組蛋白H3上發(fā)生的磷酸化和乙?；部梢允笴OX-2被活化。丁酸鈉是一種組蛋白去乙酰化抑制劑，丁酸鈉能夠增強H3的乙?；黾覥OX-2基因的表達。加入MAPK抑制劑會引起LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)中H3的乙酰化和磷酸化發(fā)生改變，這說明丁酸鈉增強LPS誘導(dǎo)的COX-2基因表達是通過MAPK依賴性信號通路引起的[14]。組蛋白去甲基化酶3(Jmjd3)是Jumonji家族中的一種酶，該酶可以擦除組蛋白標(biāo)記。當(dāng)LPS刺激巨噬細胞后能快速地通過NF-κB通路誘導(dǎo)Jmjd3產(chǎn)生。Jmjd3能夠跟多聚梳類蛋白(PcG)靶位基因結(jié)合，阻止PcG對基因表達的抑制作用，從而調(diào)控炎癥基因的表達。持續(xù)的IL-4處理可以激活Jmjd3，使信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT6)啟動子處三甲基化的組蛋白H3第27位的賴氨酸(H3K27me3)抑制被解除[15]。研究還發(fā)現(xiàn)，LPS刺激樹突狀細胞后，組蛋白H3第10位的絲氨酸(H3S10)能被磷酸化，這可能在NF-κB的招募過程中起了很大作用。有研究也證明了H3S10的磷酸化與基因轉(zhuǎn)錄相關(guān)[16]。

組蛋白去乙酰化酶(HDAC)是一類參與炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵酶，在炎癥反應(yīng)中具有多重作用。HDAC同時參與促炎因子和抗炎因子的表達，既可以上調(diào)炎癥因子的表達，也可以下調(diào)炎癥因子的表達。LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中幾乎所有的HDAC能被激活。HDAC通常是被一些特定的靶蛋白招募到靶位基因啟動子處對染色質(zhì)進行調(diào)節(jié)，而不是直接作用于DNA。在炎癥反應(yīng)中，HDAC有可能通過抑制抗炎基因的表達，使促炎基因得以表達。在巨噬細胞中HDAC3缺乏時，幾乎一半的LPS誘導(dǎo)的炎癥基因的表達出現(xiàn)障礙，特別是LPS誘導(dǎo)的干擾素-β(IFN-β)依賴性通路幾乎全部受阻。有報道稱，在HDAC3基因缺陷的巨噬細胞中，IFN-β的分泌出現(xiàn)障礙，也影響了信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)基因的表達量[17]。后來還發(fā)現(xiàn)，在HDAC3基因缺陷的巨噬細胞中COX-1基因出現(xiàn)過表達現(xiàn)象，這可能的原因是COX-1的抑制劑的表達是依賴于IFN-β和STAT1通路的，抑制劑的表達量減少，導(dǎo)致COX-1基因的過表達[18]。另外，HDAC6和HDAC7都參與了巨噬細胞中LPS誘導(dǎo)的炎癥基因的表達，HDAC7的同種型HDAC7-u能促進TLR誘導(dǎo)的促炎基因[如內(nèi)皮素1(Edn-1)]的表達[19]；巨噬細胞中HDAC6活性受到抑制時，LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中促炎因子的釋放會受到抑制[20]。在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中，增加HDAC1會抑制COX-2基因的表達，HDAC8基因的過表達也會誘導(dǎo)COX-2基因的表達受到抑制[13]。所以，HDAC幾乎在整個炎癥反應(yīng)中都有著重要的作用。

HDAC抑制劑(HDACi)能夠抑制HDAC的去乙?；饔茫诓煌募毎蠬DACi也具有不同的功能，可以是促炎的，也可以是抗炎的。曲古抑菌素A(TSA)是一種HDACi，它能促進一些巨噬細胞中LPS誘導(dǎo)的炎癥基因(如COX-2)的表達；同時它也能抑制一些基因的表達，如IL-12p40、CC趨化因子7(Ccl-7)和Edn-1[21]。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)也是參與炎癥反應(yīng)的一種關(guān)鍵酶，TSA能夠抑制其表達，TSA和LPS處理巨噬細胞后乙酰化水平普遍增加，導(dǎo)致周期蛋白依賴性激酶8連接于iNOS的啟動子區(qū)域而形成復(fù)合物，從而抑制基因的表達[22]。

為防止過度的炎癥反應(yīng)對機體造成傷害，機體對炎癥反應(yīng)具有一定的負反饋調(diào)節(jié)作用。RelB是NF-κB中的一員，在敗血癥和一些急性炎癥反應(yīng)引起的嚴(yán)重系統(tǒng)性炎癥中，RelB可以使組蛋白H3第9位的賴氨酸(H3K9)甲基轉(zhuǎn)移酶(G9a)跟異染色質(zhì)相關(guān)蛋白1(HP1)結(jié)合形成復(fù)合物，該復(fù)合物會結(jié)合于炎癥基因(如IL-1)的啟動子區(qū)域從而抑制基因的表達。當(dāng)該復(fù)合物與TNF-α的啟動子區(qū)域結(jié)合時，G9a會使H3K9發(fā)生甲基化，同時HP1蛋白又能招募DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT3a和DNMT3b)來甲基化啟動子區(qū)域的DNA，通過DNA甲基化和組蛋白甲基化來共同抑制TNF-α的表達[23]。在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中，組蛋白H2A第119位的賴氨酸(H2AK119)可以發(fā)生泛素化，H2AK119的泛素化一般會抑制炎癥物質(zhì)的表達，如趨化因子CCL5、CXCL10和CXCL2[24]。

有時基因的啟動子處會發(fā)生多種表觀遺傳學(xué)變化。如在腸上皮細胞中，當(dāng)受到LPS刺激時IL-8基因的H3上會陸續(xù)發(fā)生乙酰化和組蛋白H3第4位的賴氨酸(H3K4)、組蛋白H3第9位的賴氨酸(H3K9)以及組蛋白H3第27位的賴氨酸(H3K27)的甲基化，由于H3K27上發(fā)生的三甲基化對基因的表達具有很強的抑制作用，所以最終表現(xiàn)為抑制基因表達[25]。

LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的表觀遺傳變化除了在免疫細胞中發(fā)生，在其他類型的細胞中也會發(fā)生。最近發(fā)現(xiàn)，LPS能誘導(dǎo)急性腎炎的發(fā)生，在LPS感染小鼠1 h后腎組織中組蛋白賴氨酸的總乙?；潭纫约癏3K9、組蛋白H3第18位的賴氨酸(H3K18)、組蛋白H3第23位的賴氨酸(H3K23)和組蛋白H3第56位的賴氨酸(H3K56)的乙?；潭染黠@升高[26]。用LPS處理的神經(jīng)細胞中發(fā)現(xiàn)，Jmjd2b基因的表達量顯著升高，H3K9處的三甲基化水平(H3K9me3)明顯降低，這些表觀遺傳變化也被證明發(fā)生在IL-1β和IL-2基因的啟動子處[27]。

2.2 DNA甲基化與LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)

DNA甲基化是在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的作用下，以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作為甲基供體，把甲基轉(zhuǎn)移到胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸(CpG)中胞嘧啶的第5位碳原子上的過程[28]。哺乳動物的DNA甲基化一般發(fā)生在基因富含CpG序列的CpG島上。CpG島大多位于基因的啟動子處，因此DNA甲基化會抑制基因的表達。

在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的過程中DNA甲基化扮演著重要的角色。早在1987年就有報道指出，LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)中IL-1β的產(chǎn)生受到DNA甲基化的調(diào)控；用DNA甲基化抑制劑5-氮雜2-脫氧胞苷(5-azadC)處理單核細胞后，受LPS刺激時IL-1β基因的表達量明顯升高[29]。近些年也有類似的報道，給人的單核細胞中提供DNA甲基化所需的甲基供體SAM后，LPS刺激時炎癥反應(yīng)明顯受到抑制[28]。細胞因子信號抑制物1(SOCS1)是一種LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)中的負性調(diào)節(jié)因子，它能抑制促炎因子(如TNF-α和IL-6)的釋放。DNMT1能使SOCS1的啟動子發(fā)生甲基化，抑制SOCS1基因的表達，增加促炎因子的釋放。5-azadC能減弱DNMT1對SOCS1的甲基化作用，從而保證SOCS1基因的表達[30]。

在腸上皮細胞中，TLR4的調(diào)控受DNA甲基化和組蛋白乙?；挠绊?；DNA甲基化和組蛋白修飾同樣影響TNF-α基因的表達[31]。長期寄生在胃中的幽門螺桿菌(HP)是一種革蘭氏陰性菌，其LPS會引起胃黏膜的一些炎癥反應(yīng)并激活多種致癌途徑；HP會誘導(dǎo)胃上皮細胞DNA甲基化的降低，促進炎癥反應(yīng)的發(fā)生。HP還誘導(dǎo)抑癌基因人Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(Runx3)位點處的基因的甲基化，使抑癌基因的表達減少，增加癌癥的發(fā)病率[32]。牙齦卟啉單胞菌是一種口腔致病菌，近年來已經(jīng)證明，牙齦卟啉單胞菌的LPS能造成牙周損傷及炎癥，能阻止牙周再生。用LPS處理人牙周膜細胞后檢測到DNMT1基因的表達量顯著升高，調(diào)控成骨細胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Runx2基因發(fā)生超甲基化，使Runx2的表達量顯著降低[33]，從而使牙周膜細胞中成骨細胞的分化受到抑制。

3 通過營養(yǎng)對LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的表觀遺傳調(diào)控

隨著營養(yǎng)學(xué)、病理學(xué)和表觀遺傳學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，越來越多的研究把營養(yǎng)和表觀遺傳聯(lián)系起來，發(fā)現(xiàn)表觀遺傳現(xiàn)象與營養(yǎng)水平有很大的關(guān)系。通過飼糧可以對表觀遺傳變化進行調(diào)控，從而影響LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。

3.1 蛋白質(zhì)和能量水平

糖皮質(zhì)激素受體(GR)和過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)都是核受體，GR和PPAR能通過抑制NF-κB通路，對LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)進行抑制[34]。在妊娠期給大鼠飼喂低蛋白質(zhì)飼糧后，在子代的肝臟中發(fā)現(xiàn)GR和PPARα基因的表達量顯著升高，這2個基因的啟動子區(qū)域出現(xiàn)低甲基化。這很有可能是由于蛋白質(zhì)的缺乏使DNMT1基因的表達量降低，導(dǎo)致GR和PPARα基因啟動子發(fā)生低甲基化，使基因表達量升高[35]。GR和PPARα基因的表達量升高能一定程度上減緩炎癥反應(yīng)過程。蛋白質(zhì)中的蛋氨酸是DNA甲基化中甲基供體的前體物質(zhì)，理論上可以提高DNA甲基化程度，但是目前的研究還沒有明確的證明這一點。能量水平也一定程度影響炎癥因子的釋放。給小鼠注射葡萄糖使其處于高糖狀態(tài)6 h后，發(fā)現(xiàn)NF-κB中的p65啟動子處H3K4發(fā)生了組蛋白修飾，這使p65依賴通路的促炎因子IL-6、iNOS和促炎黏附分子1(CAM1)基因的表達量增加[36]。

3.2 甲基供體

蛋氨酸、葉酸、維生素B12、膽堿和甜菜堿都能通過間接或直接參與一碳循環(huán)過程，為DNA甲基化提供甲基，影響DNA甲基化[37]。蛋氨酸首先在蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶的作用下生成S腺苷甲硫氨酸(SAM)，SAM中的甲基十分活躍，SAM作為甲基供體提供甲基后變成S腺苷高半胱氨酸(SAH)。葉酸在體內(nèi)變成四氫葉酸(THF)，然后以5-甲基四氫葉酸的形式提供甲基。膽堿在體內(nèi)會被氧化為甜菜堿。這些甲基供體能夠整體上為一些炎癥因子基因的甲基化提供甲基，從而抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生。如限制母羊妊娠期飼料中的葉酸、維生素B12和蛋氨酸后，后代4%的CpG島位點的甲基化狀態(tài)發(fā)生了變化[38]。有試驗證明，添加葉酸能維持全基因組的甲基化水平，在由胃中螺桿菌引起的炎癥反應(yīng)中，葉酸能減少螺桿菌LPS引起的低甲基化，從而抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生，減少黏膜發(fā)炎和異常增生[39]。

3.3 維生素、礦物質(zhì)和活性物質(zhì)

維生素B2、維生素B6、維生素B12是影響甲基化過程的重要物質(zhì)。一碳單位代謝中的相關(guān)酶的構(gòu)成需要這些維生素作為輔酶或輔因子。如維生素B2是THF還原酶的輔因子；維生素B6是絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶的輔酶；維生素B12是5-甲基四氫葉酸-高半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶的輔因子，嚴(yán)重缺乏這些維生素時會導(dǎo)致基因的低甲基化。微量礦物質(zhì)元素也會對DNA甲基化產(chǎn)生一定的影響。硒和鎂的作用跟維生素類似，是甲基化過程中相關(guān)酶的輔助因子，缺乏這些礦物質(zhì)會降低DNA甲基化。綠茶里面的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)能抑制DNMT1的活性。飼料中的大豆多酚和染料木黃酮可以降低轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性，同時提高DNA甲基化水平和降低組蛋白H3上的乙?；?，使IL-6啟動子處發(fā)生基因沉默[40]。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)是組蛋白發(fā)生乙?；?，激活炎癥因子表達的關(guān)鍵酶，茶多酚和銅對HAT具有抑制作用，從而抑制炎癥反應(yīng)[41]。HDAC是鋅結(jié)合蛋白，所以HDAC的活性依賴于鋅離子濃度，因此飼糧中的鋅會影響炎癥反應(yīng)。

近年來發(fā)現(xiàn)，越來越多的多酚類物質(zhì)具有抗炎作用。巖白菜素和紅景天甙可以通過抑制NF-κB和MAPK信號通路，減少TNF-α、IL-1β和IL-6的釋放。原花青素能夠負性調(diào)控TLR4介導(dǎo)的NF-κB信號通路[9]。地塞米松和異丁苯丙酸可以抑制TNF-α和IL-1β基因的表達[42]。巴馬丁和丁酸鹽都可以對LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子和TLR4、CD14基因的表達進行抑制；促進抗炎因子IL-10基因的表達[43-44]。以上活性物質(zhì)都能一定程度上抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，但它們在抗炎過程中的表觀遺傳學(xué)作用機制尚不清楚。

3.4 反芻動物飼糧組成和添加劑

為了提高奶牛產(chǎn)奶量，常給高產(chǎn)奶牛提供高精料飼糧，但是長期飼喂高精料飼糧會導(dǎo)致瘤胃液pH降低，增加瘤胃中革蘭氏陰性菌的溶解，瘤胃中LPS的濃度增加[45]。給奶牛飼喂高精料的飼糧(65%的精料+35%玉米秸稈)后發(fā)現(xiàn)，其乳腺組織血液中的LPS濃度明顯高于低精料組，且乳腺組織組蛋白H3的乙?；潭雀橄俳M織血液中LPS濃度呈負相關(guān)[2]。高精料飼糧會增加胃腸道和體內(nèi)的LPS濃度，并可能會引起乳腺組織等發(fā)生表觀遺傳變化，從而影響奶牛健康和生產(chǎn)性能。因此，應(yīng)盡量避免使用過高比例精料的飼糧飼喂奶牛。有研究顯示，使用丁酸鈉能夠有效降低高精料飼糧飼喂奶牛所帶來的LPS濃度增加現(xiàn)象[46]。此外，可以選擇瘤胃降解較慢的精料，或用乳酸處理谷物使其在瘤胃內(nèi)的降解減少[47]。還可以在飼糧中添加緩沖劑、吸附劑、益生菌、硫胺素等，以緩解瘤胃酸中毒，減少體內(nèi)的LPS。

4 小 結(jié)

炎癥反應(yīng)對于機體健康是一把雙刃劍，適度的炎癥反應(yīng)對機體自身防御非常重要，但是過度或持續(xù)性的炎癥將會對機體產(chǎn)生不良影響，甚至死亡。因此對炎癥反應(yīng)的有效調(diào)控尤為重要。炎癥反應(yīng)的表觀遺傳學(xué)機制非常復(fù)雜，因為DNA甲基化和組蛋白修飾等方式都可以對炎癥因子表達進行調(diào)控，而且相同的調(diào)控方式在不同的細胞或組織會產(chǎn)生不同的效果?；蛑型瑫r存在促炎基因和抗炎基因，這增加了人為調(diào)控炎癥反應(yīng)的復(fù)雜性。另外，甲基化等修飾方式除了在炎癥反應(yīng)中起作用，在其他方面(如生長、消化、繁殖等)的基因表達上也起作用，這可能又會影響這些方面基因的表達。因此，需要更加深入全面地了解各個反應(yīng)的機制，以從整體上對機體進行精確調(diào)控才能更好地控制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。目前高通量染色質(zhì)免疫共沉淀和DNA甲基化定位等技術(shù)的發(fā)展，有助于人們更好地了解炎癥反應(yīng)在表觀遺傳學(xué)層面的分子機制。只有更好地了解了炎癥反應(yīng)的表觀遺傳學(xué)機制，才能更有效地從飼糧角度進行調(diào)控。

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*Corresponding author, professor, E-mail: gzdong@swu.edu.cn