復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬生產(chǎn)性能、血清生化及免疫指標(biāo)的影響

董佳琦 金三俊 汪晶晶 任紅立 武鴻志 刁新平

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱 150030)

哺乳母豬的營(yíng)養(yǎng)狀況關(guān)系到后代的生長(zhǎng)及免疫性能以及其本身的種用期[1]。抗生素和化學(xué)藥物的濫用不僅殺死了動(dòng)物體內(nèi)的致病菌，有益菌也同樣被消滅，致使母豬腸道處于亞健康狀態(tài)[2]。因此，哺乳母豬的營(yíng)養(yǎng)及腸道健康在生產(chǎn)中變的極為重要。乳酸菌和酵母菌是存在于動(dòng)物體內(nèi)的益生菌，有助于腸道健康，在防止消化道疾病產(chǎn)生的同時(shí)還能促進(jìn)生長(zhǎng)[3]。以有益菌為主要原料配合成的微生態(tài)制劑在豬生產(chǎn)中已有相關(guān)研究。尹清強(qiáng)等[4]研究表明，在哺乳仔豬和斷奶仔豬飼糧中分別加入0.10%和0.05%微生態(tài)制劑能讓仔豬胃腸道微生物區(qū)系維持穩(wěn)定，顯著降低仔豬的腹瀉率和死亡率，且效果優(yōu)于抗生素。陳興榮等[5]研究表明，在哺乳母豬、哺乳仔豬飼糧中添加微生

態(tài)制劑能夠提高哺乳母豬哺乳期的平均采食量,降低便秘發(fā)生率；能夠提高哺乳仔豬的日增重、成活率。楚青惠等[6]研究表明，對(duì)于妊娠后期和哺乳期母豬來(lái)說(shuō)，每天每頭飼喂250～300 mL乳酸菌液對(duì)其生長(zhǎng)性能、健康狀況、血清抗氧化指標(biāo)、糞便微生物數(shù)量等的改善效果較好。哺乳母豬是養(yǎng)豬生產(chǎn)中的重要環(huán)節(jié)，而有益菌在畜禽和仔豬上的應(yīng)用較母豬多，且對(duì)哺乳母豬生產(chǎn)性能的影響方式和適宜添加水平還有待研究。因此，本試驗(yàn)將復(fù)合益生菌發(fā)酵液與濕拌料混合飼喂哺乳母豬，研究其對(duì)哺乳母豬生產(chǎn)性能、血清生化及免疫指標(biāo)的影響，為有益菌在母豬生產(chǎn)中的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

復(fù)合益生菌發(fā)酵液：益生菌粉購(gòu)于深圳市百澳飛有限公司，其主要成分為乳酸菌和酵母菌及其代謝產(chǎn)物，復(fù)合益生菌發(fā)酵液是用該公司研發(fā)的自動(dòng)發(fā)酵罐發(fā)酵系統(tǒng)發(fā)酵24 h制備而成。復(fù)合益生菌發(fā)酵液的pH是3.59，每毫升含乳酸菌1.0×108CFU，酵母菌8×107CFU。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼糧

試驗(yàn)?zāi)肛i均從河南省鹿邑縣天種豬場(chǎng)選取，為平均體重、預(yù)產(chǎn)期和健康狀況都相近的2胎長(zhǎng)白母豬。試驗(yàn)從母豬妊娠108 d開(kāi)始，至哺乳21 d時(shí)結(jié)束。參照NRC(2012)母豬營(yíng)養(yǎng)需要配制妊娠后期和哺乳期基礎(chǔ)飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 妊娠后期和哺乳期基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of diets：VA 25 000 IU，VB11 mg，VB28 mg，VB63 mg，VB120.015 mg，VD35 000 IU，VK 2.5 mg，葉酸 folic acid 0.25 mg，D-泛酸D-pantothenic acid 12.5 mg，煙酸 nicotinic acid 17.5 mg，Cu (as copper sulfate) 30 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 100 mg，Mn (as manganese sulfate) 40 mg，Zn (as zinc sulfate) 100 mg，I (as potassium iodide) 0.25 mg，Se (as sodium selenite) 0.25 mg。

2)計(jì)算值 Calculated value。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)?zāi)肛i于預(yù)產(chǎn)期前7 d轉(zhuǎn)入產(chǎn)房，飼養(yǎng)于同一棟雙列式產(chǎn)房，由同一飼養(yǎng)員看管，單欄飼養(yǎng)，漏縫式高床，有自動(dòng)飲水器和鐵料槽。圈舍通風(fēng)良好，舍內(nèi)保持清潔干燥，環(huán)境溫度保持在20～25 ℃。試驗(yàn)?zāi)肛i共60頭，隨機(jī)分配到4個(gè)組，每組15個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭母豬。飼喂母豬時(shí)，在基礎(chǔ)飼糧中添入適量的水，以濕拌料的方式飼喂，需要添加發(fā)酵液的母豬按劑量倒入濕拌料中。其中，對(duì)照組僅飼喂?jié)癜枇?，試?yàn)Ⅰ組在濕拌料里添加200 mL/d的發(fā)酵液，試驗(yàn)Ⅱ組在濕拌料里添加300 mL/d的發(fā)酵液，試驗(yàn)Ⅲ組在母豬濕拌料里添加400 mL/d的發(fā)酵液。產(chǎn)前7～4 d飼喂2～3 kg/d，產(chǎn)前3～1 d飼喂1～2 kg/d，分娩當(dāng)天不喂料，哺乳第2天飼喂2 kg，第3天飼喂3 kg，第4天開(kāi)始自由采食，每天喂4.5～7.0 kg，直到仔豬21日齡斷奶，每天喂3次，自由飲水，飼養(yǎng)管理和免疫程序均按豬場(chǎng)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一進(jìn)行。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 哺乳母豬生產(chǎn)性能的測(cè)定

哺乳仔豬生產(chǎn)性能：在分娩當(dāng)天記錄哺乳仔豬的初生窩重，在斷奶當(dāng)天稱量哺乳仔豬斷奶窩重，計(jì)算出哺乳仔豬的平均日增重。

平均日采食量：每天記錄哺乳母豬的采食量，計(jì)算平均日采食量。

發(fā)情間隔：母豬下床后，觀察斷奶后母豬的發(fā)情情況(6 d)，統(tǒng)計(jì)發(fā)情間隔，并作記錄。

1.4.2 血清生化指標(biāo)及免疫指標(biāo)的測(cè)定

于試驗(yàn)結(jié)束第2天07：00，每組隨機(jī)抽取8頭體況相近的哺乳母豬，耳靜脈采血10 mL，置于促凝真空管，靜置15 min后，用3 000 r/min離心20 min，取上層血清，-20 ℃下保存待測(cè)。血清常規(guī)生化指標(biāo)包括葡萄糖(GLU)、尿素氮(UN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量以及白球比(A/G)，由全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。血清激素指標(biāo)包括生長(zhǎng)激素(GH)、三碘甲腺原氨酸(T3)、四碘甲腺原氨酸(T4)含量，血清免疫指標(biāo)包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)含量，上述指標(biāo)均采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)，試劑盒均購(gòu)自北京華英生物技術(shù)研究所。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2012軟件進(jìn)行初步處理后，采用SPSS 22.0軟件的單因素方差分析(one-way ANOVA)程序進(jìn)行方差分析，并采用LSD法進(jìn)行組間多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，300和400 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組母豬的平均日采食量比對(duì)照組分別增加了9.75%、9.03%，差異顯著(P<0.05)。仔豬斷奶窩重比對(duì)照組分別增加了4.02%、12.69%、9.90%(P<0.01)。各試驗(yàn)組的仔豬平均日增重均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。仔豬初生窩重和母豬斷奶后發(fā)情間隔各組之間差異不顯著(P>0.05)。

表2 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬生產(chǎn)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同小寫字母或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。

In the same row, values with the same small or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.

2.2 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，300和400 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清GLU含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清T3含量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，200和400 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清T3含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。在飼糧中添加復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬血清UN、TP、ALB、GH、T4含量及A/G無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表3 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬血清生化指標(biāo)的影響

2.3 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，各試驗(yàn)組的血清IgA、IgG和IgM含量均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清IL-2含量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，200和400 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清IL-2含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清IL-6含量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，400 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清IL-6含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

表4 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬血清免疫指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬生產(chǎn)性能的影響

采食量是限制母豬生產(chǎn)性能及遺傳潛力發(fā)揮的重要因素之一[7]。益生菌對(duì)哺乳母豬采食量影響的研究結(jié)果并不一致。尹華俊[8]試驗(yàn)表明，妊娠中后期和泌乳期飼糧中添加植物乳酸菌對(duì)母豬泌乳期采食量沒(méi)有促進(jìn)作用。唐明紅等[9]試驗(yàn)表明，在飼糧中添加不同劑量的乳酸菌酵母菌復(fù)合菌后妊娠90 d至產(chǎn)仔后10 d的母豬的采食量差異極顯著。本試驗(yàn)中，300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組母豬的平均日采食量比對(duì)照組增加了9.75%。這是由于乳酸菌和酵母菌可以降低母豬腸道pH，調(diào)節(jié)母豬腸道內(nèi)環(huán)境平衡，提高消化酶活性，從而提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝和吸收，進(jìn)而提高了哺乳母豬的采食量。哺乳仔豬的生長(zhǎng)和發(fā)育取決于母乳的好壞，母乳好的豬帶出來(lái)的仔豬斷奶重大，生長(zhǎng)速度快，免疫能力強(qiáng)，距離上市體重的時(shí)間短，所以母豬泌乳量的提高可給豬場(chǎng)節(jié)約成本，帶來(lái)經(jīng)濟(jì)效益。李秋艷等[10]研究報(bào)道，相比對(duì)照組，微生態(tài)制劑組母豬的仔豬初生窩重、仔豬平均個(gè)體重以及仔豬斷奶窩重均有提高。龍廣[11]研究得出，母豬妊娠和泌乳期飼糧中添加布拉迪酵母菌顯著提高了母豬泌乳期的采食量，顯著提高了仔豬的平均日增重、平均窩增重和斷奶窩重。本試驗(yàn)中，300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組21 d泌乳量比對(duì)照組增加了18.17%，且仔豬斷奶窩重和仔豬平均日增重極顯著高于對(duì)照組。復(fù)合益生菌發(fā)酵液的劑量關(guān)系到作用效果，從結(jié)果來(lái)看，300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的21 d泌乳量比200和400 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組都高，這可能是由于添加水平較低時(shí)導(dǎo)致效菌數(shù)量達(dá)不到動(dòng)物胃腸道所需的數(shù)量，其益生作用發(fā)揮不夠完美；添加水平較高會(huì)擾亂微生物區(qū)系的平衡，達(dá)不到理想的效果[12]。

3.2 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬血清生化指標(biāo)的影響

血清的各項(xiàng)生化指標(biāo)在一定程度上可以反映動(dòng)物的生理狀態(tài)和機(jī)體的整體代謝狀況，從指標(biāo)的異?？梢酝茢喑鰟?dòng)物是否健康及其適應(yīng)性和生產(chǎn)性能。GLU是動(dòng)物進(jìn)行生命活動(dòng)的直接供能物質(zhì)，是動(dòng)物體所有細(xì)胞的直接能源供給庫(kù)，與動(dòng)物的日增重和飼糧營(yíng)養(yǎng)水平相關(guān)聯(lián)[12]。在正常范圍內(nèi)，血清GLU含量升高有助于提高動(dòng)物的免疫力，減少動(dòng)物的不良應(yīng)激。在本試驗(yàn)中，300和400 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清GLU含量顯著高于對(duì)照組。血清GLU含量能反映機(jī)體對(duì)糖類的消化吸收度，當(dāng)機(jī)體GLU含量升高時(shí)會(huì)刺激胰島素的分泌，同時(shí)胰島素能影響細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而促進(jìn)細(xì)胞對(duì)氨基酸和GLU的攝取，增加體內(nèi)蛋白質(zhì)和糖原的合成[14]。甲狀腺激素是廣泛參與調(diào)節(jié)機(jī)體代謝的激素，包括T3、T4，它們共同促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。其中T3是甲狀腺分泌的主要活性物質(zhì)，生理效應(yīng)比T4大，作用快[15]。Leung等[16]用促甲狀腺激素釋放激素滴服的方法處理肉雞，被處理的肉雞血漿中T3和T4含量顯著上升。King等[17]認(rèn)為，T3和T4為動(dòng)物生長(zhǎng)和發(fā)育所必需，適量的外源性甲狀腺激素能促進(jìn)畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育。本試驗(yàn)中，300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組血清T3含量極顯著高于對(duì)照組，與上述研究結(jié)果一致。

3.3 復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬血清免疫指標(biāo)的影響

血清免疫球蛋白是體液免疫系統(tǒng)的主要成分，IgG、IgM、IgA均具有免疫和防御功能，可與抗原發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體免受抗原侵入造成損傷[18]。在血清免疫球蛋白中，IgG含量最高，約占其免疫球蛋白總量的75%，能有效預(yù)防相應(yīng)的感染性疾病，有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的趨勢(shì)，IgG含量是直接反映機(jī)體免疫力的指標(biāo)[19]。韋明宇等[20]研究表明，在母豬妊娠期和泌乳期飼糧中添加NS復(fù)合乳酸菌制劑后，母豬血清中免疫球蛋白含量顯著提高，證實(shí)了乳酸菌能夠提高母豬繁殖階段的免疫力。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組的血清IgA、IgG和IgM含量均極顯著高于對(duì)照組，與上述研究結(jié)果相一致。IL-2是動(dòng)員免疫系統(tǒng)抗感染和抗腫瘤所必需的細(xì)胞因子，可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和自然殺傷性(NK)細(xì)胞等的增殖與分化，促進(jìn)干擾素、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子的分泌，從而提高機(jī)體的抗病能力[21]。IL-6是一種能刺激B淋巴細(xì)胞分化成熟并分泌IgG的多功能因子，可以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。外源性病原菌進(jìn)入動(dòng)物體后，誘導(dǎo)吞噬細(xì)胞釋放IL-6，隨后IL-6由血液進(jìn)入肝臟并促使其產(chǎn)生甘露寡糖結(jié)合蛋白，然后觸發(fā)機(jī)體多級(jí)免疫反應(yīng)[22]。因此，IL-2、IL-6都能較好地反映動(dòng)物機(jī)體的免疫機(jī)能。本試驗(yàn)中，300 mL/d復(fù)合益生菌發(fā)酵液組的血清IL-2、IL-6含量顯著或極顯著高于對(duì)照組。這可能是因?yàn)橛幸婢紦?jù)了母豬消化道的大部分定植位點(diǎn)，從而直接作用于宿主的免疫系統(tǒng)，誘發(fā)腸道免疫，使免疫球蛋白分泌增加，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，從而提高動(dòng)物機(jī)體的免疫性能。

4 結(jié) 論

在哺乳母豬飼糧中添加復(fù)合益生菌發(fā)酵液對(duì)哺乳母豬的生產(chǎn)性能、血清生化及免疫指標(biāo)均有不同程度的改善作用，其中以哺乳母豬平均日采食量、21 d泌乳量、仔豬斷奶窩重、仔豬平均日增重以及血清GLU、T3、IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-6含量的變化最為明顯，復(fù)合益生菌發(fā)酵液可以有效提高這些指標(biāo)，且以添加水平為300 mL/d時(shí)效果最好。

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*Contributed equally

**Corresponding author, associate professor, E-mail: diaoxp63@163.com