復合益生菌制劑對肉雞生長性能、屠宰性能和免疫指標的影響

謝文惠 姜 寧 張愛忠

(黑龍江八一農墾大學動物科技學院，大慶 163319)

隨著人們生活質量的持續(xù)提高，畜牧業(yè)的發(fā)展也逐漸提升，畜禽產品的安全問題也受到了普遍重視。由于我國畜禽養(yǎng)殖生產中抗生素、化學藥物、激素等大量且不合理的使用，使畜禽產品的安全生產受到嚴重破壞[1]。益生菌制劑是一種由活體微生物制成的新式生物活性制劑，主要包括乳酸菌類、芽孢桿菌類、酵母類和腸球菌類。其中枯草芽孢桿菌能分泌多種肽類及由肽類衍生的抗菌活性物質[2]，枯草芽孢桿菌抗菌肽是采用蠅蛆抗菌肽的基因片段，通過重疊延伸聚合酶鏈式反應(SOEing PCR)法融合到枯草芽孢桿菌工程菌中表達出的新型抗菌肽[3]。李渤南等[4]在飼糧中添加不同劑量由短小芽孢桿菌、植物乳酸桿菌、酵母菌等組成的復合益生菌制劑，發(fā)現肉雞的料重比、死亡率和淘汰率顯著降低，肉雞的屠宰性能無顯著變化。呂英等[5]研究發(fā)現，雛雞飼喂益生素后法氏囊和脾臟免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白A(IgA)生成細胞數量均比未飼喂益生素有不同程度的增加，表明益生素能夠增強雛雞免疫器官的體液免疫功能。關靜姝等[6]研究發(fā)現，飼糧中添加益生菌和抗菌肽復合物能顯著增加肉雞的生長性能、免疫性能，降低禽舍氨氣和硫化氫濃度，降低肉雞的死淘率。目前有關單獨使用益生菌或抗菌肽的研究較多，但未見益生菌與含有抗菌肽的基因工程菌聯(lián)合使用于肉雞生產的報道。因此，本試驗以益生菌和含有抗菌肽的基因工程菌為試驗材料，將前期人工模擬胃腸道消化液耐受性試驗所確定的3種不同配比復合益生菌制劑分別加入到愛撥益加(AA)肉雞飼糧中，觀察其對肉雞生長性能、屠宰性能和免疫指標的影響，探尋最佳復合益生菌制劑配比，為復合益生菌制劑在肉雞產業(yè)鏈中的現實推廣應用提供數據參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設計與試驗材料

本試驗采用單因素完全隨機設計，選用320只1日齡健康雄性AA肉仔雞(購自吉林省德惠市某孵化場)，隨機分為4組，每組4個重復，每個重復20只雞。各組試驗雞初始體重無顯著差異(P>0.05)。對照組(Ⅰ組)飼喂基礎飼糧，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組飼糧分別在基礎飼糧中添加1 000 mg/kg配比為2∶1∶1∶1、1∶2∶1∶1和1∶1∶1.5∶1.5(枯草芽孢桿菌∶釀酒酵母∶嗜酸乳桿菌∶乳雙歧桿菌)的復合益生菌制劑。試驗期42 d。

本試驗所用復合益生菌制劑均為固體粉末，主要由枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、嗜酸乳桿菌和乳雙歧桿菌混合組成，總活菌數為枯草芽孢桿菌9.00×108CFU/g、釀酒酵母4.00×108CFU/g、嗜酸乳桿菌1.00×1010CFU/g、乳雙歧桿菌1.00×1010CFU/g?？莶菅挎邨U菌、釀酒酵母和嗜酸乳桿菌均為本實驗室制備，其中枯草芽孢桿菌為本實驗室所研發(fā)的含有抗菌肽CC34的基因工程菌；乳雙歧桿菌由陜西森弗生物技術有限公司提供。

1.2 試驗飼糧

基礎飼糧依照NRC(1994)肉雞飼養(yǎng)標準，并結合我國《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)配制，飼料原料購于大慶禾豐八一農大動物科技有限公司，飼糧形態(tài)為粉狀，由本實驗室粉碎及攪拌混合而成，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

進雛雞前對雞舍進行無死角沖洗、消毒。由于是在春季進行飼養(yǎng)試驗，雞舍進雛前2 d開始預熱升溫。進雛雞后2 h內，采用低濃度葡萄糖水溶液(5%)進行開飲，水溫適中。采用籠養(yǎng)方式，1～21日齡飼養(yǎng)密度為20只/m2，22～42日齡飼養(yǎng)密度為10只/m2，自由飲水和自由采食。舍內溫度、濕度和光照時間按照常規(guī)飼養(yǎng)管理要求進行嚴格控制，保證良好通風。每天換水前對水槽進行清洗和殺菌消毒，試驗期間飲用涼開水。按常規(guī)免疫程序對雛雞進行新城疫及法氏囊免疫。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生長性能

試驗期間每周按重復記錄飼糧用量，于1、7、14、21、28、35和42日齡早08:00對空腹12 h(自由飲水)后的肉雞稱重，記錄每周每重復肉雞的體重和采食量，計算各階段肉雞的平均日采食量(ADFI，g)、平均日增重(ADG，g)和料重比(F/G)。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)每千克礦物質預混料含 One kg of mineral premix provided the following: Cu (CuSO4·5H2O) 8 mg，Fe (FeSO4·7H2O) 50 mg，Zn (ZnSO4·7H2O) 45 mg，Mn (MnSO4·H2O) 65 mg，Se (Na2SeO3) 1 mg，Ca(IO3)21 mg，Ca3(PO4)20.2 mg。

2)每千克多維含 One kg of multi-vitamin provided the following: VA 40 000 000 IU，VD311 000 000 IU，VE 80 000 IU，VK312 g，VB110 g，VB222 g，VB615 g，VB12100 mg，葉酸 folic acid 4 g，生物素 biotin 300 mg，煙酰胺 niacinamide 100 g，泛酸鈣 pantothenic acid 50 g，抗氧化劑 antioxidant 500 mg。

3)營養(yǎng)水平為計算值。Nutrition levels were calculated values.

1.4.2 屠宰性能

于42日齡時從每重復中隨機選取3只體重相近的健康肉雞，屠宰前12 h停飼，自由飲水，空腹稱重，按常規(guī)方法屠宰。計算各組肉雞的屠宰性能指標，公式如下：

屠宰率(%)=(屠體重/活體重)×100；半凈膛率(%)=(半凈膛重/活體重)×100；全凈膛率(%)=(全凈膛重/活體重)×100；胸肌率(%)=(兩側胸肌重/全凈膛重)×100；腿肌率(%)=(兩側腿肌重/全凈膛重)×100。

1.4.3 免疫指標

分別于21和42日齡時從每個重復中隨機選取3只肉雞，心臟采集血樣5 mL，經3 000 r/min離心10 min，分離血清于1.5 mL離心管中，-20 ℃冷凍保存?zhèn)錅y。采血結束后將肉雞宰殺，分別摘取脾臟、胸腺和法氏囊稱重，用免疫器官重量占體重的相對重量表示免疫器官指數(g/kg BW)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定血清中IgG和IgA含量，試劑盒購自蘇州卡爾文生物科技有限公司。

1.5 數據統(tǒng)計與分析

本試驗生長性能指標以重復為單位，每組共4個平均值進行統(tǒng)計分析；屠宰性能指標和免疫指標以每組12個樣本進行統(tǒng)計分析。數據經Excel 2007初步統(tǒng)計與整理，運用SAS 8.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者運用Duncan氏法進行多重比較，結果均以“平均值±標準差”表示。P<0.05為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 復合益生菌制劑對肉雞生長性能的影響

復合益生菌制劑對肉雞平均日采食量的影響見表2。1～14日齡和36～42日齡時，各組的平均日采食量無顯著差異(P>0.05)；15～21日齡時，Ⅲ組的平均日采食量顯著高于其他各組(P<0.05)；22～28日齡時，Ⅲ和Ⅳ組的平均日采食量顯著高于其他各組(P<0.05)；29～35日齡時，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組的平均日采食量均顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。綜觀1～42日齡，Ⅲ組的平均日采食量最高，與Ⅳ組無顯著差異(P>0.05)，2者均顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。

復合益生菌制劑對肉雞平均日增重的影響見表2。1～7日齡時，各組的平均日增重無顯著差異(P>0.05)；8～42日齡時，Ⅲ組的平均日增重顯著高于Ⅰ和Ⅳ組(P<0.05)，其中15～21日齡時，Ⅱ和Ⅲ組的平均日增重無顯著差異(P>0.05)。綜觀1～42日齡，Ⅲ組的平均日增重最高，顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組(P<0.05)，分別增加了21.46%、7.98%和9.97%。

復合益生菌制劑對肉雞料重比的影響見表2。1～7和29～35日齡時，各組的料重比無顯著差異(P>0.05)；8～14和36～42日齡時，Ⅲ組的料重比顯著低于其他各組(P<0.05)；15～21日齡時，Ⅲ和Ⅳ組的料重比顯著高于其他各組(P<0.05)；22～28日齡時，Ⅱ和Ⅲ組的料重比顯著低于Ⅰ和Ⅳ組(P<0.05)。綜觀1～42日齡，Ⅱ和Ⅲ組的料重比無顯著差異(P>0.05)，其中Ⅲ組的料重比最低，顯著低于Ⅰ和Ⅳ組(P<0.05)，分別降低了9.25%和7.10%。

2.2 復合益生菌制劑對肉雞屠宰性能的影響

復合益生菌制劑對肉雞屠宰性能的影響見表3。Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組的屠宰率、半凈膛率和全凈膛率與Ⅰ組相比均有不同程度的提高，但差異不顯著(P>0.05)；Ⅲ和Ⅳ組的胸肌率顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，分別提高了4.11%和4.60%；各組的腿肌率無顯著差異(P>0.05)，其中Ⅳ組的腿肌率最高，與Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組相比分別提高了4.25%、4.52%和4.30%。

2.3 復合益生菌制劑對肉雞免疫指標的影響

復合益生菌制劑對肉雞免疫器官指數的影響見表4。在21和42日齡時，各組的脾臟指數、胸腺指數和法氏囊指數均無顯著差異(P>0.05)，但Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組均高于Ⅰ組。

復合益生菌制劑對肉雞血清IgG和IgA含量的影響見表4。21日齡和42日齡時，各組的血清IgG含量無顯著差異(P>0.05)，其中Ⅲ組的血清IgG含量最高，與Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組相比，21日齡時分別提高了48.54%、21.24%和6.05%，42日齡時分別提高了50.64%、25.46%和22.54%。21日齡時，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組的血清IgA含量無顯著差異(P>0.05)，其中Ⅲ組的血清IgA含量最高，顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，提高了93.88%；42日齡時，Ⅲ組的血清IgA含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組(P<0.05)，分別提高了63.83%、42.59%和30.51%。

表2 復合益生菌制劑對肉雞生長性能的影響

同行數據肩標相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表3 復合益生菌制劑對肉雞屠宰性能的影響

3 討 論

3.1 復合益生菌制劑對肉雞生長性能的影響

復合益生菌制劑和抗菌肽均有改善機體性能、促進動物生長發(fā)育和提高飼料轉化率等功能[7]。本試驗使用的復合益生菌制劑由枯草芽孢桿菌(含抗菌肽CC34的基因工程菌)、釀酒酵母、嗜酸乳桿菌和乳雙歧桿菌混合組成?？莶菅挎邨U菌為需氧菌，且大多數為有益菌，其主要通過減少腸道內的游離氧進而抑制有害需氧菌的繁殖[8]，為乳酸菌和雙歧桿菌等有益專性厭氧菌提供無氧的有利環(huán)境?？莶菅挎邨U菌的細胞膜為單層，分泌的抗菌肽容易回收、純化，操作簡便[9]；還能產生脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶等多種消化酶，生成纖維素酶和葡聚糖酶等非淀粉多糖酶[10]，這些酶能夠分解飼糧中的多種營養(yǎng)物質，為有益菌供應豐富的轉化基質。酵母菌具備發(fā)酵特性，可以促進消化，加快有益菌的生長；酵母菌菌體含有豐富的蛋白質、脂肪、糖分和B族維生素等，能被芽孢桿菌產生的消化酶消化吸收，為機體提供大量的營養(yǎng)物質；且酵母菌能夠補充硒元素，增加機體的免

疫力[11]。乳酸菌和雙歧桿菌能合成動物體所需的維生素，還可以將碳水化合物轉化為乳酸、醋酸、丙酸和丁酸等有機酸，使飼糧和動物腸道中的pH下降，激活動物腸道中的胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和總蛋白水解酶等消化酶，促進排泄，抑制腸道腐敗作用[12]。

表4 復合益生菌制劑對肉雞免疫指標的影響

黃金華等[13]研究發(fā)現，飼糧中添加0.1%和0.2%由植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、地衣芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌、蠟樣芽胞桿菌和釀酒酵母組成的復合益生菌制劑，能顯著增加肉雞的平均日增重和成活率，使料重比大幅度下降，其中以0.1%組的綜合效果最好。本試驗結果表明，飼糧中添加不同配比復合益生菌制劑后，1～7日齡時，各組肉雞的平均日采食量、平均日增重和料重比均無顯著差異，這可能是由于肉雞經過長途運輸產生了應激，且生長前期消化系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，消化吸收功能較差，需要一段時間來適應環(huán)境和飼糧的變化，且外源益生菌在動物腸道內的定植也需要一定的時間。本試驗所用的含抗菌肽CC34的基因工程菌為菌粉制劑，而此基因工程菌為胞外分泌型，需要在腸道內復蘇且經過一段時間才能分泌抗菌肽，促進肉仔雞的生長發(fā)育。通常情況下，第1周的料重比最低，隨著周齡的增加而提高。本試驗前2周的料重比較高，其原因可能是雛雞體型較小，前期采用的飼槽為食料桶，放置在雞籠當中，因為禽類具有刨食的習性，飼糧浪費較嚴重，導致料重比較高；第3周開始采用掛式飼槽，飼糧浪費減少，料重比降低。綜觀1～42日齡整個試驗期，與對照組相比，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組肉雞的平均日采食量和平均日增重顯著增加，料重比降低，這可能是由于肉雞在適應環(huán)境和飼糧之后，復合益生菌、含有抗菌肽的基因工程菌以及其所產生的各種代謝產物和抗菌肽有助于消化利用飼糧中的養(yǎng)分，改善腸道內微生態(tài)環(huán)境，促進肉雞的健康生長，從而提高了肉雞的生長性能。其中Ⅲ組的效果最好，這可能是因為添加比例為2倍的釀酒酵母，其自身帶有特殊的芬芳香味，能夠刺激動物的嗅覺，增進食欲，從而提高平均日采食量；酵母菌還有增強腸黏膜屏障功能、下調黏膜通透性和提高腸黏膜營養(yǎng)的作用[14]，能夠促進肉雞對營養(yǎng)物質的消化和利用，提高肉雞的生長性能。

3.2 復合益生菌制劑對肉雞屠宰性能的影響

屠宰率、胸肌率和腿肌率是評價肉雞產肉性能的重要指標，也是評價肉雞屠宰性能的關鍵[15]。陸銀等[16]研究表明，復合益生菌能夠提高21～35日齡肉雞的屠宰率、腿肌率和胸肌率，并且呈劑量依賴效應。本試驗中，飼糧中添加復合益生菌制劑可以改善肉雞的屠宰性能，不同程度地提高半凈膛率、全凈膛率、屠宰率、胸肌率和腿肌率，這可能是因為抗菌肽在促進肉雞生長發(fā)育的同時，對營養(yǎng)物質在肌肉中的沉積起到了一定的調節(jié)作用；且添加的4株益生菌均可提高肉雞自身蛋白質的合成，在胃腸道通過發(fā)酵飼糧和菌體代謝均可產生不同種類的短鏈脂肪酸，從而提高肉雞的屠宰性能。其中Ⅳ組添加比例為1.5倍的乳酸菌，與對照組相比，提高了肉仔雞的胸肌率和腿肌率，其具體作用機理還需進一步研究，這與郭元晟[17]的試驗結果相一致。

3.3 復合益生菌制劑對肉雞免疫指標的影響

免疫器官是免疫細胞發(fā)育、增殖和分化的場所，免疫器官的發(fā)育情況以及功能的強弱對禽類的免疫水平起著決定性的作用，所以免疫器官指數是反映禽類機體免疫水平的可靠指標[18]。禽類的免疫器官主要包括脾臟、胸腺和法氏囊[19]。郭欣怡等[20]研究發(fā)現，肉雞飼糧中添加乳酸菌、丁酸菌和復合菌，隨著肉雞日齡的增加和益生菌的連續(xù)應用，其作用越來越顯著。本試驗研究發(fā)現，飼糧中添加不同配比復合益生菌制劑對肉雞的免疫器官指數無顯著影響，但具有改善免疫器官指數的趨勢，與林謙等[21]報道的益生菌對黃羽肉雞胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官指數均無顯著影響的結果相一致。

血清免疫球蛋白含量是反映動物機體免疫功能變化的重要標志[22]。IgG的主要作用是介導體液免疫，禽類血清中的IgG具有抗細菌、病毒、外毒素等多種活性功能，尤其在體液免疫中具有重要的作用[23]。IgA的主要作用是參與黏膜局部免疫，通過與相應病原微生物結合，阻止病原體黏附到細胞表面，在局部抗感染中發(fā)揮作用[24]。謝全喜等[25]研究指出，添加適量復合微生態(tài)制劑可以提高肉雞血清IgG含量，提高盲腸內容物分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量，增強新城疫血凝抑制抗體效價水平，最終增強其機體免疫力。王佳麗等[26]報道，復合益生菌可顯著提高21日齡肉雞的胸腺和法氏囊指數以及42日齡肉雞的胸腺指數，顯著提高21日齡肉雞的血清IgG含量和42日齡肉雞的血清IgA含量，顯著提高21日齡肉雞的外周血T淋巴細胞增殖功能。本試驗研究發(fā)現，21和42日齡時，復合益生菌制劑可以提高肉雞血清免疫球蛋白含量，其中Ⅲ組效果最好，原因可能是酵母菌含有豐富的蛋白質、B族維生素和氨基酸等生理活性物質，能夠增強畜禽的抗病能力，但添加2倍釀酒酵母只是因素之一。盡管益生菌具有較好的免疫調節(jié)作用，但并不是所有的有益菌群對動物的免疫防御系統(tǒng)都有促進作用。本試驗中采用的復合益生菌制劑為益生菌和含有抗菌肽的基因工程菌以不同比例混合而成的制劑，各菌種之間可能存在相互協(xié)同作用，由于這方面的研究較少，其具體作用機理還需后續(xù)試驗驗證。

4 結 論

飼糧中添加不同配比復合益生菌制劑可不同程度提高肉雞的生長性能，改善屠宰性能，提高血清免疫球蛋白含量，其中以添加1 000 mg/kg配比為1∶2∶1∶1(枯草芽孢桿菌∶釀酒酵母∶嗜酸乳桿菌∶乳雙歧桿菌)復合益生菌制劑的效果最好。

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*Corresponding author, professor, E-mail: aizhzhang@sina.com