超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蜂蜜中8種生物胺

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(1.西北大學(xué)分析科學(xué)研究所,陜西西安 710069; 2.西北大學(xué)化工學(xué)院,陜西西安 710069; 3.河南科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng) 453003)

生物胺是一類含氮的小分子量堿性有機(jī)化合物,廣泛存在于動(dòng)植物的組織和多種發(fā)酵與非發(fā)酵食品中,如:乳制品、酒、肉制品、水產(chǎn)品等[1-2]。食品中的生物胺生成途徑主要有以下幾類:由機(jī)體自身細(xì)胞代謝過(guò)程產(chǎn)生。此為內(nèi)源性生物胺有助于維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，其含量較低[3-4];由醛或酮通過(guò)氨基化和轉(zhuǎn)胺作用產(chǎn)生，其量較少；在食品加工和貯藏過(guò)程中,由于被微生物侵染,微生物釋放氨基酸脫羧酶并催化氨基酸脫羧途徑生成[5-6]，大部分生物胺在此過(guò)程形成。

蜂蜜中含有少量蛋白質(zhì)和多種游離氨基酸[7],具有多種適宜微生物生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),且在酸性環(huán)境下容易生成生物胺,因此在加工、儲(chǔ)存和運(yùn)輸過(guò)程中易被微生物侵染引起發(fā)酵從而產(chǎn)生生物胺,存在危害消費(fèi)者健康的潛在危險(xiǎn)。過(guò)量攝入生物胺后會(huì)引發(fā)人體不適、損害人體健康,如組胺、酪胺等[8]。目前很少有關(guān)蜂蜜中生物胺種類及含量的研究報(bào)道,也未見(jiàn)蜂蜜中生物胺的相關(guān)限量標(biāo)準(zhǔn),因此,有必要建立一種快速有效檢測(cè)蜂蜜中生物胺的方法。

生物胺的常見(jiàn)檢測(cè)方法有毛細(xì)管電泳法(CE)[9-10]、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[11-12]、生物傳感器法(Biosensor)[13-14]、化學(xué)比色法[15]、離子色譜法(IC)[16-17]、薄層色譜法(TLC)[18-19]、氣相色譜法(GC)[20-21]、高效液相色譜法(HPLC)[22-25]和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UHPLC-MS)[26-27]等。由于UHPLC-MS方法具有分析速度快、檢測(cè)靈敏度高、定量分析準(zhǔn)確的特點(diǎn),且蜂蜜樣品基質(zhì)復(fù)雜,大大增加了同時(shí)測(cè)定8種生物胺的難度,此外,生物胺本身沒(méi)有紫外和熒光吸收基團(tuán),需對(duì)生物胺進(jìn)行衍生化,衍生后的生物胺極性減小,有利于實(shí)現(xiàn)其在色譜柱上的分離。因此,本文采用UHPLC-MS技術(shù)結(jié)合丹磺酰氯柱前衍生法同時(shí)測(cè)定蜂蜜中8種常見(jiàn)生物胺的含量與分布,以期能為市售蜂蜜質(zhì)量安全控制提供可靠依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　材料與儀器

32個(gè)蜂蜜樣品樣品信息如表1;組胺(Histamine，HIS)、色胺(Tryptamine,TR)、酪胺(Tyramine,TYR)、精胺(Spermine,SP)、亞精胺(Spermidine,SPD)、2-苯乙胺(Phenylethylamine,PHE)、尸胺(Cadaverine,CAD)、腐胺二鹽酸鹽(Putrescine dihydrochloride)標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于99%，北京百靈威科技有限公司;濃鹽酸、無(wú)水碳酸鈉、碳酸氫鈉北京化工廠;三氯乙酸濟(jì)寧宏明化學(xué)試劑有限公司;5-磺基水楊酸天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開(kāi)發(fā)有限公司;高氯酸國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;丹磺酰氯衍生劑美國(guó)Sigma公司;乙腈、丙酮、甲酸、乙酸乙酯均為色譜純,美國(guó)MREDA公司。

表1　蜂蜜樣品信息Table 1　The information of honey samples

Agilent 1290超高效液相色譜儀、6495三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀美國(guó)Agilent公司;Inolab pH level 1酸堿度計(jì)(720型)德國(guó)WTW公司;十萬(wàn)分之一天平上海梅特勒-托利多儀器有限公司;Milli-Q純水發(fā)生器美國(guó)Millipore公司;CR22G高速冷凍離心機(jī)日本日立公司;G560E渦旋混勻器美國(guó)Scientific Industries公司;N-EVAP112氮?dú)獯蹈蓛x美國(guó)OA-SYS公司。

1.2　實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)所需溶液的配制

1.2.1.10.1 mol/L HCl溶液的配制吸取8.33 mL 12 mol/L濃鹽酸于1000 mL容量瓶中,用去離子水定容,混勻。移至錐形瓶中,密封待用。

1.2.1.2碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液(pH=11.5)的配制稱取18.70 g碳酸鈉以及1.00 g碳酸氫鈉于500 mL錐形瓶中,加入300 mL去離子水溶解,用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至11.5。

1.2.1.3丹磺酰氯丙酮溶液(10 mg/mL)的配制準(zhǔn)確稱取100 mg丹磺酰氯粉末于15 mL離心管中,加入10 mL丙酮溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.1.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取8種生物胺標(biāo)準(zhǔn)品各50 mg,置于 50 mL棕色容量瓶中,用0.1 mol/L HCl定容至刻度,得到1.0 mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液。在50 mL棕色容量瓶中加入8種生物胺的單標(biāo)儲(chǔ)備液各500 μL,用0.1 mol/L HCl定容至刻度,即為10 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,所有標(biāo)準(zhǔn)溶液均密封保存于4 ℃冰箱中。用于實(shí)驗(yàn)測(cè)定和方法驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2pH的選擇由于生物胺在堿性環(huán)境中才能與丹磺酰氯發(fā)生反應(yīng),因而本實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的pH(8.0～14.0的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液)進(jìn)行了研究。

1.2.3衍生劑濃度的選擇為篩選更佳的衍生劑濃度,用1～14 mg/mL的丹磺酰氯衍生生物胺,并對(duì)其在高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上的響應(yīng)做了對(duì)比研究。

1.2.4衍生溫度和衍生時(shí)間的選擇分別以室溫-隔夜,30 ℃-90 min,40 ℃-75 min,50 ℃-30 min,50 ℃-60 min,60 ℃-15 min,60 ℃-30 min,65 ℃-15 min,65 ℃-25 min,70 ℃-10 min,70 ℃-20 min,75 ℃-10 min,80 ℃-10 min,90 ℃-5 min組合進(jìn)行衍生,考察衍生溫度和衍生時(shí)間對(duì)衍生效果的影響。

1.2.5衍生試劑的穩(wěn)定性衍生劑丹磺酰氯粉末于-20 ℃冰箱冷凍室內(nèi)避光保存,現(xiàn)用現(xiàn)配。分別在衍生劑開(kāi)封當(dāng)天及開(kāi)封后不同時(shí)間配制丹磺酰氯丙酮溶液,與相對(duì)較穩(wěn)定的尸胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行衍生化反應(yīng)來(lái)考察衍生試劑的穩(wěn)定性。

1.2.6樣品前處理樣品處理方法參照Sanghee Lee等人[27]的方法,準(zhǔn)確稱取1.00 g蜂蜜樣品于50 mL離心管中,加入15 mL 5% 三氯乙酸溶液,渦旋混合均勻,置于4 ℃冰箱中避光過(guò)夜以沉淀樣品中的蛋白。將過(guò)夜后的樣品于4 ℃下8000 r/min離心10 min。取1 mL上清液于10 mL離心管中,加入1 mL pH=11.5的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液,充分混勻后,再加入1 mL 10 mg/mL的丹磺酰氯丙酮溶液,迅速混勻后,于60 ℃下避光衍生15 min。衍生后將樣品避光冷卻至室溫,用2 mL乙酸乙酯萃取兩次,合并有機(jī)相,加入1.5 mL去離子水洗滌,收集有機(jī)相,氮?dú)獯蹈珊蟛捎? mL乙腈復(fù)溶,再過(guò)尼龍濾膜(0.22 μm),后進(jìn)行UHPLC-MS/MS樣品分析。配制標(biāo)準(zhǔn)品除不需去蛋白步驟,其它步驟同樣品處理方法。

1.2.7色譜和質(zhì)譜條件

1.2.7.1色譜條件本實(shí)驗(yàn)選擇色譜柱Agilent Poroshell 120 SB-C18(50 mm×2.1 mm,2.7 μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)作為流動(dòng)相,流速為0.3 mL/min,柱溫為40 ℃,進(jìn)樣量為5 μL。洗脫程序:0～1 min,B為30%;1～5 min,B為30%～80%;6.5～7.5 min,B為80%～100%;9.0～9.5 min,B為100～30%;9.5～12.5 min,B為30%。

1.2.7.2質(zhì)譜條件離子源:離子漏斗,電噴霧離子源(ESI);掃描方式:正離子掃描方式;監(jiān)測(cè)模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式;氣體溫度(Gas Temp):200 ℃;干燥器流速(Gas Flow):15 L/min;霧化器壓力(Nebulizer):40 psi;鞘流氣氣體溫度(Sheath Gas Temp):350 ℃;鞘流氣氣體流速(Sheath Gas Flow):11 L/min;毛細(xì)管電壓:4000 V;噴嘴電壓:1000 V。

1.2.8基質(zhì)效應(yīng)本實(shí)驗(yàn)通過(guò)稀釋來(lái)減少蜂蜜樣品的基質(zhì)效應(yīng),為考察稀釋倍數(shù)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的影響,用乙腈將已處理好的蜂蜜樣品分別稀釋2、5、10、20、50、100、200倍,分別測(cè)定各樣品中生物胺含量,再乘以各稀釋倍數(shù)后與未稀釋樣品中生物胺含量進(jìn)行對(duì)比。

1.2.9方法學(xué)考察為考察分析方法的可靠性,用8種生物胺標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)方法做了線性范圍、檢出限、回收率及精密度的測(cè)定。

2　結(jié)果與分析

2.1　樣品前處理?xiàng)l件的選擇

由于蜂蜜樣品中的蛋白會(huì)與丹磺酰氯發(fā)生反應(yīng),影響樣品中生物胺的含量測(cè)定,因此,在衍生化反應(yīng)之前,需進(jìn)行除蛋白處理。本實(shí)驗(yàn)選擇三氯乙酸作為蛋白質(zhì)的沉淀試劑。

2.1.1pH的選擇以緩沖溶液的pH為橫坐標(biāo),各生物胺的色譜峰面積(以百萬(wàn)為單位)的相對(duì)百分比為縱坐標(biāo)作圖。從圖1中可看到,色胺、腐胺、尸胺在pH為9.5時(shí)有最大生成量,在pH為11.5時(shí)略有減少,但其余6種生物胺此時(shí)有最大生成量,最終選擇pH為11.5的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖溶液來(lái)處理樣品。這與前人[28-29]的研究結(jié)果一致。

圖1　生物胺衍生物的生成量隨緩沖溶液pH升高的變化趨勢(shì)Fig.1　The change of biogenic amine derivatives under different pH conditions of buffer solution

2.1.2衍生劑濃度的選擇以丹磺酰氯衍生劑的濃度為橫坐標(biāo),各生物胺的色譜峰面積(以百萬(wàn)為單位)的相對(duì)百分比為縱坐標(biāo)作圖,圖2表示生物胺衍生產(chǎn)物的生成量隨衍生劑丹磺酰氯濃度變化的變化趨勢(shì)。結(jié)果顯示8種標(biāo)樣均在衍生劑濃度為10 mg/mL時(shí),衍生物的生成量達(dá)到最大,再增加濃度,基本不變。因此,10 mg/mL為最佳衍生劑濃度,這與楊賢慶等人[30]的研究結(jié)果一致。

圖2　生物胺衍生產(chǎn)物的生成量隨衍生劑濃度變化的變化趨勢(shì)Fig.2　The change of biogenic amine derivatives with the different concentration of derivation agent

2.1.3衍生溫度和衍生時(shí)間的選擇不同溫度和時(shí)間的組合條件下均能衍生成功,且生物胺衍生物的種類一致、生成量基本相同。但考慮到省時(shí)、節(jié)能等因素,選擇60 ℃水浴15 min為實(shí)驗(yàn)最終衍生條件。

2.1.4衍生試劑的穩(wěn)定性分別在衍生劑開(kāi)封當(dāng)天及開(kāi)封后10、20、30、60、90、120 d配制的10 mg/mL的丹磺酰氯丙酮溶液,與尸胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 μg/mL)進(jìn)行衍生化反應(yīng),利用UHPLC-MS方法檢測(cè)生物胺衍生物的含量。以衍生劑開(kāi)封當(dāng)日配制的溶液生成的尸胺衍生物的量為基準(zhǔn),丹磺酰氯在30 d內(nèi)的衍生效果基本穩(wěn)定,之后配制的衍生劑溶液與尸胺反應(yīng)生成的衍生物量開(kāi)始下降,因此,丹磺酰氯衍生劑開(kāi)封后可在-20 ℃條件下避光保存1個(gè)月左右。

2.2　色譜與質(zhì)譜條件的優(yōu)化

表2　8種生物胺的結(jié)構(gòu)信息及質(zhì)譜條件Table 2　MRM acquisition settings for the dansyl derivatives of 8 BAs

注：“a”表示定量離子對(duì)。

為選擇流動(dòng)相,本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了有機(jī)相分別為甲醇和乙腈以及是否加甲酸的流動(dòng)相組成條件下8種生物胺的響應(yīng)值和峰形。結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入甲酸不僅能提高目標(biāo)物的分離效果還能改善峰形,乙腈為流動(dòng)相時(shí)響應(yīng)比甲醇更高,因此,選擇0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液作為流動(dòng)相比較合適。另外,還比較了三種色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18(50 mm×2.1 mm,3.5 μm)、Phenomenex Kinetex C18(50 mm×2.1 mm,2.6 μm)、Agilent Poroshell 120 SB-C18(50 mm×2.1 mm,2.7 μm)的分離性能,結(jié)果表明8種目標(biāo)分析物可以在Agilent Poroshell 120 SB-C18(50 mm×2.1 mm,2.7 μm)完全分離,峰型尖銳對(duì)稱無(wú)拖尾現(xiàn)象,且該色譜柱對(duì)于目標(biāo)物的保留和分離能力明顯高于其他兩個(gè)色譜柱。圖3為8種生物胺標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。

圖3　生物胺標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖Fig.3　Chromatogram of the 8 standard mixtures注:1:色胺,TR;2:2-苯乙胺,PHE;3:腐胺,PUT;4:尸胺:CAD; 5:組胺,HIS;6:酪胺,TYR;7:亞精胺,SPD;8:精胺,SP。

生物胺結(jié)構(gòu)上N原子具有孤對(duì)電子,容易接受質(zhì)子呈堿性即容易加和氫離子生成帶有正電荷的離子,故選擇電噴霧正離子(ESI+)掃描方式,根據(jù)[M+H]+離子找到分子離子峰。在MRM模式下對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行子離子掃描,進(jìn)而優(yōu)化碰撞能量、駐留時(shí)間及離子加速電壓,在MRM監(jiān)測(cè)模式下選取定性和定量離子作為特征離子對(duì),具體質(zhì)譜條件優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3　基質(zhì)效應(yīng)

表3　8種生物胺的線性關(guān)系及檢出限、定量限Table 3　Linearities,LODs,and LOQs of the standard BAs

在液質(zhì)聯(lián)用方法中的基質(zhì)效應(yīng)是由分析物的共流出組分影響電噴霧接口的離子化效率所致,會(huì)使離子強(qiáng)度增加或降低,從而影響檢出限、定量限以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。由于本實(shí)驗(yàn)的樣品中均含少量生物胺,且沒(méi)有空白基質(zhì)樣品,因此,只能通過(guò)稀釋來(lái)減少基質(zhì)效應(yīng)。初步研究表明稀釋后的蜂蜜樣品中生物胺的含量均高于未稀釋的樣品,說(shuō)明蜂蜜基質(zhì)對(duì)于測(cè)定生物胺結(jié)果具有抑制作用,而對(duì)樣品進(jìn)行稀釋能夠降低抑制作用。隨著稀釋倍數(shù)的增加,乘以稀釋倍數(shù)后可檢測(cè)到的生物胺含量逐漸升高,20倍時(shí)達(dá)最高,此后含量基本保持不變。因此,本實(shí)驗(yàn)選取最佳稀釋倍數(shù)為20倍,這與Stahnke等[31]研究結(jié)果一致。

2.4　方法的線性范圍及檢出限

由于8種生物胺的檢測(cè)靈敏度差異很大,配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液是根據(jù)各生物胺的響應(yīng)靈敏度高低進(jìn)行濃度差異配制?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液中SPD、SP的質(zhì)量濃度范圍為5～500 μg/L,TR、PHE、PUT、CAD、TYR、HIS的質(zhì)量濃度范圍為1～500 μg/L。標(biāo)準(zhǔn)曲線以各生物胺色譜峰面積與其對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度(μg/L)呈線性關(guān)系,各標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均大于0.99。逐級(jí)稀釋生物胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,當(dāng)信噪比(S/N)為3和10時(shí)確定為各生物胺的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。結(jié)果表明該方法的檢出限(LODs)為0.01～0.51 μg/L,定量限(LOQs)為0.03～1.67 μg/L,具體結(jié)果見(jiàn)表3。

2.5　回收率和精密度

在已知各生物胺含量的蜂蜜樣品中分別添加100、500、1000 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按已優(yōu)化的樣品處理方法進(jìn)行前處理，平均回收率為76%～112%。為評(píng)價(jià)方法精密度,每日平行測(cè)定5次,連續(xù)進(jìn)行3 d。結(jié)果表明日內(nèi)精密度(n=5)均小于等于9.8%,日間精密度(n=15)均小于等于13.1%,表4為各生物胺的回收率和精密度。

表4　8 種生物胺的基質(zhì)回收率及精密度Table 4　Recoveries,intra-day(n=3)and inter-day (n=5)precision data for 8 standard BAs

2.6　實(shí)際蜂蜜樣品的測(cè)定

按上述優(yōu)化方法對(duì)22種不同植物源市售蜂蜜樣品進(jìn)行了檢測(cè),圖4為棗花蜜的總離子流圖及色胺和2-苯乙胺的MRM圖譜。22種蜂蜜樣品中生物胺的種類及含量總結(jié)如表5所示,結(jié)果顯示色胺(TR)、2-苯乙胺(PHE)、腐胺(PUT)、尸胺(CAD)、組胺(HIS)、酪胺(TYR)、亞精胺(SPD)和精胺(SP)共8種生物胺分別在32個(gè)蜂蜜樣品中檢出,其中,色胺僅存在于棗花蜜中,平均含量為192.6 μg/kg,這可能與棗花蜜獨(dú)特的酸性環(huán)境有關(guān)。Koessler等[32]認(rèn)為合成生物胺是為了抵抗酸性環(huán)境而產(chǎn)生的一種應(yīng)激反應(yīng),由于色氨酸是在脫羧酶的作用下生成的色胺,而氨基酸脫羧酶的活性最適pH是4.0～5.5,因此,棗花蜜較低的pH為色胺的生成提供了有利條件。2-苯乙胺和腐胺在所有蜂蜜樣品中均能檢出,含量范圍不等。2-苯乙胺平均含量為670.5 μg/kg,但在3個(gè)椴樹(shù)蜜樣品中含量尤高。另外鴨腳木蜂蜜也檢測(cè)到高含量的2-苯乙胺,但是一個(gè)樣品不具代表性,其具體原因有待深入研究。腐胺平均含量為65.9 μg/kg,其中歐洲百花蜜(黑蜂蜂種)及葵花蜂蜜較其余植物源的蜂蜜的含量都高。歐洲百花蜜及葵花蜂蜜腐胺含量高的原因可能跟蜂種和植物源有關(guān)。只有少量蜂蜜樣品中可檢測(cè)到尸胺、組胺、酪胺、亞精胺和精胺,尸胺在可檢出蜂蜜樣品中含量均在30 μg/kg以下;組胺僅在葵花蜜和歐洲百花蜜(黑蜂蜂種)中被檢出,含量分別為22.0和15.9 μg/kg;酪胺在14個(gè)蜂蜜樣品中檢出,平均含量為48.0 μg/kg;組胺和酪胺的毒性較高,一般認(rèn)為發(fā)酵食品中允許的組胺含量范圍在50～100 mg/kg,酪胺為100～800 mg/kg[33]。但結(jié)果表明其在蜂蜜中含量很低,對(duì)人體健康不會(huì)產(chǎn)生危害。亞精胺也僅在葵花蜜和歐洲百花蜜(黑蜂蜂種)中被檢出,含量分別為58.2 μg/kg和47.1 μg/kg。而精胺僅在葵花蜜中被檢測(cè)到,含量為15.6 μg/kg。

表5　22種不同植物源的蜂蜜樣品中生物胺的種類及含量分布Table 5　Distributions and levels of BAs in 22 kinds of honey samples from different botanical origins

注：“-”表示沒(méi)有檢出;同種蜂蜜的數(shù)量>1時(shí),含量為平均值。

圖4　棗花蜜的特征圖譜及其主要峰的MRM圖譜(色胺和2-苯乙胺)Fig.4　Representative chromatogram of data honey and MRM chromatograms of the main peaks(TR and PHE)

不同植物源的蜂蜜中生物胺的總含量也相差較大,范圍在45.4～4349.9 μg/kg之間。五味子蜂蜜生物胺總含量最低,只含有2-苯乙胺和腐胺兩種生物胺,且含量均很低。椴樹(shù)蜜因其所含2-苯乙胺的含量很高,因而生物胺總含量最高。葵花蜜和百花蜜含有的生物胺種類較多,分別為7種和6種,其他植物源的蜂蜜一般含有2～4種生物胺。另外,棗花蜜中特有的色胺和椴樹(shù)蜜中較高含量的2-苯乙胺均可作為其潛在的花源標(biāo)志物。

蜂蜜中生物胺含量與分布的顯著差異,很可能與蜜種、蜂種、地理源及其他因素相關(guān),具體影響機(jī)制和相關(guān)性還有待深入研究。

3　結(jié)論

本文建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀結(jié)合柱前衍生方法對(duì)常見(jiàn)商品種類的蜂蜜中生物胺的種類及含量分布進(jìn)行了調(diào)查研究。該方法對(duì)于蜂蜜中生物胺定性和定量檢測(cè)具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確性和可靠性,滿足蜂蜜中生物胺檢測(cè)和分析的需要,為蜂產(chǎn)品行業(yè)制定相關(guān)限量標(biāo)準(zhǔn)提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù),有利于進(jìn)一步研究植物源、地理源、蜂種及其他因素對(duì)蜂蜜中生物胺種類及含量的相關(guān)性。

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