• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    阿苯達(dá)唑聯(lián)合IFN-α抗小鼠細(xì)粒棘球蚴病的實(shí)驗(yàn)研究

    2018-04-04 09:03:27,,
    關(guān)鍵詞:包囊超微結(jié)構(gòu)細(xì)胞因子

    ,, , 

    細(xì)粒棘球蚴病 (cystic echinococcosis, CE)是一種在全世界廣泛分布并在部分區(qū)域呈現(xiàn)嚴(yán)重流行的蠕蟲類人獸共患病[1]。我國是棘球蚴病發(fā)病最高的國家之一[2]。治療CE通常依賴于手術(shù)和/或化療,取決于多種的因素如囊腫的大小和位置、合并微生物感染、潛在危險并發(fā)癥如囊腫破裂等[3-6]。作為手術(shù)治療的補(bǔ)充,唯一可用的藥物治療CE的苯并咪唑氨基甲酸酯衍生物,即甲苯咪唑(MBZ)和阿苯達(dá)唑(ABZ)[7]。然而,有超過20%的CE病例對于這樣的治療效果不佳[8]。因此,迫切需要新型的、更有效的治療方案。

    干擾素(interferon, IFN)-α,屬一類干擾素,最初主要被用于各種病毒性疾病的抗病毒治療[9]。隨后,IFN-α 被證實(shí)具有多種生物學(xué)功能,包括:抗病毒、抗腫瘤 及免疫調(diào)節(jié)等[9-10]。對于另一種棘球蚴病-泡球蚴病(AE),有研究表明IFN-α具有積極的保護(hù)作用。Godot V 等研究證實(shí)IFN-α能夠顯著減小AE病人的病變囊泡[11]。 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),IFN-α 治療AE的過程中能夠逆轉(zhuǎn)Th2型到Th1型免疫應(yīng)答,而這有利于機(jī)體免疫對于包囊產(chǎn)生有效的保護(hù)性的免疫應(yīng)答。在AE的研究中還發(fā)現(xiàn),IFN-α能夠減輕肝臟纖維化與損傷水平。然而,目前缺乏IFN-α對于CE治療效果的研究。本研究旨在小鼠體內(nèi)評價單獨(dú)IFN-α及聯(lián)合ABZ-IFN-α對于CE的治療效果。

    1 材料與方法

    1.1材料

    1.1.1實(shí)驗(yàn)動物所有動物實(shí)驗(yàn)均通過內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院倫理委員會的審核批準(zhǔn)。40只雌性Balb/c 小鼠(8周齡,18~20 g) 購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限公司。實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)在一定室溫控制(22±1 ℃)、光照 (12 h光照/黑暗 循環(huán)) 環(huán)境中。

    1.1.2藥物及試劑ABZ購自葛蘭素史克公司, Pegasys○Rinterferon alfa-2a 購自羅氏制藥有限公司。青霉素、鏈霉素、RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清 (FBS)均購自Invitrogen公司。Con-A 購自Sigma-Aldrich公司。小鼠IL-4, IL-10和 IFN-γ細(xì)胞因子ELISA檢測試劑盒購自e-Bioscience公司。山羊抗小鼠IgE、IgG抗體及其亞型二抗購自Novagen 公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.1.3原頭蚴包囊從臨床手術(shù)中分離獲得后,迅速無菌地轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室。通過注射器將囊液從包囊中吸出, 9 000×g 4 ℃離心20 min,棄上清,將沉淀原頭蚴用含有雙抗的PBS(pH 7.2,包含1 000 μg/mL青霉素和1 000 U/mL鏈霉素)洗兩遍。原頭蚴活性利用美蘭排除實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定[12]。 只有當(dāng)原頭蚴活性達(dá)到90%以上才會被用于接下來小鼠繼發(fā)感染。繼發(fā)感染使用的原頭蚴終濃度是1 500個/200 μL PBS。

    1.2實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)通過腹腔注射繼發(fā)感染40只雌性Balb/c 小鼠,每只小鼠感染重懸在200 μL PBS的1 500個新鮮的原頭蚴。感染5個月后,小鼠被隨機(jī)分配到4組(10只/組):a) ABZ治療組,小鼠每日灌胃ABZ (5 mg/kg);b) IFN-α治療組,小鼠每3 d肌肉注射IFN-α-2a 10 000 IU/50 μL;c) ABZ+IFN-α組,小鼠同時進(jìn)行ABZ與IFN-α的治療,劑量方法同a)和b);d)未經(jīng)治療對照組。各組藥物治療維持2個月。隨后,隨后處死小鼠,檢測相關(guān)指標(biāo)評價治療效果。

    1.2.2檢測寄生蟲感染及分析治療有效率解剖小鼠腹腔,檢測每只小鼠的包囊數(shù)量、大小及重量。治療有效率(基于感染小鼠包囊重量)通過下列公式計(jì)算[13]:

    其中 Xc是未經(jīng)治療對照組平均包囊重量,Xt 是治療組平均包囊重量。

    1.2.3透射電子顯微鏡觀察(Transmission electron microscopy,TEM)各組包囊樣本經(jīng)處理后用TEM進(jìn)行檢測[14]。包囊被切割為1 mm3大小并利用預(yù)冷的含2.5% 戊二醛的0.1 M PBS固定5 h。樣本經(jīng)0.1 M PBS洗兩遍后,采用1%四氧化鋨固定。樣本隨后經(jīng)不同乙醇濃度梯度脫水后在等體積的氧化丙烯/環(huán)氧樹脂中包埋過夜。隨后,再次在新鮮的100%環(huán)氧樹脂包埋24 h及在65 ℃包埋18h。采用超微切片機(jī)(Leica EM FC7)制備50-70 nm厚度的切片。隨后放置到200-目的銅網(wǎng),切片經(jīng)飽和乙酸雙氧鈾及檸檬酸鉛分別浸泡著色10 min和5 min。切片經(jīng)蒸餾水清洗后自然干燥,利用TEM(H7650, 日立)檢測。

    1.2.4酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)首先, 將每只小鼠分離的脾細(xì)胞采用RPMI 1640培養(yǎng)基(含10%熱滅活FBS)重懸,終濃度調(diào)整到5×106個脾細(xì)胞/mL,加入2.5 μg/mL Con-A (Sigma) 刺激劑37 ℃ 5% CO2孵育72 h后,收集培養(yǎng)上清用于檢測IL-4, IL-10和 IFN-γ濃度。血清與細(xì)胞培養(yǎng)上清細(xì)胞因子的檢測的具體步驟參見EILSA細(xì)胞因子檢測試劑盒說明書。

    ELISA檢測血清抗體水平:用96孔微量板,每孔加入含有0.1 μg/μL 包囊粗抗原的0.1 M磷酸鹽緩沖液 (pH 9.6)100 μL 4 ℃孵育過夜。血清以1∶100稀釋到PBST 緩沖液 (pH 7.2, PBS 中含有0.05%吐溫-20)中, 37 ℃孵育1 h。隨后加入二抗,即以1∶1000稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG、IgG亞型和IgE。酶標(biāo)儀(Bio-Rad)單波長490nm處檢測吸光密度OD值。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)均通過Prism 5.0 (GraphPad 軟件)進(jìn)行分析。結(jié)果表示為均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)誤。包囊重量、大小、細(xì)胞因子濃度與抗體水平均分別通過單因素方差檢驗(yàn)進(jìn)行分析。當(dāng)P<0.05時,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

    2 結(jié) 果

    2.1ABZ+IFN-α 治療顯著抑制包囊小鼠在實(shí)驗(yàn)過程無發(fā)現(xiàn)死亡,表明沒有嚴(yán)重的藥物副作用。小鼠處死時,4組小鼠平均小鼠體重沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。ABZ+IFN-α 治療組的包囊數(shù)量與對照組(P<0.01)或ABZ組(P<0.05)相比顯著下降,ABZ治療組的包囊數(shù)量與對照組相比顯著下降(P<0.01)。然而,IFN-α 治療組包囊數(shù)量與對照組相比無顯著差異(P>0.05),見表1。

    表1對照組與不同治療組的包囊數(shù)量
    Tab.1The number of hydatid cysts in control and treated infected mice

    分組Group每只小鼠的包囊數(shù)量EachnumberofcystinmiceMean±SEMABZ32214121322.100±0.314IFN?α47345162423.800±0.592ABZ+IFN?α11102112000.900±0.233ab對照組Untreatedcontrol54062335743.900±0.640

    注:ABZ+IFN-α治療組的包囊數(shù)量與未處理組(aP<0.01)或ABZ治療組(bP<0.05)相比顯著下降。

    注:The number of cysts in treated group showed significant reduction from group untreated control (aP<0.01) or group ABZ (bP<0.05).

    結(jié)果表明ABZ+IFN-α治療組無論包囊重量還是大小,與對照組(P<0.01)或ABZ治療組(P<0.05)相比均顯著下降,ABZ+IFN-α治療組的包囊抑制率達(dá)到89.7%,這些結(jié)果表明ABZ聯(lián)合IFN-α治療效果更顯著,見表2。

    表2不同處理組的包囊重量與大小
    Tab.2Weights and size of hydatid cysts in control and treated infected mice

    分組Group囊重(g)Weightofhydatidcyst包囊直徑(mm)Sizeofhydatidcyst包囊抑制率(%)CystinhibitionrateABZ0.21±0.17a2.1±0.9a78.4IFN?α0.89±0.286.7±1.50.08ABZ+IFN?α0.10±0.05ab1.2±0.4ab89.7Untreatedcontrol0.97±0.457.3±3.2?

    注:ABZ+IFN-α治療組的包囊重量與大小與對照組(aP<0.01)或ABZ治療組(bP<0.05)相比顯著下降。

    2.2ABZ+IFN-α治療組的包囊超微結(jié)構(gòu)的改變與破壞TEM用于觀察不同處理組包囊超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果表明,對照組的包囊呈現(xiàn)典型的細(xì)粒棘球蚴包囊結(jié)構(gòu),而ABZ+IFN-α治療組出現(xiàn)了包囊超微結(jié)構(gòu)的改變與破壞。見圖1A和1B。在生發(fā)層,ABZ+IFN-α治療的小鼠包囊中正常的未分化細(xì)胞、纖維組織、典型細(xì)胞核及核仁結(jié)構(gòu)明顯消失,取而代之的是細(xì)胞核碎裂與大量的脂滴,見圖1C和1D,表明生發(fā)層產(chǎn)生子囊的能力被破壞。與對照組相比,ABZ+IFN-α治療組的小鼠包囊典型的皮層與微毛微管結(jié)構(gòu)消失,見圖1E和1F。正常外層的非細(xì)胞的、富含糖成分的角質(zhì)層被排列不規(guī)整、富含空泡結(jié)構(gòu)的代替,見圖1G和1H。

    ABZ+IFN-α治療組的變化:A、C、E和G;未治療對照組的變化:B、D、F和H。A和B顯示的是總體的包囊超微結(jié)構(gòu)。C和D展示的是包囊生發(fā)層。E和F重點(diǎn)觀察的是微管與外皮結(jié)構(gòu)。F來自D的紅色區(qū)域。G與H是包囊外層的層積層。在對照組,包囊具有角質(zhì)層 (LL)、生發(fā)層(GL)、皮層(Te)、微管(Mt)、未分化細(xì)胞(UC)、纖維組織(F)、細(xì)胞核(Nu)與核仁(Nl)。ABZ+IFN-α治療組的超微結(jié)構(gòu)變化表明脂滴(Ld)和空泡(V)。ABZ+IFN-α treated group (A, C, E and G) and Untreated group (B, D, F and H). A and B showed the general ultrastructure of cysts. C and D showed germinal layer of cysts. E and F emphasized on changes of teguments and microtriches. F derived from red rectangle area of D. G and H represented laminated layer of cysts. In untreated group, the hydatid cyst appears almost normal laminated layer (LL), germinal layer (GL), tegument (Te), microtriches (Mt), undifferentiated cells (UC), fibrous tissue (F), cell nucleus (Nu) and nucleolus (Nl) are clearly visible. In ABZ+IFN-α treated group, ultrastructural alternations shows as lipid droplets (Ld) and vaculoles (V), nuclear fragmentation, degeneration and disappearance of microtriches (Mt), undifferentiated cells (UC), tegument (Te), and cellular elements. Each figure was labeled by a scale bar.圖1 ABZ+IFN-α治療組的包囊超微結(jié)構(gòu)變化Fig.1 Ultrastructural modification of cyst wall and cyst components in ABZ+IFN-α treated group

    2.3ABZ+IFN-α治療顯著降低了血清IL-10:為了檢測治療后細(xì)胞因子的生成情況,檢查發(fā)現(xiàn)ABZ+IFN-α治療組的血清IL-10濃度與對照組相比顯著降低(2.29±0.25 ng/mL) vs. (3.44±0.14 ng/mL),P<0.01)(圖2A)。IFN-γ(圖 2B,P=0.08)與IL-4(圖2C,P=0.11)在各組之間沒有顯著差別。

    不同治療組的小鼠血清分別使用ELISA試劑盒檢測IFN-γ (A)、 IL-4 (B)和 IL-10 (C)濃度。a P<0.01。Sera of mice from diverse groups were collected respectively for detection of IFN-γ (A), IL-4 (B) and IL-10 (C) concentration using ELISA kit. a P<0.01.圖2 ABZ+IFN-α治療組血清IL-10顯著下降Fig.2 Significant decrease of IL-10 in serum with ABZ+IFN-α treatment

    2.4ABZ+IFN-α治療顯著降低了脾細(xì)胞分泌的IL-10:經(jīng)檢測,脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子情況并發(fā)現(xiàn)ABZ+IFN-α治療組的IL-10分泌與對照組相比顯著下降(0.91±0.10 ng/mL) vs. (1.99±0.17 ng/mL),P<0.01)(圖3A)。但是IFN-γ(圖 3B,P=0.31)與IL-4(圖3C,P=0.18)水平在各組之間沒有顯著差別。

    不同治療組的小鼠脾細(xì)胞上清分別使用ELISA試劑盒檢測IFN-γ (A)、 IL-4 (B)和 IL-10 (C)濃度。a P<0.01。Cytokines production by spleen cells from diverse groups were collected respectively for detection of IFN-γ (A), IL-4 (B) and IL-10 (C) secretion using ELISA kit. a P<0.01.圖3 ABZ+IFN-α治療組的脾細(xì)胞分泌的IL-10顯著降低Fig.3 Significant decrease of IL-10 in production in vitro with ABZ+IFN-α treatment

    2.5ABZ+IFN-α治療組的血清特異性抗體變化為了更好的了解該治療對于特異性抗體水平的影響,本研究對不同處理組血清抗體進(jìn)行了ELISA檢測。結(jié)果表明,與單純感染對照組相比,ABZ+IFN-α治療組的IgG抗體持續(xù)下降,在治療結(jié)束時(第60 d)顯著下降(P<0.000 1,圖4A)。同樣,在治療結(jié)束時,IgG抗體的亞型包括IgG1(P<0.000 1,圖4B)、IgG2(P=0.029 9,圖4C)與IgG4(P<0.000 1,圖4D)均隨著治療顯著降低。與此同時,聯(lián)合治療組IgE水平亦顯著降低(P<0.000 1,圖4E)。

    圖4 不同治療組血清IgG、IgG1、 IgG2、 IgG4、 IgE和IgM的檢測Fig.4 Detection of OD value profiles of sera IgG, IgG1, IgG2, IgG4, IgE and IgM in diverse treated groups

    3 討 論

    在本研究中,評價了ABZ聯(lián)合IFN-α對于CE的治療效果。研究結(jié)果表明ABZ聯(lián)合IFN-α在小鼠繼發(fā)感染CE中具有更好的治療效果。進(jìn)一步證實(shí)該治療效果可能與包囊超微結(jié)構(gòu)的改變、降低的IL-10水平以及下調(diào)體液免疫有關(guān)。

    IFN-α具有多種生物學(xué)功能包括抗病毒感染、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用,但在蠕蟲感染中的作用研究十分有限。但是值得一提的是在AE研究中,IFN-α減輕了人和小鼠的包囊病變[11, 15]。研究者進(jìn)一步指出該作用與Th2型細(xì)胞因子向Th1型細(xì)胞因子逆轉(zhuǎn)有關(guān),包括下調(diào)IL-10、IL-6與IL-13,以及上調(diào)IFN-γ 水平[11]。 但是本研究顯示僅僅 IFN-α并不能產(chǎn)生緩解CE的能力,也不能逆轉(zhuǎn)Th細(xì)胞因子類型,說明僅僅IFN-α不能夠打破慢性CE的Th2型免疫應(yīng)答。該結(jié)果與之前在AE治療的報(bào)道不同。然而IFN-α聯(lián)合ABZ能夠顯著改善CE降低包囊負(fù)擔(dān),與ABZ組或?qū)φ战M相比治療效果顯著見表1、2。進(jìn)一步研究表明,該聯(lián)合治療能夠顯著下調(diào)IL-10。IL-10是典型的Th2型細(xì)胞因子,在 CE中抑制Th1保護(hù)性應(yīng)答并幫助寄生蟲逃避宿主免疫應(yīng)答[16]。所以,該聯(lián)合治療取得更好的治療效果可能與抑制了IL-10,降低了Th2型免疫應(yīng)答有關(guān)。

    體液免疫應(yīng)答在CE發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,在感染的早期,通過激活補(bǔ)體、調(diào)理作用、ADCC作用等發(fā)揮重要的保護(hù)性免疫應(yīng)答,而在感染的慢性期抗體尤其是IgG4類型具有保護(hù)蟲體逃逸的作用[17-18]。在本研究聯(lián)合治療中的IgG、IgG1、IgG2、IgG4和IgE都顯著下降,這表明在感染慢性期異常升高的體液免疫應(yīng)答在該聯(lián)合治療中顯著下調(diào),其中IgG4也顯著降低。但是,盡管IgG水平在聯(lián)合治療后顯著下降,我們發(fā)現(xiàn)其水平仍高于陰性水平。這可能與感染的免疫記憶有關(guān),但需要進(jìn)一步的研究??傊?,該聯(lián)合治療的治療效果可能亦與下調(diào)對寄生蟲有利的體液免疫有關(guān)。

    在本研究中,ABZ+IFN-α或單獨(dú)的IFN-α治療都沒有顯著增加感染慢性期IFN-γ水平。這或許是與IFN-γ往往在感染早期(7-8 d)發(fā)揮重要的保護(hù)作用,而隨后在感染的慢性期就會下降有關(guān)[19]。感染早期治療對于IFN-γ的影響將會進(jìn)一步研究。此外,有研究報(bào)道IFN-α通過增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞(DC)細(xì)胞遞呈抗原發(fā)揮抗腫瘤作用[20-21],但是DC細(xì)胞是否在該聯(lián)合治療中發(fā)揮作用仍需探究。

    總之,本研究證實(shí)ABZ聯(lián)合IFN-α對于CE具有更好的治療效果,為CE治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    參考文獻(xiàn):

    [1] Brunetti E, Kern P, Vuitton DA.Writing Panel for the W-I. Expert consensus for the diagnosis and treatment of cystic and alveolar echinococcosis in humans[J]. Acta tropica, 2010, 114(1): 1-16.DOI: 10.1016/j.actatropica.2009.11.001

    [2] Qi YF,Wu WP. Progress on the epidemiology of echinococcosis[J]. Chin J Parasitol Paras Dis, 2013, 31(02): 143-148. (in Chinese)

    齊顏鳳, 伍衛(wèi)平. 棘球蚴病流行病學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志, 2013, 31(02): 143-148.

    [3] Kern P. Medical treatment of echinococcosis under the guidance of Good Clinical Practice (GCP/ICH) [J]. Parasitol Int, 2006, 55 Suppl: S273-82.DOI:10.1016/j.parint.2005.11.040

    [4] Ceballos L, Elissondo C, Moreno L, et al. Albendazole treatment in cystic echinococcosis: pharmacokinetics and clinical efficacy of two different aqueous formulations[J]. Parasitol Res, 2008, 103(2): 355-362.DOI: 10.1128/AAC.05105-11

    [5] Menezes da Silva A. Hydatid cyst of the liver-criteria for the selection of appropriate treatment[J]. Acta Tropica, 2003, 85(2): 237-242.DOI: 10.1016/S0001-706X(02)00271-1

    [6] Wen H,Tu EGAL AJ,Shao YM,et al. Research achievements and challenges for echinococcosis control[J]. Chin J Parasitol Paras Dis, 2015, 33(06): 466-471. (in Chinese)

    溫浩, 吐爾干艾力·阿吉, 邵英梅, 等. 棘球蚴病防治成就及面臨的挑戰(zhàn)[J]. 中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志, 2015, 33(06): 466-471.

    [7] Falagas ME, Bliziotis IA. Albendazole for the treatment of human echinococcosis: a review of comparative clinical trials [J]. Am J Medl Sci, 2007, 334(3): 171-179.DOI: 10.1097/MAJ.0b013e31814252f8

    [8] Moro P, Schantz PM. Echinococcosis: a review[J]. Int J Infect Dis, 2009, 13(2):125-133.DOI: 10.1016/j.ijid.2008.03.037

    [9] Uze G, Tavernier J. High efficiency targeting of IFN-alpha activity: possible applications in fighting tumours and infections[J]. Cytokine Growth Factor Rev, 2015, 26(2): 179-182.DOI: 10.1016/j.cytogfr.2014.10.006

    [10] Gibbert K, Schlaak JF, Yang D, et al. IFN-α subtypes: distinct biological activities in anti-viral therapy[J]. Br J Pharmacol, 2013, 168(5):1048. DOI: 10.1111/bph.12010

    [11] Godot V, Harraga S, Podoprigora G, et al. IFN alpha-2a protects mice against a helminth infection of the liver and modulates immune responses[J]. Gastroenterology, 2003, 124(5):1441-1450. DOI: 10.1016/S0016-5085(03)00273-7

    [12] Elissondo M, Dopchiz M, Ceballos L, et al.Invitroeffects of flubendazole onEchinococcusgranulosusprotoscoleces [J]. Parasitol Res, 2006, 98(4): 317-323.DOI: 10.1007/s00436-005-0026-6

    [13] Pensel PE, Ullio Gamboa G, Fabbri J, et al. Cystic echinococcosis therapy: Albendazole-loaded lipid nanocapsules enhance the oral bioavailability and efficacy in experimentally infected mice[J]. Acta Trop, 2015, 152: 185-194.DOI: 10.1016/j.actatropica.2015.09.016

    [14] Ahmadnia S, Moazeni M, Mohammadi-Samani S, et al.Invivoevaluation of the efficacy of albendazole sulfoxide and albendazole sulfoxide loaded solid lipid nanoparticles against hydatid cyst [J]. Exp Parasitol, 2013, 135(2): 314-319.DOI: 10.1016/j.exppara.2013.07.017

    [15] Harraga S, Godot V, Bressonhadni S, et al. Clinical efficacy of and switch from T helper 2 to T helper 1 cytokine profile after interferon α2a monotherapy for human echinococcosis[J]. Clin Infec Dis, 1999, 29(1):205-206. DOI: 10.1086/520157

    [16] Manel A, Chafia TB. Involvement of Treg and alternatively activated macrophages in evasion strategies during hydatidosis[J].Front in Immunol,2013,4(4):41-7.DOI: 10.3389/conf.fimmu.2013.02.00425

    [17] Rigano R, Profumo E, Di Felice G, et al.Invitroproduction of cytokines by peripheral blood mononuclear cells from hydatid patients [J]. Clin Exp Immunol, 1995, 99(3): 433-439.

    [18] Zhang W, Hao W, Li J, et al. Immunology and immunodiagnosis of cystic echinococcosis: an update[J]. Clin Dev Immunol, 2012(1):101895.DOI: 10.1155/2012/101895

    [19] Gessner A, Moskophidis D, Lehmann-Grube F. Enumeration of single IFN-gamma-producing cells in mice during viral and bacterial infection [J]. J Immunol, 1989, 142(4): 1293-1298.

    [20] Rizza P, Capone I, Moretti F, et al. IFN-α as a vaccine adjuvant: recent insights into the mechanisms and perspectives for its clinical use.[J]. Expert Rev Vaccines, 2011, 10(4):487-498.DOI: 10.1586/erv.11.9

    [21] Aricò E, Belardelli F. Interferon-α as antiviral and antitumor vaccine adjuvants: mechanisms of action and response signature[J]. J Interferon Cytokine Res, 2012, 32(6):235-247. DOI: 10.1089/jir.2011.0077

    猜你喜歡
    包囊超微結(jié)構(gòu)細(xì)胞因子
    抗GD2抗體聯(lián)合細(xì)胞因子在高危NB治療中的研究進(jìn)展
    海洋甲藻包囊及沿革
    白藜蘆醇對金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株抑菌作用及超微結(jié)構(gòu)的影響
    急性心肌梗死病人細(xì)胞因子表達(dá)及臨床意義
    電擊死大鼠心臟超微結(jié)構(gòu)及HSP70、HIF-1α表達(dá)變化
    腹腔鏡肝包囊摘除術(shù)的護(hù)理
    西藏科技(2015年6期)2015-09-26 12:12:12
    細(xì)胞因子在慢性腎缺血與腎小管-間質(zhì)纖維化過程中的作用
    不同波長Q開關(guān)激光治療太田痣療效分析及超微結(jié)構(gòu)觀察
    Ni 脅迫對斜紋夜蛾幼蟲包囊反應(yīng)的影響
    包囊游仆蟲包囊形成和解脫過程中微管蛋白基因表達(dá)的變化
    亚洲av成人精品一区久久| 满18在线观看网站| 91国产中文字幕| 亚洲人成网站在线播| 午夜免费鲁丝| 精品久久蜜臀av无| av福利片在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美变态另类bdsm刘玥| 成人无遮挡网站| 精品国产一区二区久久| 全区人妻精品视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩一区二区视频免费看| tube8黄色片| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 成人免费观看视频高清| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产亚洲最大av| av网站免费在线观看视频| 亚洲五月色婷婷综合| 国产成人aa在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久国内精品自在自线图片| 男女国产视频网站| 久久久亚洲精品成人影院| 97超碰精品成人国产| 乱人伦中国视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲av在线观看美女高潮| a级毛色黄片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 少妇人妻久久综合中文| www.av在线官网国产| 乱人伦中国视频| 丝袜脚勾引网站| 18禁在线播放成人免费| 日本wwww免费看| 人成视频在线观看免费观看| 99re6热这里在线精品视频| 欧美成人午夜免费资源| 老司机亚洲免费影院| 国国产精品蜜臀av免费| 国产 一区精品| 在线观看免费日韩欧美大片 | 亚洲欧美清纯卡通| 国产黄频视频在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 插阴视频在线观看视频| 精品一区在线观看国产| 在线观看国产h片| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产精品女同一区二区软件| 一区二区av电影网| 成人手机av| 制服诱惑二区| 26uuu在线亚洲综合色| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产一区二区在线观看av| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产一区二区在线观看av| 只有这里有精品99| 男人操女人黄网站| 国产精品无大码| 视频区图区小说| 国产精品一区二区在线观看99| 黄色欧美视频在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 人妻系列 视频| 久久久久久久国产电影| 青春草视频在线免费观看| 国产精品一二三区在线看| 一区二区三区精品91| 黄色配什么色好看| 亚洲久久久国产精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产av精品麻豆| 亚洲在久久综合| 国产又色又爽无遮挡免| 成人综合一区亚洲| 天堂俺去俺来也www色官网| 美女国产高潮福利片在线看| 一二三四中文在线观看免费高清| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品秋霞免费鲁丝片| av免费在线看不卡| 视频在线观看一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 黄色欧美视频在线观看| 欧美3d第一页| 美女国产高潮福利片在线看| 午夜福利视频精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产一区二区在线观看av| av在线观看视频网站免费| 国产av码专区亚洲av| 国产探花极品一区二区| 日韩欧美一区视频在线观看| 一个人免费看片子| 极品少妇高潮喷水抽搐| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲国产精品国产精品| 最近的中文字幕免费完整| 日韩强制内射视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 精品一区二区三区视频在线| 国产日韩欧美视频二区| 18禁动态无遮挡网站| 九九爱精品视频在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 色哟哟·www| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲成人一二三区av| 好男人视频免费观看在线| 国产免费视频播放在线视频| 性色avwww在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久久久视频综合| 亚洲综合色惰| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| av免费观看日本| 男女免费视频国产| 日韩一本色道免费dvd| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲成人一二三区av| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久精品国产自在天天线| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 精品久久久久久久久av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 哪个播放器可以免费观看大片| av在线观看视频网站免费| 男的添女的下面高潮视频| 天堂中文最新版在线下载| 人体艺术视频欧美日本| 久久鲁丝午夜福利片| 国产色爽女视频免费观看| 老女人水多毛片| 午夜视频国产福利| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 亚洲成人手机| 视频中文字幕在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 一级a做视频免费观看| 精品久久蜜臀av无| 国产精品人妻久久久影院| 日韩大片免费观看网站| 日本与韩国留学比较| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 午夜激情久久久久久久| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久影院123| 亚洲国产欧美在线一区| 亚州av有码| 黄片播放在线免费| 亚洲,一卡二卡三卡| 婷婷色综合www| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久久a久久爽久久v久久| 18+在线观看网站| 性高湖久久久久久久久免费观看| 中文天堂在线官网| 国产男女超爽视频在线观看| h视频一区二区三区| 久久久a久久爽久久v久久| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产黄频视频在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| www.色视频.com| 天美传媒精品一区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 建设人人有责人人尽责人人享有的| videos熟女内射| 人妻一区二区av| 黑丝袜美女国产一区| 午夜av观看不卡| 男人操女人黄网站| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲综合色网址| 久久青草综合色| 大香蕉97超碰在线| 亚洲成人手机| 插阴视频在线观看视频| 国产精品熟女久久久久浪| 97精品久久久久久久久久精品| 婷婷成人精品国产| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 午夜免费观看性视频| 色5月婷婷丁香| 精品少妇黑人巨大在线播放| 成人毛片a级毛片在线播放| 少妇人妻 视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 一边亲一边摸免费视频| 少妇的逼好多水| 国产视频首页在线观看| 黄片播放在线免费| 中文字幕av电影在线播放| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久午夜福利片| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美日韩av久久| 免费黄色在线免费观看| 妹子高潮喷水视频| 三上悠亚av全集在线观看| 97在线人人人人妻| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲av成人精品一区久久| 人妻 亚洲 视频| 伦精品一区二区三区| 伦理电影大哥的女人| 全区人妻精品视频| 久久久久久久久久久久大奶| 成人手机av| 精品久久久久久电影网| 久久久国产一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产成人a∨麻豆精品| 99九九在线精品视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 在线观看www视频免费| 在线观看www视频免费| 99久久人妻综合| 考比视频在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 曰老女人黄片| 午夜激情福利司机影院| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产深夜福利视频在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲精品,欧美精品| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产高清国产精品国产三级| 色婷婷久久久亚洲欧美| 美女中出高潮动态图| 大话2 男鬼变身卡| 精品午夜福利在线看| 婷婷色综合www| 精品亚洲成国产av| 亚洲在久久综合| av.在线天堂| 欧美三级亚洲精品| 男的添女的下面高潮视频| 色吧在线观看| 一级毛片我不卡| 国产高清三级在线| 日本免费在线观看一区| 黑人高潮一二区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久久国产欧美日韩av| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲经典国产精华液单| 哪个播放器可以免费观看大片| 丰满乱子伦码专区| 成人无遮挡网站| 日韩一区二区三区影片| 久久久欧美国产精品| 日韩大片免费观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 女性被躁到高潮视频| 一个人免费看片子| 成年人免费黄色播放视频| 大陆偷拍与自拍| 蜜臀久久99精品久久宅男| 欧美国产精品一级二级三级| 日韩亚洲欧美综合| 天天影视国产精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久99一区二区三区| 最新中文字幕久久久久| 成人影院久久| 春色校园在线视频观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 亚洲国产精品成人久久小说| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级| 好男人视频免费观看在线| 国产乱来视频区| 国产高清三级在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲国产精品成人久久小说| 日本欧美视频一区| 边亲边吃奶的免费视频| 少妇的逼好多水| 99热全是精品| 欧美人与善性xxx| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲国产精品专区欧美| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久久精品性色| 国产色爽女视频免费观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲综合色惰| 插阴视频在线观看视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品视频女| 国产精品一区二区在线不卡| videos熟女内射| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产精品一区二区在线观看99| 久久久久久久久久人人人人人人| av在线观看视频网站免费| 亚洲av日韩在线播放| 人人妻人人澡人人看| 人人澡人人妻人| 亚洲人与动物交配视频| 天天影视国产精品| 亚洲av二区三区四区| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲欧洲日产国产| 春色校园在线视频观看| 成年av动漫网址| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产探花极品一区二区| 久久久午夜欧美精品| 久久久国产一区二区| 日韩免费高清中文字幕av| 中文字幕免费在线视频6| 人妻一区二区av| av免费观看日本| 最近中文字幕高清免费大全6| 三级国产精品片| 人妻一区二区av| 观看av在线不卡| 99九九在线精品视频| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 嘟嘟电影网在线观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 免费黄频网站在线观看国产| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产在线一区二区三区精| 亚洲精品aⅴ在线观看| 欧美性感艳星| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲欧美精品自产自拍| 97超视频在线观看视频| 亚洲av免费高清在线观看| 赤兔流量卡办理| 国产一区二区在线观看日韩| 日本欧美国产在线视频| 国产毛片在线视频| www.色视频.com| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产精品偷伦视频观看了| 青青草视频在线视频观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久久久久人妻| 免费观看在线日韩| 亚洲情色 制服丝袜| 涩涩av久久男人的天堂| 男女边摸边吃奶| av卡一久久| 男女无遮挡免费网站观看| 只有这里有精品99| 亚洲情色 制服丝袜| 超碰97精品在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品久久久久成人av| 成人综合一区亚洲| 久久久午夜欧美精品| 国产成人免费无遮挡视频| 一级爰片在线观看| av网站免费在线观看视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美精品高潮呻吟av久久| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日韩av不卡免费在线播放| 国产成人免费观看mmmm| 日本欧美国产在线视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产一区二区在线观看av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产69精品久久久久777片| 国产毛片在线视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产亚洲最大av| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 性色avwww在线观看| 国产成人精品一,二区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 青春草视频在线免费观看| 我的老师免费观看完整版| 免费av中文字幕在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲国产精品999| 国产精品一国产av| 国产成人免费无遮挡视频| 高清在线视频一区二区三区| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美精品国产亚洲| 午夜激情福利司机影院| 国产精品不卡视频一区二区| av免费观看日本| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久这里有精品视频免费| 国产成人精品无人区| 在线观看国产h片| 香蕉精品网在线| 精品一品国产午夜福利视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 欧美bdsm另类| 中文字幕最新亚洲高清| 一级毛片我不卡| 51国产日韩欧美| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产一区亚洲一区在线观看| 免费看av在线观看网站| 男女免费视频国产| 久久青草综合色| 久久久精品免费免费高清| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 婷婷色av中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 丰满乱子伦码专区| 久久久久久久久久久免费av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久热精品热| 午夜福利视频精品| 久久午夜福利片| 老司机亚洲免费影院| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美日韩精品成人综合77777| 观看美女的网站| 一级爰片在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| videos熟女内射| 成人国产av品久久久| 高清欧美精品videossex| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 免费大片18禁| 18+在线观看网站| 丰满乱子伦码专区| 午夜视频国产福利| 国产伦精品一区二区三区视频9| 99热这里只有精品一区| 成人黄色视频免费在线看| 少妇 在线观看| 成人手机av| 成年av动漫网址| 一本色道久久久久久精品综合| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产成人精品婷婷| 午夜福利,免费看| 午夜免费鲁丝| 国产日韩欧美亚洲二区| 色哟哟·www| 久久久久久久久久成人| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚州av有码| 国产精品国产av在线观看| 天美传媒精品一区二区| 99国产综合亚洲精品| 人妻少妇偷人精品九色| 高清午夜精品一区二区三区| 黄色怎么调成土黄色| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品国产一区二区久久| 一区二区三区四区激情视频| 插阴视频在线观看视频| 乱人伦中国视频| 91国产中文字幕| 三级国产精品片| 久久人妻熟女aⅴ| 热99国产精品久久久久久7| 全区人妻精品视频| 成人无遮挡网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 成人国产麻豆网| 亚洲精品第二区| 中文字幕人妻丝袜制服| 毛片一级片免费看久久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| √禁漫天堂资源中文www| 在线观看人妻少妇| 亚洲国产av影院在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美精品国产亚洲| 一个人免费看片子| 国产成人91sexporn| 纯流量卡能插随身wifi吗| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲人与动物交配视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 国产淫语在线视频| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品一二三区在线看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| av在线观看视频网站免费| 国模一区二区三区四区视频| 九草在线视频观看| 国产精品欧美亚洲77777| 自线自在国产av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲久久久国产精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 老女人水多毛片| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲精品456在线播放app| 这个男人来自地球电影免费观看 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲中文av在线| 综合色丁香网| 久久久久久久久久成人| 黄片播放在线免费| 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩av免费高清视频| 久久精品国产亚洲av天美| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 插阴视频在线观看视频| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩三级伦理在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲第一av免费看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产有黄有色有爽视频| 超碰97精品在线观看| 精品国产一区二区久久| 97超碰精品成人国产| 美女内射精品一级片tv| 亚洲精品自拍成人| av线在线观看网站| 国产片内射在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 最近手机中文字幕大全| 久久99精品国语久久久| 在线观看一区二区三区激情| 综合色丁香网| 天天操日日干夜夜撸| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲精品,欧美精品| 在线观看一区二区三区激情| 一区二区三区四区激情视频| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲精品国产av蜜桃| 午夜久久久在线观看| .国产精品久久| 秋霞在线观看毛片| 一本色道久久久久久精品综合| 永久免费av网站大全| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 不卡视频在线观看欧美| 五月天丁香电影| 日韩中字成人| 久久这里有精品视频免费| 毛片一级片免费看久久久久| 超色免费av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久综合国产亚洲精品| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 插阴视频在线观看视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 免费黄网站久久成人精品| 成人影院久久| 日本黄大片高清| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日韩强制内射视频| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品久久久久久精品古装| 一级片'在线观看视频| 成人免费观看视频高清| 99热6这里只有精品| 十分钟在线观看高清视频www|