• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    B類1型清道夫受體基因敲除雌鼠不孕相關(guān)機(jī)制的研究進(jìn)展

    2018-03-29 20:58:49張劉洋龔婷喻紅張?jiān)?/span>
    生殖醫(yī)學(xué)雜志 2018年11期
    關(guān)鍵詞:雌鼠類固醇顆粒細(xì)胞

    張劉洋,龔婷,喻紅,張?jiān)?

    (1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心,武漢 430071;2.海南省第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,三亞 572099;3.武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系,武漢 430071)

    WHO一項(xiàng)調(diào)查結(jié)果顯示,截止2010年底,發(fā)展中國(guó)家平均每4個(gè)家庭中就有1對(duì)夫婦受到女性不孕的困擾[1]。女性不孕的主要病因包括卵巢功能障礙、輸卵管異常、子宮異常及不明原因的不孕等。其中,不明原因的不孕約占10~20%[2],目前應(yīng)用的檢測(cè)手段無法對(duì)其進(jìn)行確診,且缺乏肯定有效的治療方法和療效指標(biāo),不明原因的不孕是女性不孕中仍待攻克的一大難題。另一方面,隨著生活水平的提高,不健康的生活方式所導(dǎo)致的肥胖、高脂血癥等疾病已成為人群中的常見病,脂代謝異常與不孕之間的關(guān)系也逐漸被人們所發(fā)現(xiàn)和重視。

    B類1型清道夫受體(scavenger receptor class B type I,SR-B1)是首個(gè)被明確的高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)受體[3],SR-B1基因敲除(SR-B1 gene knockout,SR-B1-/-)小鼠除HDL及膽固醇代謝紊亂、動(dòng)脈粥樣硬化易感等特點(diǎn)外,還表現(xiàn)為雌性不孕。與此同時(shí),大量流行病學(xué)研究顯示,人類SR-B1基因(SCARB1)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)與血脂水平、冠心病易感性等有顯著相關(guān)性[4-5],且SCARB1 rs4238001 SNP(G2S 突變)與卵泡液中孕酮水平下降及胚胎移植存活率顯著降低有關(guān),rs10846744 SNP也顯示與胚胎存活率較低有關(guān)[6]。

    多項(xiàng)研究證實(shí),SR-B1-/-雌鼠體內(nèi)異常的脂蛋白代謝與其不孕有密切的關(guān)聯(lián),但其具體機(jī)制尚未明確。本文將從SR-B1的功能特點(diǎn)及SR-B1-/-雌鼠的病理改變出發(fā),對(duì)其不孕的可能相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探究和分析。

    一、SR-B1的基本功能

    1.SR-B1參與細(xì)胞對(duì)脂蛋白膽固醇的攝?。篠R-B1能以高親和力結(jié)合HDL而選擇性介導(dǎo)膽固醇攝取,它主要分布在肝臟、類固醇激素生成器官等組織細(xì)胞膜表面,參與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)(reverse cholesterol transport,RCT)及類固醇合成細(xì)胞的膽固醇攝取等過程。

    RCT的最終環(huán)節(jié)中,肝細(xì)胞表面的SR-B1可與攜有肝外組織膽固醇的HDL顆粒結(jié)合,HDL中膽固醇酯(cholesteryl ester,CE)被肝細(xì)胞選擇性攝取進(jìn)入胞內(nèi),隨之被代謝為膽汁而排出體外[7]。此外,肝細(xì)胞表面的SR-B1還可介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)HDL中脂質(zhì)氫過氧化物的選擇性攝取[8],以避免累積的脂質(zhì)氧化產(chǎn)物對(duì)HDL結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生損害。

    在性腺、腎上腺等組織中,也可發(fā)現(xiàn)SR-B1的大量表達(dá)。性腺組織合成的性激素是一類甾體激素,卵巢所分泌的兩種性激素——雌激素與孕激素,分別由卵泡內(nèi)的顆粒細(xì)胞和排卵后形成的黃體細(xì)胞合成并分泌。研究發(fā)現(xiàn),小鼠卵巢黃體細(xì)胞的SR-B1基因沉默后其胞內(nèi)膽固醇濃度顯著降低[9],而大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的CE攝取過程也被證實(shí)與SR-B1密切相關(guān)[10]。也就是說,SR-B1在卵巢性激素的合成過程中發(fā)揮了一定的作用。

    2.SR-B1介導(dǎo)胞內(nèi)游離膽固醇的外流:在符合膽固醇濃度梯度的條件下,細(xì)胞表面的SR-B1還可介導(dǎo)胞內(nèi)游離膽固醇(free cholesterol,F(xiàn)C)流向胞外成熟的HDL顆粒[11]。

    巨噬細(xì)胞表面主要存在三種分子可介導(dǎo)胞內(nèi)FC的外流:SR-B1,三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1),和三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)。SR-B1和ABCG1主要介導(dǎo)胞內(nèi)FC外流至HDL顆粒,ABCA1則負(fù)責(zé)將磷脂和FC轉(zhuǎn)運(yùn)至胞外缺乏脂質(zhì)的載脂蛋白AI(apolipoprotein AI,apoAI)或載脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)上。在人巨噬細(xì)胞中,ABCA1和SR-B1是膽固醇外流的主要途徑[12]。顯然,在ABCA1途徑缺陷的情況下,作為抗動(dòng)脈粥樣硬化的協(xié)助環(huán)節(jié)之一,SR-B1介導(dǎo)巨噬細(xì)胞內(nèi)FC外流的重要性就顯得尤為突出。接受ABCA1/SR-B1雙敲除小鼠骨髓的LDLR基因敲除(LDLR-/-)小鼠,其體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于接受ABCA1基因敲除小鼠骨髓的LDLR-/-小鼠水平[13],這一現(xiàn)象也就可以得到合理的解釋。

    3.SR-B1的抗炎、抗氧化作用:多項(xiàng)研究結(jié)果表明,SR-B1與機(jī)體內(nèi)促炎細(xì)胞因子水平密切相關(guān)[14]。在受到炎性因子的刺激時(shí),核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)可被激活,從而進(jìn)一步提高炎性因子的轉(zhuǎn)錄水平,而SR-B1與配體的結(jié)合可活化蛋白激酶B,并同時(shí)抑制NF-κB的激活[15],使得抗炎因子分泌增加[14]。當(dāng)SR-B1介導(dǎo)的上述通路被阻斷時(shí),炎性細(xì)胞因子和活性氧(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生增多,過高的炎癥和氧化應(yīng)激水平最終可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

    作為抗炎的重要角色之一,糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)的合成也與SR-B1密切相關(guān)。小鼠體內(nèi)的SR-B1缺陷可導(dǎo)致GC合成減少[16],且Sophie等[17]通過實(shí)驗(yàn)證實(shí),小鼠腎上腺皮質(zhì)SR-B1的缺失可導(dǎo)致應(yīng)激GC水平下降,全身炎癥反應(yīng)加劇,內(nèi)毒素血癥致死率顯著上升。

    另一方面,WT小鼠中的HDL關(guān)聯(lián)蛋白,對(duì)氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)、血小板活化因子乙酰水解酶(platelet-activating factor acetylhydrolase,PAF-AH)等,可通過抑制LDL的氧化修飾達(dá)到抗氧化的作用。而SR-B1-/-小鼠血清中PON1和PAF-AH蛋白水平較WT小鼠均顯著下降,PON1活性明顯降低,且其體內(nèi)脂質(zhì)和蛋白氧化水平顯著高于WT小鼠,證實(shí)SR-B1-/-小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平較WT顯著升高[8]。

    二、SR-B1-/-雌鼠的病理表現(xiàn)及其不孕的可能機(jī)制

    1.SR-B1-/-雌鼠的激素水平缺陷:膽固醇是類固醇激素合成的主要原料[18],SR-B1作為HDL受體,在調(diào)節(jié)類固醇合成細(xì)胞攝取高密度脂蛋白膽固醇(HDL cholesterol,HDL-C),為激素合成提供原材料的過程中發(fā)揮重要作用[10]?;诖?,“激素合成不足”假說被提出。

    Trigatti等[19]發(fā)現(xiàn)SR-B1-/-雌鼠卵巢脂質(zhì)的油紅O染色顯著弱于WT雌鼠卵巢,但交配相同天數(shù)后的SR-B1-/-與WT雌鼠血漿孕酮水平并無顯著差異,且SR-B1-/-雌鼠的動(dòng)情周期、排卵數(shù)目與對(duì)照組相比并無缺陷。隨后,Jiménez等[20]對(duì)同時(shí)給予HCG促排卵處理的SR-B1-/-和WT雌鼠血漿孕酮水平進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)處于黃體期的SR-B1-/-雌鼠孕酮水平較WT雌鼠下降了約50%。

    同年,Kolmakova等[21]構(gòu)建了SR-B1缺陷的人顆粒細(xì)胞模型,檢測(cè)其孕酮分泌及相關(guān)蛋白表達(dá)的水平。在各種培養(yǎng)條件下,SR-B1 Knockdown(SR-B1 KD)顆粒細(xì)胞的孕酮分泌水平均顯著低于對(duì)照組顆粒細(xì)胞,且SR-B1 KD顆粒細(xì)胞中多種類固醇合成關(guān)鍵酶,如P450膽固醇側(cè)鏈切除酶(P450 side-chain cleavage,P450 SCC)、3β-羥化類固醇脫氫酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3βHSD)、類固醇合成快速調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR),其RNA表達(dá)水平均顯著下降。SR-B1可能通過調(diào)節(jié)StAR、SCC、3βHSD等多種類固醇合成途徑中的關(guān)鍵蛋白的表達(dá),從而影響顆粒細(xì)胞的孕酮分泌。

    以上一系列的研究結(jié)果證實(shí),SR-B1-/-雌鼠卵巢能夠合成一定水平的類固醇激素以維持器官的一些基本功能,但在應(yīng)激(促排卵)條件下,歸因于激素合成關(guān)鍵酶的低表達(dá)或其他因素,機(jī)體能夠動(dòng)員利用的激素水平是相對(duì)不足的。

    這種一定水平上的激素缺陷是否直接導(dǎo)致SR-B1-/-雌鼠不孕,Miettinen等[22]的研究對(duì)此做出了一個(gè)回復(fù)。研究人員以重組激活基因2敲除(reconstruction activating gene 2-/-,RAG-2-/-)的免疫耐受雌鼠為受體,手術(shù)切除其原卵巢后將SR-B1-/-雌鼠卵巢移植到其體內(nèi),再將其與WT雄鼠配對(duì)。術(shù)后的2~3周,SR-B1-/-卵巢移植的RAG-2-/-雌鼠中即有成功受孕鼠,最終妊娠率高達(dá)85.7%(6/7)。

    在SR-B1正常表達(dá)的卵巢外環(huán)境中,SR-B1-/-卵巢可順利產(chǎn)生功能性卵母細(xì)胞,并維持正常功能至成功妊娠。該項(xiàng)研究結(jié)果也從側(cè)面證實(shí),SR-B1-/-雌鼠不孕的原因不應(yīng)僅局限于卵巢激素的合成缺陷,更多應(yīng)該關(guān)注于紊亂的卵巢外環(huán)境。

    2.SR-B1-/-雌鼠的失調(diào)性膽固醇代謝:在正常的RCT過程中,HDL中的FC在膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(lecithin-cholesterol acyl transferase,LCAT)的作用下酯化為CE進(jìn)而被細(xì)胞選擇性攝取。上述膽固醇酯化的過程降低了體內(nèi)FC的濃度,可有效地避免膽固醇過量蓄積引起的細(xì)胞功能障礙甚至凋亡或壞死的細(xì)胞毒性[23]。

    SR-B1-/-小鼠體內(nèi)RCT途徑的受阻直接導(dǎo)致膽固醇代謝的一系列紊亂,具體表現(xiàn)為以FC升高為主的高膽固醇血癥,其血漿游離膽固醇與總膽固醇(total cholesterol,TC)的比值(FC/TC)約為對(duì)照組兩倍(0.5 vs. 0.25),而作為決定該比值的關(guān)鍵因素,LCAT在SR-B1-/-小鼠肝臟的mRNA表達(dá)水平和血漿中的蛋白水平與WT相比均無顯著差異[24]。針對(duì)LCAT活性的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),SR-B1-/-小鼠LCAT內(nèi)源性酯化活性顯著低于WT水平[24-25],但在加入外源性HDL-C的條件下,SR-B1-/-的LCAT外源性酯化活性與WT并無顯著差異[25]。上述結(jié)果提示,SR-B1缺陷引起的HDL顆粒體積和成分的異常變化對(duì)于LCAT活性有很大影響,可進(jìn)而導(dǎo)致FC向CE轉(zhuǎn)化的酯化率降低,體內(nèi)FC過量蓄積。

    考慮到過量FC的細(xì)胞毒性與SR-B1-/-雌鼠不孕的可能聯(lián)系,Yesilaltay等[25]構(gòu)建了表達(dá)人LCAT的轉(zhuǎn)基因SR-B1-/-小鼠模型(SR-B1-/-/LCATTg)對(duì)此進(jìn)行研究。與非轉(zhuǎn)基因組(SR-B1-/-)相比,轉(zhuǎn)基因組小鼠LCAT外源性活性升高7~11倍,SR-B1-/-/LCATTg組FC/TC比值相比于SR-B1-/-組顯著下降(0.37 vs. 0.44,P<0.001),但仍比WT/LCATTg組值(FC/TC=0.18)高出約一倍。值得注意的是,SR-B1-/-/LCATTg組雌鼠的妊娠率(2/15)與SR-B1-/-組(0/7)相比具有顯著差異。盡管SR-B1-/-雌鼠中LCAT的外源性活性升高近10倍只能部分改善其膽固醇酯化缺陷,但仍可有效地逆轉(zhuǎn)不孕。

    后期進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),SR-B1-/-雌鼠卵母細(xì)胞中FC水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于WT雌鼠,且前者易發(fā)生過早激活,即在未受精的情況下,自動(dòng)跳過減速分裂MII間期,排出第二極體。在體外膽固醇負(fù)荷的培養(yǎng)條件下,WT雌鼠卵母細(xì)胞出現(xiàn)了相同的現(xiàn)象[26]。

    上述結(jié)果證實(shí),過多的FC蓄積很有可能是造成SR-B1-/-雌鼠不孕的原因之一,而促進(jìn)FC向CE的轉(zhuǎn)化可有效逆轉(zhuǎn)其不孕。

    3.SR-B1-/-雌鼠的炎癥與氧化應(yīng)激:早有多篇文獻(xiàn)報(bào)道,母體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平可影響卵母細(xì)胞和胚胎質(zhì)量,甚至可誘發(fā)多種妊娠并發(fā)癥,如子癇前期、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)等的發(fā)生[27]。

    SR-B1缺陷引起的炎癥、氧化應(yīng)激與多種機(jī)制有關(guān)。除上述提及的促炎與抗炎因子的表達(dá)失衡、GC合成減少及抗氧化酶活性降低等因素外,SR-B1缺陷還可引起膳食成分中的抗氧化物(如β-胡蘿卜素和α-生育酚)生物利用度下降[28]。α-生育酚(α-tocopherol,α-T)是脂溶性維生素E最具生物活性的形式,也是人體內(nèi)最主要的抗氧化物之一。維生素E最早作為一種嚙齒類動(dòng)物正常生育所必須的微量營(yíng)養(yǎng)素而被發(fā)現(xiàn),且動(dòng)物研究證實(shí),在胚胎植入過程中回補(bǔ)維生素E可部分挽救由于維生素E缺乏所導(dǎo)致的不孕[29]。維生素E被腸上皮細(xì)胞所吸收,而這一過程有腸上皮細(xì)胞表面SR-B1的參與[28]。在循環(huán)中,LDL和HDL是α-T的主要運(yùn)載體,細(xì)胞通過相應(yīng)的脂蛋白受體攝取α-T[30]。相比于WT雌鼠,SR-B1-/-雌鼠血漿α-T的水平升高,但卵巢組織中α-T水平明顯下降[31]。前期研究表明,SR-B1-/-雌鼠的不孕與其植入前胚胎的發(fā)育能力異常有關(guān)[19]。SR-B1-/-雌鼠卵巢內(nèi)的低α-T水平可能加劇卵巢內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)從而影響卵泡的正常發(fā)育,最終導(dǎo)致不孕。

    在正常妊娠期間,母胎界面的母體面和胎兒面均有SR-B1的表達(dá)[32]。胚胎植入后的發(fā)育階段中,母體循環(huán)中的脂蛋白α-T轉(zhuǎn)運(yùn)入胚胎的過程依賴于此界面中的SR-B1分子。已有研究證實(shí),胚胎期維生素E的缺乏可引起胚胎宮內(nèi)發(fā)育遲緩及出生后各種形態(tài)和功能上的異常[32-34]。SR-B1-/-小鼠胚胎在發(fā)育期間的α-T攝取不足甚至可導(dǎo)致神經(jīng)管閉合障礙,最終引起胎鼠的圍產(chǎn)期死亡[35]。SR-B1+/-雜合雌鼠與SR-B1-/-雄鼠配對(duì)后代中,SR-B1-/-仔鼠所占比例明顯少于孟德爾遺傳定律的50%,也就得到了合理的解釋。

    三、總結(jié)與展望

    SR-B1-/-雌鼠的不孕可能涉及到多重機(jī)制。就激素水平而言,應(yīng)激條件下的激素缺陷似乎并不能對(duì)此作出完全的解釋;膽固醇代謝方面,通過促進(jìn)SR-B1-/-雌鼠體內(nèi)的FC向CE轉(zhuǎn)化,可有效逆轉(zhuǎn)其不孕,這一結(jié)果明確了過量FC蓄積可引起的生育毒性;此外,SR-B1-/-雌鼠體內(nèi)異常升高的炎癥與氧化應(yīng)激水平可能干擾了卵母細(xì)胞和胚胎的正常發(fā)育,推動(dòng)了不孕的發(fā)展。

    SR-B1-/-雌鼠不孕的機(jī)制尚未完全明確,相關(guān)的機(jī)制假說仍需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)。對(duì)于臨床不孕女性患者,可針對(duì)其SCARB1基因展開一定的檢測(cè),結(jié)合動(dòng)物模型的相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),分析結(jié)果可能更有說服力。

    針對(duì)SR-B1與女性不孕的相關(guān)研究為女性不孕的病因?qū)W提供了一個(gè)新的診斷方向,也為不明原因的不孕提供了一個(gè)新的治療方向。

    猜你喜歡
    雌鼠類固醇顆粒細(xì)胞
    MicroRNA調(diào)控卵巢顆粒細(xì)胞功能的研究進(jìn)展
    變性的雄鼠
    超聲引導(dǎo)腕管注射類固醇治療腕管綜合征及其對(duì)神經(jīng)電生理的影響
    大腿肌內(nèi)顆粒細(xì)胞瘤1例
    人11β-羥基類固醇脫氫酶基因克隆與表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究
    組蛋白乙酰化對(duì)衰老雌鼠胚胎發(fā)育影響的研究
    補(bǔ)腎活血方對(duì)卵巢早衰小鼠顆粒細(xì)胞TGF-β1TGF-βRⅡ、Smad2/3表達(dá)的影響
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:22
    超聲引導(dǎo)下局部注射皮質(zhì)類固醇混合制劑治療老年性膝骨關(guān)節(jié)炎的止痛療效
    微囊藻毒素LR對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞氧化損傷和凋亡的影響
    類固醇可降低IgA腎病復(fù)發(fā)所致移植腎失功的風(fēng)險(xiǎn)
    曰老女人黄片| 日本三级黄在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 美女黄网站色视频| 神马国产精品三级电影在线观看| h日本视频在线播放| 欧美最黄视频在线播放免费| 精品一区二区三区四区五区乱码| 免费搜索国产男女视频| 久久久国产精品麻豆| 亚洲美女黄片视频| 婷婷亚洲欧美| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 观看美女的网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 12—13女人毛片做爰片一| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 伦理电影免费视频| 成人av在线播放网站| 国产高清有码在线观看视频| 哪里可以看免费的av片| 久久久久久久午夜电影| 午夜福利免费观看在线| 男人舔女人的私密视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产成人av激情在线播放| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 成年版毛片免费区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 天堂影院成人在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 免费高清视频大片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美三级亚洲精品| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产成+人综合+亚洲专区| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| e午夜精品久久久久久久| 欧美乱妇无乱码| 麻豆av在线久日| а√天堂www在线а√下载| 成人特级av手机在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品久久久av美女十八| 午夜视频精品福利| av福利片在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 免费观看精品视频网站| 久久久久久久久免费视频了| 高清在线国产一区| 久久国产精品影院| 成人av在线播放网站| 亚洲精华国产精华精| 午夜亚洲福利在线播放| 极品教师在线免费播放| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 香蕉av资源在线| 亚洲国产精品999在线| 国产高清视频在线播放一区| 激情在线观看视频在线高清| 国产激情偷乱视频一区二区| 制服人妻中文乱码| 久久草成人影院| 国产麻豆成人av免费视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品爽爽va在线观看网站| 免费电影在线观看免费观看| 成人国产一区最新在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 搡老熟女国产l中国老女人| 一级毛片女人18水好多| 精品久久久久久久久久久久久| www国产在线视频色| 嫩草影院精品99| 香蕉av资源在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久热在线av| 99久久综合精品五月天人人| av片东京热男人的天堂| 国产真实乱freesex| 久久久久九九精品影院| а√天堂www在线а√下载| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 一级a爱片免费观看的视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 免费av不卡在线播放| 在线观看66精品国产| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 少妇的逼水好多| 国产成人精品久久二区二区免费| 人人妻人人看人人澡| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久人妻av系列| 日本三级黄在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产综合懂色| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 一级毛片高清免费大全| 啦啦啦韩国在线观看视频| xxx96com| 国产探花在线观看一区二区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 一级毛片高清免费大全| 免费一级毛片在线播放高清视频| 看片在线看免费视频| 脱女人内裤的视频| 两个人看的免费小视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品一区二区免费欧美| 高清在线国产一区| 国产高清videossex| 国产成人啪精品午夜网站| 伦理电影免费视频| 日本一本二区三区精品| 精品国内亚洲2022精品成人| 窝窝影院91人妻| 丁香六月欧美| 免费一级毛片在线播放高清视频| 成人精品一区二区免费| 国产伦在线观看视频一区| 色老头精品视频在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 午夜两性在线视频| 国产精品久久久久久久电影 | 成年人黄色毛片网站| 91在线精品国自产拍蜜月 | av国产免费在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 午夜激情福利司机影院| 女警被强在线播放| 99久久精品国产亚洲精品| aaaaa片日本免费| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 精品欧美国产一区二区三| 给我免费播放毛片高清在线观看| www.www免费av| 麻豆成人午夜福利视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| bbb黄色大片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 老司机福利观看| 国产av一区在线观看免费| 国产久久久一区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲人成网站高清观看| 窝窝影院91人妻| 欧美乱码精品一区二区三区| 成年版毛片免费区| 女同久久另类99精品国产91| 白带黄色成豆腐渣| 99视频精品全部免费 在线 | 亚洲五月天丁香| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产亚洲精品久久久com| 成人性生交大片免费视频hd| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产单亲对白刺激| 国产精品久久电影中文字幕| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产高清三级在线| 99热精品在线国产| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精品福利观看| 久久久久久九九精品二区国产| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美在线黄色| 欧美黑人欧美精品刺激| or卡值多少钱| 午夜福利在线观看吧| 一本久久中文字幕| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜成年电影在线免费观看| 脱女人内裤的视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲激情在线av| 露出奶头的视频| 成人无遮挡网站| 99久久国产精品久久久| 久久伊人香网站| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美日韩综合久久久久久 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产熟女xx| 一个人看的www免费观看视频| 国产极品精品免费视频能看的| 变态另类丝袜制服| 午夜福利免费观看在线| cao死你这个sao货| 香蕉国产在线看| 久久久久性生活片| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久午夜综合久久蜜桃| 一级毛片高清免费大全| 国产黄片美女视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| www日本黄色视频网| 天堂动漫精品| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲五月婷婷丁香| 一级作爱视频免费观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 可以在线观看的亚洲视频| 国产激情久久老熟女| 国产精品电影一区二区三区| 国产乱人伦免费视频| av在线蜜桃| av国产免费在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 99精品久久久久人妻精品| 久久伊人香网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品国产高清国产av| 欧美乱码精品一区二区三区| 听说在线观看完整版免费高清| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品欧美国产一区二区三| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 免费在线观看影片大全网站| 成人三级黄色视频| 天堂动漫精品| 亚洲五月天丁香| 亚洲欧美激情综合另类| 成人三级做爰电影| 可以在线观看毛片的网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产爱豆传媒在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 91九色精品人成在线观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产伦在线观看视频一区| av在线蜜桃| 国产欧美日韩一区二区三| 舔av片在线| 久久久色成人| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国内精品久久久久久久电影| 两个人看的免费小视频| 老司机在亚洲福利影院| 国产爱豆传媒在线观看| 久久这里只有精品中国| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜精品在线福利| 91麻豆av在线| 亚洲成av人片在线播放无| 国产高潮美女av| 午夜福利欧美成人| a级毛片a级免费在线| 毛片女人毛片| 中文在线观看免费www的网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 最好的美女福利视频网| 久久精品影院6| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成人欧美在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 一进一出抽搐gif免费好疼| 色吧在线观看| 午夜福利在线观看吧| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美高清成人免费视频www| 免费在线观看影片大全网站| 久久中文看片网| 最近最新免费中文字幕在线| 午夜福利成人在线免费观看| 国产熟女xx| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产高清视频在线观看网站| 男人的好看免费观看在线视频| 国产av一区在线观看免费| 757午夜福利合集在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久中文字幕人妻熟女| 久久久久性生活片| 色综合婷婷激情| 久久久久久人人人人人| 91av网站免费观看| 又爽又黄无遮挡网站| 757午夜福利合集在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品九九99| 亚洲成人久久爱视频| 脱女人内裤的视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美中文综合在线视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产99白浆流出| 欧美黄色片欧美黄色片| 男人的好看免费观看在线视频| 天堂影院成人在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久亚洲精品不卡| 国产伦人伦偷精品视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 曰老女人黄片| 亚洲自拍偷在线| 99国产综合亚洲精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲av电影在线进入| 成人性生交大片免费视频hd| 怎么达到女性高潮| 身体一侧抽搐| 一二三四社区在线视频社区8| 免费观看的影片在线观看| 成人18禁在线播放| 国产精品国产高清国产av| 村上凉子中文字幕在线| 黄色视频,在线免费观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久久久久久中文| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费高清视频大片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 99热这里只有是精品50| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 小说图片视频综合网站| 国产欧美日韩一区二区三| 男人的好看免费观看在线视频| 成人18禁在线播放| 免费av不卡在线播放| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 色播亚洲综合网| 欧美国产日韩亚洲一区| 小说图片视频综合网站| 国产精品一及| 久久性视频一级片| 国产伦在线观看视频一区| 一级a爱片免费观看的视频| 精品免费久久久久久久清纯| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 一本综合久久免费| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 成年版毛片免费区| 亚洲18禁久久av| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成人18禁在线播放| av福利片在线观看| 最新中文字幕久久久久 | 美女cb高潮喷水在线观看 | 美女大奶头视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 91麻豆av在线| 亚洲色图av天堂| 久久久成人免费电影| 性色avwww在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 中文亚洲av片在线观看爽| 他把我摸到了高潮在线观看| 黄片大片在线免费观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久国产成人免费| 特级一级黄色大片| 国产免费av片在线观看野外av| 18美女黄网站色大片免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 九九在线视频观看精品| 国产av不卡久久| aaaaa片日本免费| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品久久久av美女十八| 一边摸一边抽搐一进一小说| 中文字幕久久专区| av天堂在线播放| 91在线精品国自产拍蜜月 | 亚洲欧美激情综合另类| 无限看片的www在线观看| 国产不卡一卡二| 桃红色精品国产亚洲av| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产黄色小视频在线观看| 久久草成人影院| 婷婷精品国产亚洲av| 宅男免费午夜| a在线观看视频网站| 久久人妻av系列| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美激情在线99| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 三级国产精品欧美在线观看 | 国内精品久久久久精免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 老鸭窝网址在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 91字幕亚洲| 色播亚洲综合网| 国产1区2区3区精品| 日本五十路高清| 麻豆av在线久日| 一级毛片高清免费大全| 99re在线观看精品视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99热精品在线国产| av国产免费在线观看| 免费观看的影片在线观看| 中文字幕久久专区| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲色图av天堂| 亚洲精品粉嫩美女一区| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产一区二区在线av高清观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲中文字幕日韩| av在线天堂中文字幕| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品人妻少妇| 国产成人精品久久二区二区91| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 午夜福利欧美成人| 1024手机看黄色片| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美中文日本在线观看视频| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产亚洲欧美98| 在线a可以看的网站| 亚洲av电影在线进入| 久久久久精品国产欧美久久久| 日本免费一区二区三区高清不卡| 99国产精品一区二区蜜桃av| 99精品在免费线老司机午夜| 国产主播在线观看一区二区| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 哪里可以看免费的av片| 婷婷丁香在线五月| 国产爱豆传媒在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 欧美日本视频| 亚洲激情在线av| 又爽又黄无遮挡网站| 日本黄色视频三级网站网址| 搡老妇女老女人老熟妇| 成人欧美大片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 色视频www国产| 不卡一级毛片| 欧美zozozo另类| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品国产美女av久久久久小说| 国产成人欧美在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 男女之事视频高清在线观看| xxx96com| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产真实乱freesex| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲av电影在线进入| 国产高清三级在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 黄色片一级片一级黄色片| 成人特级黄色片久久久久久久| 日韩欧美免费精品| 国产精品电影一区二区三区| 最新中文字幕久久久久 | 真人做人爱边吃奶动态| 久久精品国产清高在天天线| 在线看三级毛片| 我的老师免费观看完整版| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产伦在线观看视频一区| 综合色av麻豆| 精品国内亚洲2022精品成人| 黄片小视频在线播放| www.精华液| 国产高清激情床上av| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲美女视频黄频| www.熟女人妻精品国产| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一级a爱片免费观看的视频| 在线观看日韩欧美| 国产极品精品免费视频能看的| 男女视频在线观看网站免费| 色综合婷婷激情| 久久久水蜜桃国产精品网| xxx96com| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲精品456在线播放app | 我的老师免费观看完整版| 又大又爽又粗| 亚洲av五月六月丁香网| 男女之事视频高清在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产探花在线观看一区二区| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品 欧美亚洲| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲精品456在线播放app | 国产精品av视频在线免费观看| 人妻久久中文字幕网| 欧美av亚洲av综合av国产av| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产高清视频在线播放一区| 后天国语完整版免费观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 老鸭窝网址在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲无线在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产精品99久久99久久久不卡| 淫秽高清视频在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲中文av在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 天堂√8在线中文| 天堂网av新在线| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品久久久久久精品电影| 校园春色视频在线观看| 国产不卡一卡二| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品av视频在线免费观看| 99久久综合精品五月天人人| 成人国产一区最新在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 国产视频内射| 欧美乱色亚洲激情| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲无线在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 最新在线观看一区二区三区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| av欧美777| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品乱码一区二三区的特点| av视频在线观看入口| 国产精品乱码一区二三区的特点| 岛国在线免费视频观看| 婷婷亚洲欧美| 99久久无色码亚洲精品果冻| 一二三四在线观看免费中文在| 久久久久国内视频| 日本黄色视频三级网站网址| 国产亚洲精品久久久com| 不卡一级毛片| 亚洲人与动物交配视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产视频内射| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲人成电影免费在线| 999久久久国产精品视频| 精品一区二区三区视频在线 | av在线蜜桃| 国产美女午夜福利| 国产av在哪里看| 国产单亲对白刺激| 一区福利在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久精品国产清高在天天线| 最新美女视频免费是黄的| 欧美黄色片欧美黄色片| 免费在线观看日本一区| 国产三级黄色录像| 在线观看舔阴道视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 精品福利观看| 性色avwww在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲美女视频黄频|