子宮內(nèi)膜異位癥無創(chuàng)性診斷的研究進展

王凱麗，祁秀娟

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，青島 266071)

子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMT)是指具有活性的子宮內(nèi)膜腺體或間質(zhì)出現(xiàn)在子宮以外的部位，簡稱內(nèi)異癥[1]。典型臨床表現(xiàn)為呈進行性加重的繼發(fā)性痛經(jīng)，慢性盆腔痛，性交不適及不孕等，在育齡女性中的發(fā)病率為2%～18%，合并不孕的女性發(fā)病率達(dá)40%[2]，且最近有增長趨勢，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。目前腹腔鏡直視下明確異位病灶仍然是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[3]，但臨床上一直在探索內(nèi)異癥的無創(chuàng)診斷方法，現(xiàn)綜述如下。

一、血清中的標(biāo)志物

1. 糖蛋白類：CA125是目前最常用于內(nèi)異癥的診斷、敏感性與內(nèi)異癥的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)的一種糖蛋白，由于單獨檢測其診斷特異性較低，因此目前傾向于聯(lián)合其他指標(biāo)[4]。Hirsch等[5]最新的研究證實，即使對于有盆腔疼痛的病人，單獨使用CA125以>30 U/ml作為臨界值，敏感性僅有57%。而國內(nèi)張清等[6]的研究顯示CA125聯(lián)合CA199可將敏感度提高到60%。Agic等[7]發(fā)現(xiàn)聯(lián)合CA125、CCR1 mRNA(趨化因子受體-1信使RNA)和MCP1(單核細(xì)胞趨化蛋白-1)可以將敏感性提高到92.2%，特異性提高到81.6%。Acimovic等[8]最新的研究發(fā)現(xiàn)，CA125聯(lián)合生存素(survivin)和VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)可以將敏感性提高到93.3%，特異性90%。Seeber等[9]發(fā)現(xiàn)CA125結(jié)合血清標(biāo)志物MCP-1、MIF、瘦素、可將敏感性提高到94%，特異性為73%。Zhang等[10]最新研究發(fā)現(xiàn)自噬基因Becline1 mRNA無論是在位內(nèi)膜還是異位內(nèi)膜均呈低表達(dá)，且與CA125的高表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，二者聯(lián)合起來特異性更高。聯(lián)合指標(biāo)的應(yīng)用都比單獨用CA125的敏感性更高，為進一步診斷內(nèi)異癥提供了新的思路；但CCR1也同時參與腫瘤的發(fā)生，會在腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞、間-質(zhì)干細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞中存在高表達(dá)，這又為與婦科惡性腫瘤的鑒別提出了新的挑戰(zhàn)。目前CA125的臨界值仍然只是可以幫助確定內(nèi)異癥的診斷，評估治療預(yù)后、隨訪觀察，而非排除診斷。

胎盤蛋白A是由子宮內(nèi)膜腺體和妊娠期蛻膜分泌的一種糖蛋白，可以促進血管生成和細(xì)胞增殖。Kocbek等[11]研究證實，內(nèi)異癥患者腹腔液和血清中的胎盤蛋白A都顯著增加，而且腹腔液的胎盤蛋白增加約為血清的10倍，并與患者的自覺疼痛程度呈正相關(guān)，尤其常見與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫，診斷敏感度為82.1%，靈敏度為78.4%。胎盤蛋白14也由子宮內(nèi)膜合成，參與血管生成、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞分化等過程。近期國內(nèi)多人研究[12-13]證實，胎盤蛋白14在內(nèi)異癥患者的血清和腹腔液中高表達(dá)，且與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，敏感性也明顯高于單獨檢測CA125。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)存在于消化道、生殖道的多種上皮細(xì)胞內(nèi)，由活化的巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等分泌從而參與炎癥反應(yīng)。Cho等[14]的研究證實，內(nèi)異癥患者血清中的骨橋蛋白的表達(dá)明顯高于對照組，敏感性為93%，特異性為72.4%。內(nèi)異癥的表型不同，骨橋蛋白的量也有差異。最近Streuli等[15]研究了腹膜表淺型、卵巢內(nèi)異囊腫型、深部浸潤型等不同類型的內(nèi)異癥，發(fā)現(xiàn)深部浸潤型內(nèi)異癥患者血清中的骨橋蛋白的量明顯低于腹膜表淺型。Moszynski等[16]進一步引入OPN/CA125值，證實相比卵巢其他良性腫瘤(1.25)，卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的骨橋蛋白明顯降低(0.36)，高于惡性腫瘤(0.25)，但診斷價值與單獨CA125檢測相似。

2. 炎癥介質(zhì)：Jolicoeur等[17]的研究首先證實了MCP-1參與了內(nèi)異癥患者腹腔液中巨噬細(xì)胞的募集和活化，在內(nèi)異癥患者血清中明顯升高。Arici等[18]進一步證實，內(nèi)異癥患者增殖期的腹腔液中的MCP-1水平明顯高于分泌期，且隨疾病加重而逐漸升高。Cakmak等[19]通過使用他汀類藥物來抑制MCP-1表達(dá)的裸鼠模型實驗中也證實，辛伐他汀明顯降低MCP-1在子宮內(nèi)膜種植中的表達(dá)，并且呈劑量依賴性，能夠有效降低裸鼠的內(nèi)異程度(P<0.05)。Drosdzol-Cop等[20]對青少年內(nèi)異癥的研究發(fā)現(xiàn)，血清和腹腔液中的IL-4顯著增加(P<0.05)，但腹腔液中的IL-2明顯減少(P=0.01)。Tuten等[21]的研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異癥患者(n=50)血清中co-peptin的含量明顯增加(P<0.001)，與內(nèi)異癥的嚴(yán)重程度和卵巢內(nèi)異囊腫的大小都呈正相關(guān)；但對比ROC曲線后，CA125仍然有較高的預(yù)測價值(P=0.001)。

3. 微小RNA：微小RNA是一種小型的、高度保守的、非編碼序列，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)[22]。Suryawanshi等[23]發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥患者血清中的miR-17-5p，miR-20a和miR-22比對照組低，但miR-16，miR-2191，miR-2195相對較高。Wang等[24]則認(rèn)為內(nèi)異癥患者血清中的miR-199a和miR-122a 相對較高，而miR-145，miR-141，miR-542-3p和miR-9則較低。Burney等[25]在對中重度內(nèi)異癥患者分泌早期的微小RNA家族系列的分析中發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異癥者的miR-9和 miR-34明顯下降。Cho等[26]利用熒光定量PCR技術(shù)提取內(nèi)異癥患者和健康人血清中的miRNA系列7a-f和miR-135a、b發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異癥患者血清中的let-7b、let-7d、let-7F和miR-135a水平明顯下降，而且let-7b與血清CA-125水平具有明顯的相關(guān)性。內(nèi)異癥者的內(nèi)膜轉(zhuǎn)錄物組學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA會隨月經(jīng)周期的改變而呈現(xiàn)動態(tài)變化，內(nèi)異癥者處于分泌中期時內(nèi)膜轉(zhuǎn)錄物中有12中微小RNA表達(dá)上調(diào)，進一步證實，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生有可能與增殖期向分泌期轉(zhuǎn)化延遲，或孕激素受體基因表達(dá)異常有關(guān)[27]。

4. 組學(xué)：Zhao等[28]對內(nèi)異癥患者的在位內(nèi)膜的研究中引入差異表達(dá)基因(Differentially expressed genes，DEGs)的概念，研究發(fā)現(xiàn)72種DEGs中有66種上調(diào)，6種下調(diào)，其中基質(zhì)金屬蛋白酶11、雙重特異性磷酸酶1、絲氨酸蛋白酶抑制劑家族成員基因fos原E1顯著上調(diào)，但腺苷脫氨酶2卻是顯著下調(diào)。Grande等[29]用高分辨率質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對內(nèi)異癥患者的宮頸粘液樣本的研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異癥患者的6種蛋白定量增加，另外9種蛋白定量減少，包括與固有免疫相關(guān)的蛋白(CRISP-3和pglyrp1)和抗氧化應(yīng)激的保護蛋白(HSPB1)，這些蛋白全部參與了炎癥模式。Wolfler等[30]用SELDI-TOF MS分析法研究內(nèi)異癥患者的靈敏度僅為78～81%，特異性為50～59%。內(nèi)異癥患者存在鞘脂類代謝失調(diào)，鞘磷脂組學(xué)有力的證實了體內(nèi)多種鞘磷脂的聚集，包括功能性拮抗葡糖和神經(jīng)酰胺。Lee等[31]研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異癥患者血清和體液中的神經(jīng)鞘磷脂合成酶1(SMS1)、鞘磷脂酶3(SMPD3)和葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶(GCS)均明顯升高。雖然組學(xué)技術(shù)為內(nèi)異癥的診斷提供了新思路，但是耗時與高成本還是限制其廣泛開展。

5. 細(xì)胞因子：胎盤生長因子(PLGF)存在于胎盤，可以參與調(diào)控細(xì)胞的生長、分化、侵襲等過程[32]。早在2003年，Suzumori等[33]發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥患者的腹腔液中PLGF比囊腺瘤婦女的高很多，提示PLGF的產(chǎn)生可能通過促進新生血管形成，參與了內(nèi)異癥的形成。最近Zucchini等[34]在對內(nèi)異癥者和對照組的PLGF對比中發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異癥患者血清中的PLGF中位數(shù)(14.7 pg/ml)高于對照組(13.8 pg/ml)。VEGF和血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)作為最有力的促血管生成因子和抗血管生成因子，參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生[35]。Young等[36]發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥患者腹膜液中TGF-β1的濃度顯著高于對照組，并且內(nèi)異癥患者腹腔液中的VEGF-A和TGF-β1呈顯著正相關(guān)(r=0.39，P<0.05)，且免疫組化顯示VEGF-A多數(shù)定位于女性腹膜間皮細(xì)胞和內(nèi)異病灶組織中。

二、宮頸分泌物

胞外囊泡(Extra-cellular Vesicles，EV)是一種脂質(zhì)雙層囊泡，負(fù)責(zé)攜帶包括核酸、蛋白質(zhì)、代謝物和脂類等大分子物質(zhì)。EV包含外泌體和微泡等結(jié)構(gòu)，主要參與降解有害的細(xì)胞產(chǎn)物、胞間通訊傳遞等[37]。由于宮頸分泌物的獲取在臨床上比較容易獲得，無創(chuàng)傷，因而如果能夠找到與內(nèi)異癥相關(guān)的高水平或特異性表達(dá)的指標(biāo)，臨床應(yīng)用前景應(yīng)該好于其他微創(chuàng)的檢查手段。Muth等[38]率先對靈長類動物(恒河猴)的宮頸陰道分泌物中的胞外顆粒和富于胞外囊泡的顆粒碎片進行研究，將宮頸拭子(CVS)和陰道灌洗(CVL)的標(biāo)本進行超速離心后發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異癥組的顆粒物濃度明顯高于對照組。但該指標(biāo)目前國內(nèi)外的研究較少，有效性仍有待進一步確定。

三、影像學(xué)

目前對于內(nèi)異癥的影像學(xué)診斷主要有經(jīng)陰道超聲、CT、MRI、光聲成像技術(shù)等，這幾種影像學(xué)的診斷比較一直以來都是研究的熱點。Abrao等[39]研究了104例疑似為深部浸潤性內(nèi)異癥(宮頸后方或乙狀結(jié)腸浸潤病灶)的患者，有98例最終經(jīng)腹腔鏡下組織病理學(xué)診斷得到證實，對兩種影像學(xué)方法(陰道超聲和MRI)的診斷比較后發(fā)現(xiàn)，經(jīng)陰超聲的敏感性為98%和95%，特異性為100%和98%，陽性預(yù)測值為100%和98%，陰性預(yù)測值為98%和97%，檢驗功效為99%和97%；MRI的敏感性為83%和76%，特異性為98%和68%，陽性預(yù)測值為98%和61%，陰性預(yù)測值為85%和81%，檢驗功效分別為90%和71%。相比而言，陰道超聲比MRI對深部浸潤性的內(nèi)異病灶有更高的敏感性和特異性。

在美國，超聲檢查是評估盆腔子宮內(nèi)膜異位癥，尤其是深部盆腔內(nèi)異癥(DPE)的一線影像學(xué)方法，但視野區(qū)域以及診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性高度依賴于操作者的臨床技術(shù)，因而又有其局限性。來自歐洲泌尿生殖放射學(xué)會(ESUR)的婦科影像專家們，在基于循證醫(yī)學(xué)和專家共識的研究后認(rèn)為，磁共振成像(MRI)在盆腔內(nèi)異病灶，尤其在擇期手術(shù)前，對復(fù)雜內(nèi)異癥、多部位的盆腔內(nèi)異病灶的評價是高度準(zhǔn)確的[40]，并且有望成為常規(guī)的術(shù)前二線影像學(xué)檢查項目[41]。Manganaro等[42]研究也進一步證實，3.0T磁共振可以在獲取高空間分辨率圖像的同時，提高信號噪聲比，從而準(zhǔn)確定位盆腔內(nèi)多點的內(nèi)異病灶。光聲成像(photo-acoustic imaging，PA)基本原理是：利用生物組織吸收脈沖激光后受熱膨脹形成瞬時壓力，產(chǎn)生一個光聲信號，再經(jīng)由重建算法反演得到組織光吸收圖像，即光聲圖像，同時結(jié)合光、聲兩種成像技術(shù)的優(yōu)點，在提高成像深度的同時，圖像又具有高對比度和高分辨率。國內(nèi)張明珠在裸鼠的皮下植入內(nèi)異病灶組織，該模型證實了當(dāng)波長為532 nm時，離體人在位子宮內(nèi)膜能夠表現(xiàn)出較強的吸收信號和信噪比，對活體內(nèi)異癥病灶的敏感性為0.9375，特異性為1，可準(zhǔn)確測量病灶最小直徑達(dá)到0.3 mm，優(yōu)于超聲、MRI等影像學(xué)診斷方法[43]。

ESHRE(歐洲人類生殖與胚胎協(xié)會)的內(nèi)異癥指南中提到，內(nèi)異癥患者從出現(xiàn)疼痛癥狀到確診，存在時間延遲，并將其稱為內(nèi)異癥的診斷延遲。由于診斷延遲導(dǎo)致治療的延誤，一定程度上造成了病情的進展加重，因此，尋找一種特異性和敏感性均較高的無創(chuàng)性診斷方法是未來研究的方向。

【參考文獻(xiàn)】

[1] Adamson GD. Endometriosis classification： an update[J]. Curr Opin Obstet Gynecol，2011，23：213-220.

[2] Shah DK，Correia KF，Vitonis AF，et al. Body size and endometriosis： results from 20 years of follow-up within the Nurses’ Health Study Ⅱ prospective cohort[J]. Hum Reprod，2013，28：1783-1792.

[3] Wdowiak A，Wdowiak E，Stec M，et al. Post-laparoscopy predictive factors of achieving pregnancy in patients treated for infertility[J]. Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne，2016，11：253-258.

[4] Fassbender A，Burney RO，O DF，et al. Update on biomarkers for the detection of endometriosis[J]. Biomed Res Int，2015，2015：130854.

[5] Hirsch M，Duffy JMN，Deguara CS，et al. Diagnostic accuracy of Cancer Antigen 125(CA125) for endometriosis in symptomatic women： a multi-center study[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2017，210：102-107.

[6] 張清，洛若愚，徐翊，等. 血清CA19-9及CA125測定診斷子宮內(nèi)膜異位癥[J]. 國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2012，39：194-195.

[7] Agic A，Djalali S，Wolfler MM，et al. Combination of CCR1 mRNA，MCP1，and CA125 measurements in peripheral blood as a diagnostic test for endometriosis[J]. Reprod Sci，2008，15：906-911.

[8] Acimovic M，Vidakovic S，Milic N，et al. Survivin and VEGF as novel biomarkers in diagnosis of endometriosis[J]. J Med Biochem，2016，35：63-68.

[9] Seeber B，Sammel MD，F(xiàn)an X，et al. Proteomic analysis of serum yields six candidate proteins that are differentially regulated in a subset of women with endometriosis[J]. Fertil Steril，2010，93：2137-2144.

[10] Zhang L，Liu Y，Xu Y，et al. The expression of the autophagy gene beclin-1 mRNA and protein in ectopic and eutopic endometrium of patients with endometriosis[J]. Int J Fertil Steril，2015，8：429-436.

[11] Kocbek V，Vouk K，Mueller MD，et al. Elevated glycodelin-A concentrations in serum and peritoneal fluid of women with ovarian endometriosis[J]. Gynecol Endocrinol，2013，29：455-459.

[12] 高紅艷，沈宗姬，陳繼明. 子宮內(nèi)膜胎盤蛋白14和CA-125在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)[J]. 江蘇醫(yī)藥，2010，36：2408-2410.

[13] 余曉茹，李燕. 血管內(nèi)皮生長因子及胎盤蛋白-14在子宮內(nèi)膜異位癥診斷中的價值及臨床意義[J]. 中國婦幼保健，2016，31：3152-3154.

[14] Cho S，Ahn YS，Choi YS，et al. Endometrial osteopontin mRNA expression and plasma osteopontin levels are increased in patients with endometriosis[J]. Am J Reprod Immunol，2009，61：286-293.

[15] Streuli I，Santulli P，Chouzenoux S，et al. Serum osteopontin levels are decreased in focal adenomyosis[J]. Reprod Sci，2017，24：773-782.

[16] Moszynski R，Szubert S，Szpurek D，et al. Role of osteopontin in differential diagnosis of ovarian tumors[J]. J Obstet Gynaecol Res，2013，39：1518-1525.

[17] Jolicoeur C，Boutouil M，Drouin R，et al. Increased expression of monocyte chemotactic protein-1 in the endometrium of women with endometriosis[J]. Am J Pathol，1998，152：125-133.

[18] Arici A，Oral E，Attar E，et al. Monocyte chemotactic protein-1 concentration in peritoneal fluid of women with endometriosis and its modulation of expression in mesothelial cells[J]. Fertil Steril，1997，67：1065-1072.

[19] Cakmak H，Basar M，Sevalcelik Y，et al. Statins inhibit monocyte chemotactic protein 1 expression in endometriosis[J]. Reprod Sci，2012，19：572-579.

[20] Drosdzol-Cop A，Skrzypulec-Plinta V，Stojko R. Serum and peritoneal fluid immunological markers in adolescent girls with chronic pelvic pain[J]. Obstet Gynecol Surv，2012，67：374-381.

[21] Tuten A，Kucur M，Imamoglu M，et al. Copeptin is associated with the severity of endometriosis[J]. Arch Gynecol Obstet，2014，290：75-82.

[22] Fassbender A，Waelkens E，Verbeeck N，et al. Proteomics analysis of plasma for early diagnosis of endometriosis[J]. Obstet Gynecol，2012，119：276-285.

[23] Suryawanshi S，Vlad AM，Lin HM，et al. Plasma microRNAs as novel biomarkers for endometriosis and endometriosis-associated ovarian cancer[J]. Clin Cancer Res，2013，19：1213-1224.

[24] Wang WT，Zhao YN，Han BW，et al. Circulating microRNAs identified in a genome-wide serum microRNA expression analysis as noninvasive biomarkers for endometriosis[J]. J Clin Endocrinol Metab，2013，98：281-289.

[25] Burney RO，Hamilton AE，Aghajanova L，et al. MicroRNA expression profiling of eutopic secretory endometrium in women with versus without endometriosis[J]. Mol Hum Reprod，2009，15：625-631.

[26] Cho S，Mutlu L，Grechukhina O，et al. Circulating microRNAs as potential biomarkers for endometriosis[J]. Fertil Steril，2015，103：1252-1260.

[27] Kuokkanen S，Chen B，Ojalvo L，et al. Genomic profiling of microRNAs and messenger RNAs reveals hormonal regulation in microRNA expression in human endometrium[J]. Biol Reprod，2010，82：791-801.

[28] Zhao L，Gu C，Ye M，et al. Identification of global transcriptome abnormalities and potential biomarkers in eutopic endometria of women with endometriosis： A preliminary study[J]. Biomed Rep，2017，6：654-662.

[29] Grande G，Vincenzoni F，Milardi D，et al. Cervical mucus proteome in endometriosis[J]. Clin Proteomics，2017，14：7.

[30] Wolfler MM，Schwamborn K，Otten D，et al. Mass spectrometry and serum pattern profiling for analyzing the individual risk for endometriosis： promising insights?[J]. Fertil Steril，2009，91：2331-2337.

[31] Lee YH，Tan CW，Venkatratnam A，et al. Dysregulated sphingolipid metabolism in endometriosis[J]. J Clin Endocrinol Metab，2014，99：E1913-E1921.

[32] Khaliq A，Li XF，Shams M，et al. Localisation of placenta growth factor(PIGF) in human term placenta[J]. Growth factors，1996，13：243-250.

[33] Suzumori N，Sugiura-Ogasawara M，Katano K，et al. Women with endometriosis have increased levels of placental growth factor in the peritoneal fluid compared with women with cystadenomas[J]. Hum Reprod，2003，18：2595-2598.

[34] Zucchini C，De Sanctis P，F(xiàn)acchini C，et al. Performance of circulating placental growth factor as a screening marker for diagnosis of ovarian endometriosis： a pilot study[J]. Int J Fertil Steril，2016，9：483-489.

[35] Braza-Boils A，Mari-Alexandre J，Gilabert J，et al. MicroRNA expression profile in endometriosis： its relation to angiogenesis and fibrinolytic factors[J]. Hum Reprod，2014，29：978-988.

[36] Young VJ，Ahmad SF，Brown JK，et al. Peritoneal VEGF-A expression is regulated by TGF-beta1 through an ID1 pathway in women with endometriosis[J]. Sci Rep，2015，5：16859.

[37] Raposo G，Stoorvogel W. Extracellular vesicles： exosomes，microvesicles，and friends[J]. J Cell Biol，2013，200：373-383.

[38] Muth DC，McAlexander MA，Ostrenga LJ，et al. Potential role of cervicovaginal extracellular particles in diagnosis of endometriosis[J]. BMC Vet Res，2015，11：187.

[39] Abrao MS，Goncalves MO，Dias JA Jr，et al. Comparison between clinical examination，transvaginal sonography and magnetic resonance imaging for the diagnosis of deep endometriosis[J]. Hum Reprod，2007，22：3092-3097.

[40] Medeiros LR，Rosa MI，Silva BR，et al. Accuracy of magnetic resonance in deeply infiltrating endometriosis： a systematic review and meta-analysis[J]. Arch Gynecol Obstet，2015，291：611-621.

[41] Bazot M，Bharwani N，Huchon C，et al. European society of urogenital radiology(ESUR) guidelines： MR imaging of pelvic endometriosis[J]. Eur Radiol，2017，27：2765-2775.

[42] Manganaro L，F(xiàn)ierro F，Tomei A，et al. Feasibility of 3.0T pelvic MR imaging in the evaluation of endometriosis[J]. Eur J Radiol，2012，81：1381-1387.

[43] Ding Y，Zhang M，Lang J，et al. In vivo study of endometriosis in mice by photoacoustic microscopy[J]. J Biophotonics.，2015，8：94-101.