砂仁酚類特征成分含量測定及其特征 圖譜質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析研究

呂珊,路東波,張?jiān)?孔靜,孫仁弟，黃廣偉，武秋紅,李文霞,李思潼, 范圓圓,馮鑫,黃玉娟,石任兵,3*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,國家中醫(yī)藥管理局中藥經(jīng)典名方有效物質(zhì)發(fā)現(xiàn)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京 102488； 2.上海綠谷生命園醫(yī)藥有限公司，上海 201700;3.北京市教委中藥質(zhì)量控制技術(shù)工程中心,北京 102488)

砂仁為姜科植物陽春砂AmomwmvillosumLour.、綠殼砂AmomumvillosumLour.var.xanthioidesT.L.Wu et Senjen或海南砂AmomumlongiligulareT.L.Wu的干燥成熟果實(shí)。具有化濕開胃，溫脾止瀉，理氣安胎的功用。用于濕濁中阻，脘痞不饑，脾胃虛寒，嘔吐泄瀉，妊娠惡阻，胎動(dòng)不安[1]。2015年版《中國藥典》一部中只是測定了砂仁中的揮發(fā)油成分，然而，僅基于揮發(fā)油為指標(biāo)性成分不足以反映砂仁飲片質(zhì)量的整體性。筆者在基于促胃動(dòng)力藥效對砂仁進(jìn)行藥物體系研究時(shí)，發(fā)現(xiàn)砂仁中的酚類成分為其藥物體系的主要有效的物質(zhì)基礎(chǔ)。因此，對其研究顯得極其重要。雖有文獻(xiàn)報(bào)道對其黃酮類成分槲皮苷、兒茶素的含量進(jìn)行測定[2-3]；對酚酸類成分原兒茶酸、香草酸進(jìn)行含量測定[4]，但尚未見同時(shí)測定酚酸類成分(原兒茶酸、香草酸)和黃酮類成分(槲皮苷、兒茶素)的含量及酚類特征圖譜質(zhì)量表征分析的報(bào)道，且對于砂仁中黃酮類成分表兒茶素的含量測定也未見文獻(xiàn)報(bào)道，故，本文現(xiàn)對砂仁的酚類相關(guān)的特征圖譜的質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析方法進(jìn)行研究，主要采用本課題組前期建立的質(zhì)量評價(jià)模式[5-9]，以黃酮類、酚酸類為著手點(diǎn)，建立同時(shí)測定其特征指標(biāo)性成分含量及酚類的特征圖譜質(zhì)量表征模式，對砂仁飲片進(jìn)行質(zhì)和量的表征且關(guān)聯(lián)性分析，即關(guān)注特征圖譜中特征峰的類型成分及其關(guān)聯(lián)性，測定5個(gè)特征成分原兒茶酸、香草酸、兒茶素、表兒茶素、槲皮苷的含量，以兒茶素為參比，來計(jì)算所要加和未知的黃酮類成分的含量；同樣，也要關(guān)注各成分的組成比例，并和有準(zhǔn)確藥效的參比飲片相關(guān)聯(lián)，形成砂仁特征圖譜的質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析與評價(jià)模式，完善砂仁的質(zhì)量控制體系[10-16]，更為系統(tǒng)地評價(jià)砂仁質(zhì)量，為砂仁的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)為有關(guān)藥物的質(zhì)量的有效評價(jià)與控制提供借鑒參照。

1 材料

1.1 主要的儀器

Waters e2695自動(dòng)進(jìn)樣高效液相色譜儀，2998 PDA檢測器，Empower工作站，XS205型1/100 000電子分析天平，上海梅特勒-托利多有限公司，AL204型1/10 000電子分析天平，上海梅特勒-托利多有限公司、DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司,Serial型數(shù)控超聲波清洗器，北京市超聲儀器有限公司。

1.2 主要的試藥與試劑

原兒茶酸對照品(批號：110810-200207)購自中國藥品生物制品鑒定所，純度≥98%；香草酸(批號：0776-9001)購自中國藥品生物制品鑒定所，純度≥98%；兒茶素(批號：877-200001)購自中國藥品生物制品檢定所，純度≥98%；表兒茶素(批號：121224)購自中國藥品生物制品檢定所，純度≥98%；槲皮苷(批號：111538-200302)購自中國藥品生物制品檢定所，純度≥98%；色譜級乙腈，購自Fisher Scientific公司)；分析甲醇，購自北京化工廠；磷酸，北京化學(xué)試劑公司；色譜用純凈水，購自杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。

從北京市的各藥店購得的11批砂仁飲片，由北京中醫(yī)藥大學(xué)鑒定系劉春生教授鑒定，所購砂仁飲片都是正品飲片，留樣飲片存儲于本校中藥化學(xué)系。

2 方法和結(jié)果

2.1 砂仁的特征圖譜的建立和特征成分含量測定方法的建立

2.1.1 制備混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液

精密稱取各標(biāo)準(zhǔn)品適量，用70%濃度的乙醇配制混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使得含原兒茶酸、香草酸、兒茶素、表兒茶素、槲皮苷濃度分別為0.67 μg/mL、29.48 μg/mL、41.51 μg/mL、162.38 μg/mL、22.05 μg/mL。

2.1.2 制備供試品溶液

取過2號篩的砂仁粉末約0.5 g，精密稱定，放于具塞的錐形瓶中，精密加入50 mL 70%濃度的乙醇，稱定其重量，加熱回流提取2次，每次1 h，冷卻至室溫，再稱定其重量，用相同濃度的補(bǔ)足失重，搖勻，濾過，將濾液合并，減壓濃縮至干，殘?jiān)?0%乙醇超聲溶解，并完全轉(zhuǎn)移至5 mL的容量瓶中，冷卻至室溫，用70%乙醇定容至刻度線，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，進(jìn)樣分析。

2.1.3 色譜條件

WatersXbridge Shield RP18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：(A)乙腈-(B)磷酸水(0.2%)，梯度洗脫(0～20 min，10%～12%A；20～25 min，12%～14%A；25～30 min，14%～16%A；30～45 min，16%～18%A；45～65 min，18%～21%A；65～75 min，21%～22%A，75～80 min，22%A)，流速為1 mL/min，柱溫30 ℃；檢測波長：原兒茶酸、香草酸260 nm、槲皮苷330 nm；兒茶素277 nm、表兒茶素279 nm；進(jìn)樣體積：20 μL，采集所需的時(shí)間：80 min。

砂仁樣品及混合標(biāo)準(zhǔn)品在以上的色譜條件下的HPLC特征色譜圖，見圖1，11個(gè)特征峰在圖譜中顯示分離度良好。

1原兒茶酸(260 nm)；2兒茶素(277 m)；3香草酸(260 nm)；4表兒茶素(279 nm)；5～10黃酮類(277 nm)；11槲皮苷(330 nm) A砂仁樣品；B混合標(biāo)準(zhǔn)品 圖1 砂仁樣品及混合標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC色譜圖

2.1.4 特征圖譜的方法學(xué)試驗(yàn)

(1)精密度：同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，依次進(jìn)樣6次，計(jì)算其他峰和峰11的相對峰面積和相對保留時(shí)間，結(jié)果顯示各特征峰的相對峰面積RSD都小于2.80%，相對保留時(shí)間RSD都小于2.86%，顯示儀器的精密度良好。

(2)穩(wěn)定性：同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，在0、2、4、6、12、24分別進(jìn)樣分析，計(jì)算其他峰和峰11的相對峰面積和相對保留時(shí)間。結(jié)果顯示各特征峰的相對峰面積RSD都小于2.63%，相對保留時(shí)間RSD都小于2.55%，結(jié)果表明樣品溶液在所設(shè)列的時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定。

(3)重復(fù)性：同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，共6份，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，注入色譜儀，計(jì)算其他峰和峰11的相對峰面積和相對保留時(shí)間。結(jié)果顯示各特征峰的相對峰面積RSD都小于2.94%，相對保留時(shí)間RSD都小于2.45%，表示所采用的方法重復(fù)性較好。

2.1.5 特征指標(biāo)性成分的含量測定的方法學(xué)試驗(yàn)

(1)線性關(guān)系：同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，進(jìn)樣2、5、10、15、20、25、30、35 μL，設(shè)進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制作回歸曲線，計(jì)算方程和r值，結(jié)果：原兒茶酸Protocatechuic acid Y=33 218 119.53X-1 276.146(r=0.999 9，線性范圍0.001～0.023 μg，n=6)；香草酸Vanillic acid Y=3 901 023.814X-27 687.186(r=0.999 9，線性范圍0.059～1.032 μg，n=6)；兒茶素Catechin Y=592 499.9122X-1 730.433(r=0.999 9，線性范圍0.083～1.453 μg，n=6)；表兒茶素Epicatechin Y=596 509.329 3X-26 60.092 (r=0.999 9，線性范圍0.325～5.683 μg，n=6)；槲皮苷 Quercitrin Y=3 018 250.701X-21 413.948(r=0.999 9，線性范圍0.044～0.772 μg，n=6)。

(2)精密度：同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，依次6次進(jìn)樣，測得各峰的峰面積RSD值：原兒茶酸0.62%、香草酸0.64%、兒茶素1.00%、表兒茶素1.08%、槲皮苷0.45%，結(jié)果證明，儀器精密度較好。

(3)穩(wěn)定性：同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，于制備后的0、2、4、6、12、24 h進(jìn)樣測定，測得各峰的峰面積的RSD值：原兒茶酸1.47%、香草酸0.79%、兒茶素1.44%、表兒茶素1.02%、槲皮苷1.15%，結(jié)果證明，樣品溶液在所設(shè)列的時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定性較好。

(4)重復(fù)性：同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對同一批砂仁飲片的供試品溶液進(jìn)行制備，平行6份，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，注入色譜儀，測得各峰的平均含量為：原兒茶酸0.001%、香草酸0.022%、兒茶素0.041%、表兒茶素0.120%、槲皮苷0.015%，RSD值依次為：1.07%、1.11%、2.12%、1.96%、1.12%，表明所采用方法的重復(fù)性較好。

(5)加樣回收率：精密稱取已知含量的同批砂仁飲片粉末6份，各約0.25 g，分別精密加入一定量的對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品，同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，注入色譜儀，測定峰面積，計(jì)算可得原兒茶酸、香草酸、兒茶素、表兒茶素、槲皮苷的平均加樣回收率分別為101.60%、100.72%、101.27%、101.13%、100.28%，RSD值分別為2.18%、1.60%、2.32%、2.37%、1.90%。結(jié)果證明所采用的方法的加樣回收率合格，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率考察結(jié)果

2.2 砂仁質(zhì)的表征及其關(guān)聯(lián)性分析

2.2.1 基于特征性成分的質(zhì)的表征

取不同批號的11批砂仁飲片，同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，平行3份，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，注入色譜儀，形成11批砂仁飲片的特征圖譜，以批號5為基準(zhǔn)參比，11個(gè)特征峰在特征圖譜中均有顯示，其中包括酚酸類特征峰2個(gè)，黃酮類特征峰9個(gè)，所測定的批次飲片的色譜圖都包含此11個(gè)特征峰，結(jié)果見圖2。

圖2 11批砂仁飲片HPLC的特征圖譜

2.2.2 基于特征成分的質(zhì)的表征關(guān)聯(lián)分析

對特征圖譜中的11個(gè)峰進(jìn)行相關(guān)性分析，將槲皮苷設(shè)為基準(zhǔn)峰，保留時(shí)間以1計(jì)，同時(shí)與其他峰的保留時(shí)間進(jìn)行換算，計(jì)算可得11個(gè)特征峰的保留時(shí)間和相對保留時(shí)間，結(jié)果見表2。

表2 砂仁特征成分質(zhì)的關(guān)聯(lián)性

2.3 砂仁的量的表征及其關(guān)聯(lián)分析

2.3.1 基于特征性成分、酚酸類和黃酮類的含量的質(zhì)量表征

取11批砂仁飲片樣品，同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，平行3份，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，注入色譜儀，得各批次飲片的特征圖譜。測定圖譜中各特征指標(biāo)性成分的含量，同時(shí)，加和酚酸類、黃酮類特征性成分的色譜峰的峰面積，以兒茶素為參比，來表征所要加和的未知黃酮類成分的含量，結(jié)果見表3。

表3 基于特征成分、酚酸類和黃酮類的含量的11批砂仁飲片質(zhì)量表征(%，n=3)

表4 基于特征成分、酚酸類和黃酮類的峰面積的11批砂仁飲片質(zhì)量表征(n=3)

表5 基于主要特征性成分、酚酸類和黃酮類的含量相對比值11批砂仁飲片量的表征(%,n=3)

表6 基于主要特征性成分、酚酸類和黃酮類的峰面積相對比值的11批砂仁飲片量的表征(n=3)

圖3 11批砂仁飲片中各特征指標(biāo)性成分及類型成分 含量與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分含量的相對比值

圖4 11批砂仁飲片中各特征指標(biāo)性成分及類型成分 峰面積與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分峰面積的相對比值

2.3.2 基于特征性成分、酚酸類和黃酮類的峰面積的質(zhì)量表征

取11批砂仁飲片樣品，同“2.1.2”項(xiàng)下的方法對供試品溶液進(jìn)行制備，平行3份，按“2.1.3”項(xiàng)下的色譜條件，注入色譜儀，得各批次飲片的特征圖譜。計(jì)算砂仁特征圖譜中各個(gè)特征指標(biāo)性成分的的峰面積。同時(shí)，加和未知的酚酸類成分的色譜峰的峰面積以表征酚酸類峰面積，加和未知黃酮類成分的色譜峰的峰面積以表征黃酮類的峰面積，結(jié)果見表4。

2.3.3 基于主要特征性成分、酚酸類和黃酮類的含量相對比值的質(zhì)量表征

以藥物體系中的主要特征指標(biāo)性成分槲皮苷的含量作為基準(zhǔn)，將11批砂仁飲片中各特征性成分含量及類型成分含量和同一批號的槲皮苷的含量的相對比值予以表征，結(jié)果見表5。

2.3.4 基于主要特征性成分、酚酸類和黃酮類的峰面積相對比值的質(zhì)量表征

以藥物體系中的主要特征指標(biāo)性成分槲皮苷的峰面積作為基準(zhǔn)，將11批砂仁飲片中各特征性成分及類型成分的峰面積和同一批號的槲皮苷的峰面積的相對比值予以表征，結(jié)果見表6。

2.3.5 砂仁質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析

(1)基于與基準(zhǔn)參比飲片特征指標(biāo)性成分含量相對比值的質(zhì)量表征的關(guān)聯(lián)分析：基于“2.3.1”項(xiàng)下表3，以批號5的砂仁飲片為基準(zhǔn)參比，計(jì)算其他批號飲片各特征指標(biāo)性成分含量與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分含量的相對比值，對11批砂仁飲片進(jìn)行質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析得圖3。

(2)基于與基準(zhǔn)參比飲片特征指標(biāo)性成分峰面積相對比值的質(zhì)量表征的關(guān)聯(lián)分析：基于“2.3.2”項(xiàng)下表4，以批號5的砂仁飲片為基準(zhǔn)參比，計(jì)算其他批號飲片各指標(biāo)性成分峰面積與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分峰面積的相對比值，對11批砂仁飲片進(jìn)行質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析得圖4。

如表3～4，圖3～4所示，各特征指標(biāo)性成分及類型成分含量、峰面積在11批砂仁飲片中相差較大。原兒茶酸含量最大相差約3.13倍，峰面積最大相差約3.15倍，峰面積和含量從高到低的順序?yàn)椋号?、2、3、4、5、6、7、11、10、8、1；香草酸含量最大相差約2.16倍，峰面積最大相差約2.22倍，峰面積及含量由高到低的順序?yàn)椋号?、9、4、8、3、7、11、5、10、6、1；酚酸類成分加和含量最大相差約2.16倍，峰面積加和最大相差2.29倍，峰面積及含量由高到低的順序?yàn)椋号?、9、4、8、3、7、11、5、10、6、1；兒茶素含量最大相差約2.03倍，峰面積最大相差2.04倍，峰面積及含量由高到低順序?yàn)椋号?1、1、2、6、5、10、8、5、3、7、4、9；表兒茶素含量最大相差約2.93倍，峰面積最大相差2.95倍，含量及峰面積從高到低的順序?yàn)椋号?1、4、1、2、10、6、8、5、7、3、9；槲皮苷含量最大相差約0.56倍，峰面積最大相差0.59倍，峰面積及含量由高到低的順序?yàn)椋号?、4、1、6、11、10、5、7、2、3、9；黃酮類成分加和含量最大相差約1.74倍，峰面積加和最大相差1.54倍，峰面積及含量由高到低的順序?yàn)椋号?1、1、4、2、8、6、10、5、7、3、9；可見，在11批砂仁飲片中各特征指標(biāo)性成分與類型成分含量的差異性為：原兒茶酸(3.13倍)>表兒茶素(2.93倍)>酚酸類(2.16倍)>香草酸(2.16倍)>兒茶素(2.03倍)>黃酮類(1.74倍)>槲皮苷(0.56倍)；特征指標(biāo)性成分與類型成分的峰面積的差異性為：原兒茶酸(3.15倍)>表兒茶素(2.95倍)>酚酸類(2.29倍)>香草酸(2.22倍)>兒茶素(2.04倍)>黃酮類(1.52倍)>槲皮苷(0.59倍)，基于黃酮類主要特征性成分及其類型成分的含量及峰面積進(jìn)行考量，批號11、1、4、2、10、8中較高；基于酚酸類主要特征性成分及其類型成分的含量及峰面積進(jìn)行考量，批號2、9、4、8、3、7較高；綜合兩者主要特征指標(biāo)性成分含量、峰面積及其類型成分的含量、峰面積進(jìn)行考量，批號11、1、4、2、8、10較高。批號8的主要特征指標(biāo)性成分與基準(zhǔn)參比飲片批號5的含量接近。

(3)基于與基準(zhǔn)參比飲片特征性成分含量相對比值的比值質(zhì)量表征的關(guān)聯(lián)分析：基于“2.3.3”項(xiàng)下表5，以參比飲片批號5為基準(zhǔn)，計(jì)算其他批號飲片各特征指標(biāo)性成分、類型成分含量相對比值與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分含量相對比值的比值，進(jìn)行11批砂仁質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析，得圖5。

圖5 11批砂仁飲片中各特征指標(biāo)性成分及類型成分含量 相對比值與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分含量相對比值的比值

圖6 11批砂仁飲片中各特征指標(biāo)性成分及類型成分峰面 積相對與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分峰面積相對比值的比值

(4)基于與基準(zhǔn)參比飲片特征性成分峰面積相對比值的比值質(zhì)量表征的關(guān)聯(lián)分析: 基于“2.3.4”項(xiàng)下表6，以參比飲片批號5為基準(zhǔn)，計(jì)算其他批號飲片各特征指標(biāo)性成分、類型成分峰面積的相對比值與基準(zhǔn)參比飲片對應(yīng)成分峰面積的相對比值的比值，進(jìn)行11批砂仁質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析，得圖6。

圖5、圖6中不同顏色條帶代表飲片中各特征指標(biāo)性成分及類型成分含量、峰面積相對比值與基準(zhǔn)參比飲片中所對應(yīng)的成分的含量、峰面積相對比值的比值。條帶的長度與基準(zhǔn)參比飲片中顏色相同條帶的長度越接近，則代表該飲片的特征指標(biāo)性成分含量、峰面積比值與基準(zhǔn)參比飲片越接近，即質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)也最為密切。從圖中可得出，批號8、7、6、10、4、3與基準(zhǔn)參比飲片質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)密切。以參比飲片批號5為基準(zhǔn)，其他批號樣品與其相對比值的比值差值的絕對值之和，即為非關(guān)聯(lián)系數(shù)；非關(guān)聯(lián)系數(shù)與特征指標(biāo)性成分?jǐn)?shù)目的比值，即為非關(guān)聯(lián)度，進(jìn)而得到關(guān)聯(lián)度，用此來反映飲片質(zhì)量之間的關(guān)聯(lián)性，得到表7、表8。

表7 11批砂仁飲片樣品含量關(guān)聯(lián)度表征

表8 11批砂仁飲片樣品峰面積關(guān)聯(lián)度表征

3 砂仁的質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析

由表5可得，基準(zhǔn)參比飲片中砂仁酚類成分的質(zhì)量關(guān)系式為：(原兒茶酸)0.040∶(香草酸)1.570∶(兒茶素)2.938∶(表兒茶素)8.091∶(槲皮苷)1∶(酚酸類)1.610∶(黃酮類)24.721，當(dāng)砂仁飲片中所含的酚類成分類型與基準(zhǔn)參比飲片相同，且質(zhì)和量的關(guān)系同基準(zhǔn)參比飲片中所含成分的質(zhì)量關(guān)系式接近時(shí)，那么它和基準(zhǔn)參比飲片的關(guān)聯(lián)度接近。綜合分析可知，批號8、6、7、10、4、3與基準(zhǔn)參比飲片批號5的質(zhì)量關(guān)聯(lián)度最高。

4 結(jié)論

4.1 供試品溶液制備方法考察

在對供試品溶液制備方法進(jìn)行考量時(shí)，分別從(1)提取溶劑；(2)提取方式；(3)提取倍量；(4)提取次數(shù)；(5)提取時(shí)間幾個(gè)方面對其進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：70%乙醇100倍量回流提取2次，每次1h效果最佳，可將砂仁飲片中酚類成分完全提取，因此選用此法制備供試品溶液。

4.2 色譜條件考察

在建立HPLC-PDA法同時(shí)測定砂仁酚類指標(biāo)性成分的含量時(shí)，分別對流動(dòng)相、柱溫、檢測波長進(jìn)行了考察：

(1)流動(dòng)相：本文參考文獻(xiàn)[4]，以其為基礎(chǔ)，考察了乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水、甲醇-水、甲醇-磷酸水、甲醇-甲酸水、甲醇-乙酸水等溶劑系統(tǒng)，結(jié)果表明以乙腈-磷酸水(0.2%)為流動(dòng)相時(shí)各色譜峰峰形及分離效果較好。

(2)柱溫：在對柱溫進(jìn)行考量時(shí)，發(fā)現(xiàn)柱溫在30℃以上時(shí)，分離效果較好，因此，在不降低分離度同時(shí)保護(hù)色譜柱的情況下，選用柱溫30℃。

(3)檢測波長：經(jīng)光電二極管陣列檢測器對5種成分進(jìn)行全波長掃描，為保證所有峰均有足夠的靈敏度，綜合得出260 nm較好。因此，綜合以上結(jié)果可得到最優(yōu)的色譜條件：流動(dòng)相為乙腈-磷酸水(0.2%)，柱溫30℃，檢測波長260 nm。

在對砂仁中酚類成分進(jìn)行研究時(shí)，發(fā)現(xiàn)其含有表兒茶素成分，在所選的11批飲片中，其含量最高可達(dá)0.27%，提示，在對砂仁飲片進(jìn)行研究時(shí)，不僅要關(guān)注其揮發(fā)性成分，更應(yīng)該關(guān)注作用與藥性存在顯著一致性的非揮發(fā)性成分，且除了對酚酸類和黃酮類這兩類成分的定量進(jìn)行控制外，還需依據(jù)其特征圖譜的相似性，結(jié)合特征成分相對保留時(shí)間和相對峰面積的數(shù)據(jù)匹配的比較結(jié)果才可較全面的反應(yīng)砂仁飲片的質(zhì)量。

中藥的質(zhì)與量和其所含有效化學(xué)成分的類型及存在量、組成比例等有關(guān)。本文在自然藥學(xué)觀相關(guān)理論的指導(dǎo)下[17-20]，基于藥物體系導(dǎo)向研究發(fā)現(xiàn)其有效物質(zhì)基礎(chǔ)和所含的酚類及其特征指標(biāo)性成分，建立了HPLC法同時(shí)測定砂仁飲片中5種酚類成分的含量測定方法及中藥藥物體系特征圖譜質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析方法，并以此對11批砂仁飲片進(jìn)行了質(zhì)量評價(jià)?；诨鶞?zhǔn)參比飲片(批號5)進(jìn)行質(zhì)量關(guān)聯(lián)度分析比較，綜合評價(jià)砂仁飲片質(zhì)量優(yōu)良度。經(jīng)分析可知批號11、1、4、2、8、10、6、7樣品質(zhì)量較好，批號11、1、4、2、8、10樣品特征指標(biāo)性成分含量總體較高，批號8、6、7、10、4、3樣品與基準(zhǔn)參比飲片關(guān)聯(lián)性最高，本文研究的質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析方法綜合考量了砂仁應(yīng)用有效性及質(zhì)量關(guān)聯(lián)性，從而為砂仁的質(zhì)量評價(jià)與篩選及其藥物質(zhì)量的精準(zhǔn)預(yù)期提供了依據(jù)。

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