小柴胡顆粒中5種指標(biāo)性成分的同時(shí)測(cè)定

楊 慧

(江蘇聯(lián)合職業(yè)技術(shù)學(xué)院 徐州醫(yī)藥分院，江蘇 徐州 221116)

小柴胡顆粒具有解表散熱、疏肝和胃的功效，在生產(chǎn)的過(guò)程中，對(duì)指標(biāo)性成分具有較高的要求，需要做好5種指標(biāo)性成本的分析，包括：黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素和甘草次酸。為了確保小柴胡顆粒指標(biāo)性成分含量足夠，提高化工生產(chǎn)質(zhì)量，需要對(duì)指標(biāo)性成分含量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。對(duì)小柴胡顆粒的質(zhì)量進(jìn)行全面評(píng)價(jià)，確保小柴胡顆粒能夠在生產(chǎn)后有效投入使用，保障小柴胡顆粒具有充分的含量測(cè)定信息。

1 儀器與材料

戴安高效液相色譜儀、電子天平、超聲波清洗器。黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素和甘草次酸，純度不低于95%。將其作為對(duì)照組使用，保證測(cè)定過(guò)程具有良好的對(duì)比條件，便于對(duì)試驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行靈活安排。需要注意的是，試驗(yàn)儀器使用前需要做好校正工作，確保儀器能夠正常工作，并規(guī)范化地進(jìn)行使用，防止儀器在測(cè)定過(guò)程中產(chǎn)生誤差，對(duì)含量測(cè)定過(guò)程造成影響。小柴胡顆粒需要選擇不同的批次，對(duì)不同批次的顆粒進(jìn)行分析，確定5種指標(biāo)性成分組成，保障小柴胡顆粒能夠得到全面地檢驗(yàn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜條件是實(shí)現(xiàn)成分測(cè)定的關(guān)鍵。色譜條件包括色譜柱、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)、進(jìn)樣量等，需要根據(jù)小柴胡顆粒的成分展開(kāi)分析，提高色譜結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免測(cè)定結(jié)果受到影響。色譜柱會(huì)受到不同成分含量的影響，需要合理對(duì)色譜柱進(jìn)行選擇，否則將會(huì)影響到色譜柱的正常使用，甚至?xí)?dǎo)致使用壽命下降。本試驗(yàn)中，色譜柱的規(guī)格為：250 mm×φ4.6 mm，5 μm，能夠?qū)ιV柱起到保護(hù)作用，使色譜條件能夠發(fā)揮作用。流速相主要受到進(jìn)樣量的影響，需要對(duì)流速相的設(shè)定進(jìn)行重視，確保庫(kù)流速與進(jìn)樣量相匹配。通常情況下，流速一般設(shè)置為 1.0 mL/min，并且不可隨意進(jìn)行改動(dòng)。檢測(cè)波長(zhǎng)受到活性成分響應(yīng)時(shí)間的影響，需要精準(zhǔn)地對(duì)波長(zhǎng)進(jìn)行選擇，使色譜檢測(cè)能夠滿足精度要求，本試驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)為 254 nm。另外，還需要對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行控制，將進(jìn)樣量控制在10～15 μL 之間，保證色譜能夠易于進(jìn)行檢測(cè)[1]。

2.2 試液配置

2.2.1 對(duì)照溶液配制

對(duì)照溶液在指標(biāo)性成分分析中具有重要作用，需要做好對(duì)照溶液的配置工作，使對(duì)照溶液能夠發(fā)揮作用，為成分測(cè)定過(guò)程提供對(duì)比條件，保障對(duì)照溶液配置的合理性。對(duì)照溶液配置需要進(jìn)行精密稱取，使溶液具有良好的配置指標(biāo)，防止試驗(yàn)對(duì)比過(guò)程受到影響。本試驗(yàn)中，取黃芩苷 14.86 mg、黃芩素 9.51 mg、漢黃芩苷 8.36 mg、漢黃芩素 9.26 mg，甘草次酸 7.93 mg。采用甲醇溶液分別進(jìn)行稀釋，注入量為 10 mL，最終得到稀釋質(zhì)量濃度分別1.49、0.95、0.84、0.93、0.79 mg/mL。甲醇對(duì)小柴胡顆粒5種指標(biāo)性成分具有較高的溶解性，將其作為稀釋溶劑具有顯著優(yōu)勢(shì)，可以將有效成分進(jìn)行充分溶解，保障對(duì)照溶液能夠進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋，確保含量測(cè)定過(guò)程能夠順利進(jìn)行。

2.2.2 試驗(yàn)溶液配制

小柴胡顆粒稱取之前，需要認(rèn)真做好研磨工作，將其研磨成細(xì)粉狀，加速顆粒的溶解速度。取研磨后粉末 1.5 g，將其置于 200 mL 的錐形瓶中，采用乙醇溶液進(jìn)行稀釋操作，向錐形瓶中加入 50 mL 的乙醇溶液。為了促進(jìn)指標(biāo)性成分的進(jìn)一步溶解，應(yīng)采用超聲振蕩提取的方式，促進(jìn)指標(biāo)性成分向乙醇中進(jìn)一步滲透，加速小柴胡顆粒進(jìn)一步溶解，使有效成分能夠充分地溶解。超聲振蕩時(shí)間為 0.5 h，冷卻狀態(tài)，隨后再進(jìn)行稱量。若溶液出現(xiàn)失重狀態(tài)，則采用同濃度的乙醇溶液進(jìn)行補(bǔ)足，保障溶液可以更好地投入使用。

2.3 適應(yīng)性試驗(yàn)

為了確保成分測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要進(jìn)行適應(yīng)性試驗(yàn)，確保試驗(yàn)系統(tǒng)能夠進(jìn)行準(zhǔn)確地測(cè)定，使試驗(yàn)儀器能夠更好地投入使用。適應(yīng)性試驗(yàn)需要應(yīng)用對(duì)照組溶液，嚴(yán)格做好質(zhì)量濃度測(cè)定工作，確保測(cè)定質(zhì)量濃度處于精度范圍內(nèi)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)良好的測(cè)定效果。適應(yīng)性測(cè)定過(guò)程中，需要注重色譜圖的使用，對(duì)5種指標(biāo)性成分進(jìn)行記錄，實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的測(cè)定效果，保障試驗(yàn)過(guò)程符合適應(yīng)性要求。試驗(yàn)過(guò)程中，需要注重相鄰色譜峰的分離度，確保分離度大于均1.5，使各個(gè)分度具有明顯的色譜峰，便于對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行識(shí)別，采用規(guī)范化測(cè)定方法。同時(shí)，需要對(duì)色譜的保留時(shí)間進(jìn)行關(guān)注，使色譜能夠更好地投入適用，對(duì)色譜之間的邊界進(jìn)行初步預(yù)估，保障適應(yīng)性檢驗(yàn)過(guò)程的有效性[2]。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

線性關(guān)系是實(shí)現(xiàn)進(jìn)樣量分析的關(guān)鍵，需要做好線性關(guān)系分析試驗(yàn)，確定線性關(guān)系的大致范圍，提高線性關(guān)系分析的合理性。線性關(guān)系分析具有一定的難度，需要通過(guò)對(duì)照組進(jìn)行判斷，對(duì)進(jìn)樣量實(shí)施嚴(yán)格的控制，防止進(jìn)樣量控制過(guò)程中發(fā)生問(wèn)題，確保進(jìn)樣量控制的精準(zhǔn)化程度。線性關(guān)系試驗(yàn)需要進(jìn)行精密取樣，將樣本投入到液相色譜儀中，對(duì)5種指標(biāo)性成分的進(jìn)樣量進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)量情況進(jìn)行確定，將峰面積S與進(jìn)樣量m(μg)作為主要參數(shù)，進(jìn)而得到指標(biāo)性成分的曲線方程。

黃芩苷：S=53.974m+0.0598，r=0.9988；

漢黃芩苷：S=142.98m+0.5122，r=0.9997；

黃芩素：S=185.68m+0.5374，r=0.9996；

漢黃芩素：S=207.12m+0.1026，r=0.9995；

甘草次酸：S=104.28m+0.2124，r=0.9989。

結(jié)果表明，小柴胡顆粒5種指標(biāo)性成分的進(jìn)樣量控制如下：黃芩苷0.43～4.52 μg，漢黃芩苷0.15～2.54 μg，黃芩素0.24～2.45 μg，漢黃芩素0.26～2.36 μg，甘草次酸0.14～2.28 μg。

2.5 加樣回收試驗(yàn)

通過(guò)加樣回收試驗(yàn)，可以對(duì)小柴胡顆粒指標(biāo)性成分的回收率進(jìn)行測(cè)量，保障樣品具有可回收的狀態(tài)。試驗(yàn)過(guò)程中，需要將小胡柴顆粒分成5份，每份質(zhì)量為 0.5 g，再向其中精密添加樣品試劑。最終得到5種指標(biāo)性成分的溶液質(zhì)量濃度如下：黃芩苷 0.210 mg/mL、黃芩素 0.102 mg/mL、漢黃芩苷 0.165 mg/mL、漢黃芩素 0.114 mg/mL、甘草次酸 0.145 mg/mL。對(duì)上述溶液進(jìn)行色譜條件測(cè)定，同時(shí)計(jì)算對(duì)應(yīng)的回收率。通過(guò)對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，得到的5種指標(biāo)性成分的回收率分別為97.25%、98.26%、99.01%、98.89%、97.95%。由此可見(jiàn)，加樣回收試驗(yàn)具有較高的回收率，能夠確保有效成分回收的穩(wěn)定性，保障5種指標(biāo)性成分能夠在溶液中進(jìn)行提取，使有效成分回收具有精密性。

2.6 樣品測(cè)定

樣品測(cè)定是小柴胡顆粒指標(biāo)性成分分析的關(guān)鍵，需要圍繞對(duì)照溶液和試驗(yàn)溶液進(jìn)行，使樣品測(cè)定過(guò)程能夠形成對(duì)照，提高樣品檢測(cè)的精準(zhǔn)性。分別取 15 μL 對(duì)照溶液和試驗(yàn)溶液進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)5種指標(biāo)性成分的含量進(jìn)行對(duì)照檢測(cè)，使含量測(cè)定結(jié)果能夠得到驗(yàn)證。分別按照黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素和甘草次酸的順序進(jìn)行測(cè)量，得到的對(duì)照組質(zhì)量分?jǐn)?shù)為：0.56%、0.94%、1.16%、0.91%、0.75%；試驗(yàn)組質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為：0.54%、0.95%、1.15%、0.89%、0.72%。通過(guò)對(duì)照組與試驗(yàn)組對(duì)比可知，兩者的含量測(cè)定結(jié)果具有較高的一致性，說(shuō)明樣品測(cè)定方法滿足標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，樣品測(cè)定結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性，可以將上述數(shù)據(jù)作為5種指標(biāo)性成分含量的測(cè)量結(jié)果[4]。

2.7 特征圖譜分析

特征圖譜是分析小柴胡顆粒指標(biāo)性成分的重要方法，需要做好圖譜的分析工作，對(duì)特征圖譜展開(kāi)細(xì)致化地分析，保證圖譜能夠得到有效運(yùn)用。圖譜分析過(guò)程中，需要對(duì)參照峰進(jìn)行選取，將黃芩苷作為參照峰，對(duì)小柴胡顆粒的特征峰展開(kāi)分析，使特征圖譜的變化能夠形成鮮明的對(duì)比。圖譜分析需要進(jìn)行相似度檢測(cè)，確保圖譜之間的相似度是否一致。對(duì)5批樣品進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，圖譜的相似度分別為0.985、0.936、0.954、0.933、0.914。圖譜之間具有較高的相似度，說(shuō)明圖譜測(cè)量結(jié)果具有較高的精準(zhǔn)。在特征圖譜條件下，需要考量小胡柴顆粒5種指標(biāo)性成分含量測(cè)定的重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密性等，對(duì)特征圖譜進(jìn)行全面分析，保障指標(biāo)性含量測(cè)定過(guò)程能夠有序開(kāi)展。實(shí)際測(cè)量過(guò)程中，相對(duì)峰面積RSD應(yīng)小于3.0%，使特征圖譜能夠得到測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，保障指標(biāo)性成分評(píng)價(jià)的合理性。

3 結(jié)語(yǔ)

本文方法對(duì)小柴胡顆粒進(jìn)行指標(biāo)性成分進(jìn)行分析能夠?yàn)榛どa(chǎn)過(guò)程提供參考。小柴胡顆粒含量測(cè)定需要滿足一定的標(biāo)準(zhǔn)，確保各項(xiàng)成分的含量測(cè)定能夠達(dá)到指標(biāo)，對(duì)指標(biāo)性成分含量作出客觀的評(píng)價(jià)，保障含量測(cè)定過(guò)程能夠順利進(jìn)行。