百合地黃湯對(duì)抑郁模型大鼠行為及海馬內(nèi)單胺類 神經(jīng)遞質(zhì)和單胺氧化酶含量的影響

薛劍,李冀

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

抑郁癥(depression)已是全球高發(fā)疾病，WTO預(yù)測(cè)在2020年以后成為繼高血壓之后第二大臨床慢性疾病[1]。百合地黃湯是治療百合病的代表方劑，中醫(yī)理論中百合病屬于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，抑郁癥的范疇。抑郁癥臨床癥狀中多有學(xué)習(xí)上的障礙，有時(shí)會(huì)有一定的情感障礙及記憶能力的下降。在諸多抑郁癥病因假說中指出，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的功能紊亂會(huì)直接導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生發(fā)展，而研究指出使單胺類遞質(zhì)含量的升高可以有效緩解抑郁癥，是減輕抑郁水平的重要途徑[2]。當(dāng)抑郁癥發(fā)生時(shí)，腦組織中的海馬區(qū)是與情緒、記憶功能密切相關(guān)的腦組織區(qū)域，研究指出海馬區(qū)也是應(yīng)激易損傷的重要靶點(diǎn)區(qū)域，因此本實(shí)驗(yàn)通過建立慢性輕度不可預(yù)見性刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)加孤養(yǎng)模型，并給予百合地黃湯進(jìn)行抗抑郁干預(yù)治療，觀察造模前后，百合地黃湯灌胃前后大鼠的行為學(xué)變化，取海馬區(qū)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及單胺氧化酶作為抗抑郁機(jī)制的研究[3-4]，探討百合地黃湯對(duì)大鼠抑郁行為的影響及大鼠腦內(nèi)海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)含量的影響,為治療抑郁癥的提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物主要實(shí)驗(yàn)藥品試劑及儀器

百合地黃湯組成為百合、地黃，藥物購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院天江中藥局，百憂解膠囊(鹽酸氟西汀，批號(hào):蘇州制藥公司)。

1.2 試劑盒

去甲腎上腺素(NE)、5羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、單胺氧化酶(MAO)檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器

KDL-40低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司)；anthos酶標(biāo)儀(安徽實(shí)達(dá)電腦科技有限公司)。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

雌性健康成年SD大鼠40只，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證：SCXK(黑)2007003。大鼠體質(zhì)量為180～200 g。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由進(jìn)食飲水，室溫為(22±3)℃。大鼠隨機(jī)分為空白組、模型(CUMS)組、陽(yáng)性藥組、百合地黃湯組(簡(jiǎn)稱百地組)，每組10只。

1.5 分組給藥

給藥從造模第22天開始所有大鼠連續(xù)給藥14 d。陽(yáng)性藥組給予百優(yōu)解(鹽酸氟西丁膠囊)20 mg/日，空白組和模型組每天給予5 mL/kg生理鹽水灌胃。百地組每天給予計(jì)算后5 mL/kg的百合地黃湯灌胃。

1.6 抑郁模型的建立

根據(jù)文獻(xiàn)建立CUMS加孤養(yǎng)模型[5]，并根據(jù)具體環(huán)境情況加以改進(jìn)。空白組大鼠正常條件飼養(yǎng)無任何干預(yù)；其余3組大鼠用CUMS應(yīng)激刺激進(jìn)行抑郁造模并單籠飼養(yǎng)，進(jìn)行21 d隨機(jī)方式刺激，刺激方式包括電擊足底(強(qiáng)度10 mA，1次持續(xù)刺激10 s，共刺激20次)、冰水游泳(4℃，5 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)、黑白顛倒(24 h)、夾尾(1 min)、潮濕墊料(24 h)共7種，每日隨機(jī)給予1種刺激方式，每種刺激方式全程共3次，同種刺激不能連續(xù)出現(xiàn)，使大鼠不能預(yù)測(cè)刺激的發(fā)生，造模共21 d，建立不可預(yù)知性抑郁模型。

1.7 大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(forced swimmingtest，F(xiàn)ST)

將大鼠單獨(dú)置于強(qiáng)迫游泳的刻度圓筒內(nèi)，桶內(nèi)裝清水，水溫24～26℃，桶內(nèi)徑為40 cm ，高度為70 cm，水面高度為35 cm，將大鼠放置其中，放置時(shí)動(dòng)作柔和避免過度刺激。實(shí)驗(yàn)共測(cè)試5 min，前1 min為大鼠適應(yīng)階段，后4 min納入不動(dòng)狀態(tài)的時(shí)間。全程用攝像機(jī)采集影響材料。大鼠漂浮或小肢體運(yùn)動(dòng)為大鼠的不動(dòng)狀態(tài)標(biāo)準(zhǔn)。為了避免重復(fù)用水對(duì)大鼠產(chǎn)生影響，則每只大鼠測(cè)試后需要更換一次水。每只大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后需用毛巾、吹風(fēng)機(jī)干燥身體后放回單籠。統(tǒng)計(jì)的不動(dòng)狀態(tài)時(shí)間作為抑郁程度的指標(biāo)。

1.8 取材

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)完成后，斷頭處死大鼠取腦并迅速剝離出海馬組織，將組織分為左右部分，左側(cè)用于單胺類神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)，右側(cè)用于單胺氧化酶檢測(cè)，將組織分好后放入適量生理鹽水搗碎制成勻漿，低溫3 000 r離心10 min取上清液，按照試劑盒說明書檢測(cè)NE、5-HT、DA及MAO含量。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 百合地黃湯干預(yù)后各組大鼠行為學(xué)指標(biāo)變化

與空白組比較，模型組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)；陽(yáng)性藥組時(shí)間對(duì)比模型組有所縮短，百合地黃組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P<0.01),見表1。

2.2 各組大鼠海馬單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化

經(jīng)過28 d慢性不可預(yù)知性溫和性應(yīng)激刺激后，與空白組相比較，模型組大鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)均有降低；與模型組相比，陽(yáng)性藥組百合地黃湯組大鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量明顯升高。見表2。

表1 各組大鼠強(qiáng)迫游泳指標(biāo)變化與空白組比較

注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01

表2 各組大鼠海馬單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△△P<0.01

2.3 治療后各組大鼠海馬單胺氧化酶含量變化

經(jīng)過28天慢性不可預(yù)知性溫和性應(yīng)激刺激后，與空白組相比較，模型組大鼠海馬區(qū)MAO有所升高；與模型組相比，陽(yáng)性藥組和百合地黃湯組大鼠海馬區(qū)MAO含量有所降低。見表3。

表3 各組大鼠海馬MAO含量變化

注：與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

3 討論

現(xiàn)代社會(huì)，由于環(huán)境等因素，抑郁癥嚴(yán)重影響人們的身心健康。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用CUMS結(jié)合孤養(yǎng)的方法建立抑郁大鼠模型，與人類抑郁癥的發(fā)展機(jī)理較為接近，被國(guó)際學(xué)者廣泛運(yùn)用。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中，采用了大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)是將大鼠置于圓形水桶環(huán)境中，觀察動(dòng)物在水中拼命掙扎后，漂浮于水面的“不動(dòng)狀態(tài)”的時(shí)間，這種不動(dòng)狀態(tài)即動(dòng)物的行為學(xué)上的絕望狀態(tài)。時(shí)間越長(zhǎng)，說明大鼠絕望狀態(tài)越嚴(yán)重，則可以說明抑郁越嚴(yán)重。通過21 d的造模和14 d的藥物組干預(yù)，行為學(xué)測(cè)試中與空白組比較，模型組大鼠表現(xiàn)出的不動(dòng)時(shí)間明顯變長(zhǎng)，表明模型組的抑郁模型復(fù)制成功。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中同時(shí)發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性藥組與百地組在大鼠強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間上對(duì)比模型組時(shí)間均有縮短，從行為學(xué)角度也說明百合地黃湯具有一定的抗抑郁作用。

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)主要包括去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)等，查閱文獻(xiàn)中可以得知自1965年開始提出5-HT和NE含量改變能改善抑郁的假說開始，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的研究便與抑郁癥的研究密不可分。研究中得出5-HT和NE的減少與抑郁癥的發(fā)生機(jī)制有關(guān)[6]。有效促使5-HT和NE的升高，則抑郁癥緩解明顯。多巴胺(DA)是下丘腦和腦垂體腺中的關(guān)鍵性神經(jīng)遞質(zhì)，能直接影響人的情緒，研究中證明DA可以產(chǎn)生興奮的情緒，增加行動(dòng)力[7]。因增加單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在大腦內(nèi)的含量水平，是有效減輕抑郁的重要途徑之一。本實(shí)驗(yàn)中百合地黃湯組的對(duì)比模型組中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量均有升高(P<0.05)。從單胺類遞質(zhì)方面的研究可以說明百合地黃湯可以有效改善抑郁癥。

單胺氧化酶(MAO)是一種催化單胺氧化脫氨反應(yīng)酶。研究中發(fā)現(xiàn)MAO具有一定的抗抑郁、抗焦慮的作用[8-10]。MAO增高，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的分解力度則會(huì)加強(qiáng)，則單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量則會(huì)降低，抑郁癥便會(huì)發(fā)生發(fā)展。而本實(shí)驗(yàn)中可以得出百合地黃湯可以降低MAO的活性含量，從而減少了DA、5-HT、NE的分解，避免其含量降低。實(shí)驗(yàn)中百地組的MAO指標(biāo)比模型組有顯著的降低(P<0.05)。因此,從單胺氧化酶的實(shí)驗(yàn)分析中可以得出百合地黃湯有著一定得抗抑郁作用。

綜上所述，百合地黃湯對(duì)CUMS結(jié)合孤養(yǎng)的抑郁模型大鼠具有抗抑郁作用，其機(jī)制與抑制MAO，從而升高大鼠的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量有關(guān)。

[1] 王曉慧，孫家華.現(xiàn)代精神醫(yī)學(xué)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：960.

[2] 李銀貴，柯娟娟.抗抑郁藥物的研究進(jìn)展[J].中國(guó)制藥信息，2000，16(9)：1-7.

[3] Liu, Q, Li B, Zhou H Y,et al, Glia atrophy in the hippocampus of chronic unpredictable stress-induced depression model rats is reversed by electroacupuncture treatment[J].J Affect Disord, 2011,128(3):309-313.

[4] Sheline Y I, Mittler B L, Mintun M A, The hippocampus and depression[J].Eur Psychiatry,2002,17(Suppl 3):300-305.

[5] Luo D D, An S C, Zhang X. Involvement of hippocampal serotonin and neuropeptide Y in depression induced by chronic unpredicted mild stress[J].Brain Res Bull,2008,77(1):8-12.

[6] Owens MJ, Nemeroff CB. Role of serotonin in the pathophysiology of depression: focus on the serotonin transporter[J].Clin chem,2013,40(40):288-295.

[7] D’Aquila PS, Collu M, Gessa GL,et al. The role of dopamine in the mechanism of action of antidepressant drugs[J].Eur J Pharmacol,2010,405(1-3):365-373.

[8] 闞紅衛(wèi)，明亮，伊艷艷，等.BCPT對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠脂質(zhì)過氧化及免疫功能的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2005，21(11)：1385-1388.

[9] 闞紅衛(wèi)，明亮，鄭麗芳，等.BCPT對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠行為及體重的影響[J].安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，4(2)：55-57.

[10] Weinstock M, Poltyrev T, Beajr C, et al. Effect of TV3326, a novel monoamine-oxidase cholinesterase inhibitor, in rat models of anxietv and depression[J].Psychopharmacology(berl),2012,160(3):318-324.