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    拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱa基因表達(dá)檢測(cè)對(duì)乳腺癌多西他賽+阿霉素+環(huán)磷酰胺新輔助化療方案療效的預(yù)測(cè)作用

    2018-03-08 06:55:26
    腫瘤基礎(chǔ)與臨床 2018年6期
    關(guān)鍵詞:乳腺癌療效

    (信陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院腫瘤放療科,河南 信陽(yáng) 464000)

    目前,在晚期乳腺癌的初始治療方案中,新輔助化療發(fā)揮重要的作用。有研究[1]顯示,拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱa基因(topoisomerase Ⅱa,TOPⅡA)與蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療的療效有關(guān),能夠預(yù)測(cè)化療的敏感性。近年來(lái)研究[2]證明原癌基因擴(kuò)增原因在于乳腺癌的化療耐藥反應(yīng)。本研究通過(guò)探討TOPⅡA基因表達(dá)與臨床病理參數(shù)、乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系,從而尋找預(yù)測(cè)乳腺癌新輔助化療療效的指標(biāo)。

    1 資料與方法

    1.1臨床資料選擇我院2012年1月至2016年12月收治的原發(fā)性乳腺癌患者40例作為研究對(duì)象,所有患者病灶>3 cm,并且無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。術(shù)前活檢進(jìn)行病理診斷,均采用統(tǒng)一的新輔助化療方案,年齡30~69(48.0±2.0)歲,其中50歲以上患者20例,絕經(jīng)后患者10例;臨床分期:Ⅱa期10例,Ⅱb期15例,Ⅲa期10例,Ⅲb期3例,Ⅲc期2例。

    1.2新輔助化療方法術(shù)前新輔助化療采用多西他賽+阿霉素+環(huán)磷酰胺(TAC)方案,具體用法用量參考文獻(xiàn)[3]。

    1.3觀(guān)察指標(biāo)根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)近期療效。完全緩解(CR):所有病灶消失;部分緩解(PR):腫瘤縮小超過(guò)30%;疾病穩(wěn)定(SD):介于PR和PD之間;疾病進(jìn)展(PD):腫瘤增大超過(guò)20%,或發(fā)現(xiàn)新病灶。以CR+PR計(jì)算有效率[4]。根據(jù)Miller-Payne分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),評(píng)估化療后與化療前對(duì)比腫瘤細(xì)胞減少的程度,可通過(guò)顯微鏡檢查,和化療前對(duì)比,腫瘤細(xì)胞成分減少的程度分級(jí),具體標(biāo)準(zhǔn):1級(jí):腫瘤細(xì)胞無(wú)變化,總數(shù)量沒(méi)有減少;2級(jí):腫瘤細(xì)胞數(shù)量輕度減少,但密度高,減少程度比化療前減少30%;3級(jí):腫瘤細(xì)胞減少程度達(dá)到30%~90%;4級(jí):腫瘤細(xì)胞基本消失,存在浸潤(rùn)小簇細(xì)胞,減少程度高達(dá)90%以上;5級(jí):腫瘤部位無(wú)明顯浸潤(rùn)癌細(xì)胞,殘存血管纖維,含有巨噬細(xì)胞。其中4~5級(jí)屬于腫瘤對(duì)化療敏感;1~3級(jí)屬于腫瘤對(duì)化療耐藥[5]。

    1.3.1 TOPⅡA蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用鼠抗人單克隆抗體工作液,使用PV-9000二步法免疫組化試劑盒(北京中山金橋生物工程技術(shù)有限公司)。把體積分?jǐn)?shù)95%乙醇處理后的乳腺癌細(xì)胞印片放在磷酸鹽緩沖液(PBS)中,放置于4 ℃冷藏過(guò)夜;使用蒸餾水沖洗細(xì)胞印片,使用PBS沖洗3次,每次5 min;然后放置于體積分?jǐn)?shù)3%過(guò)氧化氫甲醇溶液10 min,使用PBS沖洗3次,每次5 min;滴加一抗50 μL,加上塑料膜封蓋,放置于濕盒,室溫下孵育,3 h后使用PBS沖洗3次,每次5 min;進(jìn)行DAB顯色30 s,再使用自來(lái)水沖洗,進(jìn)行復(fù)染,脫水觀(guān)察。根據(jù)核染色判定陰陽(yáng)性,從染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比2個(gè)方面評(píng)價(jià),然后綜合評(píng)判表達(dá)的陰陽(yáng)性[4-5]。

    1.3.2 熒光原位雜交法檢測(cè)TOPⅡA基因 試劑盒購(gòu)自北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司,包含2種混合探針,橘紅色熒光代表TOPⅡA基因,綠色熒光代表17號(hào)染色體著絲粒。使用顯微鏡觀(guān)察雜交信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù),選擇細(xì)胞需細(xì)胞核大小均等、細(xì)胞核形態(tài)無(wú)缺損、染色均勻、細(xì)胞核無(wú)相互疊加、綠色著絲粒熒光信號(hào)清晰。對(duì)紅色和綠色信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù)。當(dāng)紅色信號(hào)數(shù)值與綠色信號(hào)數(shù)值比值>2,則為擴(kuò)增;<1.8則為無(wú)擴(kuò)增;1.8~2則表示需要重新計(jì)數(shù)。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0處理數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示,比較用χ2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1新輔助化療療效及病理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果40例可評(píng)價(jià)療效的乳腺癌患者中,CR 4例(10.0%),PR 23例(57.5%),SD 12例(30.0%),PD 1例(2.5%);Miller-Payne分級(jí):5級(jí)2例(5.0%),4級(jí)10例(25.0%),3級(jí)9例(22.5%),2級(jí)13例(32.5%),1級(jí)6例(15.0%)。見(jiàn)表1。

    表1 新輔助化療療效與病理學(xué)評(píng)價(jià)

    2.2TOPⅡA基因擴(kuò)增與TOPⅡA蛋白過(guò)表達(dá)的關(guān)系TOPⅡA基因擴(kuò)增13例,無(wú)擴(kuò)增27例;TOPⅡA蛋白表達(dá)(-)~(+)27例,(++)~(+++)13例。27例TOPⅡA蛋白表達(dá)(-)~(+)組患者中,TOPⅡA基因擴(kuò)增8例,無(wú)擴(kuò)增19例;13例(++)~(+++)組患者中,擴(kuò)增5例,無(wú)擴(kuò)增8例。TOPⅡA基因擴(kuò)增和TOPⅡA蛋白過(guò)表達(dá)無(wú)關(guān)(χ2=0.231,P>0.05)。

    3 討論

    乳腺癌是世界女性發(fā)病率最高的腫瘤,近年來(lái)乳腺癌的發(fā)病率在我國(guó)迅速增長(zhǎng),給女性健康和生命造成嚴(yán)重的威脅。雖然乳腺癌早期診斷率的提高與靶向治療藥物的出現(xiàn)促使乳腺癌死亡率降低,但是晚期乳腺癌患者的療效和預(yù)后并不樂(lè)觀(guān)。對(duì)乳腺癌患者必須給予綜合治療,從而提高治療效果,改善患者的預(yù)后情況[6]。

    乳腺癌的新輔助化療是針對(duì)未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病灶進(jìn)行局部化療,現(xiàn)已成為晚期乳腺癌標(biāo)準(zhǔn)的初始治療方案,在綜合治療中占有重要的位置。當(dāng)乳腺癌患者手術(shù)治療后,容易刺激病灶生長(zhǎng),但是如果術(shù)前或術(shù)中進(jìn)行局部化療,則可以抑制手術(shù)刺激所致的殘留殘根生長(zhǎng)[7-9]。同時(shí),新輔助化療方案有利于提前測(cè)試化療方案的敏感性和耐藥性,為手術(shù)后的化療方案選擇提供重要的依據(jù);腫瘤對(duì)新輔助化療的敏感性是預(yù)測(cè)乳腺癌患者預(yù)后的重要指標(biāo),化療療效對(duì)患者的5 a生存率造成一定的影響。

    本研究結(jié)果顯示,40例可評(píng)價(jià)療效的乳腺癌患者中,CR 4例(10.0%),PR 23例(57.5%),SD 12例(30.0%),PD 1例(2.5%);Miller-Payne分級(jí):5級(jí)2例(5.0%),4級(jí)10例(25.0%),3級(jí)9例(22.5%),2級(jí)13例(32.5%),1級(jí)6例(15.0%)。由此可見(jiàn),新輔助化療極少導(dǎo)致疾病進(jìn)展的結(jié)果,病理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果證實(shí),患者對(duì)新輔助化療方案具有較高的敏感性。TOPⅡ抑制劑為主的化療方案通過(guò)阻斷斷裂的DNA修復(fù),促使TOPⅡ和DNA殘端結(jié)合,導(dǎo)致染色體畸變,從而達(dá)到消滅腫瘤細(xì)胞的目的。本研究還發(fā)現(xiàn)TOPⅡA基因擴(kuò)增和TOPⅡA蛋白過(guò)表達(dá)無(wú)關(guān)。根據(jù)乳腺癌新輔助化療方案的影響因素分析,我們認(rèn)為T(mén)OPⅡA基因擴(kuò)增、蛋白過(guò)表達(dá)和新輔助化療的療效無(wú)明顯的關(guān)系。因此,TOPⅡA不是能夠有效預(yù)測(cè)乳腺癌新輔助化療敏感性的指標(biāo)。

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