拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱa基因表達(dá)檢測對乳腺癌多西他賽+阿霉素+環(huán)磷酰胺新輔助化療方案療效的預(yù)測作用

(信陽市腫瘤醫(yī)院腫瘤放療科，河南 信陽 464000)

目前，在晚期乳腺癌的初始治療方案中，新輔助化療發(fā)揮重要的作用。有研究[1]顯示，拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱa基因(topoisomerase Ⅱa，TOPⅡA)與蒽環(huán)類藥物新輔助化療的療效有關(guān)，能夠預(yù)測化療的敏感性。近年來研究[2]證明原癌基因擴(kuò)增原因在于乳腺癌的化療耐藥反應(yīng)。本研究通過探討TOPⅡA基因表達(dá)與臨床病理參數(shù)、乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系，從而尋找預(yù)測乳腺癌新輔助化療療效的指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1臨床資料選擇我院2012年1月至2016年12月收治的原發(fā)性乳腺癌患者40例作為研究對象，所有患者病灶>3 cm，并且無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。術(shù)前活檢進(jìn)行病理診斷，均采用統(tǒng)一的新輔助化療方案，年齡30～69(48.0±2.0)歲，其中50歲以上患者20例，絕經(jīng)后患者10例；臨床分期：Ⅱa期10例，Ⅱb期15例，Ⅲa期10例，Ⅲb期3例，Ⅲc期2例。

1.2新輔助化療方法術(shù)前新輔助化療采用多西他賽+阿霉素+環(huán)磷酰胺(TAC)方案，具體用法用量參考文獻(xiàn)[3]。

1.3觀察指標(biāo)根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)近期療效。完全緩解(CR)：所有病灶消失；部分緩解(PR)：腫瘤縮小超過30%；疾病穩(wěn)定(SD)：介于PR和PD之間；疾病進(jìn)展(PD)：腫瘤增大超過20%，或發(fā)現(xiàn)新病灶。以CR+PR計(jì)算有效率[4]。根據(jù)Miller-Payne分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估化療后與化療前對比腫瘤細(xì)胞減少的程度，可通過顯微鏡檢查，和化療前對比，腫瘤細(xì)胞成分減少的程度分級(jí)，具體標(biāo)準(zhǔn)：1級(jí)：腫瘤細(xì)胞無變化，總數(shù)量沒有減少；2級(jí)：腫瘤細(xì)胞數(shù)量輕度減少，但密度高，減少程度比化療前減少30%；3級(jí)：腫瘤細(xì)胞減少程度達(dá)到30%～90%；4級(jí)：腫瘤細(xì)胞基本消失，存在浸潤小簇細(xì)胞，減少程度高達(dá)90%以上；5級(jí)：腫瘤部位無明顯浸潤癌細(xì)胞，殘存血管纖維，含有巨噬細(xì)胞。其中4～5級(jí)屬于腫瘤對化療敏感；1～3級(jí)屬于腫瘤對化療耐藥[5]。

1.3.1 TOPⅡA蛋白表達(dá)檢測 采用鼠抗人單克隆抗體工作液，使用PV-9000二步法免疫組化試劑盒(北京中山金橋生物工程技術(shù)有限公司)。把體積分?jǐn)?shù)95%乙醇處理后的乳腺癌細(xì)胞印片放在磷酸鹽緩沖液(PBS)中，放置于4 ℃冷藏過夜；使用蒸餾水沖洗細(xì)胞印片，使用PBS沖洗3次，每次5 min；然后放置于體積分?jǐn)?shù)3%過氧化氫甲醇溶液10 min，使用PBS沖洗3次，每次5 min；滴加一抗50 μL，加上塑料膜封蓋，放置于濕盒，室溫下孵育，3 h后使用PBS沖洗3次，每次5 min；進(jìn)行DAB顯色30 s，再使用自來水沖洗，進(jìn)行復(fù)染，脫水觀察。根據(jù)核染色判定陰陽性，從染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比2個(gè)方面評(píng)價(jià)，然后綜合評(píng)判表達(dá)的陰陽性[4-5]。

1.3.2 熒光原位雜交法檢測TOPⅡA基因 試劑盒購自北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司，包含2種混合探針，橘紅色熒光代表TOPⅡA基因,綠色熒光代表17號(hào)染色體著絲粒。使用顯微鏡觀察雜交信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù)，選擇細(xì)胞需細(xì)胞核大小均等、細(xì)胞核形態(tài)無缺損、染色均勻、細(xì)胞核無相互疊加、綠色著絲粒熒光信號(hào)清晰。對紅色和綠色信號(hào)進(jìn)行計(jì)數(shù)。當(dāng)紅色信號(hào)數(shù)值與綠色信號(hào)數(shù)值比值>2，則為擴(kuò)增；<1.8則為無擴(kuò)增；1.8～2則表示需要重新計(jì)數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，比較用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1新輔助化療療效及病理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果40例可評(píng)價(jià)療效的乳腺癌患者中，CR 4例(10.0%)，PR 23例(57.5%)，SD 12例(30.0%)，PD 1例(2.5%)；Miller-Payne分級(jí)：5級(jí)2例(5.0%)，4級(jí)10例(25.0%)，3級(jí)9例(22.5%)，2級(jí)13例(32.5%)，1級(jí)6例(15.0%)。見表1。

表1 新輔助化療療效與病理學(xué)評(píng)價(jià)

2.2TOPⅡA基因擴(kuò)增與TOPⅡA蛋白過表達(dá)的關(guān)系TOPⅡA基因擴(kuò)增13例，無擴(kuò)增27例；TOPⅡA蛋白表達(dá)(-)～(+)27例，(++)～(+++)13例。27例TOPⅡA蛋白表達(dá)(-)～(+)組患者中，TOPⅡA基因擴(kuò)增8例，無擴(kuò)增19例；13例(++)～(+++)組患者中，擴(kuò)增5例，無擴(kuò)增8例。TOPⅡA基因擴(kuò)增和TOPⅡA蛋白過表達(dá)無關(guān)(χ2=0.231，P>0.05)。

3 討論

乳腺癌是世界女性發(fā)病率最高的腫瘤，近年來乳腺癌的發(fā)病率在我國迅速增長，給女性健康和生命造成嚴(yán)重的威脅。雖然乳腺癌早期診斷率的提高與靶向治療藥物的出現(xiàn)促使乳腺癌死亡率降低，但是晚期乳腺癌患者的療效和預(yù)后并不樂觀。對乳腺癌患者必須給予綜合治療，從而提高治療效果，改善患者的預(yù)后情況[6]。

乳腺癌的新輔助化療是針對未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病灶進(jìn)行局部化療，現(xiàn)已成為晚期乳腺癌標(biāo)準(zhǔn)的初始治療方案，在綜合治療中占有重要的位置。當(dāng)乳腺癌患者手術(shù)治療后，容易刺激病灶生長，但是如果術(shù)前或術(shù)中進(jìn)行局部化療，則可以抑制手術(shù)刺激所致的殘留殘根生長[7-9]。同時(shí)，新輔助化療方案有利于提前測試化療方案的敏感性和耐藥性，為手術(shù)后的化療方案選擇提供重要的依據(jù)；腫瘤對新輔助化療的敏感性是預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)，化療療效對患者的5 a生存率造成一定的影響。

本研究結(jié)果顯示，40例可評(píng)價(jià)療效的乳腺癌患者中，CR 4例(10.0%)，PR 23例(57.5%)，SD 12例(30.0%)，PD 1例(2.5%)；Miller-Payne分級(jí)：5級(jí)2例(5.0%)，4級(jí)10例(25.0%)，3級(jí)9例(22.5%)，2級(jí)13例(32.5%)，1級(jí)6例(15.0%)。由此可見，新輔助化療極少導(dǎo)致疾病進(jìn)展的結(jié)果，病理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果證實(shí)，患者對新輔助化療方案具有較高的敏感性。TOPⅡ抑制劑為主的化療方案通過阻斷斷裂的DNA修復(fù)，促使TOPⅡ和DNA殘端結(jié)合，導(dǎo)致染色體畸變，從而達(dá)到消滅腫瘤細(xì)胞的目的。本研究還發(fā)現(xiàn)TOPⅡA基因擴(kuò)增和TOPⅡA蛋白過表達(dá)無關(guān)。根據(jù)乳腺癌新輔助化療方案的影響因素分析，我們認(rèn)為TOPⅡA基因擴(kuò)增、蛋白過表達(dá)和新輔助化療的療效無明顯的關(guān)系。因此，TOPⅡA不是能夠有效預(yù)測乳腺癌新輔助化療敏感性的指標(biāo)。