咪鮮胺及其代謝物在絲瓜上的殘留檢測方法及動態(tài)研究

劉騫 程運斌 沈菁

摘要：采用氣相色譜法（ECD）檢測絲瓜中咪鮮胺及其代謝物的總殘留量。用丙酮提取絲瓜中的咪鮮胺及其代謝物，在210～240 ℃條件下用吡啶鹽酸鹽將咪鮮胺及其代謝物全部水解成2，4，6-三氯苯酚，氣相色譜法（ECD）測定2，4，6-三氯苯酚的含量，再換算成咪鮮胺的殘留量。咪鮮胺在絲瓜中的平均添加回收率為73%～78%， 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4%～6%。咪鮮胺在絲瓜中最低檢測濃度為0.02 mg/kg。殘留動態(tài)研究表明， 咪鮮胺在絲瓜中消解速率快，3 d后，均檢測不出咪鮮胺殘留量。

關(guān)鍵詞：氣相色譜法（ECD）;咪鮮胺;絲瓜;消解動態(tài)

中圖分類號：S642.4;O657.7+1? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2018）23-0136-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.23.032? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

咪鮮胺（Prochloraz）是咪唑類廣譜性低毒殺菌劑，其作用機(jī)理是通過抑制麥角甾醇的生物合成，從而使菌體細(xì)胞膜功能受破壞而起作用?？捎糜诜乐伟追劬⑻烤揖榷喾N致病菌引起的油料作物、谷類、熱帶和亞熱帶水果、蔬菜、經(jīng)濟(jì)作物的病害，也可用于種子、苗木處理及水果貯存期病害的防治。咪鮮胺的最終降解產(chǎn)物2，4，6-三氯苯酚是環(huán)境中重要污染物之一，生物降解性差，會對人類的健康造成潛在威脅，并污染生態(tài)環(huán)境，因此，檢測其在蔬菜水果中的殘留量是非常有必要的[1-3]。

目前，檢測咪鮮胺的方法主要有氣相色譜法[4，5]、液相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[6]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[7，8]。羅逢健等[9]先將柑橘樣品中的咪鮮胺及其代謝物提取出來，在高溫下與鹽酸吡啶鹽反應(yīng)全部轉(zhuǎn)化成2，4，6-三氯苯酚，采用氣相色譜法檢測柑橘中2，4，6-三氯苯酚的含量，最后折算為咪鮮胺殘留量。吳瓊等[10]建立氣質(zhì)連用法測定牛奶中咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚的含量。王燕等[11]建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定人參和土壤中咪鮮胺的殘留量。李天秀等[12]建立高效液相色譜法測定鴨梨中咪鮮胺及代謝物2，4，6-三氯苯酚的含量。由于不同的樣本基質(zhì)需要開發(fā)不同的殘留檢測方法，咪鮮胺及其代謝物在絲瓜上的殘留分析方法還未見報道。本研究采用氣相色譜法（ECD）檢測絲瓜中咪鮮胺及其代謝物的總殘留量，為制定咪鮮胺在絲瓜上的安全使用準(zhǔn)則提供參考。

1? 試劑與材料

1.1? 試劑

丙酮、濃鹽酸、二氯甲烷、吡啶鹽酸鹽、濃硫酸均為分析純;助濾劑545;無水硫酸鈉使用前在550 ℃下烘干4 h，冷卻后使用;石油醚沸程為30～60 ℃;正己烷為色譜純。

1.2? 標(biāo)準(zhǔn)品

咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品，純度98.8%（上海市農(nóng)藥研究所有限公司）;咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，1 000 mg/L，準(zhǔn)確稱取咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品0.050 0 g，加丙酮溶解并定容至50 mL的容量瓶中。

1.3? 儀器設(shè)備及型號

6890N氣相色譜儀，配ECD檢測器（Agilent，美國）;HY-5A回旋振蕩器（國華，中國）;HX-VP01泵（恒信，中國）;FYZD100分液漏斗振蕩器（ANPEL，中國）;SENCO？誖旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（申生，中國）;ZNCL-DLS250ML智能磁力攪拌器;RK 100H超聲波清洗器（BANDELIN SONOREX，德國）;MS 3渦旋儀（IKA，德國）;電子天平、移液槍、氮吹儀以及其他實驗室常用儀器設(shè)備。

1.4? 方法

1.4.1? 提取? 稱取絲瓜樣品40.00 g于250 mL錐形瓶中，加入5 mL鹽酸，80 mL丙酮浸泡過夜（12～16 h），振蕩提取60 min，提取液經(jīng)裝有助濾劑545的布氏漏斗抽濾，濾渣再用20～30 mL丙酮分次淋洗，合并濾液于500 mL分液漏斗中，用60 mL二氯甲烷振蕩萃取15 min，下層有機(jī)相經(jīng)裝有無水硫酸鈉的漏斗過濾于250 mL磨口圓底燒瓶中，并用適量二氯甲烷洗滌漏斗，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器減壓蒸餾至近干。

1.4.2? 分解? 在上述磨口圓底燒瓶中加入5 g吡啶鹽酸鹽，置于加熱套內(nèi)240 ℃加熱回流1.5 h，冷卻后，用10 mL去離子水沖洗冷凝管，取出磨口圓底燒瓶，超聲溶解鹽酸吡啶鹽，并轉(zhuǎn)入500 mL分液漏斗，并用40 mL去離子水分次沖洗圓底燒瓶后轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用石油醚萃取兩次（每次50 mL），棄去水相，合并有機(jī)相。

1.4.3? 凈化? 向上述有機(jī)相中加入5 mL硫酸，振搖后靜止分層，棄去硫酸，重復(fù)3次。然后用去離子水洗滌有機(jī)相中殘余硫酸，每次加50 mL，反復(fù)4～5次洗至中性，收集有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后用石油醚洗滌濃縮至干，并用正己烷定容至2～4 mL，待上機(jī)測定。

1.5? 氣相色譜條件

色譜柱：INNOWAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）;進(jìn)樣口：240 ℃;檢測器（ECD）320 ℃，柱溫150 ℃保持1 min，2 ℃/min升至180 ℃，保持2 min，40 ℃/min升至250 ℃，保持5 min。

氣體流量：柱流量2 mL/min;隔墊吹掃3 mL/min;尾吹氣流量58 mL/min。進(jìn)樣量1.0 μL，不分流進(jìn)樣。

在該色譜條件下2，4，6-三氯苯酚的保留時間為15 min，咪鮮胺標(biāo)樣的氣相色譜見圖1，絲瓜樣品中咪鮮胺及其代謝物殘留的氣相色譜見圖2。

式中，？籽為咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度，mg/L;A樣為樣品溶液中吡唑醚菌酯的峰面積;A標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中吡唑醚菌酯的峰面積;V為樣品溶液定容體積，mL;m為試樣的質(zhì)量，g。

計算結(jié)果大于1 mg/kg時保留三位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果小于1 mg/kg時保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果低于最低檢測濃度時，以“<定量限”表示。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 添加回收試驗

檢測方法的正確度用添加回收試驗進(jìn)行評價，即在空白對照試驗小區(qū)采集的絲瓜樣品中添加咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使其含咪鮮胺的量分別為0.02、0.10、1.00 mg/kg，平行處理5組進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果見表1。5次重復(fù)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4%～6%。

2.2? 定量限

2.2.1? 最小檢出量? 在上述儀器測定條件下，咪鮮胺的最低檢出量為2.0×10-3 ng。

2.2.2? 定量限? 據(jù)添加回收率試驗，在上述色譜條件下咪鮮胺及其代謝物在絲瓜中的最低檢出濃度為0.02 mg/kg。

2.3? 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將1 000 mg/L的咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用丙酮稀釋至適宜的濃度，以方便使用100、200 μL的移液槍，分別移取1、2、5、10、20、200 μg咪鮮胺于圓底燒瓶中，經(jīng)過分解及凈化得到以咪鮮胺計濃度為0.2、0.4、1、2、4、40 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在“1.5”條件下上機(jī)測定，以咪鮮胺的濃度為橫坐標(biāo)，由咪鮮胺轉(zhuǎn)化生成的2，4，6-三氯苯酚峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為：y=150 682.061x-7 118.405 8，相關(guān)系數(shù)為：r=0.997 5（圖3）。其中以咪鮮胺計濃度為40 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣品檢測前稀釋使用，有效期1個月。

2.4? 咪鮮胺及其代謝物在絲瓜中的消解試驗

在進(jìn)行消解試驗時，檢測出絲瓜上的咪鮮胺殘留量最大時為0.36 mg/kg，原始沉積量低，3 d后，均檢測不出咪鮮胺殘留量?？赡艿脑蚴巧L稀釋作用，絲瓜為牽藤作物，果實上不易著藥。

3? 小結(jié)

本檢測方法的定量限為0.02 mg/kg，檢測方法的添加回收率在73%～79%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在4%～6%，滿足NY/T 788《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則》的要求;標(biāo)準(zhǔn)曲線覆蓋了2個數(shù)量級以上。該方法能滿足殘留量檢測的要求，可用于檢測絲瓜樣品中咪鮮胺及其代謝物殘留量。

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