HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)稻田土、水中阿維菌素等5種農(nóng)藥

黃蘭淇 ，張正煒 ，陳 秀 ，尹 軍

（1.上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201103；2.上海市浦東新區(qū)農(nóng)技推廣中心，上海 201201）

我國(guó)是水稻生產(chǎn)大國(guó)，常年水稻種植面積約為3 000萬(wàn)hm2[1]。水稻上已登記的常用農(nóng)藥有效成分有阿維菌素、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、嘧菌酯、噻嗪酮、茚蟲(chóng)威等，5種農(nóng)藥單劑或復(fù)配制劑可有效防治稻縱卷葉螟、二化螟、飛虱、稻瘟病等病蟲(chóng)害。我國(guó)農(nóng)藥使用量大，其中大部分農(nóng)藥最終進(jìn)入土壤環(huán)境，土壤環(huán)境污染嚴(yán)重。隨著人們環(huán)境保護(hù)意識(shí)的逐漸增強(qiáng)，土壤和水環(huán)境的安全越來(lái)越受到重視。因此，有必要針對(duì)稻田土和水建立多殘留檢測(cè)方法。

上述5種農(nóng)藥的主要檢測(cè)方法有液相色譜、氣相色譜、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測(cè)方法[2-10]。王思威等[2]采用甲醇提取稻田土中氯蟲(chóng)苯甲酰胺，經(jīng)弗羅里硅土固相萃取凈化，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。謝惠等[3]分別用二氯甲烷和丙酮提取稻田水、土中嘧菌酯，氣相色譜測(cè)定。何紅梅等[4]分別采用乙腈振蕩提取和乙酸乙酯液液分配提取稻田土和水中阿維菌素，經(jīng)C18固相萃取小柱凈化后，UPLC-MS/MS檢測(cè)。目前未見(jiàn)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)稻田土和水中上述5種農(nóng)藥的報(bào)道。本文中稻田土采用乙腈振蕩提取1 h，離心過(guò)膜后直接進(jìn)樣；稻田水采用二氯甲烷萃取，甲醇定容后直接過(guò)膜進(jìn)樣。對(duì)比文獻(xiàn)[2-4]，本方法縮減了樣品凈化步驟，且減少了大量溶劑的使用，節(jié)省了分析時(shí)間和成本。

本文旨在高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)基礎(chǔ)上，建立一種科學(xué)、快速、簡(jiǎn)便的殘留檢測(cè)方法，同時(shí)滿足定性和定量的要求，為合理規(guī)范用藥提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備與試劑

Agilent 6460三重四級(jí)桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)Agilent公司；SHA-C恒溫振蕩器，常州國(guó)華電器有限公司。阿維菌素標(biāo)樣、氯蟲(chóng)苯甲酰胺標(biāo)樣、嘧菌酯標(biāo)樣、噻嗪酮標(biāo)樣、茚蟲(chóng)威標(biāo)樣（99%），由上海市農(nóng)藥研究所提供；乙腈、甲醇（色譜純）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱：Poroshell 120 EC-C18（3.0 mm×100 mm，2.7 μm）；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：2.0 μL；流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為甲醇；流速：0.4 mL/min。梯度洗脫程序：0～1 min，5%B；1～5 min，5%～50%B；5～10 min，50%～95%B；10～15 min，95%B。

1.2.2 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜條件：可加熱的ESI源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），正離子掃描；進(jìn)樣體積：2 μL；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流量：7 mL/min；霧化氣壓力：0.28 MPa；鞘氣溫度：350℃；鞘氣流量：11 mL/min；其他質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

1.2.3 樣品前處理

稱取10 g土壤樣品至100 mL錐形瓶中，加入20 mL乙腈，在恒溫振蕩器上振蕩1 h，轉(zhuǎn)入離心管中離心3 min后靜置，制成待測(cè)液。

準(zhǔn)確量取稻田水50 mL，分別用30 mL、10 mL、10 mL二氯甲烷萃取3次。分出下層有機(jī)相，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮近干，甲醇定容至5 mL，制成待測(cè)液。

上述待測(cè)液無(wú)需凈化，吸取2 mL直接過(guò)0.22 μm濾膜后于進(jìn)樣小瓶保存，待測(cè)。

表1 質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)表

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確稱取阿維菌素等5種農(nóng)藥標(biāo)樣10 mg（精確至0.01 mg），用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成質(zhì)量濃度1 000 mg/L的標(biāo)樣母液。

取適量的標(biāo)樣母液用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度0.005～1.0 mg/L系列標(biāo)樣溶液，并進(jìn)樣檢測(cè)。以相應(yīng)農(nóng)藥標(biāo)樣溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

在0.005～1.0 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，阿維菌素等5種農(nóng)藥峰面積與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系（見(jiàn)表2）。5種農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)樣（0.01 mg/L）的總離子流圖如圖1所示。

表2 5種農(nóng)藥線性關(guān)系

圖1 5種農(nóng)藥總離子流圖

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)（Mi）是指從樣品中與目標(biāo)物同時(shí)提取出來(lái)的共萃物在分析時(shí)對(duì)目標(biāo)物分析產(chǎn)生的影響和干擾，包括基質(zhì)減弱和增強(qiáng)效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)通常與基質(zhì)種類、色譜分離條件、目標(biāo)分析物特性等諸多因素有關(guān)，可以按照下式進(jìn)行量化評(píng)價(jià)[11]。

｜Mi｜＜20%，為弱基質(zhì)效應(yīng)，可忽略，無(wú)需采取補(bǔ)償措施；20%≤｜Mi｜≤50%，為中等程度基質(zhì)效應(yīng)；｜Mi｜＞50%，為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。中等程度基質(zhì)效應(yīng)和強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)需要采取補(bǔ)償措施，通常采用的方法有基質(zhì)匹配標(biāo)樣溶液校正法和樣品稀釋法。

配制低、中、高3種質(zhì)量濃度（0.01 mg/L、0.1 mg/L、1.0 mg/L）基質(zhì)標(biāo)樣溶液，以及甲醇配制的同質(zhì)量濃度的純?nèi)軇?biāo)樣溶液，按上述公式進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 5種農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)參數(shù)

結(jié)果表明，5種農(nóng)藥在質(zhì)量濃度為0.1 mg/L和1.0 mg/L時(shí)，｜Mi｜＜20%，基質(zhì)效應(yīng)可忽略；而在低質(zhì)量濃度0.01 mg/L時(shí)，20%≤｜Mi｜≤70%，出現(xiàn)中等及以上程度基質(zhì)效應(yīng)，需要基質(zhì)標(biāo)樣溶液校正。因此，本文稻田土中低濃度添加回收率采用基質(zhì)標(biāo)樣溶液校正定量。

2.3 添加回收率

采用空白樣品添加法測(cè)定5種農(nóng)藥回收率。分別向土壤、水中添加一定體積的阿維菌素、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、嘧菌酯、噻嗪酮、茚蟲(chóng)威標(biāo)樣，使其質(zhì)量濃度為0.02,0.2,1.0 mg/L，按照上述方法進(jìn)行處理。在0.02～1.0 mg/L范圍內(nèi)，稻田土和水中阿維菌素回收率分別為82.89%～100.75%、87.55%～105.91%；變異系數(shù)分別2.63%～6.98%、2.75%～8.11%。氯蟲(chóng)苯甲酰胺回收率分別為96.71%～105.03%、91.72%～97.49%；變異系數(shù)分別為2.25%～4.20%、1.80%～2.82%。嘧菌酯回收率分別為107.23%～110.20%、91.66%～110.69%；變異系數(shù)分別為2.58%～5.83%、1.51%～8.83%。噻嗪酮回收率分別為106.58%～108.43%、94.28%～96.66%；變異系數(shù)分別為0.95%～4.94%、1.81%～3.31%。茚蟲(chóng)威回收率分別為109.95%～118.12%、94.33%～106.37%；變異系數(shù)分別為1.97%～7.36%、1.12%～9.37%（見(jiàn)表4）。結(jié)果表明，該方法達(dá)到農(nóng)藥殘留分析要求。

表4 稻田土及水中阿維菌素等5種農(nóng)藥的添加回收結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立了稻田土和水中阿維菌素、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、嘧菌酯、噻嗪酮、茚蟲(chóng)威等5種農(nóng)藥殘留高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。稻田土采用乙腈作為提取溶劑，振蕩提取1 h，離心后直接過(guò)膜檢測(cè)。稻田水經(jīng)二氯甲烷萃取，濃縮后甲醇定容直接過(guò)膜檢測(cè)。稻田土和水中各農(nóng)藥的回收率和變異系數(shù)均符合農(nóng)藥殘留試驗(yàn)要求。該方法無(wú)凈化步驟，具有分析速度快，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到稻田土、水中5種農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)的要求。

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