雞甲胺磷中毒性神經(jīng)肌病模型的建立及電生理研究

胡軼虹， 金梅香， 郭爾平， 江新梅

近年來(lái)人們關(guān)注急性有機(jī)磷中毒后引起遲發(fā)性周?chē)窠?jīng)病(organophosphate induced delayed neuropathy，OPIDN)的研究，本病多發(fā)生于急性中毒后20d左右，主要表現(xiàn)為感覺(jué)-運(yùn)動(dòng)性多發(fā)性神經(jīng)病，其特點(diǎn)為運(yùn)動(dòng)重于感覺(jué)，遠(yuǎn)端重于近端，下肢重于上肢，發(fā)生率5%左右［1］。有學(xué)者試圖以伴或不伴有感覺(jué)障礙將其分為“遲發(fā)性神經(jīng)炎”和“中毒性肌病”［2］，本文中仍延用“遲發(fā)性神經(jīng)病”。本病的發(fā)生與有機(jī)磷農(nóng)藥的種類(lèi)、中毒途徑及中毒量有關(guān)。本研究用甲胺磷使leghorn雞染毒，將在出現(xiàn)遲發(fā)性神經(jīng)病臨床表現(xiàn)前進(jìn)行神經(jīng)電生理檢測(cè)，并通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察電生理變化評(píng)估預(yù)后。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物來(lái)源及分組 萊亨母雞50只，雞齡8～14 個(gè)月，體重1．5 ±0．5kg，營(yíng)養(yǎng)良好，購(gòu)自長(zhǎng)春市生物制品所免疫室。隨機(jī)分為5組(n=10)，以同樣方式染毒，分別于第 1、2、3、4、8 周取材。

1．2 主要試劑 硫酸阿托品注射液購(gòu)自河北省鄭州獸藥廠，50%甲胺磷乳油購(gòu)自湖北沙隆達(dá)股份有限公司。實(shí)驗(yàn)用臺(tái)式液(試劑購(gòu)自北京化工廠):氯化鈉 8．0g，氯化鉀 0．2g，氯化鈣0．2g，碳酸氫鈉 1．0g，磷酸二氫鈉 0．05g，氯化鎂 0．1g，葡萄糖1．0 g，蒸餾水加至 1000ml。

1．3 動(dòng)物模型的建立 這些Leghorn雞實(shí)驗(yàn)前稱(chēng)重，單只飼養(yǎng)于底是鐵絲網(wǎng)眼的鐵絲籠(0．5×0．5×0．8m)之中，房間的溫度控制在21℃ ～23℃，每12h光照/12h黑暗為一個(gè)循環(huán)，甲胺磷用植物油溶解，濃度為5mg/ml，按2ml/kg體積通過(guò)套管直接灌入已斷食24h的雞素囊中，染毒的雞用阿托品保持度過(guò)急性期。

1．4 標(biāo)本的留取 分別于染毒后1、2、3、4、8w留取標(biāo)本。雞在腹腔注射水合氯醛麻醉下，固定在特制木板上，室溫25℃，下肢去皮，在髂關(guān)節(jié)處沿坐骨神經(jīng)走行鈍性剝離肌肉，用玻璃分針游離坐骨神經(jīng)，至膝關(guān)節(jié)分為脛神經(jīng)和腓神經(jīng)，于髂關(guān)節(jié)及膝關(guān)節(jié)兩處用小剪刀剪斷，取坐骨神經(jīng)長(zhǎng)約3cm浸于臺(tái)式液中，除去周?chē)窘M織，進(jìn)行電生理檢測(cè)。

1．5 主要儀器及電生理學(xué)檢測(cè)方法 連接Powerlab生物信號(hào)記錄儀(澳大利亞艾德公司生產(chǎn)，吉林大學(xué)生理實(shí)驗(yàn)室提供)各組件，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，予熱20～30min。將神經(jīng)屏蔽盒的所有電極用臺(tái)氏液棉球擦拭，然后用一臺(tái)氏液浸濕的棉線調(diào)試記錄儀。其后將神經(jīng)粗的一端放在刺激電極上，細(xì)的一端放在記錄電極上。蓋上屏蔽盒，在50Hz交流干擾小的情況下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。調(diào)節(jié)刺激強(qiáng)度，從0．1v開(kāi)始，逐漸增加刺激強(qiáng)度至產(chǎn)生雙向動(dòng)作電位，當(dāng)刺激強(qiáng)度增至1v，動(dòng)作電位不再加大，記錄刺激偽跡前沿到動(dòng)作電位起始處時(shí)間間隔即為潛伏期，動(dòng)作電位的上相波頂點(diǎn)與下相波的最低點(diǎn)之間的距離即為波幅。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度的測(cè)定基本同前，近端置于刺激電極上，遠(yuǎn)端置于兩個(gè)記錄電極上，兩記錄電極間距離為2．5cm，放大器有A、B兩組，示波器Y上和Y下條件一致(放大倍數(shù)均為500)，按刺激器起動(dòng)鈕可產(chǎn)生上下兩個(gè)動(dòng)作電位，用兩記錄電極間距離除以兩動(dòng)作電位潛伏期差即為神經(jīng)傳導(dǎo)速度。

1．6 臨床觀察 每日觀察遲發(fā)性神經(jīng)毒性的臨床體征，臨床OPIDN的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)依照1987年Robertson的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［3］，0級(jí):沒(méi)有體征;1級(jí):步態(tài)異常;2級(jí):動(dòng)物用后臀休息后但還能站立;3級(jí):完全癱瘓。

2 結(jié)果

2．1 模型死亡、體征變化 雞經(jīng)甲胺磷染毒后5～10min即表現(xiàn)萎靡、流涎、瞳孔縮小、喜臥，從第2天開(kāi)始有動(dòng)物死亡，共死亡6只，死亡時(shí)間為2～6d，實(shí)驗(yàn)組平均死亡率為12%。之后經(jīng)過(guò)1w左右的潛伏期，出現(xiàn)周?chē)窠?jīng)病的癥狀，動(dòng)物的表現(xiàn)開(kāi)始呈全身無(wú)力狀態(tài)，喜臥，后出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)，逐漸發(fā)展為站立困難，此期肌力下降表現(xiàn)為1級(jí)及2級(jí)，無(wú)完全癱瘓者，至4w完全恢復(fù)正常，總發(fā)病率為15．9%。

2．2 電生理檢測(cè)結(jié)果 染毒后1w，波幅有明顯降低，而運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度無(wú)明顯改變，提示周?chē)窠?jīng)早期以軸索損害為主。其后2、3w波幅逐漸升高，至第4周波幅已近恢復(fù)正常。染毒后2w出現(xiàn)潛伏期延長(zhǎng)，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢，提示出現(xiàn)脫髓鞘改變，至第8周運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度已恢復(fù)正常。電生理檢測(cè)陽(yáng)性率為90%(見(jiàn)表1)。

表1 坐骨神經(jīng)電生理動(dòng)態(tài)變化表(±s)

表1 坐骨神經(jīng)電生理動(dòng)態(tài)變化表(±s)

波幅1、2、3 與4、8w 間有顯著性差異 P ＜0．05;遠(yuǎn)端潛伏期1、8w 與2、3、4w 間有顯著性差異 P ＜0．05;運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度 1、8w 與 2、3、4w間有顯著性差異P＜0．05

1w 2w 3w 4w 8w波幅(mV)遠(yuǎn)端潛伏期(ms)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(m/s)5．98 ±0．71 0．99 ±0．08 28．21 ±2．70 4．87 ±1．83 1．25 ±0．09 21．56 ±1．48 10．60 ±1．14 1．24 ±0．23 21．52 ±3．73 12．06 ±0．46 1．26 ±0．09 20．76 ±1．70 11．75 ±1．17 1．08 ±0．11 24．83 ±2．50

3 討論

甲胺磷(又名多滅磷或克螨隆:Methamidophos/Tamaron，化學(xué)名 O，S-二甲基-硫代磷酰胺:OS-dimethylphosphoramidothiolate)屬硫代磷酸酯類(lèi)化合物，高毒，是一種高效、內(nèi)吸、觸殺、低殘留、廣譜性有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑，對(duì)人、畜高毒［4］。不同途徑包括消化道、呼吸道和皮膚接觸均可造成急性中毒，但以消化道中毒所致遲發(fā)性神經(jīng)病的機(jī)率最大。不同的有機(jī)磷農(nóng)藥引起的OPIDN有種屬特異性，以人類(lèi)和雞最為敏感，而嚙齒動(dòng)物則不敏感［5］。鑒于消化道染毒毒物劑量易于控制，雞對(duì)甲胺磷的敏感性高，我們本次實(shí)驗(yàn)選用萊亨母雞進(jìn)行甲胺磷染毒制成遲發(fā)性神經(jīng)病的動(dòng)物模型。萊亨母雞在染毒后1w出現(xiàn)周?chē)窠?jīng)電生理改變(陽(yáng)性率90%)，2w出現(xiàn)不同程度的步態(tài)異常(總發(fā)病率15．9%)，說(shuō)明我們成功的構(gòu)建了遲發(fā)性神經(jīng)病的動(dòng)物模型。

1987年Senanayake首次報(bào)道急性有機(jī)磷中毒后1～4d可發(fā)生一種以肌無(wú)力為突出表現(xiàn)的綜合征，因發(fā)病時(shí)間居于急性膽堿能危象和遲發(fā)性周?chē)窠?jīng)病之間被稱(chēng)為中間綜合征［6］，為有機(jī)磷中毒的主要病死原因。本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒后已用阿托品搶救度過(guò)急性期，死亡時(shí)間主要在2～6d的主要原因可能是中間綜合征。

聶淑敏等［7］提出中毒引起的周?chē)窠?jīng)變性，先影響最長(zhǎng)神經(jīng)的末稍端，而后慢慢地向中樞段擴(kuò)布。王海鳳對(duì)28例患者臨床及神經(jīng)肌電分析后，認(rèn)為有機(jī)磷殺蟲(chóng)藥中毒后遲發(fā)性神經(jīng)病是一種以軸索病變?yōu)橹鞯闹車(chē)\(yùn)動(dòng)神經(jīng)?。?］。本實(shí)驗(yàn)電生理檢測(cè)顯示染毒后1w出現(xiàn)波幅明顯降低，2w出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢，但比波幅改變輕，這與上述臨床分析完全吻合。中毒性變性的原發(fā)病變可能主要在胞體，是代謝性障礙，導(dǎo)致軸漿流中營(yíng)養(yǎng)成分減少，供應(yīng)末梢減少，很少有脫髓鞘變化。因此中毒變性時(shí)，主要表現(xiàn)為動(dòng)作電位波幅劇減，而運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度大多正?；蜉p度減慢。

趙寧軍等［9］對(duì)26例有機(jī)磷農(nóng)藥中毒致遲發(fā)性神經(jīng)病患者進(jìn)行電生理檢測(cè)，有5例出現(xiàn)早期電生理改變，明顯早于臨床體征的出現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)了與臨床相似的結(jié)果，即電生理改變(染毒后1w)明顯早于臨床體征(染毒后2w)的出現(xiàn)，電生理檢測(cè)的陽(yáng)性率(90%)也明顯高于臨床體征的陽(yáng)性率(15．9%)，而臨床體征的恢復(fù)(4w)也明顯早于電生理改變的恢復(fù)(8w)。因此，對(duì)有機(jī)磷殺蟲(chóng)藥中毒的患者急性中毒癥狀消失后，還應(yīng)密切觀察，及時(shí)了解有無(wú)遲發(fā)性周?chē)窠?jīng)損害。神經(jīng)電生理檢測(cè)可早期協(xié)助本病的診斷，應(yīng)定期檢查，同時(shí)對(duì)神經(jīng)修復(fù)的預(yù)后判定不能單純依靠臨床體征，應(yīng)結(jié)合電生理檢查綜合判定。

目前該病發(fā)病機(jī)制尚不明確，因此尚無(wú)特異的治療方法。李芳健等［10］對(duì)132例急性有機(jī)磷中毒者臨床結(jié)局2年后隨訪調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，中毒后1年內(nèi)OPIDP發(fā)生率為9．17%，其中僅5例赴醫(yī)院醫(yī)治，1例6個(gè)月后完全恢復(fù)，其余未經(jīng)醫(yī)院治療也有不同程度好轉(zhuǎn)。本實(shí)驗(yàn)在萊亨母雞染毒后，只應(yīng)用阿托品渡過(guò)急性期，未應(yīng)用其他藥物干預(yù)治療，臨床體征(4w)及電生理檢測(cè)(8w)均有不同程度的好轉(zhuǎn)，提示本病有自愈傾向。

［1］王漢斌，阮金秀．急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒致臟器損害與并發(fā)癥的防治［J］．中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2001，10:285 －287．

［2］吳祖舜，王小冬，程寶庚，等．實(shí)驗(yàn)性甲胺磷中毒的肌肉與神經(jīng)病理研究［J］．臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，1992，5:73 －75．

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［7］聶淑敏，劉向軍，解玉梅，等．有機(jī)磷中毒并發(fā)周?chē)窠?jīng)損害電生理分析［J］．實(shí)用醫(yī)技雜志，2004，11:2205．

［8］王海鳳．有機(jī)磷中毒后遲發(fā)性神經(jīng)病28例的臨床與神經(jīng)肌電圖分析［J］．臨床腦電學(xué)雜志，2000，9:232－233．

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［10］李芳健，何鳳生，崔樹(shù)偉，等．急性有機(jī)磷中毒者臨床結(jié)局2年后的隨訪調(diào)查［J］．中國(guó)公共衛(wèi)生，2004，20:731 －733．