3種抑菌劑在黃槐組培中的抑菌效果研究

安冰

摘要 本試驗(yàn)通過組織培養(yǎng)手段，以黃槐種子為材料，研究3種抑菌劑在無菌組織培養(yǎng)體系各階段中的抑菌效果和對(duì)苗木生長(zhǎng)的影響，尋找出各階段的最優(yōu)技術(shù)參數(shù)組合，形成完整的組培再生植株。結(jié)果表明，在黃槐組培的各個(gè)階段，愛力克、益培隆和益培靈均可有效減輕微生物污染，提高試驗(yàn)成效，降低試驗(yàn)成本。愛力克和益培靈更適合用于黃槐組培，濃度降低時(shí)，抑菌劑促進(jìn)組培苗的生長(zhǎng)；而濃度過高則呈現(xiàn)出抑制作用。

關(guān)鍵詞 黃槐；抑菌劑；組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào) Q94 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）02-0147-02

Study on Antibacterial Effect of Three Bacteriostats on Tissue Culture of Cassia surattensis Burm.

AN Bing

（Guangxi Paiyangshan State Forest Farm，Ningming Guangxi 532500）

Abstract This experiment adopted the system of micropropagation in Cassia surattensis Burm. to study the antibacterial effect of three bacteriostats，the suitable medium in each stage had been found out，and the test-tube plant was well. The results showed that at each stage of the group，Ailike，Yipeilong and Yipeiling could effectively reduce microbial contamination，improve test results and reduce test costs. Ailike and Yipeiling were more suitable for the tissue culture of Cassia surattensis Burm.，and when the concentration was reduced，the bacteriostat promoted the growth of the tissue culture，while the concentration was too high，which showed the inhibitory effect.

Key words Cassia surattensis Burm.；bacteriostat；tissue culture

黃槐（Cassia surattensis Burm.），蘇木科決明屬喬木，是優(yōu)良的綠化觀賞植物，藥用價(jià)值高，其果實(shí)富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、多種維生素和礦物質(zhì)，其性味微溫甜，具有和血、健脾、滋陰功效，清肝明目，利水通便，有緩瀉作用，降血壓、降血脂，有很好的減肥保健功效[1-2]。

黃槐種植廣泛，主要通過播種和扦插方式繁育[3-4]，種質(zhì)來源參差不齊、優(yōu)劣混雜，選育技術(shù)不完備。組培快繁技術(shù)有助于解決良種缺乏問題，并為種質(zhì)資源開發(fā)提供技術(shù)支撐，達(dá)到優(yōu)良遺傳材料的良種快繁、基因工程植株的快速繁殖和離體種子的快速繁殖等。目前，關(guān)于決明屬植物通過組織培養(yǎng)獲得再生植株的報(bào)道鮮少，關(guān)于黃槐組織培養(yǎng)的報(bào)道更少[5]。

近些年來，組培技術(shù)的工廠化生產(chǎn)技術(shù)趨于成熟，應(yīng)用廣泛，在生產(chǎn)出大量幼苗的同時(shí)，使植物繁育逐步擺脫周期長(zhǎng)、完全受控于自然環(huán)境的分散狀態(tài)，走向集控化、自動(dòng)化、擺脫自然因素制約的工廠化生產(chǎn)。盡管組培理論研究已經(jīng)非常精深，但依舊面臨很多技術(shù)瓶頸和關(guān)卡，例如褐化、玻璃化和污染三大殺手。其中污染的原因復(fù)雜，貫穿整個(gè)組培環(huán)節(jié)，涉及組培材料、技術(shù)、試劑、人員、內(nèi)外環(huán)境等諸多因素，始終是制約其發(fā)展的一個(gè)難題，亟待研究解決[6]。

本文以黃槐種子為材料，探尋新型抑菌劑在組織培養(yǎng)過程中的應(yīng)用，旨在解決外植體誘導(dǎo)過程中污染率居高不下的難題，降低無菌體系中污染給科研和生產(chǎn)帶來的巨大危害，提高組織培養(yǎng)的成功率和效率。本設(shè)計(jì)中所使用的愛力克、益培隆和益培靈均為新型組織培養(yǎng)專用防污染殺菌劑，具有長(zhǎng)效、廣譜和高活性的優(yōu)勢(shì)，其作用機(jī)理為穿透微生物的細(xì)胞壁，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，通過斷開微生物關(guān)鍵蛋白質(zhì)的鍵或與核酸堿基結(jié)合、干擾復(fù)制，從而起到殺菌作用。目前在植物組培類論文中應(yīng)用很少，其滅菌效果顯著，但使用濃度及其對(duì)植物生長(zhǎng)狀況的影響尚不清楚，有待于進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)以黃槐種子（Moringa oleifera Lam.）為材料，試驗(yàn)所用抑菌劑愛力克、益培隆和益培靈購(gòu)自上海宇涵生物科技有限公司。培養(yǎng)基pH值為5.5～5.6，在121 ℃高溫下滅菌15 min后備用。滅菌后的材料接種到培養(yǎng)基上，置于光強(qiáng)3 000 lx、溫度25 ℃條件下培養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。所有試驗(yàn)處理的空白對(duì)照都不添加抑菌劑，其他均與處理設(shè)計(jì)一致。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體消毒階段

試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，可以看出，在外植體消毒階段，使用愛力克，處理C為最佳處理濃度。與空白對(duì)照相比，雖然處理C的灼傷率是空白對(duì)照的2.2倍，但空白對(duì)照的污染率是處理C的5.2倍、萌芽率只有處理C的51%，效果顯著。說明愛力克可有效降低污染率、提高萌芽率，提高外植體誘導(dǎo)試驗(yàn)的成效。與此同時(shí)，愛力克對(duì)黃槐種子具有一定的傷害，要把握好處理濃度和時(shí)間。

2.2 外植體誘導(dǎo)階段endprint

在外植體誘導(dǎo)階段，處理D的保存率和萌芽率最高。其保存率分別較處理A、B、C、E、F高出78%、112%、147%、1%和20%，萌芽率分別比處理A、B、C、E、F高出32%、47%、78%、5%和11%。因此，處理D為最佳選擇。同時(shí)可知，益培靈效果優(yōu)于益培隆。試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，使用益培靈的3個(gè)處理保存率和萌芽率平均值分別為84%和87%，而益培隆分別為43%和61%，這與空白對(duì)照的數(shù)據(jù)41%和58%相比，說明使用益培隆不適合外植體誘導(dǎo)，并出現(xiàn)了玻璃化和愈傷團(tuán)；而益培靈可有效防止污染，并有利于誘導(dǎo)芽的萌發(fā)，減少內(nèi)生菌的污染。

2.3 增殖培養(yǎng)階段

在增殖培養(yǎng)階段，數(shù)據(jù)顯示使用益培靈的3個(gè)處理增殖個(gè)數(shù)、莖芽伸長(zhǎng)和污染率平均值分別為13.7個(gè)、7.2 cm和9%，而益培隆分別為5.4個(gè)、4.6 cm和19%，這與空白對(duì)照的數(shù)據(jù)6.1個(gè)、5.8 cm和40%相對(duì)比，說明使用益培隆雖然污染率較空白對(duì)照低52.5%，但增殖個(gè)數(shù)和莖芽伸長(zhǎng)分別較空白對(duì)照低11%和21%，不適用于黃槐組培。益培靈處理的增殖個(gè)數(shù)和莖芽伸長(zhǎng)分別較空白對(duì)照高125%、24%，而污染率較對(duì)照低78%，可有效降低污染，提高增殖個(gè)數(shù)，適宜用于黃槐增殖培養(yǎng)，其中處理D為最佳選擇。在增殖過程中，益培靈濃度不宜過高，過高的濃度雖然可以降低污染率，但同時(shí)也會(huì)抑制莖芽伸長(zhǎng)和生長(zhǎng)。

2.4 生根培養(yǎng)階段

在生根培養(yǎng)階段，使用益培隆的3個(gè)處理根長(zhǎng)、苗高、生根率和污染率平均值分別為3.2 cm、4.3 cm、73%和9%，而益培靈分別為5.5 cm、6.5 cm、95%和5%，這與空白對(duì)照的數(shù)據(jù)4.8 cm、5.6 cm、85%和19%相比，得出與增殖階段相同的結(jié)論。在益培靈處理的3個(gè)對(duì)比中，處理E、F污染率最低，但處理E的根長(zhǎng)、苗高和生根率分別比處理F高10%、11%和1%，其苗木生長(zhǎng)狀況更優(yōu)良，長(zhǎng)勢(shì)均茁壯，為最適宜處理。

3 結(jié)論與討論

在黃槐組織培養(yǎng)的各個(gè)階段，愛力克、益培隆和益培靈均可有效減輕微生物污染，降低污染率，提高試驗(yàn)成效，降低試驗(yàn)成本，這與其他類似試驗(yàn)結(jié)果一致[7]。本試驗(yàn)中使用的愛力克、益培隆和益培靈均為新型組織培養(yǎng)專用防污染殺菌劑，其作用機(jī)理不同，愛力克和益培靈更適合用于黃槐的組織培養(yǎng)，在試驗(yàn)中，把握處理濃度和時(shí)間很重要。濃度降低時(shí)，抑菌劑可促進(jìn)組培苗的生長(zhǎng)；而濃度過高，則呈現(xiàn)出抑制作用，這與其他植物的類似組織培養(yǎng)試驗(yàn)研究結(jié)果一致[8-9]。

組織培養(yǎng)由于條件可控，故不受季節(jié)限制可全年生產(chǎn)，利用組培技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)優(yōu)良無性系或單株迅速繁育推廣，且不改變其遺傳特性，保持原有優(yōu)良性狀不變。組織培養(yǎng)技術(shù)有望建立“種質(zhì)銀行”或“基因庫”，便于種質(zhì)資源保存和交流，加速優(yōu)良品種的繁育與推廣，縮短育種周期，獲得常規(guī)育種難以或無法得到的新基因型，創(chuàng)造新的物種或品種。

組培過程中造成污染的原因及影響因素眾多，一直是該項(xiàng)技術(shù)的大敵，外植體表面和內(nèi)部常攜帶微生物，是組織培養(yǎng)過程的主要污染源[10-12]，而其內(nèi)生菌消毒要比表面消毒更復(fù)雜[13]。因此，篩選出適宜的抑菌劑，是組培過程中事半功倍的選擇，可以有效提高成功率、降低成本，在工廠化育苗中則更有優(yōu)勢(shì)。

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