補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓大鼠血壓及骨橋蛋白表達(dá)的影響

遲偉峰，紀(jì)艷珍，付 燕，聶穎穎

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補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓大鼠血壓及骨橋蛋白表達(dá)的影響

遲偉峰，紀(jì)艷珍，付 燕，聶穎穎

目的 探討補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓(ISH)模型大鼠血壓及骨橋蛋白(OPN)表達(dá)的影響。方法 采用WVK法復(fù)制ISH大鼠模型，分為補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組、中西藥聯(lián)用組、空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，予以相應(yīng)的藥物干預(yù)，8周后檢測(cè)各組大鼠血壓、主動(dòng)脈中膜厚度及OPN表達(dá)。結(jié)果 補(bǔ)腎活血法能夠降低大鼠收縮壓、縮小大鼠主動(dòng)脈中膜厚度，減低OPN蛋白的表達(dá)，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中西藥聯(lián)用組效果更明顯。結(jié)論 補(bǔ)腎活血法能夠通過降低血壓，減低OPN蛋白的表達(dá)，從而改善動(dòng)脈中膜厚度，減少血管重塑。

單純收縮期高血壓；補(bǔ)腎活血法；血管重塑；骨橋蛋白；眩暈

高血壓是心血管疾病的危險(xiǎn)因素，可以影響血管壁結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致器官功能障礙，而引起心血管疾病發(fā)生[1-3]。單純收縮期高血壓(ISH) 是以收縮壓增高和脈壓增大為特點(diǎn)的一種特殊類型的高血壓，常見于60歲以上人群，具體指收縮壓≥140 mmHg，舒張壓<90 mmHg，其發(fā)生常與血管重塑有關(guān)[4]：如動(dòng)脈中層彈力纖維減少，鈣質(zhì)沉著增加，血管僵硬度增加、彈性下降，血管順應(yīng)性降低等。本研究根據(jù)老年人中醫(yī)辨證腎虛血瘀及多發(fā)ISH的特點(diǎn)，探討補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期實(shí)驗(yàn)大鼠血管重塑的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取健康6周～7周齡 Wistar-Kyoto雄性大鼠(WKY)50只，SPF級(jí)，體重175 g～200 g，由青島市藥物檢驗(yàn)研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(魯)20090007。大鼠飼養(yǎng)于青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)動(dòng)物房，金屬鼠籠，分籠飼養(yǎng)，每籠5只，保持室內(nèi)環(huán)境恒溫(19 ℃±3 ℃)，濕度50%～60%，通風(fēng)良好，標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由進(jìn)食飲水。

1.2 藥物與試劑 補(bǔ)腎活血湯(BSHXD)藥物組成：生熟地各20 g，山萸肉15 g，茯苓15 g，澤瀉30 g，丹皮12 g，菟絲子20 g，益母草15 g，當(dāng)歸15 g，鉤藤15 g，仙靈脾6 g，由青島海慈醫(yī)療集團(tuán)藥劑科中藥制劑室制備，濃度為生藥92 g/L，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按照2010版《中國藥典》；苯磺酸氨氯地平片，每片5 mg，大連輝瑞制藥有限公司(國藥準(zhǔn)字號(hào)：H10950224)；華法林鈉片，每片2.5 mg，山東齊魯制藥有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字號(hào)：H37021314)；維生素K1注射液，每支10 mg/mL，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字號(hào)：H37021988)。大鼠骨橋蛋白(osteopontin，OPN)Western-blot試劑盒(030906)，上海長島生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 模型制備 應(yīng)用華法林和維生素K(WVK)誘導(dǎo)動(dòng)脈中層鈣化法[2]。華法林鈉片研成粉末，蒸餾水配成懸濁液，按照華法林鈉片15 mg/(kg·d)灌胃，每天1次；予以維生素K1注射液，按10 mg/(kg·d)背部皮下注射，每天1次。維生素K1比華法林提前1周用藥，每2周測(cè)量并記錄血壓1次，6周后判定造模結(jié)果。收縮壓升高并持續(xù)大于18.67 kPa(140 mmHg)為造模成功。

1.4 方法

1.4.1 分組及給藥 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為5組。隨機(jī)選取其中的10只做空白對(duì)照組，其余40只進(jìn)行高血壓造模。按隨機(jī)數(shù)字表法分為補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組、補(bǔ)腎活血湯與氨氯地平聯(lián)用組(中西藥聯(lián)用組)、模型對(duì)照組，每組10只。

根據(jù)人和動(dòng)物間按體表面積折算的等效劑量分別灌胃給藥。補(bǔ)腎活血湯組給予補(bǔ)腎活血湯1.83 g/(kg·d)；氨氯地平組給予氨氯地平25 mg/(kg·d)；中西藥聯(lián)用組給予補(bǔ)腎活血湯1.83 g/(kg·d)和氨氯地平25 mg/(kg·d)；空白對(duì)照組及模型對(duì)照組給予蒸餾水10 mL/(kg·d)，每日1次，給藥8周。

1.4.2 指標(biāo)檢測(cè)

1.4.2.1 血壓測(cè)量 實(shí)驗(yàn)開始后，將造模成功后的大鼠灌胃，每?jī)芍軠y(cè)收縮壓1次，共8周。采用大鼠血壓檢測(cè)儀測(cè)量大鼠收縮壓1次，具體操作為：將大鼠放入固定盒中，先加熱保溫10 min，待大鼠情緒平穩(wěn)后，通過尾動(dòng)脈測(cè)量血壓，記錄血壓數(shù)值，監(jiān)測(cè)血壓變化。

1.4.2.2 胸主動(dòng)脈中膜厚度測(cè)量 大鼠取血后迅速解剖、分離，切取胸主動(dòng)脈，用生理鹽水充分沖洗，吸水紙吸干水分，用甲醛溶液固定，乙醇梯度脫水，浸蠟包埋，備用。HE染色，光鏡下觀察胸主動(dòng)脈病理變化，采用KS400醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)測(cè)量胸主動(dòng)脈中膜厚度。

1.4.2.3 Western-blot法檢測(cè)OPN 動(dòng)物處死，將主動(dòng)脈(從主動(dòng)脈弓到腎動(dòng)脈)取出，用無菌PBS沖洗，去除外膜組織，放入-80 ℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?yán)格按操作步驟進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠收縮壓比較 藥物干預(yù)8周后，氨氯地平組及中西藥聯(lián)用組收縮壓與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而補(bǔ)腎活血湯組收縮壓下降程度與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但降壓程度不及中西藥聯(lián)用組及氨氯地平組。詳見表1。

2.2 各組大鼠胸主動(dòng)脈中膜厚度比較 鏡下空白對(duì)照組胸主動(dòng)脈管壁內(nèi)膜、中膜無明顯增厚，管腔無明顯擴(kuò)大；模型對(duì)照組管壁內(nèi)膜、中膜均有增厚，以中膜為主，較空白對(duì)照組明顯增厚，管腔狹窄變形；各治療組胸主動(dòng)脈管壁較模型對(duì)照組均有不同程度的改變。用醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)測(cè)量胸主動(dòng)脈中膜厚度，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組胸主動(dòng)脈中膜厚度明顯增厚，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組及中西藥聯(lián)用組中膜厚度均變薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組、中西藥聯(lián)用組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

2.3 Western-blot法檢測(cè)OPN 各組各時(shí)相點(diǎn)均有OPN的陽性擴(kuò)增條帶?？瞻讓?duì)照組OPN陽性表達(dá)最強(qiáng)，模型對(duì)照組表達(dá)最弱；而補(bǔ)腎活血組與氨氯地平組表達(dá)相似，較中西藥聯(lián)用組降低；中西藥聯(lián)用組與空白對(duì)照組OPN表達(dá)均較少。補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組OPN表達(dá)與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中西藥聯(lián)用組OPN表達(dá)與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

組別nOPN收縮壓(kPa)胸主動(dòng)脈中膜厚度(μm)空白對(duì)照組100.78±0.1210.35±0.8187.01±7.21模型對(duì)照組80.24±0.092)18.41±1.382)109.55±8.522)補(bǔ)腎活血湯組9 0.56±0.191)3)13.58±1.651)96.38±6.323)氨氯地平組10 0.60±0.151)3)12.44±1.212)95.33±5.893)中西藥聯(lián)用組90.68±0.113)11.11±0.893) 92.36±5.952)3) 與空白對(duì)照組比較,1)P<0.05,2)P<0.01;與模型對(duì)照組比較,3)P<0.05。

3 討 論

ISH根據(jù)其臨床表現(xiàn)在中醫(yī)診斷為眩暈?！鹅`樞·海論》中指出：“髓海不足，則腦轉(zhuǎn)耳鳴，脛酸眩冒，目無所見，懈怠安臥”。故《內(nèi)經(jīng)》以腎虛及髓海不足立論，《傷寒論》中真武湯開辟了從腎虛角度論治眩暈之先河。清末唐容川總結(jié)了血瘀所致眩暈的治療大法，重點(diǎn)介紹了以重劑活血化瘀之品治療眩暈的經(jīng)驗(yàn)。這些論述都為后世從“腎虛血瘀”角度治療眩暈病提供了重要的理論依據(jù)。單純收縮期高血壓多見于老年病人，老年病人年過半百，天癸衰竭，腎為先天之本，為五臟之根本，腎虛日久則心氣不足，心氣虛則不能行血，氣血運(yùn)行不暢而致血瘀，腎虛和血瘀相互影響，腎虛為本，血瘀為標(biāo)，由虛致瘀，而血瘀的存在又加重了腎虛。因此腎虛血瘀是老年人單純收縮期高血壓病的根本病機(jī)。

ISH的發(fā)生主要與動(dòng)脈僵硬度增加有關(guān)。隨著年齡的增長，老年人大動(dòng)脈的結(jié)構(gòu)也發(fā)生了變化：如動(dòng)脈中層彈力纖維減少，膠原含量及鈣質(zhì)沉著增加，血管僵硬度增加、彈性下降，血管順應(yīng)性降低等。本實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)腎活血法具有良好的減少胸主動(dòng)脈中膜厚度的作用，從而減少血管重塑。

骨橋蛋白是一種酸性磷酸化糖蛋白，最初認(rèn)為是一種骨基質(zhì)，由成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞分泌，參與骨的吸收與形成。Giachelli等首次揭示了OPN在心血管病中的可能作用，證實(shí)其參與動(dòng)脈粥樣硬化(AS)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)后再狹窄、高血壓等疾病引起的血管重構(gòu)(VR)過程，OPN可以直接或間接增強(qiáng)血管外膜成纖維細(xì)胞的遷移活性，導(dǎo)致血管重構(gòu)。有研究表明高血壓早期過程中，OPN表達(dá)有明顯的升高[5]。本實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)腎活血湯可以降低OPN的水平，從而通過抑制OPN表達(dá)起到改善血管重塑的作用。

綜上所述，補(bǔ)腎活血法能夠通過縮小胸主動(dòng)脈中膜厚度、減低動(dòng)脈組織鈣含量，降低OPN表達(dá)水平而達(dá)到減少血管重塑的作用。

[1] Sliwa K，Stewart S，Gersh BJ.Hypertension：a global perspective[J].Circulation，2011，123(24)：2892-2896.

[2] Toth P，Tucsek Z，Sosnowska D，et al.Age-related autoregulatory dysfunction and cerebromicrovascular injury in mice with angiotensin Ⅱ-induced hypertension[J].J Cereb Blood Flow Metab，2013，33(11)：1732-1742.

[3] Polichnowski AJ，Griffin KA，Long J，et al.Blood pressure-renal blood flow relationships in conscious angiotensin Ⅱ- and phenylephrine-infused rats[J].Am J Physiol Renal Physiol，2013，305(7)： F1074-1084.

[4] 宋業(yè)琳，魏陵博，于廣宇，等.補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓大鼠血管重塑的影響[J].中國中醫(yī)急癥，2013，22(8)：1298-1322.

[5] 王吉靜，李玉琳，王月麗，等.高血壓多小鼠骨橋蛋白表達(dá)的影響[J].中國分子心臟病學(xué)雜志，2014，14(1)：830-833.

(本文編輯郭懷印)

The Influence of Kidney-tonifying and Blood-activating Therapy on Blood Pressure and Osteopontin in Rats with Isolated Systolic Hypertension (ISH)

Chi Weifeng，Ji Yanzhen，F(xiàn)u Yan，Nie Yingying

Qingdao Haici Medical Group,Qingdao 266033,Shandong，China

Nie Yingying

Objective To observe the influence of kidney-tonifying and blood-activating therapy on blood pressure and osteopontin (OPN) in rats with isolated systolic hypertension(ISH).Methods ISH rat model was established by WVK method and divided into Bushen Huoxue decoction (BHD) group，amlodipine group，BHD plus amlodipine combination group(two drugs combination group)，and blank control group，model control group.After 8 weeks，blood pressure，aortic medial thickness and OPN protein expression were detected.Results The systolic blood pressure，aortic medial thickness and OPN protein expression reduced in BHD group and combination group compared with model control group(P<0.05)，which was lower in combination group than that in BHD group.Conclusion Kidney-tonifying and blood-activating therapy can reduce vascular remodeling by lowering blood pressure and down-regulating the protein expression of OPN，thereby improve the aortic medial thickness.

isolated systolic hypertension；kidney-tonifying and blood-activating therapy；vascular remodeling；osteopontin；vertigo

山東省青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)(山東青島 266033)

聶穎穎，E-mail：momo0820@163.com

R544.1 R285.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.01.009

1672-1349(2017)01-0034-03

2016-06-21)

引用信息：遲偉峰，紀(jì)艷珍，付燕，等.補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓大鼠血壓及骨橋蛋白表達(dá)的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(1)：34-36.