胚胎移植技術(shù)在牛羊品種改良工作中的現(xiàn)狀及發(fā)展建議

烏麗江·巴合達(dá)吾列提

（新疆新源縣草原工作站，新源 835800）

1 胚胎移植技術(shù)在牛羊品種改良中的發(fā)展現(xiàn)狀

20世紀(jì)90年代生物工程誕生，經(jīng)過(guò)多年發(fā)展，已經(jīng)成為生命科學(xué)中不可缺少的一環(huán)，是21世紀(jì)的高精尖技術(shù)之一。1890年首次胚胎移植試驗(yàn)，在活體兔子成功完成。經(jīng)過(guò)無(wú)數(shù)的試驗(yàn)、校對(duì)、更正，幾十年后，終于成功的將胚胎移植技術(shù)運(yùn)用到牛羊試驗(yàn)中。隨著胚胎移植技術(shù)的不斷發(fā)展，20世紀(jì)60年代，許多發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)牛羊的胚胎采集、移植以及保存等關(guān)鍵技術(shù)投入了大量的試驗(yàn)，并準(zhǔn)備將胚胎移植技術(shù)運(yùn)用到實(shí)際生產(chǎn)中。20世紀(jì)70年代，陸續(xù)的有發(fā)達(dá)國(guó)家將胚胎移植技術(shù)運(yùn)用到生產(chǎn)的實(shí)際應(yīng)用階段。隨著胚胎移植技術(shù)的不斷發(fā)展，胚胎移植技術(shù)的程序不斷得到簡(jiǎn)化，從最開(kāi)始的臨床試驗(yàn)性質(zhì)的手術(shù)、到常見(jiàn)普通手術(shù)、慢慢發(fā)展到了農(nóng)場(chǎng)非手術(shù)型，成為牛羊品種改良不可缺少的手段。

首先將供體和受體實(shí)施到同期化，確保供體和受體同時(shí)進(jìn)入發(fā)情期。使用FSH、PMSG或其他的促性腺激素適時(shí)適量注射，促進(jìn)供體超數(shù)排卵，并由專業(yè)的人工授精技術(shù)員進(jìn)行人工配種。隨后在供體接受配種的7 d后，用簡(jiǎn)單的非手術(shù)法移植到受體體內(nèi)，由于非手術(shù)法較簡(jiǎn)單，且不需要手術(shù)進(jìn)行，可以直接在牛羊舍內(nèi)進(jìn)行胚胎移植。正常情況下母牛的平均沖卵數(shù)為每次每只5枚。目前的受孕率實(shí)際情況，鮮胚胎受孕率約為65%，而冷凍胚胎略低約為50%。而國(guó)外的技術(shù)相對(duì)比較成熟，手術(shù)后鮮胚胎受孕率約為80%，非手術(shù)鮮胚胎受孕率約為65%，而冷凍胚胎的受孕率相對(duì)鮮胚胎的受孕率相對(duì)較低。由于技術(shù)的不成熟，按照母牛的平就排卵數(shù)，和國(guó)內(nèi)外的胚胎移植技術(shù)的受孕率，即每有一只排卵母牛，國(guó)外的技術(shù)就相對(duì)比我國(guó)技術(shù)多生產(chǎn)一枚受精卵[1]。但我國(guó)的胚胎移植技術(shù)的發(fā)展較比很多發(fā)達(dá)國(guó)家要晚很多年，有很大的發(fā)展空間，隨著國(guó)家對(duì)技術(shù)的不斷重視，胚胎移植技術(shù)得到了迅速發(fā)展，胚胎的冷凍、分割等技術(shù)成功試驗(yàn)，胚胎性別鑒定、核移植等技術(shù)也得到了重大突破。隨著國(guó)家對(duì)胚胎移植技術(shù)的重視程度的提高，前沿科學(xué)經(jīng)費(fèi)不斷投入，我國(guó)的胚胎移植技術(shù)將得到更多更大的突破，為牛羊的品種改良、生產(chǎn)提供更堅(jiān)強(qiáng)的后盾。

胚胎移植技術(shù)的基本流程包括以下幾點(diǎn)：受體和供體的選擇、調(diào)整同步；供體超數(shù)排卵；專業(yè)配種；受體同步發(fā)情期；檢肛；胚胎的采集、移植、保存與回收。

2 胚胎移植技術(shù)

2.1 超數(shù)排卵與卵子回收技術(shù)

2.1.1 超數(shù)排卵的技術(shù)

超數(shù)排卵的技術(shù)目前主要有2種，都是采用促性腺激素。常用的是PSH法與PMSG+前列腺素法。PSH法是在發(fā)情期9 d注射FSH，而后逐漸遞減用量，每日遞減1 mg。而后每間隔12 h肌肉注射1次，每日2次，連續(xù)注射4 d?？倓┝堪凑张．?dāng)前體重做出對(duì)應(yīng)的改動(dòng)，但總劑量最低不低于400大數(shù)單位，最高不超過(guò)500大數(shù)單位。

PMSG+前列腺素法是在發(fā)情期的第11 d，肌肉注射PSMG。在注射PSMG后的48 h后，肌肉注射一次PGF。PMSG按照5U/kg·bw確定首次注射量，而PGF用量為2～4 mL。在發(fā)情后的12 h和18 h各進(jìn)行一次人工授精。兩者相比較PSH方法比較繁瑣，PMSG+前列腺素法相對(duì)簡(jiǎn)潔，但是PSH方法的排卵數(shù)相對(duì)較多[2]。

2.1.2 影響超數(shù)排卵的因素

影響超數(shù)排卵的因素的主要因素有以下幾點(diǎn)：遺傳差異、用藥劑量、藥品批號(hào)、不同促排卵方法、注射時(shí)間到發(fā)情期的間隔。

（1）遺傳因素對(duì)超數(shù)排卵的影響

遺傳差異引起的超數(shù)排卵也有差異，不同品種對(duì)超數(shù)排卵的反應(yīng)不同，其中肉用品種對(duì)超數(shù)排卵的促性腺激素的耐受度較高，奶用品種的排卵數(shù)會(huì)相對(duì)增加部分。

（2）用藥劑量對(duì)超數(shù)排卵的影響

超數(shù)排卵的排卵平均數(shù)、變異系數(shù)會(huì)隨著用藥劑量的增加呈現(xiàn)出遞增趨勢(shì)。用藥劑量過(guò)高會(huì)引起持久卵泡比例增加。

（3）藥品批號(hào)對(duì)超數(shù)排卵的影響

通過(guò)基因工程方法生產(chǎn)的不同批次的同一種藥品對(duì)超數(shù)排卵可以回出現(xiàn)上下浮動(dòng)的情況。

（4）不同促排卵方法對(duì)超數(shù)排卵的影響

PSH法與PMSG+前列腺素法屬于兩種常見(jiàn)的超數(shù)排卵的方法，兩者中PSH法雖然步驟繁瑣，但是相對(duì)比較排卵的數(shù)量較多，有效的生產(chǎn)效率。

（5）注射時(shí)間到發(fā)情期的間隔對(duì)超數(shù)排卵的影響

注射PMSG到發(fā)情期的間隔，在5 d左右時(shí)，排卵數(shù)最高。但是由于發(fā)情期的周期長(zhǎng)度不同，導(dǎo)致掌握不到準(zhǔn)確的注射時(shí)間，主要可以通過(guò)注射前列腺素或者其他類似物，將黃體迅速溶解，從而相對(duì)控制發(fā)情周期。

2.1.3 影響超數(shù)排卵的卵子回收因素

影響超數(shù)排卵的卵子回收因素主要分為以下3點(diǎn)：排卵到回收的時(shí)間間隔；回收卵的受精率；超數(shù)排卵的程度。

（1）排卵到回收的時(shí)間間隔對(duì)卵子回收的影響

發(fā)情期后的前2 d的卵子回收率較低，到3～6 d期間內(nèi)卵子回收率達(dá)到峰值，6 d后不斷降低。

（2）回收卵的受精率對(duì)卵子回收的影響

平均每頭可以獲得約4個(gè)受精卵，回收卵的受精率波動(dòng)較大在50%～80%之間。

（3）超數(shù)排卵的程度對(duì)卵子回收的影響

隨著藥劑量增加到峰值后，卵子回收率開(kāi)始逐漸呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。

2.1.4 超數(shù)排卵的價(jià)值

超數(shù)排卵是胚胎移植技術(shù)中的關(guān)鍵點(diǎn)，排卵的數(shù)量與卵子回收會(huì)直接的影響胚胎移植技術(shù)的效率。所以提高單次排卵的數(shù)量、提高卵子的回收率，會(huì)直接拉升胚胎移植技術(shù)的效率，節(jié)約時(shí)間成本。

2.2 胚胎保存技術(shù)

早期的胚胎，穩(wěn)定性較差，容易被溫度損害。胚胎的冷凍保存對(duì)胚胎移植的應(yīng)用起到了不可或缺的作用，并且對(duì)遺傳資源的保護(hù)、保存也起到了關(guān)鍵作用。目前冷凍保護(hù)劑主要使用的是二甲基亞砜，部分地區(qū)使用甘油代替。通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，將鮮胚胎的冷凍溫度定位在10℃，胚胎的穩(wěn)定性最佳，受損程度最低。胚胎在處于囊胚期的階段冷凍保存效果最佳，可以有效提高胚胎保存的有效率。目前伊犁州的胚胎冷凍設(shè)備、冷凍保護(hù)劑、基礎(chǔ)建設(shè)以及冷凍程序都沒(méi)有得到完善，需要向其他發(fā)達(dá)國(guó)家學(xué)習(xí)、改進(jìn)。

2.3 胚胎分割技術(shù)

胚胎的分割目的分為兩項(xiàng)：增加胚胎利用率、性別鑒定。胚胎分割主要是將一個(gè)原始胚胎，分割成兩個(gè)或者以上的獨(dú)立胚胎，可以獨(dú)立養(yǎng)成、成長(zhǎng)為單個(gè)生命體，從而極大的增加胚胎的利用率，可以降低生產(chǎn)的基礎(chǔ)成本。同時(shí)可以進(jìn)行性別鑒定，提早確認(rèn)胚胎的性別可以將無(wú)用性別剔除，確保單次生產(chǎn)統(tǒng)一性別。例如奶用牛羊品種，在生產(chǎn)過(guò)程中，母系個(gè)體起到了決定性作用，所以提前將母系個(gè)體選出進(jìn)行胚胎移植，可以極大地提高母系個(gè)體的數(shù)量，從而增加生產(chǎn)力，提高企業(yè)的生產(chǎn)效率。胚胎的分割技術(shù)主要核心技術(shù)為分割技術(shù)和保護(hù)液兩部分，目前我國(guó)的胚胎分割技術(shù)處于國(guó)際領(lǐng)先地位，分割后的胚胎發(fā)育率高達(dá)80%左右。

3 胚胎移植技術(shù)存在的問(wèn)題及發(fā)展建議

伊犁州在胚胎移植技術(shù)發(fā)展時(shí)間過(guò)短，所以處于相對(duì)落后狀態(tài)、技術(shù)沒(méi)有得到大面積推廣。而伊犁州胚胎移植技術(shù)由于沒(méi)有規(guī)?；瑥亩斐稍O(shè)備相對(duì)落后、不穩(wěn)定，所以部分的胚胎，需要通過(guò)國(guó)外進(jìn)口的渠道獲取，這極大的提高了生產(chǎn)成本。從技術(shù)角度看，缺乏足夠的試驗(yàn)數(shù)據(jù)；對(duì)發(fā)情期處理不足，從而造成無(wú)法確定最佳移植時(shí)間；品種雜亂，造成超數(shù)排卵的藥品選擇和劑量無(wú)法精準(zhǔn)；性別鑒定技術(shù)沒(méi)有完全使用到實(shí)際生產(chǎn)中；管理技術(shù)不足；沒(méi)有高精尖的設(shè)備和足夠的操作技術(shù)人員等都成為伊犁州當(dāng)前的胚胎移植技術(shù)發(fā)展和推廣的重要難題。針對(duì)胚胎移植技術(shù)對(duì)牛羊品種的改進(jìn)主要應(yīng)從以下幾點(diǎn)進(jìn)行：提高牛羊的超數(shù)排卵效率；明確母畜的發(fā)情期；提高或改進(jìn)沖卵的技術(shù)；對(duì)非手術(shù)法的胚胎移植技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，提高其胚胎移植的受精率；在生產(chǎn)上多使用胚胎性別鑒定，合理控制公母數(shù)量，從而提高生產(chǎn)效率；提高胚胎移植雙卵技術(shù)，提升畜犢的數(shù)量，擴(kuò)大生產(chǎn)；提升胚胎分割技術(shù)的成功率，降低基礎(chǔ)生產(chǎn)成本[3]。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉丑生，李魁.胚胎移植技術(shù)在養(yǎng)牛生產(chǎn)中的應(yīng)用研究[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2000(2):39-41.

[2] 莫延新.牛羊品種改良的先鋒—胚胎移植技術(shù)[J].當(dāng)代畜牧，2016(11Z):39-40.

[3] 蔣超祥，馮星，徐候華.牛胚胎移植技術(shù)推廣應(yīng)用注意事項(xiàng)[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2017，13(3):55-56.