發(fā)情相關(guān)基因在小尾寒羊性腺軸組織中的表達(dá)分析

陳玉林 賀小云 劉玉芳 儲(chǔ)明星

摘要 [目的]探究綿羊繁殖性狀相關(guān)候選基因ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3和RASD1在小尾寒羊性腺軸組織（大腦、小腦、下丘腦、垂體、子宮、卵巢、輸卵管）的表達(dá)差異，為闡明綿羊發(fā)情期調(diào)控分子機(jī)理提供理論依據(jù)。[方法]以FecB BB型小尾寒羊?yàn)檠芯繉?duì)象，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)上述6個(gè)基因在小尾寒羊黃體期和卵泡期與性腺軸相關(guān)的7種組織中的表達(dá)差異。[結(jié)果]ATF4在小尾寒羊黃體期卵巢組織中的表達(dá)量最高且極顯著高于卵泡期（P<0.01）;CCNG1在小尾寒羊黃體期卵巢組織中的表達(dá)量最高，在卵泡期大腦組織中的表達(dá)量極顯著高于黃體期（P<0.01）;KDM3B在小尾寒羊黃體期小腦中的表達(dá)量最高，且黃體期小腦和下丘腦中的表達(dá)量均顯著高于卵泡期（P<0.05）;NPTX1在小尾寒羊黃體期小腦中的表達(dá)量最高且顯著高于卵泡期（P<0.05）;PLCB3在小尾寒羊黃體期卵巢中的表達(dá)量顯著高于卵泡期（P<0.05）;RASD1在小尾寒羊卵泡期垂體組織中的表達(dá)量最高，在黃體期大腦、小腦、子宮中的表達(dá)量顯著高于卵泡期（P<0.05）。[結(jié)論]ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3和RASD1基因可能對(duì)綿羊的發(fā)情期轉(zhuǎn)換起到一定的調(diào)控作用，為進(jìn)一步闡明綿羊發(fā)情期轉(zhuǎn)換過(guò)程的分子機(jī)理提供了新思路，為進(jìn)一步研究上述6種基因的功能奠定了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 綿羊;發(fā)情期;性腺軸;候選基因;組織表達(dá)

中圖分類號(hào) S 826? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A? 文章編號(hào) 0517-6611（2021）21-0105-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.21.026

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Expression Analysis of Genes Related with Estrus in the Gonadal Axis of Small Tail Han Sheep

CHEN Yu-lin? HE Xiao-yun LIU Yu-fang 2 et al

（1.Key Laboratory of Animal Genetics， Breeding and Reproduction of Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Institute of Animal Sciences， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100193; 2.College of Life Science and Food Engineering， Hebei University of Engineering， Handan， Hebei 056001）

Abstract [Objective]To explore the expression differences of candidate genes（ATF4， CCNG? KDM3B， NPTX? PLCB3 and RASD1）related with the reproduction traits in the gonadal axis tissues （cerebrum， cerebellum， hypothalamus， pituitary， uterus， ovary， fallopian tube） of Small Tail Han Sheep，? so as to provide references? for elucidating the molecular mechanism of sheeps estrus regulation.[Method]Taking FecB BB Small Tail Han Sheep as the research object， real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression differences of the above 6 genes in 7 kinds of tissues related with gonadal axis of Small Tail Han Sheep in follicular phase and luteal phase， respectively. [Result] The expression of ATF4 in ovarian tissue of Small Tail Han Sheep in luteal phase was the highest and significantly higher than that in follicular phase （P< 0.01）. The expression of CCNG1 in the ovarian tissue of Small Tail Han Sheep was the highest in luteal phase of Small Tail Han Sheep， and its expression in the brain tissue in the luteal phase was significantly higher than that in the follicular phase（P< 0.01）. The expression of KDM3B in cerebellum of Small Tail Han Sheep in luteal phase was the highest， its expression in the cerebellum and hypothalamus in the luteal phase were both significantly higher than that in the follicular phase（P<0.05）.? The expression of NPTX1 in cerebellum in luteal phase was the highest and significantly higher than that in follicular phase（P<0.05）. The expression of PLCB3 in ovary of Small Tail Han Sheep in luteal phase was significantly higher than that in follicular phase（P<0.05）. The expression of RASD1 in the pituitary of Small Tail Han Sheep was the highest in the follicular phase， and the expression in the brain， cerebellum and uterus in the luteal phase was significantly higher than that in the follicular phase（P<0.05）.? [Conclusion]? ATF4， CCNG? KDM3B， NPTX? PLCB3 and RASD1 genes might play a certain role in regulating the estrus conversion of sheep， which provided a new idea for further elucidating the molecular mechanism of estrus conversion process in sheep， and laid the theoretical basis for further research on the functions of the 6 above genes.

Key words Sheep;Estrus;Gonadal axis;Candidate genes;Tissue expression

基金項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31772580）;國(guó)家肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)（CARS-38）;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目（ASTIP-IAS13）。

作者簡(jiǎn)介 陳玉林（1997—），男，河南駐馬店人，碩士研究生，研究方向：動(dòng)物遺傳育種。

*通信作者：劉玉芳，講師，博士，從事動(dòng)物遺傳育種研究;儲(chǔ)明星，研究員，博士，從事羊優(yōu)異繁殖性狀分子機(jī)理研究。

收稿日期 2021-01-30

排卵數(shù)和產(chǎn)羔數(shù)是決定綿羊繁殖力高低的重要因素。一般情況下綿羊排卵數(shù)為1～2個(gè)，但其數(shù)量不絕對(duì)，研究表明一些羊的排卵數(shù)在10個(gè)左右[1]。綿羊繁殖力受到復(fù)雜因素的調(diào)控，包括營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、遺傳因子以及羊群中的性別比例等，其中遺傳因素對(duì)綿羊繁殖力的影響較大[2]。通過(guò)對(duì)FecB基因的研究發(fā)現(xiàn)，攜帶該基因的母羊在排卵數(shù)方面存在劑量效應(yīng)，即每增加一個(gè)拷貝數(shù)，其排卵數(shù)可增加1.5個(gè)，產(chǎn)羔數(shù)可增加1.0～1.5個(gè)[3-4]。該基因的發(fā)現(xiàn)為選育高繁殖力母羊提供了研究方向。發(fā)情期作為動(dòng)物繁殖過(guò)程中的重要時(shí)期，具有研究遺傳因素對(duì)綿羊繁殖力作用機(jī)制的重大意義。近些年研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)情相關(guān)基因ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3和RASD1都對(duì)綿羊的繁殖力有一定的影響，探究這些基因在多羔綿羊發(fā)情期性腺軸相關(guān)組織中的表達(dá)差異對(duì)于闡明綿羊多羔分子機(jī)理具有重要意義。

前人研究發(fā)現(xiàn)，激活轉(zhuǎn)錄因子4（activiting transcription factor? ATF4）結(jié)合基序存在于多種時(shí)鐘基因中，包括PER2、PER3、Cry1、Cry2和Clock。ATF4與PER2啟動(dòng)子結(jié)合并激活其轉(zhuǎn)錄，參與動(dòng)物發(fā)情周期的調(diào)控過(guò)程[5]。大鼠卵巢ATF4敲除會(huì)導(dǎo)致卵母細(xì)胞數(shù)量減少，表明ATF4在排卵中有著以前未知的作用[6]。細(xì)胞周期蛋白G1（Cyclin G CCNG1）是一種細(xì)胞周期蛋白G家族蛋白，參與哺乳動(dòng)物顆粒細(xì)胞增殖、卵母細(xì)胞成熟等繁殖生物學(xué)過(guò)程[7]。研究表明，CCNG1可能通過(guò)參與卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育，繼而達(dá)到對(duì)綿羊發(fā)情和季節(jié)性繁殖的調(diào)控[8]。組蛋白去甲基化酶3B（lysine demethylase 3B，KDM3B）基因敲除雌性小鼠發(fā)情周期延長(zhǎng)，排卵能力下降，受精率下降，且在子宮中的胚胎植入位置也顯著減少，這可能是排卵和受精減少的結(jié)果[9]。KDM3B基因敲除雄性小鼠存在精子發(fā)生缺陷，并且由于生殖細(xì)胞中CREM介導(dǎo)的基因表達(dá)受損而導(dǎo)致不育[10]。因此，KDM3B是維持正常發(fā)情周期、排卵能力和受精效率所必需的。神經(jīng)元正五聚蛋白1（neuronal pentraxin? NPTX1）是神經(jīng)元發(fā)育的重要分泌蛋白，編碼神經(jīng)元五肽 研究發(fā)現(xiàn)在GnRH神經(jīng)元的誘導(dǎo)下NPTX1是最早激活的細(xì)胞外信號(hào)之一，該基因已被發(fā)現(xiàn)在松果體中存在晝夜差異表達(dá)（夜間表達(dá)量增加3.5倍），因此被認(rèn)為是與生殖季節(jié)性表型相關(guān)的候選基因[11-12]。磷脂酶C β3（phospholipase C beta? PLCB3）是一種磷脂酶，在調(diào)節(jié)母體排卵、黃體生成、卵泡生長(zhǎng)等方面發(fā)揮重要作用[13]。地塞米松誘導(dǎo)的Ras相關(guān)蛋白1（Ras related dexamethasone induced? RASD1）是Ras家族單體G蛋白的成員，在多種細(xì)胞功能中發(fā)揮核心作用，包括細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化、分泌和凋亡，另外研究表明其在下丘腦對(duì)神經(jīng)元激活的反應(yīng)中起重要作用[14]。此外，RASD1是一個(gè)雌激素反應(yīng)的即刻早期基因（immediate-early genes），它還調(diào)控垂體雌激素反應(yīng)晚期基因的表達(dá)[15]。

筆者利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)上述繁殖相關(guān)候選基因在綿羊不同繁殖時(shí)期（卵泡期和黃體期）性腺軸組織中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，旨在為進(jìn)一步揭示ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3和RASD1基因的功能和解析綿羊繁殖機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品的收集

隨機(jī)選取2～3周歲健康、經(jīng)產(chǎn)的空懷小尾寒羊卵泡期和黃體期母羊各3只，于2017年10月飼養(yǎng)于天津市畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)羊場(chǎng)，所有試驗(yàn)羊的飼養(yǎng)環(huán)境和飼料均相同，2017年11月進(jìn)行屠宰，取其大腦、小腦、下丘腦、垂體、子宮、卵巢、輸卵管，取樣后迅速裝入1.8 mL RNase-Free凍存管中（最大樣品量為凍存管體積的2/3），所有樣品采集要在30 min內(nèi)完成，樣品采集完迅速放入液氮中冷凍保存，用干冰帶回實(shí)驗(yàn)室，放入-80 ℃冰箱中冷凍保存，備用。

1.2 RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)

將采集的小尾寒羊卵泡期和黃體期性腺軸7種組織研磨后，用Trizol試劑（Invitrogen，美國(guó)）進(jìn)行裂解，此后按照動(dòng)物組織RNA提取試劑盒（天根，北京）的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行總RNA的提取，最后利用1.0%瓊脂糖凝膠電泳和Nanodrop 2000檢測(cè)提取RNA的質(zhì)量和濃度。經(jīng)檢驗(yàn)合格的組織總RNA置于-80 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 引物設(shè)計(jì)

根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)提供的綿羊ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3、RASD1、RPL19基因序列（登錄號(hào)分別為NM_001142518.1、NM_001287473.1、XM_027970282.1、XM_004013084.4、XM_027959899.1、NM_001161872.1、XM_012186026.1）信息，并利用Primer Premier 5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，以RPL19為內(nèi)參基因。引物由北京天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司合成。各引物濃度均為10 μmol/L，引物序列詳細(xì)信息見(jiàn)表1。

1.4 cDNA的合成

利用TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒（PK0445）合成cDNA，反轉(zhuǎn)錄體系如下：1.0 μL反轉(zhuǎn)錄混合引物，1.0 μL Oligo dT引物，1.0 μL隨機(jī)引物，4.0 μL熒光定量緩沖液，10 μL RNA，12.0 μL雙蒸水，全程在冰上操作。RT-PCR反應(yīng)程序如下：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，將反轉(zhuǎn)錄完成后的cDNA產(chǎn)物稀釋后，用持家基因RPL19進(jìn)行PCR檢測(cè)，質(zhì)量檢驗(yàn)合格后于-20 ℃下保存，以備檢測(cè)基因mRNA表達(dá)[16]。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

1.5.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR體系及反應(yīng)程序。

PCR反應(yīng)體系（總體積為20 μL）：10.0 μL熒光定量Ex Taq引物Ⅱ、0.8 μL上游引物、0.8 μL下游引物、2.0 μL cDNA 模板、6.4 μL雙蒸水。PCR反應(yīng)程序如下：95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性5 s，60 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán);反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行熔解曲線分析[17]。

1.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。

將cDNA樣本5倍稀釋后，進(jìn)行2倍梯度稀釋后獲得5個(gè)濃度梯度（1、1/2、1/4、1/8、1/16）的cDNA樣品。用這些cDNA作為模板，對(duì)目的基因和持家基因進(jìn)行熒光定量PCR，以濃度梯度的對(duì)數(shù)值（以10為底數(shù)）為橫坐標(biāo)，以Ct值為縱坐標(biāo)，繪制目的基因和持家基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.3 實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)與數(shù)據(jù)分析。

使用Roche Light Cycler480 Ⅱ 型熒光定量PCR儀進(jìn)行熒光定量檢測(cè)，采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用2-△△Ct的方法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。獲得的表達(dá)量數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 RNA的提取

提取后的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)28S條帶明顯亮于18S條帶，條帶完整性較好，表明該RNA質(zhì)量合格，可用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.2 ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3、RASD1基因組織表達(dá)分析

2.2.1 ATF4基因組織表達(dá)檢測(cè)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，ATF4基因在7種組織中均有表達(dá)，其中在小尾寒羊黃體期的卵巢組織中的表達(dá)量最高且極顯著高于卵泡期（P<0.01）;ATF4基因在其他組織中的表達(dá)量差異均不顯著（P>0.05）（圖1）。

2.2.2 CCNG1基因組織表達(dá)檢測(cè)。

小尾寒羊2個(gè)繁殖時(shí)期的7種組織中，CCNG1基因在小尾寒羊黃體期卵巢組織中的表達(dá)量最高;CCNG1基因在卵泡期大腦組織中的表達(dá)量極顯著高于黃體期（P<0.01），但其在其他組織中的表達(dá)量差異均不顯著（P>0.05）（圖2）。

2.2.3 KDM3B基因組織表達(dá)檢測(cè) 。

如圖3所示，KDM3B基因在小尾寒羊黃體期小腦組織中的表達(dá)量最高;KDM3B基因在黃體期小腦和下丘腦組織中的表達(dá)量顯著高于卵泡期（P<005）;KDM3B基因在其他組織中的表達(dá)量差異均不顯著（P>0.05）。

2.2.4 NPTX1基因組織表達(dá)檢測(cè)。

如圖4所示，NPTX1基于在小尾寒羊黃體期小腦組織中的表達(dá)量最高且顯著高于卵泡期（P<0.05）;NPTX1基因在其他組織中的表達(dá)量均無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.2.5 PLCB3基因組織表達(dá)檢測(cè)。

如圖5所示，PLCB3基因在小尾寒羊2個(gè)繁殖時(shí)期卵巢組織中的表達(dá)量均最高，黃體期卵巢組織中該基因的表達(dá)量顯著高于卵泡期（P<005），其在其他組織中的表達(dá)量無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.2.6 RASD1基因組織表達(dá)分析。

如圖6所示，RASD1基因在小尾寒羊卵泡期垂體組織中的表達(dá)量最高;在黃體期大腦、小腦、子宮中該基因的表達(dá)量顯著高于卵泡期（P<005），而其在卵泡期卵巢、子宮、輸卵管呈痕量表達(dá)。

3 討論

哺乳動(dòng)物的繁殖性能受到復(fù)雜的激素和分子網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)，其中下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸是最基本和最重要的調(diào)節(jié)途徑，也起到調(diào)節(jié)生殖功能的關(guān)鍵作用[18]。研究表明，對(duì)小鼠、綿羊、斑馬魚(yú)和三穗鴨等的研究發(fā)現(xiàn)相關(guān)基因能夠影響性腺軸，從而參與到繁殖的調(diào)控之中[19-22]。發(fā)情期是動(dòng)物繁殖的重要環(huán)節(jié)，研究動(dòng)物發(fā)情期的調(diào)控機(jī)制對(duì)于動(dòng)物繁殖力的提高具有重要意義，因此探究發(fā)情相關(guān)候選基因在性腺軸組織中的表達(dá)差異對(duì)于闡明小尾寒羊高繁殖力的機(jī)理具有一定的促進(jìn)作用。

ATF4是一種應(yīng)激性轉(zhuǎn)錄因子，又稱環(huán)腺苷酸（cAMP）連接效應(yīng)元件2（cREB2），與氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝、抗氧化應(yīng)激、蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)和鈣釋放密切相關(guān)，也可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯和衰老，是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重要的調(diào)節(jié)因子，且在早期胚胎發(fā)育中起著十分重要的作用[23]。研究發(fā)現(xiàn)，ATF4可以結(jié)合VEGF啟動(dòng)子中發(fā)現(xiàn)的4種氨基酸反應(yīng)元件來(lái)上調(diào)VEGF表達(dá)，增加新生血管的形成[24]。該試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ATF4在小尾寒羊性腺軸的7種組織中均有表達(dá)，且黃體期卵巢中的表達(dá)量顯著高于卵泡期，由于黃體形成過(guò)程中伴有血管生長(zhǎng)，因此推測(cè)其通過(guò)促進(jìn)卵泡膜內(nèi)層毛細(xì)血管的生長(zhǎng)，從而促進(jìn)小尾寒羊黃體的形成，在黃體期至卵泡期的轉(zhuǎn)變中起到調(diào)控作用。

細(xì)胞周期蛋白G1（CCNG1）是細(xì)胞周期蛋白G1/MDM2/p53軸的關(guān)鍵組成部分，其表達(dá)與促進(jìn)生長(zhǎng)和細(xì)胞周期進(jìn)程相關(guān)[25-26]。研究發(fā)現(xiàn)，該基因在發(fā)情期和發(fā)情后期卵巢中的表達(dá)量存在顯著的品種間差異，因此推斷其可能通過(guò)參與卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育，繼而達(dá)到對(duì)綿羊發(fā)情和季節(jié)性繁殖的調(diào)控[8]。該試驗(yàn)中CCNG1基因在小尾寒羊性腺軸7種組織中均有表達(dá)，與前人研究結(jié)果相符合，且2種時(shí)期大腦組織中的表達(dá)量存在極顯著差異（P<001），而其在其他組織中的表達(dá)量均無(wú)顯著差異（P>005），初步推測(cè)其參與卵泡期大腦神經(jīng)元細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，從而調(diào)控性腺軸中下丘腦以及垂體活性，以此參與小尾寒羊卵泡期與黃體期的轉(zhuǎn)換過(guò)程，該基因的具體作用機(jī)制值得進(jìn)一步探究。

KDM3B是組蛋白賴氨酸去甲基酶（KDMs）中KDM3家族的重要成員[9]。組蛋白賴氨酸去甲基酶（KDM）首次在哺乳動(dòng)物中被發(fā)現(xiàn)，能去除組蛋白底物上的甲基，并通過(guò)賴氨酸去甲基化的作用在細(xì)胞增殖中發(fā)揮作用[27]。目前已在多種腫瘤相關(guān)的疾病中發(fā)現(xiàn)KDM3B的調(diào)控作用，如前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌[28-31]，這些結(jié)果表明KDM3B在細(xì)胞周期調(diào)控中是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳因子。該試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)KDM3B基因在小尾寒羊性腺軸7種組織中均有表達(dá)，表明該基因可能與繁殖相關(guān)，且在黃體期下丘腦中的表達(dá)量顯著高于卵泡期，初步推測(cè)其通過(guò)促進(jìn)下丘腦細(xì)胞GnRH的分泌來(lái)動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)FSH和LH的含量，進(jìn)而參與小尾寒羊卵泡期至黃體期的激素調(diào)控。

NPTX1屬于神經(jīng)元正五聚體蛋白（neuronal pentraxins，NPTX/NPs），它是正五聚蛋白（pentraxins，PTX）的一個(gè)超家族成員。正五聚蛋白主要為促炎或抗炎細(xì)胞因子，NPTX1主要在大腦皮質(zhì)、海馬、小腦中表達(dá)[32]，屬于以鈣依賴性方式與多種蛋白質(zhì)相互作用的NPTX家族成員，在突觸可塑性中發(fā)揮一定的作用[33]。研究發(fā)現(xiàn)，NPTX1與KDM3B一樣都屬于表觀遺傳調(diào)控基因，并通過(guò)過(guò)表達(dá)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、侵襲和血管生成，在許多癌癥中起到抑制作用[33-36]。該試驗(yàn)中該基因在性腺軸7種組織中均有表達(dá)，小腦中表達(dá)最高且黃體期顯著高于卵泡期，與預(yù)期結(jié)果相一致，推測(cè)其通過(guò)調(diào)控小腦中樞神經(jīng)元的活性對(duì)小尾寒羊的生殖活動(dòng)起抑制作用，參與黃體期到卵泡期發(fā)情狀態(tài)的轉(zhuǎn)換。

PLCB3是由2個(gè)G蛋白α亞基（α-Q和α-11）以及G蛋白β和γ亞基激活的，在啟動(dòng)受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用[37]。磷脂酶（PLC）是一大類酶，能將磷脂水解成脂肪酸和其他親脂性物質(zhì)，在炎癥、細(xì)胞生長(zhǎng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞死亡和維持細(xì)胞膜磷脂等過(guò)程中起重要作用[38]。研究發(fā)現(xiàn)，該基因在排卵期大小的卵泡細(xì)胞中高表達(dá)，具有激活LH/LHR信號(hào)的作用[39]，并在芬蘭綿羊中鑒定出該基因與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)[40]。該試驗(yàn)中PLCB3基因在性腺軸7種組織中均檢測(cè)到表達(dá)，其在卵巢中的表達(dá)量最高且黃體期顯著高于卵泡期，與前人結(jié)果相符，推測(cè)其在小尾寒羊從黃體期向卵泡期的轉(zhuǎn)換過(guò)程中激活LH/LHR信號(hào)，促進(jìn)小尾寒羊發(fā)情啟動(dòng)的過(guò)程。

RAS超家族具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)功能，其信號(hào)通路在細(xì)胞增殖調(diào)控中起著關(guān)鍵作用[41]，RASD1是RAS超家族中編碼小GTP酶的30 ku的G蛋白成員[42]，可作為受體非依賴性的鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子發(fā)揮作用[43]。在視交叉上核（SCN）中，RASD1在夜間表達(dá)較高水平的晝夜節(jié)律性，下丘腦中RASD1的表達(dá)則主要受到糖皮質(zhì)激素以及血漿滲透壓的影響[15，44]。研究發(fā)現(xiàn)，RASD1是垂體前葉細(xì)胞中雌激素反應(yīng)的即刻早期基因，調(diào)控垂體雌激素反應(yīng)晚期基因的表達(dá)[14]。該試驗(yàn)中RASD1基因在卵泡期垂體組織中表達(dá)量最多，與預(yù)期結(jié)果相一致，說(shuō)明該基因在垂體水平經(jīng)由雌激素的調(diào)控發(fā)揮局部作用，且黃體期大腦、小腦、子宮中的表達(dá)量均顯著大于卵泡期，推測(cè)其在黃體期受到黃體分泌雌激素的影響，然后通過(guò)參與垂體GnRH神經(jīng)元的激活，從而誘導(dǎo)小尾寒羊卵泡期的啟動(dòng)，調(diào)控小尾寒羊繁殖活動(dòng)。

該試驗(yàn)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR探究了ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3和RASD1在卵泡期和黃體期的小尾寒羊性腺軸7種組織中的表達(dá)量差異，結(jié)果表明ATF4、CCNG1、KDM3B、NPTX1、PLCB3和RASD1基因在卵泡期、黃體期性腺軸相關(guān)組織中的表達(dá)有較大差異，表明這6個(gè)基因可能對(duì)綿羊繁殖力具有一定的調(diào)控作用，可為進(jìn)一步闡明綿羊高繁殖力的分子機(jī)理提供參考。

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