新疆某養(yǎng)雞場禽白血病流行病學(xué)調(diào)查及凈化效果監(jiān)測

李澤宇，齊亞銀

（1.石河子大學(xué)，石河子 832003；2.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，昌吉 831100）

0 引言

禽白血病是一種腫瘤性疾病，由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒引起。目前，在世界大多數(shù)養(yǎng)雞業(yè)發(fā)達(dá)國家已基本控制，但在我國本病的感染和流行仍十分普遍，尤其是地方品系的雞群[1-2]。雞群感染此病會導(dǎo)致嚴(yán)重的損失[3]，一是產(chǎn)生腫瘤，導(dǎo)致雞群發(fā)??；二是出現(xiàn)系列并發(fā)癥，嚴(yán)重影響經(jīng)濟(jì)效益；三是還可以導(dǎo)致雞群免疫抑制，造成繼發(fā)感染等。

近年來，新疆養(yǎng)雞場禽白血病發(fā)病較多，給養(yǎng)雞業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解新疆某規(guī)模化肉種雞場禽白血病的感染情況，分兩批從4棟雞舍采集血清800份，每批400份，進(jìn)行ALV-J 亞群抗體檢測，并對雞場采取了凈化措施?，F(xiàn)將監(jiān)測及凈化情況報告如下。

1 材料與方法

美國愛德士（IDEXX）公司生產(chǎn)的白血病ELISA抗體檢測試劑盒、自動酶標(biāo)儀（美國BioTek儀器有限公司）、微量移液器（eppendorf公司）、恒溫培養(yǎng)箱（北京市光明醫(yī)療儀器廠）、振蕩器、高壓滅菌鍋、離心機(jī)等實驗所需儀器設(shè)備。

2 實驗樣品

2.1 血清樣品的準(zhǔn)備

采集新疆昌吉市某規(guī)?；夥N雞場血清數(shù)共800份，分兩批采集，每批400份。第一批采集14～15周齡的雞群，其中，14周齡采集A、B圈血清各100份、15周齡采集C、D圈血清各100份。第二批采集21～22周齡的雞群，其中，21周齡采集A、B圈血清各100份、22周齡采集C、D圈血清各100份。

2.2 樣品采集時間、方法及樣品儲存

血清共分8次均等采集，分別為2016年7-8月、2016年9-10月；主要采集方法為翅靜脈采血法，血液采集后用離心機(jī)提取血清即樣品，置于-20℃冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

3 試驗方法與判定

3.1 血清稀釋

樣品：檢測前用樣品稀釋液將被檢樣品進(jìn)行500倍稀釋。

對照：注意不要稀釋對照。不同的樣品要注意換吸頭。在將樣品加入檢測板前要將樣品充分混勻。

3.2 試驗方法步驟

使用前，將所有試劑恢復(fù)到室溫，并將其混勻后再進(jìn)行使用。

（1）標(biāo)記：將抗原包被板取出并做好標(biāo)記。

（2）加樣：在板的相應(yīng)孔中，分別加入陰性對照、陽性對照和被檢樣品（已稀釋）各100 μL，加蓋后，在室溫下孵育30 min。

（3）洗板：將各孔的液體甩去，每個孔中加入350 μL的純水或超純水。第1次加入純水后浸泡2 min，然后將各孔的液體甩掉，以上步驟再重復(fù)4次（無需浸泡）。用吸水紙輕拍使之吸干。注意在每次洗滌之間和加下一種液體前不要讓板干燥或放置時間過久。

（4）加酶標(biāo)抗體：每孔加入100 μL酶標(biāo)抗體，室溫孵育30 min。

（5）洗板：重復(fù)（3）步驟。

（6）加底物液：每孔中加入100 μL的TMB底物，室溫下孵育15 min。

（7）加終止液：每孔中加入100 μL的終止液終止反應(yīng)。

（8）讀數(shù)：測定并記錄各孔在650 nm波長的吸光值（A650）。

3.3 結(jié)果判定

（1）試驗結(jié)果需同時符合下列條件：

陽性對照平均OD值與陰性對照平均OD值之差大于0.100。

陰性對照平均OD值小于或等于0.150。

（2）判定：

陽性對照和樣品的OD值應(yīng)經(jīng)陰性對照OD值校正。陽性對照：OD陽平均值－OD陰平均值，樣品：OD樣平均值－OD陰平均值；S/P=（OD樣平均值－OD陰平均值）/（OD陽平均值－OD陰平均值）。

S/P比值小于或等于0.60，判為陰性。S/P比值大于0.60（抗體滴度大于844），判為陽性，表明曾感染ALV-J。

4 凈化措施

該肉種雞場是父母代種雞場，飼養(yǎng)管理實行嚴(yán)格的全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式。針對檢測發(fā)現(xiàn)的問題，采取了嚴(yán)格的淘汰措施，加強(qiáng)雞舍環(huán)境衛(wèi)生管理與消毒，加強(qiáng)雞舍通風(fēng)，控制人員出入等措施。

4.1 淘汰措施

對檢測中發(fā)現(xiàn)的ALV-J亞群陽性雞只全部淘汰，徹底消除傳染來源。同時，在日常飼養(yǎng)管理過程中，加強(qiáng)對雞群的觀察，對有臨床癥狀的病雞及已死亡雞只及時淘汰，并進(jìn)行無害化處理。

4.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

為保證雞群的營養(yǎng)狀況，采用全價飼料喂養(yǎng)，確保雞只營養(yǎng)均衡。

4.3 加強(qiáng)環(huán)境控制

嚴(yán)格執(zhí)行養(yǎng)雞場的衛(wèi)生管理制度，對出入雞場人員采用紫外線全身消毒、新鮮石灰水消毒等，對進(jìn)出車輛采取石灰水消毒；每天對雞舍環(huán)境及場內(nèi)設(shè)施設(shè)備進(jìn)行消毒，保持雞舍內(nèi)空氣的流通，及時清除糞便。

5 結(jié)果與分析

5.1 第一次J亞群雞白血病血清抗體水平分析

從表格可以看出（表1）：第1次對某肉種雞場A（14周齡）、B（14周齡）、C（15周齡）、D（15周齡）4棟雞舍不同日齡雞群400份血清的檢測，結(jié)果陽性總數(shù)為94只，陽性率為23.50%，平均OD值為0.273，其中A、B、C、D 4個圈舍陽性率分別為26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

通過統(tǒng)計可知，A、B、C、D 4棟圈舍檢測樣本的平均OD值分別0.287、0.315、0.275、0.216，總體OD值為0.273。

表1 昌吉市某規(guī)模化肉種雞場ALV-J血清抗體水平及陽性率匯總表

5.2 第二次J亞群雞白血病血清抗體水平分析

從表格可以看出（表2）：第2次對某肉種雞場A（21周齡）、B（21周齡）、C（22周齡）、D（22周齡）4棟雞舍不同日齡雞群400份血清的檢測，結(jié)果陽性總數(shù)為31只，總陽性率為7.75%，平均OD值為0.109，其中A、B、C、D 4個圈舍陽性率分別為9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。

通過統(tǒng)計可知，A、B、C、D各圈舍的OD值分別0.117、0.129、0.098、0.090，總體OD值為0.109。

6 分析與討論

從結(jié)果分析可知，對昌吉市某規(guī)?；夥N雞場4棟雞舍不同日齡的雞群分兩批進(jìn)行檢查，每次各檢測400份血清。第1次檢測時間為14～15周齡，分別檢測了A、B、C、D4棟雞舍各100只雞，結(jié)果陽性總數(shù)為94只，總陽性率為23.50%，平均OD值為0.273，其中A、B、C、D4棟雞舍陽性率分別為26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

表2 昌吉市某規(guī)?；夥N雞場ALV-J血清抗體水平及陽性率匯總表

針對此種情況，雞場采取了嚴(yán)格的淘汰措施，對第1批檢測出為陽性的種雞進(jìn)行淘汰；嚴(yán)格觀察雞群，及時淘汰病雞、死雞；加強(qiáng)雞場消毒、通風(fēng)，7周后再次進(jìn)行檢測，陽性率明顯下降，4棟雞舍不同日齡（21～22周）雞群400份血清的檢測，結(jié)果陽性總數(shù)為31，陽性率為7.75%，下降了15.45個百分點，平均OD值為0.109。其中A、B、C、D4棟雞舍陽性率分別為9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。由23.50%下降到7.75%。

參考文獻(xiàn)

[1] 崔治中. 我國雞群 J 亞群白血病流行的過去、現(xiàn)在和將來及其防控：對我國動物疫病防控的啟示[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2015(1)：30-32.

[2] 崔治中，孫淑紅，趙鵬，等.對種雞場禽白血病凈化方案的建議[J].中國家禽，2014(1)：3-6.

[3] 馬秀麗.雞病毒性免疫抑制病的發(fā)展趨勢與防制措施[J].山東畜牧獸醫(yī)，2000（2)：36-38.