基于含藥腸吸收液法的“瓜蔞反草烏”配伍對離體胸主動脈環(huán)舒縮功能影響的實驗研究

★ 李瑩 李文宏 賴珍珍 肖雄 許照

(江西中醫(yī)藥大學 南昌 330004)

“十八反”作為傳統(tǒng)的中藥配伍禁忌，至今用藥法規(guī)仍嚴格禁止臨床使用，但應用相反藥對治療沉疴痼疾者仍不在少數(shù)。據統(tǒng)計2010版《中國藥典》收錄含“十八反”藥對的成方制劑5個[1]，《中醫(yī)方劑大辭典》(南京中醫(yī)藥大學主編)共收錄含反藥同方配伍方劑1406首[2]。因此，系統(tǒng)開展“十八反”藥物配伍關系研究，解析各相反藥對的相互作用、宜忌條件、化學本質和生物學基礎，揭示中藥“十八反”的科學實質，對于臨床安全用藥具有重要的意義[3]。本課題組在國家重點基礎研究發(fā)展計劃和國家自然科學基金項目的資助下，系統(tǒng)開展了“半蔞貝斂芨攻(草)烏”的化學、藥理及毒理研究。前期研究結果表明，草烏與瓜蔞的共煎液中雙酯型生物堿(烏頭堿、中烏頭堿、次烏頭堿)的含量高于草烏單煎液[4]；草烏瓜蔞配伍的LD50小于草烏，毒性明顯增加；配伍抑制蛋清致大鼠足趾腫脹的活性增強，毛細血管通透性降低，可見配伍的抗炎作用強于草烏[5]。上述結果表明，“瓜蔞反草烏”呈現(xiàn)相反配伍特征的增毒/增效作用模式。草烏對心血管系統(tǒng)的影響主要表現(xiàn)為調節(jié)心律、影響血壓等。本研究針對草烏對心血管系統(tǒng)的影響，采用含藥腸吸收液方法，以離體胸主動脈環(huán)為研究對象，研究草烏配伍瓜蔞后收縮血管效應的變化及其初步機理。

1 材料和方法

1.1 試驗藥物 生草烏AconitumkusnezoffiiReichb.購自浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片有限公司，批號120701；瓜蔞Trichosantheshisrilowii購自北京華邈中藥技術開發(fā)中心，批號120906。經江西中醫(yī)藥大學生藥學科組付小梅副教授鑒定藥材合格。草烏單煎醇提液：取生草烏粉末，精密稱取10g，加10倍量75%乙醇浸泡60min，微沸回流提取60min，過濾，再加5倍量75%乙醇微沸回流提取60min，合并濾液，在60℃下減壓濃縮至1g·mL-1。

草烏與瓜蔞配伍提取液：取生草烏粉末，精密稱取10g，按照相應比例稱定瓜蔞粉末(9∶1組1.1g，3∶1組3.3g，1∶1組10g，1∶3組30g，1∶9組90g)，混合，加10倍量75%乙醇浸泡60 min，微沸回流提取60 min，過濾，再加5倍量75%乙醇微沸回流提取60 min，合并濾液，在60 ℃下減壓濃縮依次至1.1，1.3，2，4，10g·mL-1。

含藥腸吸收液制備：按文獻方法[6]，取大鼠空腸或回腸腸段10cm制成翻轉囊，置于草烏及與瓜蔞配伍的提取液中溫孵，取腸囊內的緩沖液，即得含藥腸吸收液。

6×10-2mol·L-1KCl(KH 液配制)；苯腎上腺素(PE，中國食品藥品檢定研究所，批號：109K1528)臨用時用 KH 液配成 1×10-6mol·L-1；普萘洛爾(中國食品藥品檢定研究所，批號:105468-201403)臨用時用 KH 液配成3.38×10-2mol·L-1。

1.2 動物 SD大鼠，180±20 g，雌雄不拘，長沙市天勤生物技術有限公司提供，許可證號：SCXK(湘)2009-0012。

1.3 試劑 KH液：1 mmol·L-1含NaCl 120g，KCl 4.7g，MgSO4·7H2O 1.2g，KH2PO41.18g，CaCl22.5g，NaHCO324.5g，葡萄糖 11.1g，EDTA 0.03g，調 pH至7.4；KR液：1mmol·L-1含NaCl 129，KCl 4.7g，NaH2PO41.2g，CaCl22.5g，MgCl21.2g，NaHCO35.0g，葡萄糖3.0g，調節(jié)pH至7.4。

1.4 儀器 PowerLab多通道生理記錄系統(tǒng)(澳大利亞 ADInstruments Pty Ltd)，HL-2S恒流泵(上海青浦瀘西儀器廠)，HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)，微量加樣器(上海求精生化試劑儀器有限公司)，分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.5 方法

1.5.1 血管環(huán)的制備 按文獻方法[6]，取大鼠胸主動脈，制成2～3 mm的小環(huán)，懸掛于浴槽內，一端固定，另一端通過張力換能器連接于Powerlab 生物信號采集系統(tǒng)，調節(jié)張力2g， 6×10-2mol·L-1KCl 溶液刺激3次，待血管環(huán)收縮穩(wěn)定后備用。

實驗用BL-420F計算機生物信號記錄分析系統(tǒng)記錄血管的張力變化，分別以末次預處理藥物刺激引起的最大/最小收縮幅度為100%，所得數(shù)據用百分比比值表示。

1.5.2 草烏瓜蔞配伍對基礎狀態(tài)大鼠離體胸主動脈環(huán)的影響 血管環(huán)穩(wěn)定后，分別加入草烏及與瓜蔞配伍含藥腸吸收液400μL，觀察并記錄胸主動脈環(huán)張力的變化。以血管環(huán)張力的變化率即X%=(基值-給藥后值)/基值×100%表示。

1.5.3 草烏瓜蔞配伍對PE預刺激大鼠離體胸主動脈環(huán)的影響 血管環(huán)穩(wěn)定后，以1×10-6mol·L-1的PE 10μL預刺激，待收縮達坪值后，分別加入草烏及與瓜蔞配伍離體腸吸收液 400μL，觀察并記錄胸主動脈環(huán)張力的變化。以測得的血管環(huán)張力變化值與PE預收縮血管張力變化值之比的百分率，即X%=(坪值-給藥后值)/(坪值-基值)×100%表示，探討草烏及與瓜蔞配伍腸吸收液對血管環(huán)收縮功能的影響。

1.5.4 草烏與瓜蔞配伍對KCl預刺激大鼠離體胸主動脈環(huán)影響實驗 血管環(huán)穩(wěn)定后，加入 10-2mol·L-1KCl 10μL刺激，待收縮達坪值后，分別加入草烏及與瓜蔞配伍離體腸吸收液 400μL，觀察并記錄胸主動脈環(huán)張力的變化，計算方法同“1.5.3”。

1.5.5 草烏與瓜蔞配伍對普萘洛爾預刺激大鼠離體胸主動脈環(huán)影響實驗 血管環(huán)穩(wěn)定后，加入3.38×10-2mol·L-1普萘洛爾10μL預處理，待舒張達坪值后，分別加入草烏及與瓜蔞配伍離體腸吸收液400μL，觀察并記錄胸主動脈環(huán)張力的變化，計算方法同“1.5.3”。

2 結果

2.1 對基礎狀態(tài)血管環(huán)張力的影響 草烏、草烏瓜蔞配伍含藥腸吸收液對基礎狀態(tài)血管環(huán)均有收縮作用，且草烏瓜蔞各配伍組的收縮強度均不同程度地強于草烏組，其中草蔞1∶1組和草蔞1∶9組明顯強于草烏組(P<0.05)。各組對血管環(huán)收縮功能影響的強度依次為：草蔞1∶1>草蔞1∶9>草蔞9∶1>草蔞1∶3>草蔞3∶1>草烏。表明瓜蔞能增強草烏對基礎狀態(tài)血管環(huán)的收縮作用，結果見圖1。

注：與草烏組比較，*P<0.05，**P<0.01。

圖1 草烏及與瓜蔞配伍含藥腸吸收液對基礎狀態(tài)離體血管環(huán)張力的影響

2.2 對PE預刺激血管環(huán)張力的影響 草烏、草烏瓜蔞配伍含藥腸吸收液對PE預刺激血管環(huán)均能促進其進一步收縮，但草烏瓜蔞各配伍組的作用強度均不同程度地弱于草烏組，其中草蔞1∶3組明顯弱于草烏組(P<0.05)。各組對PE預刺激血管環(huán)收縮功能影響的強度依次為：草烏>草蔞1∶1>草蔞1∶9>草蔞3∶1>草蔞9∶1>草蔞1∶3。表明瓜蔞能減弱草烏對PE預刺激血管環(huán)的收縮作用，結果見圖2。

2.3 對KCl預刺激血管環(huán)張力的影響 草烏、草烏瓜蔞配伍含藥腸吸收液對KCl預刺激血管環(huán)均能促進其進一步收縮，但草烏瓜蔞各配伍組的作用強度均不同程度地弱于草烏組，其中草蔞1∶1組明顯弱于草烏組(P<0.05)。各組對KCl預刺激血管環(huán)收縮功能影響的強度依次為：草烏>草蔞1∶9>草蔞9∶1>草蔞3∶1>草蔞1∶3>草蔞1∶1。表明瓜蔞能減弱草烏對KCl預刺激血管環(huán)的收縮作用，結果見圖3。

注：與草烏組比較，*P<0.05，**P<0.01。

圖2 草烏及與瓜蔞配伍含藥腸吸收液對PE預刺激離體血管環(huán)張力的影響

注：與草烏組比較，*P<0.05，**P<0.01。

圖3 草烏及與瓜蔞配伍含藥腸吸收液對KCl預刺激收縮離體血管環(huán)張力的影響

2.4 對普萘洛爾預刺激血管環(huán)張力的影響 草烏、草烏瓜蔞配伍含藥腸吸收液對普萘洛爾預處理血管環(huán)均能促進其進一步收縮，且草烏瓜蔞各配伍組的作用強度均不同程度地強于草烏組，其中草蔞1∶9組、草蔞1∶3組、草蔞1∶1組明顯強于草烏組(P<0.05，P﹤0.01)。各組對普萘洛爾預刺激血管環(huán)收縮功能影響的強度依次為：草蔞1∶9>草蔞1∶3>草蔞1∶1 >草蔞9∶1>草蔞3∶1>草烏。表明瓜蔞能增強草烏對普萘洛爾預刺激血管環(huán)的收縮作用，結果見圖4。

3 討論

血管靜息張力取決于血管內皮依賴性舒張和血管平滑肌收縮之間的平衡[7]。實驗結果顯示草烏及與瓜蔞配伍含藥腸吸收液對胸主動脈環(huán)的靜息張力產生影響，進而對血管乃至心血管系統(tǒng)的生理活動產生影響。草烏瓜蔞各比例配伍組對基礎狀態(tài)胸主動脈環(huán)的收縮作用較草烏組增強，

表明瓜蔞可增強草烏對血管靜息張力的影響作用。血管平滑肌收縮的關鍵因子是鈣離子[8]，主要對外源性鈣離子的依賴性較大。外源性鈣離子內流主要依靠細胞膜上電壓依賴型通道(VDCC)和受體控制型通道(ROCC)[9]。在本實驗中，草烏對PE 、KCl和普萘洛爾預刺激的血管環(huán)均具有收縮作用，表明草烏可能通過興奮血管平滑肌細胞膜上VDCC和ROCC通道，促進細胞外鈣離子內流而引起血管收縮；草烏瓜蔞配伍組對PE 和 KCl 預收縮的血管環(huán)的收縮作用均弱于草烏組，可見瓜蔞可減弱草烏促進細胞外鈣離子內流的作用；而草烏瓜蔞配伍組對普萘洛爾預處理血管環(huán)的收縮強度明顯強于草烏組，表明瓜蔞又可增強草烏促進細胞外鈣離子內流的作用。該結果與文獻報道一致，瓜蔞既有促進、又有抑制血管平滑肌細胞外鈣離子內流的組分[10-11]。

注：與草烏組比較，*P<0.05，**P<0.01。

圖4 草烏及與瓜蔞配伍含藥腸吸收液對普萘洛爾預刺激離體血管環(huán)張力的影響

綜上，草烏對各種狀態(tài)的血管環(huán)均有不同程度的收縮效應。配伍后，瓜蔞可增強草烏對基礎狀態(tài)、普萘洛爾預處理血管環(huán)的收縮效應；但減弱草烏對PE 、KCl預收縮血管環(huán)的收縮效應，呈現(xiàn)出雙向調節(jié)草烏的血管收縮效應。此外，不同配伍比例對上述效應的影響也不盡相同，其配伍機理有待進一步探討。

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