視安利膠囊的制備及其含量測定

★ 張婷彭紅金鑫 肖飛 許軍 鄒文清 李佳君

視疲勞作為眼科中常見的疾病，是眼或者全身器質性因素與精神因素相互交織所引起的一組疲勞綜合征， 患者的癥狀多種多樣，常見為用眼后出現(xiàn)眼部不適、眼及眼眶周圍疼痛、眼睛干澀、流淚、視物模糊、視覺障礙及頭暈、惡心等全身癥狀[1-3]。如果這種視疲勞狀態(tài)長期得不到調整和治療，就會出現(xiàn)睫狀肌痙攣，從而擠壓眼內毛細血管，導致微循環(huán)障礙、視力下降而成為近視眼[4-5]。近年來，我國佩戴眼鏡的人數(shù)呈現(xiàn)逐年增長趨勢。因此保護視力、改善視疲勞已成為刻不容緩的問題。

視安利膠囊是以中醫(yī)藥理論為基礎，并結合了現(xiàn)代藥理學研究成果，以藥效為主導研究開發(fā)的一種新復方制劑，用于緩解視疲勞和防治近視。其主要成分是蓮子殼提取物原花青素及葉黃素，原花青素具有抗氧化性，能防止細胞被自由基破壞，保護和改善眼底微循環(huán)從而有效舒緩視疲勞[6]。而葉黃素是一種廣泛存在于鮮花、水果、蔬菜等植物中的天然物質，屬于“類胡蘿卜素”物質。葉黃素是眼睛組織中的重要營養(yǎng)元素, 其本身是一種抗氧化物，能夠有效促進眼部微循環(huán), 并可以吸收藍光等有害光線從而緩解眼睛干澀及視疲勞癥狀[7]。膠囊劑不僅能夠掩蓋藥物不適的苦味，使其整潔美觀便于吞服，而且能提高藥物的穩(wěn)定性，便于運輸和保存[8]，本文參考有關文獻[9-11]，將該復方制劑制成了便于患者服用的膠囊劑?，F(xiàn)就視安利膠囊成型工藝及含量測定進行了如下探討。

1 材料

Aglient1260高效液相色譜儀；HZT-A1000電子天平(上海嘉展儀器有限公司)；GZX-9146MBE電熱鼓風干燥箱(蘇州豫通自動化電熱設備有限公司)；KQ-250E超聲波清洗器(深圳超聲儀器有限公司)。

原花青素對照品(樊克生物有限公司，純度>95%，批號：20140628)；葉黃素對照品(上海同田生物科技有限公司，純度≧98%，批號：20140703)；蓮子殼提取物(實驗室自制，原花青素含量為28.7%，批號：20140613)；無水乙醇(遼寧東源藥業(yè)有限公司)；淀粉(遼寧東源藥業(yè)有限公司)；微晶纖維素、糊精(曲阜市藥用輔料有限公司)；二氧化硅(山西紅日股份有限公司)；硬脂酸鎂(西安輔料股份有限公司)；明膠空心膠囊(河南省商水縣富源明膠有限公司)；甲醇 (固安縣華陽化工銷售有限公司)；乙腈 (天津盛通化工有限公司)；純化水為實驗室自制三蒸水。

2 方法與結果

2.1 處方與工藝研究

2.1.1 輔料種類及用量的選擇 選用淀粉、微晶纖維素、糊精、硬脂酸鎂、二氧化硅作為輔料，均需過100目篩，組成不同處方考察流動性和吸濕性。

表1 不同輔料的配伍處方

2.1.1.1 不同處方休止角測定 采用固定漏斗法，將3只漏斗串聯(lián)并固定最低端于距水平放置的坐標紙上1cm處，小心將按不同輔料制成的藥粉沿漏斗壁倒入最上的漏斗中，直到坐標紙上形成的藥粉圓錐體尖端接觸到漏斗下口為止。由坐標紙測出圓錐體底部的直徑2R(反復測定3次)，己知圓錐體高H，計算休止角:tga=H/R，不同處方的休止角結果見表2。由表可知，6組處方的流動性均符合要求，但處方4，處方5的流動性較好。

表2 不同處方休止角的測定

2.1.1.2 不同處方吸濕率測定 將底部盛有氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器于25℃條件下恒溫24h，此時干燥器內的相對濕度為75%。在己恒重的扁形稱量瓶底部放入厚約2mm的藥粉，精密稱定，置于25℃，相對濕度為75%的恒溫恒濕的玻璃干燥器內(稱量瓶蓋打開)，分別于6、12、24、48h精密稱定藥粉重量，計算吸濕率，結果見表3，處方2，處方4的吸濕率較小，且結合表2的實驗結果，說明處方4的流動性較好，吸濕率較低，因此確定處方為蓮子殼提取物280g，葉黃素1g，淀粉50g，微晶纖維素20g,硬脂酸鎂1.5g，二氧化硅2g，共制成1000粒。

表3 不同處方吸濕百分率的測定 %

2.1.2 潤濕劑的選擇 分別選擇了40%、50%、60%和80%的乙醇作為潤濕劑進行制粒工藝考察。試驗過程中發(fā)現(xiàn)40%的乙醇與藥粉混合后，藥粉容易結成硬塊，無法制粒；80%乙醇粘度太小，顆粒無法成型；60%乙醇，可以制粒，但細粉較多；50%乙醇可以滿足制粒要求，因此，本實驗采用50%乙醇, 并按30%比例加入到藥粉中，制成軟材后用24目篩制粒，45℃干燥3h后整粒。過65目篩除去細粉，即得粒度為24～65目的顆粒。

2.1.3 顆粒干燥時間的確定 在45℃下，分別干燥1、2、3、4、5h后，按照藥典規(guī)定，測定顆粒中水分含量和原花青素的含量。結果見表4，結果表明，當顆粒的干燥時間超過3h后，顆粒的含水量已無明顯變化，結合原花青素含量測定結果，選用3h為干燥時間。

2.1.4 顆粒干燥溫度的確定 分別在25℃、35℃、45℃、55℃、65℃條件下，干燥3h，按照藥典規(guī)定，測定顆粒中水分含量和原花青素含量。結果見表5，結果表明，當顆粒的干燥溫度超過45℃后，顆粒的含水量已無明顯變化，結合原花青素含量測定結果，選用45℃為干燥溫度。

表4 不同干燥時間的試驗結果(n=3)

表5 不同干燥溫度的試驗結果(n=3)

2.1.5 顆粒休止角的測定 按2.1.1.1項下方法操作，測定顆粒的休止角，反復測定3次，計算休止角，結果顆粒的休止角為21.8°(<30°)，表明經過制粒，顆粒的流動性更為良好。

2.1.6 顆粒吸濕率的測定 按照2.1.1.2項下方法操作，分別測定6、12、24、48、72h后顆粒的吸濕率，結果見表6。

表6 顆粒的吸濕率(n=3)

2.1.7 顆粒臨界相對濕度的測定 取已干燥至恒重的顆粒1g,精密稱定,置己恒重的扁形稱量瓶中,分別置于盛有7種不同濃度硫酸和不同鹽的過飽和溶液的干燥器內(稱量瓶蓋打開),于25℃恒溫條件下保持48h后稱量顆粒吸濕重量,計算不同相對濕度下的吸濕率,以相對濕度為橫坐標,吸濕率為縱坐標,繪制吸濕曲線,結果見表7。由圖可知，視輕松顆粒的臨界相對濕度為75.0%。

表7 不同相對濕度下顆粒的吸濕百分率

2.1.8 顆粒堆密度的確定 取顆粒適量，精密稱定，置10mL量筒內，將量筒上下振動5次，測定顆粒體積。己知顆粒質量m和體積V，根據(jù)公式P=m/V計算，顆粒的堆密度為0.64g/mL，物料容積0.55mL，可選擇1號膠囊進行填充。

2.1.9 處方 根據(jù)預實驗結果，確定處方為：蓮子殼提取物280g，葉黃素1g，淀粉50g，微晶纖維素20g，硬脂酸鎂2g，二氧化硅1.5g。

2.1.10 視安利膠囊的制備 按上述處方量將蓮子殼提取物、葉黃素、淀粉、微晶纖維素、硬脂酸鎂、二氧化硅采用等量遞增法混勻，加入30%藥粉量的50%的乙醇，約106mL制備成軟材。將所制軟材通過2號篩，擠壓制粒，將顆粒在45℃干燥3h，用2號篩整粒，裝1號膠囊，即得。

2.2 含量測定

2.2.1 原花青素的含量測定

2.2.1.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm)，DAD檢測器；流動相為水∶甲醇∶異丙醇∶甲酸(65∶15∶10∶10 V/V)；流速為1.0 mL/min；檢測波長為525 nm，進樣量20μL。

2.2.1.2 對照品溶液的制備 稱取原花青素對照品約15mg，精密稱定，置于10mL棕色瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得對照品儲備液，從中精密量取1.0mL置于10mL棕色量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.1.3 供試品溶液的制備 取本品內容物，用研缽研細，精密稱定約0.2g內容物置于具塞錐形瓶中，精密加入25mL甲醇溶液，密塞后稱重，超聲(功率250W，頻率40kHz)處理30min，取出后放冷，再次稱重，用甲醇補足減失重量。搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1mL置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.1.4 陰性對照品溶液的制備 取按制劑“2.1.9”項下處方比例及“2.1.10”項下制備工藝除去蓮子殼提取物的陰性樣品，按“2.2.1.3”項下制備供試品的方法制備成陰性對照品溶液。

2.2.1.5 系統(tǒng)適應性實驗 按“2.2.1.1”項下色譜條件進行HPLC分析，色譜圖見圖1。

2.2.1.6 標準曲線的制備 分別精密量取“2.2.1.2”項下的原花青素對照品儲備液0.1,0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 mL置10 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻后按“2.2.1.1”項下色譜條件進行試驗，分析數(shù)據(jù)，得標準曲線方程：Y=1.54X-17.02，r=0.9993(X為濃度，Y為峰面積)。結果表明，在濃度15.03～302.42μg/mL范圍內線性關系良好。

2.2.1.7 精密度實驗 取“2.2.1.2”項下對照品溶液，重復進樣6次，記錄其峰面積。計算RSD為0.45%，表明儀器精密度良好。

2.2.1.8 重復性實驗 取本品內容物6份，按“2.2.1.1”項下色譜條件進行試驗，結果表明原花青素的平均含量分別為標示量的100.48%，RSD為0.76% (n=6)，表明該方法的重復性較好。

2.2.1.9 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0、4、8、12、18、24 h測定，記錄原花青素的峰面積。原花青素的峰面積的RSD%為1.36% (n=5)。表明供試品溶液在24h內穩(wěn)定性較好。

a.供試品;b.對照品;c.空白樣品

2.2.1.10 加樣回收率實驗 取本品內容物6份，各約0.1g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入25 mL甲醇溶液，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHZ)處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，分別加入對照品儲備液0.5 mL，并加甲醇至刻度，搖勻，按“2.2.1.1” 項下色譜條件進行試驗，測得平均回收率為100.5%。RSD為1.15%，表明方法的準確度良好。

2.2.1.11 樣品含量測定 取10批不同視安利膠囊樣品(標示裝量為0.35g/粒)，按“2.2.1.3”項下制備樣品溶液的方法制備視安利膠囊樣品溶液，按“2.2.1.1”項下色譜條件進行試驗，用外標法計算含量。結果見表8。

表8 樣品中原花青素的測定結果(n=10) mg/粒

2.2.2 葉黃素的含量測定

2.2.2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，DAD檢測器；流動相為甲醇∶水∶乙腈(15∶5∶80)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：447 nm；進樣量：20μL。

2.2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取適量經P2O5干燥的葉黃素對照品，加流動相溶解后定量制成每1mL含24 μg的葉黃素對照品溶液，即得。

2.2.2.3 供試品溶液的制備 取本品內容物,研細,精密稱定約0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相25mL后密塞，稱重，超聲20min，放冷，再次稱重，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.2.2.4 陰性對照品溶液的制備 取按制劑“2.1.9”項下處方比例及“2.1.10”項下制備工藝，除去葉黃素的陰性樣品，按“2.3.2.3”項下制備供試品的方法制備成陰性對照品溶液。

2.2.2.5 系統(tǒng)適應性實驗 按“2.2.2.1”項下色譜條件進行HPLC分析，色譜圖見圖3。結果表明葉黃素的峰形良好，R值均大于1.5，n均大于7500，無拖尾現(xiàn)象。

2.2.2.6 標準曲線 分別精密吸取“2.2.2.2”項下對照品溶液0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0mL 置10mL 棕色量瓶中, 加流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.2.2.1”項下色譜條件測定葉黃素的峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(Y)，對照品濃度為橫坐標(X)，繪制葉黃素對照品的標準曲線，其回歸方程為Y=80.45X+1.83，r=0.9997。結果表明， 葉黃素在濃度 5.23～49.76μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.2.2.7 精密度實驗 取“2.2.2.2”項下葉黃素對照品溶液，按“2.2.2.1” 項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄葉黃素峰面積，測得RSD%為0.71%，表明方法的精密度良好。

2.2.2.8 重復性實驗 取同一批號的供試品，按“2.2.2.3”項下制備供試品溶液的方法平行制備5份供試品溶液，按“2.2.2.1”項下色譜條件下進行分析測定，記錄葉黃素的峰面積。結果測得葉黃素的平均含量為標示量的99.7%，葉黃素峰面積的RSD%為2.2%，表明方法重復性良好。

2.2.2.9 穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液,室溫放置，分別于0、4、8、12、18、24 h測定，記錄葉黃素的峰面積。測得RSD%為1.05%。表明供試品溶液在24h內穩(wěn)定。

2.2.2.10 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的樣品(2.98mg/g)約0.1g，共6份，分別精密加入0.5mL葉黃素對照品溶液(0.6024mg/mL)，然后按“2.2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.2.1”項下色譜條件測定葉黃素的含量，計算回收率。測得平均回收率為100.8%。RSD為0.73%，表明方法的準確度良好。

a.葉黃素對照品溶液 b.樣品溶液 c.陰性對照溶液

2.2.2.11 樣品含量的測定 取10批視安利膠囊樣品，按“2.2.2.3”項下制備方法制備供試品溶液，經高效液相色譜分析，用外標法計算含量。測得三批樣品中葉黃素含量見表9。故擬定視安利膠囊按干燥品計算，含葉黃素不得少于2.6mg/g。

表9 視安利膠囊中葉黃素的含量結果(n=10) mg/g

3 討論

視安利膠囊是以蓮子殼提取物原花青素及葉黃素為主要原料制備而成，用于緩解各種因素所引起的視疲勞癥狀。本文對視安利膠囊的制備工藝及其主藥的含量進行了測定，為視安利膠囊的研究開發(fā)提供了科學、合理的藥學研究資料。同時，也為緩解和調理眼部疲勞提供了一種新的制劑研究方法與思路。

本課題的研究仍有不足之處，原花青素為不同聚合度的聚合物，我們所得到是原花青素不同聚合度的混合物。而蓮子殼提取物生物活性的高低與原花青素低聚物的含量有關，如何獲得純度較高的原花青素低聚物需要進一步研究。

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