環(huán)境激素睪丸酮和雌二醇對卜氏晶囊輪蟲繁殖影響

劉露露 盧緒鑫 葉天韻 金司晨 閔元棋 韓亞杰 楊家新

(南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 南京 210023)

輪蟲是重要的淡水浮游生物類群, 由于其個體小, 生活史周期和世代時間短、生殖速度快, 自20世紀(jì)70年代初期開始, 輪蟲被用作毒理學(xué)研究的重要受試動物[1,2], 如Buikema等[3]采用輪蟲評價重金屬離子的毒性, 并獲得理想效果。目前, 生態(tài)毒理學(xué)方面的研究多集中在萼花臂尾輪蟲(Brachionus calyciflorus), 而對捕食性晶囊輪蟲, 如卜氏晶囊輪蟲(Asplanchna brightwelli)作為實驗動物研究生態(tài)毒理效應(yīng)的報道尚不多見。目前, 針對晶囊輪蟲的研究大多學(xué)者都集中于輪蟲表型多態(tài)現(xiàn)象研究方面, Gilbert[4]發(fā)現(xiàn)西氏晶囊輪蟲(Asplanchna sieboldi)在0.02 pg生育酚的誘導(dǎo)下會由正常的囊型個體(Saccate)轉(zhuǎn)變?yōu)槭中蛡€體(Cruciform)和鐘型個體(Campanulate)。Birky[5]將雌體卜氏晶囊輪蟲的形態(tài)分為α 型和β 型。由于卜氏晶囊輪蟲個體比萼花臂尾輪蟲大且行動緩慢易計數(shù), 很多學(xué)者都建議將其作為水環(huán)境監(jiān)測的指示生物。

睪丸酮與雌二醇是由脊椎動物分泌的類固醇激素, 進(jìn)入水體會對浮游生物產(chǎn)生內(nèi)分泌干擾。近年來, 國內(nèi)外已有若干關(guān)于環(huán)境激素對輪蟲影響的研究[6,7], 如Radix等[8]發(fā)現(xiàn)當(dāng)睪丸酮濃度高于0.58 μmol/L時, 萼花臂尾輪蟲內(nèi)稟增長率r會顯著下降。2種多溴二苯醚BDE-47和BDE-209均促進(jìn)褶皺臂尾輪蟲(Brachionus plicatilis)性成熟, 其中BDE-47顯著抑制其繁殖力, BDE-209顯著提高其繁殖力[9]。Huang等[10]發(fā)現(xiàn)狄氏劑濃度為0.001—100 μg/L,17β-雌二醇濃度為0.001、0.01、1、100和1000 μg/L時, 可顯著延長萼花臂尾輪蟲輪蟲的繁殖期(P＜0.01)。然而關(guān)于環(huán)境激素對卜氏晶囊輪蟲生長生殖的影響鮮有報道。

本文以卜氏晶囊輪蟲為受試動物, 旨在探討在睪丸酮、雌二醇等典型類固醇激素對卜氏晶囊輪蟲生殖的影響, 分析捕食性種類-晶囊輪蟲對環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的敏感性和可靠性, 為利用輪蟲作為受試動物, 開展環(huán)境激素風(fēng)險評估和評價提供新的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料的培養(yǎng)

實驗采用卜氏晶囊輪蟲, 體長: 500—800 μm,來自南京采月湖(32°6′35.24″N, 118°18′32.71″E)。在解剖鏡下挑取活力旺盛的非混交雌體作為起始材料, 在實驗室條件下以EPA(去離子水配制, 含96 mg/L NaHCO3, 60 mg/L CaSO4· 2H2O, 60 mg/L MgSO4, 4 mg/L KCl, pH 7.5左右)為培養(yǎng)基進(jìn)行單個體“克隆”培養(yǎng)[11]。培養(yǎng)光照強(qiáng)度約4000 lx, 晝長比L鯰D=12鯰12, 溫度(25±5)℃, 每天投喂萼花臂尾輪蟲為食物, 食物密度大于50個/mL, 每天投喂2次。萼花臂尾輪蟲使用濃縮蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)培養(yǎng), 蛋白核小球藻培養(yǎng)方式同楊家新和黃祥飛[12]。

1.2 試驗藥品的配置

睪丸酮和雌二醇(純度均＞98%)購于Sigma-Aldrich公司。采用丙酮(分析純)為助溶劑, 分別將睪丸酮、雌二醇配置為10000 mg/L的母液, 再用EPA培養(yǎng)基稀釋為不同濃度梯度的實驗溶液。

1.3 急性毒性實驗

利用1.2母液, 分別配制不同濃度(5、10、15和20 mg/L)的睪丸酮和雌二醇, 隨機(jī)挑取300只非混交雌體幼體(齡期＜4h), 分別放入6孔板中培養(yǎng), 每孔添加5 mL實驗液, 隨機(jī)加入10只個體。每12h觀察1次, 24h更換培養(yǎng)基。根據(jù)幾率單位法計算48hLC50。每組設(shè)6個平行及1個對照組。

1.4 激素單一作用效應(yīng)實驗

睪丸酮、雌二醇對卜氏晶囊輪蟲生殖和壽命的影響隨機(jī)挑取單個活潑健壯的新生幼體(＜4h), 移入24孔板中培養(yǎng), 每孔加入1 mL濃度為0.5、1、2、4和8 mg/L的實驗液。每4—6h觀察1次, 24h更換培養(yǎng)基。記錄輪蟲第一次產(chǎn)幼時間、后代幼體個數(shù)以及母體存活數(shù)。移除剛出生幼體,實驗至全部個體死亡為止。每組設(shè)12個平行及1個對照組。其他培養(yǎng)條件同1.1。

睪丸酮、雌二醇對卜氏晶囊輪蟲種群增長率的影響隨機(jī)挑取齡期小于4h的非混交雌體于6孔板中, 每孔4只并加入4 mL實驗液。每組設(shè)6個平行及1個對照組。藥品濃度與培養(yǎng)方法同上。

1.5 睪丸酮和雌二醇組合效應(yīng)實驗

睪丸酮和雌二醇組合定量(8 mg/L)對卜氏晶囊輪蟲生殖、壽命影響根據(jù)預(yù)實驗, 睪丸酮與雌二醇濃度為8 mg/L時對卜氏晶囊輪蟲生長抑制最為明顯, 設(shè)置組合總實驗濃度為8 mg/L。將睪丸酮和雌二醇按以下方案進(jìn)行混合: T表示睪丸酮, E表示雌二醇, 下標(biāo)為濃度(單位mg/L), 具體組合如下:T0E8、T2E6、T4E4、T6E2和T8E0, 另設(shè)置一個對照組T0E0, 每組12個平行。

睪丸酮和雌二醇組合定量(8 mg/L)對卜氏晶囊輪蟲種群增長率的影響隨機(jī)挑取齡期小于4h的非混交雌體于6孔板中, 每孔4只并加入4 mL實驗液。每組設(shè)6個平行及1個對照組。藥品濃度與培養(yǎng)方法同上。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

種群增長率:r=(lnNt-lnN0)/tNt為種群在t時的種群數(shù)量,N0為起始數(shù)量,T為試驗時間。采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One Way ANOVA)。

2 結(jié)果

2.1 睪丸酮、雌二醇的急性毒性實驗

如圖1、圖2, 卜氏晶囊輪蟲暴露在5、10、15和20 mg/L濃度組梯度的睪丸酮中, 處理48h, 其死亡率分別為31.30%、43.80%、70.80% 和72.90%,運用概率單位法求得睪丸酮對卜氏晶囊輪蟲的48hLC50為9.56 mg/L, 直線回歸方程為Y=1.98X+3.06(R2=0.92), 95%置信限為2.74—33.40 mg/L。

卜氏晶囊輪蟲暴露在5、10、15和20 mg/L雌二醇濃度處理48h, 其死亡率分別為28.30%、50.00%、78.30% 和95.00%, 運用概率單位法求得雌二醇對卜氏晶囊輪蟲的48hLC50為8.18 mg/L, 直線回歸方程為Y=3.53X+1.78 (R2=0.92), 95%置信限為3.07—21.77 mg/L。由以上結(jié)果可看出隨睪丸酮與雌二醇濃度升高, 輪蟲死亡率呈上升趨勢。

圖1 睪丸酮濃度對數(shù)與輪蟲死亡幾率的關(guān)系Fig. 1 The relationship between probability and logarithmic of testosterone concentrations

圖2 雌二醇濃度對數(shù)與輪蟲死亡幾率的關(guān)系Fig. 2 The relationship between probability and logarithmic of estradiol concentrations

2.2 睪丸酮和雌二醇對卜氏晶囊輪蟲生殖、壽命的影響

在睪丸酮處理后, 卜氏晶囊輪蟲平均壽命和后代個體數(shù)均受到顯著影響(表 1)。方差分析顯示,生殖前期在8 mg/L時, 比對照組顯著延長11.71%(P＜0.05), 其他組無顯著性變化(P＞0.05)。除0.5 mg/L濃度組之外, 其余各處理組的平均壽命顯著縮短、后代個體數(shù)明顯減少(P＜0.05)。與對照組相比, 睪丸酮濃度為1、2、4和8 mg/L時, 平均壽命分別縮短21.91%、35.61%、35.00%和52.22%;后代個數(shù)分別降低31.63%、69.22%、60.51%和82.20%, 差異顯著(P＜0.05)。

方差分析顯示, 雌二醇為4和8 mg/L處理組的生殖前期比對照組分別延長6.74% 和7.10%(P＜0.05)。與對照組相比, 各處理組表現(xiàn)出輪蟲壽命縮短和后代個體數(shù)減少現(xiàn)象。雌二醇濃度為0.5、1、2、4和8 mg/L時, 輪蟲平均壽命分別縮短21.49%、27.72%、34.58%、39.09%和49.75%; 后代個數(shù)分別降低24.44%、38.67%、46.22%、49.44%和80.33%, 各處理間差異顯著(P＜0.05)。

2.3 睪丸酮、雌二醇對卜氏晶囊輪蟲種群增長率的影響

由圖3可以看出, 睪丸酮對卜氏晶囊輪蟲的種群增長率有顯著影響, 在總體上, 隨著睪丸酮濃度升高,r值呈現(xiàn)下降趨勢, 其中第4天組間差異最為明顯(F=20.17,df組間=5,df組內(nèi)=66,P＜0.001)。 與對照組相比, 第4天睪丸酮濃度為4和8 mg/L時, 種群增長率為0.74和0.55, 分別比對照組下降10.77%和33.58%, 差異極其顯著(P＜0.01)。

雌二醇處理組與睪丸酮較為相似(圖4), 卜氏晶囊輪蟲種群增長率呈現(xiàn)顯著差異, 總體上隨著雌二醇濃度升高,r值呈現(xiàn)下降趨勢, 其中第4天組間差異最為明顯(F=25.81,df組間=5,df組內(nèi)=66,P＜0.001)。與對照組相比, 第4天睪丸酮濃度為1、4和8 mg/L時, 種群增長率為0.80、0.74和0.61, 分別比對照組下降12.92%、18.70%和33.53%, 差異顯著(P＜0.05)。

2.4 睪丸酮和雌二醇組合對卜氏晶囊輪蟲生殖、壽命影響

睪丸酮與雌二醇組合對卜氏晶囊輪蟲生殖前期、平均壽命和后代個體數(shù)有顯著影響(表 2)。方差分析顯示, 藥物濃度為T0E8、T2E6和T8E0mg/L時,生殖前期顯著延長, 分別比對照組延長34.17%、48.01%和43.57%(P＜0.05), 其他組無顯著性變化(P＞0.05)。組合濃度為T0E8、T2E6、T4E4、T6E2和T8E0時, 輪蟲平均壽命比對照組分別縮短32.53%、42.12%、31.56%、35.33%和37.73%; 后代個數(shù)則分別減少87.89%、89.78%、78.67%、85.22%和86.11%, 差異極其顯著(P＜0.001)。

表 1 睪丸酮和雌二醇對卜氏晶囊輪蟲生殖前期、平均壽命與產(chǎn)出后代個數(shù)的影響Tab. 1 The effect of testosterone and estradiol on pre-reproductive period, mean lifespan and fecundity of Asplanchna brightwelli under different concentrations

由表 1、表 2可看出, 8 mg/L睪丸酮的生殖前期為(35.00±1.56)h, 后代個數(shù)為1.88 ± 0.35, 組合處理組T0E8、T2E6和T8E0輪蟲的生殖前期分別較其延長19.14%、31.43%和27.51%, 產(chǎn)出后代個數(shù)分別減少42.01%、51.06%和33.51%; 8 mg/L雌二醇的生殖前期為33.20±0.84, 后代個數(shù)為1.77±0.32, 處理組T0E8、T2E6和T8E0的生殖前期分別延長25.60%、38.55%和34.43%; 產(chǎn)出后代個數(shù)分別減少38.42%、48.02%和29.38%。

圖3 不同濃度睪丸酮對卜氏晶囊輪蟲種群增長率的影響Fig. 3 The impact of testosterone with different concentrations on population growth rate of Asplanchna brightwelli

圖4 不同濃度雌二醇對卜氏晶囊輪蟲種群增長率的影響Fig. 4 The impact of estradiol with different concentration on the population growth rate of Asplanchna brightwelli

2.5 睪丸酮和雌二醇組合對卜氏晶囊輪蟲種群增長率的影響

由圖5可以看出, 睪丸酮和雌二醇組合對卜氏晶囊輪蟲的種群增長率的影響顯著, 總體上, 隨著組合中雌二醇睪丸酮濃度升高,r值呈下降趨勢, 其中第5天, 組間差異最為明顯(F=9.71,df組間=5,df組內(nèi)=62,P＜0.001)。與對照組相比, 第5天, 濃度組為T6E2、T4E4、T8E0、T0E8和T2E6mg/L的種群增長率分別為0.49、0.44、0.41、0.28和0.24, 分別比對照組減少30.00%、37.14%、41.43%、60.00%和65.71%, 差異極其顯著(P＜0.01)。由此可見, 在睪丸酮與雌二醇組合中, 雌二醇對卜氏晶囊輪蟲種群存活和繁殖影響更大, 兩者表現(xiàn)出顯著的協(xié)同作用。

3 討論

3.1 睪丸酮和雌二醇單一作用下對卜氏晶囊輪蟲生殖和種群增長的影響

許多浮游動物早期生命階段對毒物的敏感性較晚期發(fā)育階段高, 胚胎發(fā)育歷時在輪蟲、枝角類和橈足類都被認(rèn)為是比較敏感性的指標(biāo)之一[13,14]。生殖前期是輪蟲性成熟標(biāo)志, 與平均壽命和后代個體數(shù)目作為生活史特征參數(shù)來檢測環(huán)境激素具有重要意義。Halbach[15]提出環(huán)境激素會降低機(jī)體對食物攝取、減緩游泳速度以及通過影響各生活史階段歷時和產(chǎn)卵量, 進(jìn)而影響輪蟲的種群動態(tài)。Marcial等[14]研究發(fā)現(xiàn), 當(dāng)敵匹硫磷濃度高于2.5 mg/L時, 褶皺臂尾輪蟲第一次產(chǎn)幼時間顯著滯后, 高于5 mg/L時, 延遲其產(chǎn)卵時間并顯著縮短其平均壽命。朱瑋閣等[16]研究發(fā)現(xiàn)1和5 μg/LTBTC能顯著延長萼花臂尾輪蟲生殖前期并縮短其平均壽命。本實驗結(jié)果表明, 環(huán)境雄激素睪丸酮和雌性激素雌二醇在1—8 mg/L內(nèi)均能降低卜氏晶囊輪蟲種群增長率、減少產(chǎn)出后代個體數(shù)目、縮短平均壽命, 且表現(xiàn)出明顯劑量效應(yīng), 這與以往觀察結(jié)果相近[14,16,17]。比較產(chǎn)出后代個體數(shù)目發(fā)現(xiàn), 各處理組后代個體數(shù)僅相當(dāng)于對照組的15%—70%, 這意味著睪丸酮和雌二醇對卜氏晶囊輪蟲的性成熟和生殖行為存在明顯的干擾作用。

表 2 睪丸酮和雌二醇組合定量(8 mg/L)對卜氏晶囊輪蟲生殖前期、平均壽命與產(chǎn)出后代個數(shù)的影響Tab. 2 The effect of testosterone and estradiol on pre-reproductive period, mean lifespan and fecundity of Asplanchna brightwelli with a total concentration of 8 mg/L

國內(nèi)外關(guān)于環(huán)境因子和污染物(如除草劑、殺蟲劑和重金屬等)對輪蟲存活率和繁殖率的研究已有若干報道, 但對利用輪蟲評價環(huán)境激素類污染物的報道尚不多見。Radix等[8]研究發(fā)現(xiàn), 當(dāng)乙炔雌二醇和睪丸酮濃度分別高于1.72和8.88 μmol/L時, 萼花臂尾輪蟲的內(nèi)稟增長率顯著下降。 柯麗霞等[18]研究發(fā)現(xiàn)100 μg/L 17β-雌二醇顯著提高萼花臂尾輪蟲種群增長率, 1000 μg/L時顯著降低其休眠卵產(chǎn)量。許多學(xué)者認(rèn)為, 輪蟲孤雌生殖的過程中生殖前期歷時和胚胎發(fā)育時間會影響其種群增長速率, 生殖前期的延長會導(dǎo)致種群增長率降低[19,20]。Gama-Flores等[21]認(rèn)為輪蟲暴露時間和濃度對種群增長有重要影響。本實驗結(jié)果顯示睪丸酮和雌二醇濃度高于1 mg/L時, 隨暴露時間的延長, 卜氏晶囊輪蟲種群增長率呈下降趨勢, 且濃度越高抑制作用越明顯。卜氏晶囊輪蟲生殖前期對睪丸酮和雌二醇的反應(yīng)并不敏感, 平均壽命與后代個體數(shù)目間接反應(yīng)種群增長率的變化, 這與以往的研究結(jié)果較為一致[21]。輪蟲繁殖能力下降不僅與其生殖前期延長, 進(jìn)而導(dǎo)致生殖期縮短, 同時還可能是因為高濃度劑量睪丸酮和雌二醇對輪蟲生理機(jī)能產(chǎn)生了影響, 干擾其內(nèi)分泌系統(tǒng)正常機(jī)能, 對其種群增長產(chǎn)生的不利影響。這種激素效應(yīng)是否會隨食物鏈傳遞到高營養(yǎng)級的魚類尚不得而知, 因此, 利用卜氏晶囊輪蟲作為環(huán)境激素檢測的標(biāo)志動物具有潛在應(yīng)用價值[22]。

圖5 睪丸酮和雌二醇聯(lián)合定量(8 mg/L)對卜氏晶囊輪蟲種群增長率的影響Fig. 5 The impact of testosterone and estradiol (8 mg/L) on the population growth rate of A.brightwelli

3.2 睪丸酮與雌二醇組合作用下對卜氏晶囊輪蟲生殖和種群增長的影響

在自然界中, 環(huán)境污染物影響著物種豐富度、多樣性和生態(tài)系統(tǒng)功能, 它們往往是聯(lián)合發(fā)揮作用,目前關(guān)于單一環(huán)境激素對輪蟲生殖影響研究的報道很多, 但以組合形式對輪蟲的研究的卻很少[23]。Gallardo等[24,25]提出50 mg/L γ-氨基丁酸、0.0025和0.025 IU/mL生長激素、0.25和2.50 IU/mL人體絨毛膜促性腺激素釋放激素以及5 mg/L 5-羥色胺聯(lián)合能顯著提高褶皺臂尾輪蟲種群增長率。張輝等[26]以鯽(Carassius auratus)血漿卵黃蛋白為指標(biāo)并借助數(shù)學(xué)模型, 得出17β-雌二醇和雙酚A毒性固定比例混合物的劑量-效應(yīng)關(guān)系, 發(fā)現(xiàn)混合物的效應(yīng)取決于化合物的性質(zhì)、暴露劑和質(zhì)量比例, 為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物在水生生物中的作用機(jī)理提供了很好的科學(xué)依據(jù)。睪丸酮是生物中主要的雄性激素, 是類固醇物質(zhì)[27]; 雌二醇同樣是類固醇物質(zhì), 在雌性生殖中是重要生長激素, 它保持卵母細(xì)胞的活力,又能阻止精細(xì)胞的凋亡[28]。楊家新等[29]提出睪丸酮和孕酮組合定量為1000 μg/L時, 能顯著提高萼花臂尾輪蟲的種群增長率。本研究發(fā)現(xiàn), 與睪丸酮和雌二醇單一濃度為8 mg/L相比, 兩激素組合定量(8 mg/L)中各處理組的生殖前期顯著延長, 后代個體數(shù)目顯著減少, 種群增長率顯著降低。整體上表現(xiàn)出在組合中隨雌二醇濃度增高, 對輪蟲生殖抑制越明顯,其中T2E6濃度組最為顯著, 這表明卜氏晶囊輪蟲對雌二醇更為敏感, 并且2種藥品呈現(xiàn)出協(xié)同作用。

[1]Snell T W, Moffat B D. A 2-d life cycle test with the rotiferBrachionus calyciflorus[J].Environmental Toxicology and Chemistry, 1992, 11(9): 1249—1257

[2]Snell T W, Joaquim J C. Workshop on rotifers in ecotoxicology [J].Hydrobiologia, 2007, 593(1): 227—232

[3]Buikema A L, Cairns J, Sullivan G W. Evaluation ofPhilodina acuticornis(Rotifera) as a bioassay organism for heavy metal [J].Water Research Bulletin, 1974, 10(4):48—66

[4]Gilbert J J. Polymorphism in the rotiferAsplanchna sieboldi: Biomass, growth, and reproductive rate of the saccate and campanulate morphotypes [J].Ecology, 1976,57(3): 542—551

[5]Birky C W. The developmental genetics of polymorphism in the rotiferAsplanchna. 1. Dietary vitamin E control of mitosis and morphogenesis in embryos [J].Journal of Experimental Zoology, 1968, 169(2): 205—210

[6]Andersen H R, Halling-Sorensen B, Kusk K O. A para-meter for detecting estrogenic exposure in the copepodAcartia tonsa[J].Ecotoxicology and Environmental Safety, 1999, 44(1): 56—61

[7]Preston B L, Snell T W, Robertson T L,et al. Use of freshwater rotiferBrachionus calyciflorusin screening assay for potential endocrine disruptors [J].Environmental Toxicology & Chemistry, 2000, 19(12): 2923—2928

[8]Radix P, Severin G, Schramm K W,et al. Reproduction disturbances ofBrachionus calyciflorus(rotifer) for the screening of environmental endocrine disrupters [J].Chemosphere, 2002, 47(10): 1097—1101

[9]Zhang J, Wang Y, Zhou B,et al. Reproductive effects of two polybrominated diphenyl ethers on the rotiferBrachionus plicatilis[J].Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 2016, 97(2): 198—202

[10]Huang L, Xi Y L, Zha C W,et al. Effects of dieldrin and 17β-estradiol on life history characteristics of freshwater rotiferBrachionus calyciflorus Pallas[J].Journal of Freshwater Ecology, 2012, 27(3): 381—392

[11]Ortells R, Gómez A, Serra M. Coexistence of cryptic rotifer species: ecological and genetic characterisation ofBrachionus plicatilis[J].Freshwater Biology, 2003,48(12): 117—126

[12]Yang J X, Huang X F. Effects of density and temperature on the egg and mictic female produced byBrachionus calyciflorus[J].Journal of Lake Sciences, 1996, 8(4):367—372 [楊家新, 黃祥飛. 密度和溫度對萼花臂尾輪蟲產(chǎn)卵量和混交雌體的影響. 湖泊科學(xué), 1996, 8(4):367—372]

[13]Rand G M. Fundamentals of aquatic toxicology: effects,environmental fate, and risk assessment [J].International Journal of Toxicology, 1996, 15(5): 453—454

[14]Marcial H S, Hagiwara A, Snell T W. Effects of some pesticides on reproduction of rotiferBrachionus plicatilisMuller [J].Hydrobiologia, 2005, 546(1): 569—575

[15]Halbach U. Population dynamics of rotifers and its consequences for ecotoxicology [J].Hydrobiologia, 1984,109(1): 79—96

[16]Zhu W G, Li S G, Lü L L,et al. Effects of environmental hormones fenvalerate and organotin on the life history of rotifers [J].Journal of Lake Sciences, 2009, 21(5):687—692 [朱瑋閣, 李孫根, 呂林蘭, 等. 環(huán)境激素氰戊菊酯和有機(jī)錫對輪蟲生活史特征的影響. 湖泊科學(xué),2009, 21(5): 687—692]

[17]Chu Z X, Xi Y L, Xu X P,et al. Effects of herbicide glyphosate on the life history ofBrachionus calyciflorus[J].Chinese Journal of Applied Ecology, 2005, 16(6):1142—1145 [儲昭霞, 席貽龍, 徐曉平, 等. 除草劑草甘膦對萼花臂尾輪蟲生活史特征的影響. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報,2005, 16(6): 1142—1145]

[18]Ke L X, Xi Y L, Zha C W,et al. Effects of methamidophos and 17β-estradiol on the experimental population dynamics ofBrachionus calyciflorus[J].Chinese Journal of Applied Ecology, 2008, 19(1): 157—162 [柯麗霞,席貽龍, 查春旺, 等. 甲胺磷和17β-雌二醇對萼花臂尾輪蟲實驗種群動態(tài)的影響. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報, 2008, 19(1):157—162]

[19]Day K, Kaushik N K. An assessment of the chronic toxicity of the synthetic pyrethrnoid, fenvalerate, toDaphnia galeata mendotae, using life tables [J].Environmental Pollution, 1987, 44(1): 13—26

[20]Xi Y L, Hu H Y. Effect of thiophanate-methyl on the reproduction and survival of the freshwater rotiferBrachionus calyciflorusPallas [J].Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 2003, 71(4): 722—728

[21]Gama-Flores J L, Castellanos-Paez M E, Sarma S S S,et al. Effect of pulsed exposure to heavy metals (copper and cadmium) on some population variables ofBrachionus calyciflorusPallas (Rotifera: Brachionidae: Monogononta) [J].Hydrobiologia, 2007, 593(1): 201—208

[22]Chen J Q, Wang Z L, Li G P,et al. Effect of organophosphorus pesticide dimethoate on reproduction ofBrachionus calyciflorus[J].Journal of Ecology, 2012(10):1731—1736 [陳建秋, 王志良, 李國平, 等. 有機(jī)磷農(nóng)藥樂果對萼花臂尾輪蟲生殖的影響. 生態(tài)環(huán)境學(xué)報,2012(10): 1731—1736]

[23]Lürling M, Scheffer M. Info-disruption: pollution and the transfer of chemical information between organisms [J].Trends in Ecology & Evolution, 2007, 22(7): 374—379

[24]Gallardo W G, Hagiwara A, Tomita Y. Effect of growth hormone and γ-aminobutyric acid onBrachionus plicatilis(Rotifera) reproduction at low food or high ammonia levels [J].Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 1999, 240(2): 179—191

[25]Gallardo W G, Hagiwara A, Tomita Y. Effect of juvenile hormone and serotonin(5-HT) on mixis induction of the rotiferBrachionus plicatilismüller [J].Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 2000, 252(1):97—107

[26]Zhang H, Kong F X, Wang S H,et al. Combined estrogenic effects of bisphenol A on the action of steroidal estrogen [J].Safety and Environmental Engineering, 2008,15(2): 13—17 [張暉, 孔繁翔, 王世和, 等. 雙酚A與內(nèi)源性雌激素聯(lián)合作用的探討. 安全與環(huán)境工程, 2008,15(2): 13—17]

[27]Nelson R J, An Introduction to Behavioral Endocrinology (Fourth Edition) [M]. Sunderland: Sinauer Associates. 2000, 36(4): 620—622

[28]Pentik?inen V, Erkkil? K, Suomalainen L,et al. Estradiol acts as a germ cell survival factor in the human testis in vitro [J].Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 2000, 85(5): 2057—2067

[29]Yang J X, Snell T W. Effects of progesterone, testosterone, and estrogen on sexual reproduction of the rotiferBrachionus calyciflorus[J].International Review of Hydrobiology, 2010, 95(6): 441—449