硫甙脫毒菌株的篩選及其發(fā)酵菜籽粕的效果

吳正可 劉國華 蔡輝益 常文環(huán) 鄭愛娟 張 姝

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，生物飼料開發(fā)國家工程研究中心，農(nóng)業(yè)部生物飼料重點實驗室，北京 100081)

隨著我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，常規(guī)飼料原料尤其是蛋白質(zhì)原料供應(yīng)緊缺，傳統(tǒng)型的玉米-豆粕型動物飼糧結(jié)構(gòu)正在發(fā)生變化，引入菜籽粕等雜粕的多元化飼糧結(jié)構(gòu)將會成為我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的新常態(tài)[1]。菜籽粕是油菜籽在榨油過程中生產(chǎn)的副產(chǎn)物，其粗蛋白質(zhì)含量在35%～45%，是一種較為常見的飼料蛋白質(zhì)原料資源[2]，但由于含有硫甙(glucosinolate，GS)、單寧、植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子，且粗纖維含量較高[3]，限制了其在動物飼糧中的飼用價值。為了提高菜籽粕的飼用價值，研究人員針對菜籽粕抗?fàn)I養(yǎng)因子的脫毒和降解開展了大量的研究。早期的菜籽粕脫毒方法主要有物理法與化學(xué)法[4]，通過物理加熱和溶劑浸提雖然能有效地減少菜籽粕中的硫甙含量，但操作成本高，且存在著營養(yǎng)物質(zhì)損失大、試劑殘留等問題[5]。近年來，生物發(fā)酵脫毒法由于具有成本低、營養(yǎng)物質(zhì)損失小、脫毒的同時改善菜籽粕的營養(yǎng)價值等優(yōu)點而得到了廣泛的關(guān)注[6-8]。Rozan等[9]使用少孢根霉菌發(fā)酵處理菜籽粕，發(fā)酵40 h后可降解30%的木質(zhì)素，降解47%的硫甙。研究發(fā)現(xiàn)，采用混菌發(fā)酵可以產(chǎn)生多種酶系，達(dá)到協(xié)同效果[10-11]。目前用于發(fā)酵菜籽粕的菌株多為黑霉、曲霉及芽孢類等非農(nóng)業(yè)部允許添加在飼料中的微生物，其安全性有待進一步考證；其次，大部分發(fā)酵菜籽粕的研究主要側(cè)重于硫甙的降解，而對于菜籽粕營養(yǎng)指標(biāo)及風(fēng)味指標(biāo)的研究報道相對較少[12]。因此，本試驗旨在從發(fā)酵青貯與土壤混合液中篩選出能高效降解硫甙且符合農(nóng)業(yè)部添加規(guī)定的微生物，并結(jié)合釀酒酵母發(fā)酵以提高菜籽粕風(fēng)味，配合枯草芽孢桿菌以改善菜籽粕營養(yǎng)結(jié)構(gòu)，對菜籽粕進行混菌固態(tài)發(fā)酵，于脫毒的同時改善菜籽粕營養(yǎng)價值與風(fēng)味。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

菜籽餅(高毒)取自云南大理，硫甙含量108 μmol/g，用于硫甙的提取；發(fā)酵用菜籽粕取自北京金盛祥科技發(fā)展有限公司，硫甙含量37 μmol/g，用于微生物發(fā)酵培養(yǎng)基基質(zhì)；枯草芽孢桿菌、釀酒酵母取自山東大學(xué)微生物技術(shù)國家重點實驗室；硫甙由本實驗室粗提獲得。

1.1.1 硫甙的粗提

硫甙的粗提參照文獻[13]，在70 ℃水浴條件下，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液提取6 h，離心、過濾并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)上清液后獲得硫甙粗品。

1.1.2 培養(yǎng)基

乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)+硫甙固體篩選培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，牛肉膏10 g/L，硫甙5 g/L，磷酸氫二鉀2 g/L，乙酸鈉5 g/L，檸檬酸三銨2 g/L，硫酸鎂0.1 g/L，硫酸錳0.05 g/L，吐溫-80 1 g/L，瓊脂20 g/L，121 ℃滅菌20 min。

MRS培養(yǎng)基+硫甙液體復(fù)篩培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，牛肉膏10 g/L，硫甙5 g/L，磷酸氫二鉀2 g/L，乙酸鈉5 g/L，檸檬酸三銨2 g/L，硫酸鎂0.1 g/L，硫酸錳0.05 g/L，吐溫-80 1 g/L，121 ℃滅菌20 min。

MRS培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，牛肉膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，磷酸氫二鉀2 g/L，乙酸鈉5 g/L，檸檬酸三銨2 g/L，硫酸鎂0.1 g/L，硫酸錳0.05 g/L，吐溫-80 1 g/L，121 ℃滅菌20 min。

酵母膏胨葡萄糖(YPD)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨20 g/L，酵母膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，121 ℃滅菌20 min。

細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基(LB培養(yǎng)基)：蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，氯化鈉10 g/L，121 ℃滅菌20 min。

菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基：菜籽粕50 g，無菌水50 mL，105 ℃滅菌15 min。

1.2 試驗方法

1.2.1 硫甙降解菌的初篩

取發(fā)酵青貯20 g、土壤10 g接種于裝有120 mL無菌水的250 mL錐形瓶中，于37 ℃，200 r/min的搖床充分振蕩20 min，隨后靜置30 min，并取上清液20 mL接種于菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基中，于37 ℃恒溫靜置培養(yǎng)48 h。用滅菌玻璃棒攪拌均勻后，取出5 g用無菌水振蕩稀釋，取上清液1 mL按10-1、10-2、10-3、10-4倍比稀釋涂布于MRS培養(yǎng)基+硫甙固體篩選培養(yǎng)基上，于37 ℃恒溫靜置培養(yǎng)48 h，挑取數(shù)量多、生長快、菌落大的菌株進行劃線、分離、純化保存，進行復(fù)篩。

挑取分離純化后的菌株單菌落于MRS培養(yǎng)基并于37 ℃恒溫靜置培養(yǎng)24 h后，按5%體積比的接種量接種于MRS培養(yǎng)基+硫甙液體復(fù)篩培養(yǎng)基，37 ℃恒溫靜置培養(yǎng)48 h，3 000 r/min離心15 min，取上清液測硫甙含量，選取硫甙降解率最高的5個菌株保存。

1.2.2 硫甙降解菌的復(fù)篩

將初篩得到的5株硫甙降解菌擴大培養(yǎng)后，按10%體積質(zhì)量比的接種量，1∶1體積質(zhì)量比的料水比接種于菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基，37 ℃恒溫靜置發(fā)酵48 h，試驗設(shè)3個重復(fù)；發(fā)酵結(jié)束后一部分60 ℃烘干粉碎后測硫甙含量，另一部分-20 ℃保存。選取5株菌中硫甙降解效果最好的1株菌株與枯草芽孢桿菌、酵母菌配伍混合發(fā)酵。

1.2.3 菌株鑒定

根據(jù)菌株菌落特征及形態(tài)觀察，參照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)鑒定圖譜》對篩選到的菌株進行初步鑒定。菌株通過引物1492R：5′-GGTTACCTTGTTACCACTT-3′和27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3′進行16S rDNA擴增，將純化后的PCR產(chǎn)物交于青島擎科生物技術(shù)有限公司測序，測序結(jié)果在GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫中進行BLAST比對分析，尋找同源序列。

1.2.4 菌株生長曲線測定

將分離得到的目的菌株平板劃線培養(yǎng)，挑取平板上單菌落于10 mL液體MRS培養(yǎng)基中37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h制成種子液，并按1%體積質(zhì)量比的接種于150 mL液體MRS培養(yǎng)基中，37 ℃靜置培養(yǎng)48 h，每3 h取樣1次，在紫外可見分光光度計600 nm處測其光密度(OD)值，并繪制OD600與時間的關(guān)系曲線圖。

1.2.5 硫甙降解菌與枯草芽孢桿菌、釀酒酵母的混菌發(fā)酵

將該菌株培養(yǎng)液與枯草芽孢桿菌、釀酒酵母的培養(yǎng)液按4∶3∶3的體積比、10%體積質(zhì)量比的總接種量、1∶1體積質(zhì)量比的料水比對菜籽粕進行配伍發(fā)酵，34 ℃恒溫靜置發(fā)酵48 h，試驗設(shè)3個重復(fù)。測定發(fā)酵后的硫甙以及粗蛋白質(zhì)、粗纖維、粗脂肪、多肽、總酸含量。

1.3 測定指標(biāo)及方法

參照文獻[14-15]，采用氯化鈀比色法測定菜籽粕發(fā)酵前后硫甙的含量；采用杜馬斯全自動定氮儀測定樣品粗蛋白質(zhì)含量；濾袋法測定粗纖維含量；索氏抽提法測定粗脂肪含量；參照GB/T 22492—2008大豆肽粉的測定方法測定多肽含量；采用滴定法測定發(fā)酵后總酸含量(結(jié)果以乳酸計)[16-17]。

采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法測定蛋白質(zhì)分子量的分布，具體操作為：精確稱取粉碎過60目篩的菜籽粕1.000 0 g，用0.1 mol/L的Tris-HCl(pH 8.0)的緩沖液浸提后離心取上清，吸取20 μL蛋白質(zhì)提取液加入到由5%濃縮膠、15%分離膠組成的從上到下2層SDS-PAGE膠泳道中，20 mA、80 V恒流電泳2 h后，考馬斯亮藍(lán)染色觀察電泳條帶。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)分為2部分。菌株篩選部分?jǐn)?shù)據(jù)通過直觀分析即可得出結(jié)論；發(fā)酵菜籽粕相關(guān)指標(biāo)數(shù)據(jù)通過軟件SPSS 19.0中的一般線性模型分析，結(jié)合Duncan氏法進行多重比較，試驗結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。采用Excel 2007繪制散點圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 初篩與復(fù)篩結(jié)果

以硫甙為唯一碳源，通過MRS+硫甙固體培養(yǎng)基分離得到54株菌落大、生長快、能較好利用硫甙的微生物菌株。以MRS+硫甙液體培養(yǎng)基復(fù)篩測定硫甙降解率，如表1所示，硫甙降解率大于30%的有9株，最大降解率為39.25%，選取效果最好的5株菌進行下一步的發(fā)酵，其編號分別為A1、A9、D6、E6、F3，對應(yīng)的降解率分別為39.25%、34.57%、34.58%、34.58%、35.51%。

表1 復(fù)篩菌株硫甙降解率

2.2 菜籽粕單菌固態(tài)發(fā)酵結(jié)果

將初篩得到的5株菌株做菜籽粕單菌固態(tài)發(fā)酵試驗，試驗設(shè)3個重復(fù)，發(fā)酵結(jié)束后測定發(fā)酵前后菜籽粕硫甙含量變化，計算硫甙降解率。如表2所示，初篩得到的5株菌中，菌株A9硫甙降解率最高，為23.69%。

表2 固態(tài)發(fā)酵硫甙降解率

2.3 菌株鑒定結(jié)果

將初篩、復(fù)篩得到的A9菌株在分離平板上培養(yǎng)24 h后觀察形成圓形透明菌落，邊緣整齊，菌落光滑，在倒置顯微鏡下觀察菌體細(xì)胞呈棒狀。通過PCR擴增得到長度為948 bp的序列，將該序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中已收錄的DNA序列進行BLAST比較分析可知，該菌株屬于乳酸菌桿屬(Lactobacillus)，與嗜酸乳桿菌(Lactobacillusfarciminis)KJ04的相似性達(dá)99%，在GenBank中的登記號為KX139184.1，由此確定菌株A9為嗜酸乳桿菌。

2.4 菌株生長曲線

如圖1所示，嗜酸乳桿菌經(jīng)過短暫的延滯期，在3～21 h進入對數(shù)生長期，在30 h達(dá)到最大生長濃度，隨后進入衰亡期。因此，在后續(xù)培養(yǎng)與發(fā)酵試驗中均選取培養(yǎng)21 h的活化菌液作為種子液。

圖1 嗜酸乳桿菌生長曲線

2.5 混菌發(fā)酵對菜籽粕硫甙含量的影響

將嗜酸乳桿菌培養(yǎng)液與枯草芽孢桿菌、釀酒酵母的培養(yǎng)液按4∶3∶3的體積比、10%的體積質(zhì)量比的總接種量、1∶1體積質(zhì)量比的料水比對菜籽粕進行混菌發(fā)酵，34 ℃恒溫靜置發(fā)酵48 h，發(fā)酵后菜籽粕硫甙含量由37.48 μmol/g降低到25.67 μmol/g，硫甙降解率為30.73%，符合農(nóng)業(yè)部關(guān)于低硫甙菜籽粕硫甙含量的規(guī)定。

2.6 不同發(fā)酵方式對硫甙降解率的影響

如表3所示，不同的發(fā)酵方式對硫甙的降解效果不同。嗜酸乳桿菌的液體篩選培養(yǎng)基硫甙降解率為39.25%，而單菌發(fā)酵組與混菌發(fā)酵組硫甙降解率分別為23.69%和30.73%，均低于篩選培養(yǎng)基的硫甙降解率；混菌發(fā)酵的硫甙降解效果要優(yōu)于單菌發(fā)酵。

表3 不同發(fā)酵方式對硫甙降解率的影響

2.7 發(fā)酵后菜籽粕營養(yǎng)成分的改變

微生物發(fā)酵菜籽粕脫毒的同時也改善了菜籽粕的營養(yǎng)價值。菜籽粕經(jīng)單菌發(fā)酵與混菌發(fā)酵后，其粗蛋白質(zhì)、多肽和總酸含量有了不同程度地提高，粗纖維和粗脂肪等成分的含量也得到了不同程度地改變。如表4所示，菜籽粕經(jīng)單菌發(fā)酵

和混菌發(fā)酵后，粗蛋白質(zhì)含量顯著提高(P<0.05)，由38.41%分別提高到44.94%和45.59%，但單菌發(fā)酵組和混菌發(fā)酵組之間差異不顯著(P>0.05)；多肽和總酸含量顯著提高(P<0.05)，混合發(fā)酵的效果要優(yōu)于單菌發(fā)酵，且差異顯著(P<0.05)。

表4 微生物發(fā)酵對菜籽粕營養(yǎng)成分的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Valves in the same line with different small letter superscripts mean significant difference(P<0.05).

2.8 發(fā)酵后菜籽粕蛋白質(zhì)分子組成變化

如圖2所示，菜籽粕蛋白質(zhì)分子質(zhì)量主要分布在17～34 ku之間，菜籽粕經(jīng)發(fā)酵后，A區(qū)域大分子蛋白質(zhì)(17～34 ku)含量減少，B區(qū)域小分子蛋白質(zhì)含量明顯增加，尤其是分子質(zhì)量在10 ku以下的小分子蛋白質(zhì)。單菌發(fā)酵與混菌發(fā)酵有相似的效果。

M：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；D：對照組；F1：單菌發(fā)酵組；F2：混菌發(fā)酵組。

M: protein molecular weight marker; D: control group; F1: single bacteria fermented group; F2: mixed bacteria fermented group.

圖2菜籽粕發(fā)酵后蛋白質(zhì)分子組成變化

Table 2 Changes of protein molecular composition of rapeseed meal after fermentation

2.9 發(fā)酵后菜籽粕風(fēng)味的改變

菜籽粕經(jīng)嗜酸乳桿菌發(fā)酵48 h以后，表面呈黃褐色蓬松狀，大量有機酸的存在使菜籽粕產(chǎn)生一種濃郁的酸香味，酸香味是評價飼料風(fēng)味的重要指標(biāo)[18]。菜籽粕經(jīng)單菌發(fā)酵和混菌發(fā)酵后，總酸含量顯著提高(P<0.05)，由1.01%分別提高到3.10%和3.91%。

3 討 論

3.1 不同發(fā)酵方式對菜籽粕中硫甙降解率的影響

微生物發(fā)酵可以有效降解菜籽粕中的硫甙,其降解原理是微生物可直接利用硫甙為碳源進行代謝活動，同時微生物代謝過程中產(chǎn)生了大量不同種類的酶，硫甙在酶的催化作用下可水解生成多種易揮發(fā)的異硫氰酸鹽等物質(zhì)[19]。MRS培養(yǎng)基+硫甙液體篩選培養(yǎng)基中，硫甙是唯一可被微生物利用的碳源，微生物可直接利用硫甙，對硫甙的降解效果要優(yōu)于菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基；菜籽粕發(fā)酵培養(yǎng)基中硫甙并非為唯一碳源，微生物選擇性地先利用容易被利用的碳源，然后再利用硫甙為碳源進行生命代謝活動，且MRS培養(yǎng)基+硫甙液體篩選培養(yǎng)基的生長環(huán)境更利于微生物的生長。試驗發(fā)現(xiàn)，混菌發(fā)酵對硫甙的降解效果要優(yōu)于單菌發(fā)酵，原因可能是由硫甙的結(jié)構(gòu)特征決定的，根據(jù)R基結(jié)構(gòu)的不同，硫甙可分為120多種[20]，單一菌種分泌的酶只能降解某一部分類型的硫甙，混菌發(fā)酵產(chǎn)生更為豐富的酶系則能同時降解多種不同類型的硫甙，達(dá)到協(xié)同發(fā)酵的效果[21]。王曉凡等[22]研究表明，多菌種混合發(fā)酵效果優(yōu)于單菌發(fā)酵，當(dāng)植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌、米曲霉的接種比例為9%∶9%∶6%，水料比為1.3∶1.0，33 ℃發(fā)酵96 h后，菜籽粕硫甙降解率可達(dá)91.36%；鞠興榮等[23]研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌與宇佐美曲霉混合發(fā)酵的菜籽粕硫甙降解率都要優(yōu)于其單菌發(fā)酵的菜籽粕硫甙降解率，這與本試驗的研究結(jié)果一致。

3.2 發(fā)酵菜籽粕蛋白質(zhì)品質(zhì)的改善

微生物發(fā)酵是改善菜籽粕蛋白質(zhì)品質(zhì)的重要途徑之一。菜籽粕蛋白質(zhì)含量雖高，但其蛋白質(zhì)分子質(zhì)量比較大，消化吸收率低，尤其是由壓榨工藝獲得的菜籽粕[24]。菜籽粕蛋白質(zhì)主要是12S球蛋白，由6個亞基對組成，這6個亞基對由2條分子質(zhì)量在20～30 ku之間的多肽鏈組成。研究表明，嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌在生長代謝過程中會產(chǎn)生一系列的α-淀粉酶、中性蛋白酶及其他胞外蛋白酶[25]，這些酶能夠不同程度地將不易被動物消化吸收的大分子蛋白質(zhì)降解為易被利用的小分子多肽類物質(zhì)，還能將不易被動物消化吸收的植物蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為更為優(yōu)質(zhì)的微生物菌體蛋白質(zhì)及功能性多肽[26]。動物對蛋白質(zhì)及氨基酸的消化率是評價飼料蛋白質(zhì)品質(zhì)的重要標(biāo)準(zhǔn)，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量越小，多肽含量越高，越容易被動物消化吸收利用。從蛋白質(zhì)電泳圖可以觀察到，發(fā)酵后菜籽粕小分子蛋白質(zhì)含量增加，多肽含量顯著增加。多肽具有更好的營養(yǎng)價值，相比于氨基酸，多肽更易被動物吸收利用，且對氨基酸和礦物元素的消化吸收有促進作用[27]，同時，多肽還具有免疫活性、神經(jīng)活性、抗氧化作用等功能[28]。發(fā)酵后，菜籽粕蛋白質(zhì)質(zhì)量得到改善，大大提高了菜籽粕蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值，這與付敏等[26]和王剛等[29]的研究相似。

3.3 微生物發(fā)酵改善菜籽粕營養(yǎng)價值機理

菜籽粕經(jīng)微生物發(fā)酵后，表面蓬松多孔，原因可能是微生物分泌的酶的水解作用破壞了菜籽粕表面纖維結(jié)構(gòu)，同時枯草芽孢桿菌與釀酒酵母在代謝過程中發(fā)生大量的氣體交換，又加快了這種結(jié)構(gòu)破壞，從而增加了微生物分泌的消化酶與菜籽粕的接觸面積[30]，對菜籽粕進行消化，使得菜籽粕各營養(yǎng)物質(zhì)能被動物更高效地吸收與利用。

微生物混菌固態(tài)發(fā)酵對菜籽粕營養(yǎng)價值與風(fēng)味的改善是各菌株協(xié)同發(fā)酵的結(jié)果。菜籽粕經(jīng)微生物發(fā)酵后，粗蛋白質(zhì)和多肽含量得到了不同程度地提高，這主要因為前期發(fā)酵體系中枯草芽孢桿菌生長迅速，分泌了大量的α-淀粉酶、中性蛋白酶及其他胞外蛋白酶，這些蛋白酶在將菜籽粕粗蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為易被動物消化吸收的微生物菌體蛋白質(zhì)及多肽的同時消耗的碳源、能源物質(zhì)也相應(yīng)增加，造成發(fā)酵菜籽粕的部分干物質(zhì)損失，出現(xiàn)了蛋白質(zhì)的“濃縮效應(yīng)”，最終導(dǎo)致了發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白質(zhì)含量的提高，這與蔣邊[31]的研究結(jié)果一致。發(fā)酵后，菜籽粕總酸含量顯著增加，并且產(chǎn)生一種酸香味，改善了菜籽粕的風(fēng)味。這是因為在嗜酸乳桿菌和釀酒酵母的生長代謝過程中消耗蛋白質(zhì)和脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)的同時產(chǎn)生了大量的乳酸、芳香酸和不飽和脂肪酸類物質(zhì)。此外，酸香味可以緩解因環(huán)境變化、飼料原料改變等應(yīng)激產(chǎn)生的采食量下降，同時刺激動物的嗅覺器官，進而促進采食量，調(diào)節(jié)飼糧適口性[32]。乳酸等有機酸是一種良好的酸化劑，在改善飼料適口性、降低動物胃腸道pH和提高動物采食量等方面已有相關(guān)報道[33]。除此之外，進入消化系統(tǒng)的乳酸能夠激活胃蛋白酶原，促進膽汁分泌和膽囊收縮，在促進動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、抑制動物胃腸道病原菌繁殖、促進腸道微生物平衡等方面有積極作用[34]。菜籽粕發(fā)酵過程中微生物產(chǎn)生的豐富酶系對菜籽粕進行預(yù)消化，降低抗?fàn)I養(yǎng)因子含量，提高蛋白質(zhì)含量與質(zhì)量，增加多肽含量，并顯著提高總酸及各種有機酸組分含量，改善適口性與風(fēng)味，使其能夠更好地被動物消化吸收與利用。

4 結(jié) 論

① 本試驗篩選出一株能夠高效降解硫甙的天然微生物菌株，經(jīng)鑒定該菌株為嗜酸乳桿菌，對菜籽粕中硫甙的降解率為39.25%。

② 通過嗜酸乳桿菌單菌發(fā)酵以及與枯草芽孢桿菌、釀酒酵母混菌發(fā)酵均可有效降低菜籽粕硫甙含量，降解率分別為23.69%和30.73%；同時能顯著提高菜籽粕中粗蛋白質(zhì)、多肽和總酸的含量，有效地改善了菜籽粕的營養(yǎng)價值與風(fēng)味。

[1] 蔡輝益.新型日糧技術(shù)體系可解決飼料資源短缺問題[J].農(nóng)業(yè)知識:科學(xué)養(yǎng)殖,2013(2):50-51.

[2] 胡永娜,李愛科,王之盛,等.微生物固態(tài)發(fā)酵菜籽粕營養(yǎng)特性的研究[J].中國糧油學(xué)報,2012,27(3):76-80.

[3] AIDER M,BARBANA C.Canola proteins:composition,extraction,functional properties,bioactivity,applications as a food ingredient and allergenicity-A practical and critical review[J].Trends in Food Science & Technology,2011,22(1):21-39.

[4] YANG X X,CHEN H Z,GAO H L,et al.Bioconversion of corn straw by coupling ensiling and solid-state fermentation[J].Bioresource Technology,2001,78(3):277-280.

[5] 王小三,金青哲,王興國.菜籽粕硫甙生物降解和脫毒研究進展[J].糧食與油脂,2009(12):1-3.

[6] RAMACHANDRAN S,ROOPESH K,NAMPOOTHIRI K M,et al.Mixed substrate fermentation for the production of phytase byRhizopusspp.using oilcakes as substrates[J].Process Biochemistry,2005,40(5):1749-1754.

[7] ARO S O.Improvement in the nutritive quality of cassava and its by-products through microbial fermentation[J].African Journal of Biotechnology,2008,7(25):4789-4797.

[8] COUTO S R,SANROMN M A.Application of solid-state fermentation to food industry—A review[J].Journal of Food Engineering,2006,76(3):291-302.

[9] ROZAN P,VILLAUME C,BAU H M,et al.Detoxication of rapeseed meal byRhizopusoligosporussp-T3:a first step towards rapeseed protein concentrate[J].International Journal of Food Science and Technology,1996,31(1):85-90.

[10] MADEIRA M J Jr,MACEDO J A,MACEDO G A.A new process for simultaneous production of tannase and phytase byPaecilomycesvariotiiin solid-state fermentation of orange pomace[J].Bioprocess and Biosystems Engineering,2012,35(3):477-482.

[11] 葉龍祥,牛興亮.菜籽粕混菌發(fā)酵脫毒研究[J].糧食與食品工業(yè),2010,17(4):41-44.

[12] 熊鋒,何榮海,張韋唯,等.餅粕生物發(fā)酵飼料產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀與趨勢[J].糧食與飼料工業(yè),2016,12(5):39-43.

[13] 石萍,卜路霞,徐園園,等.油菜籽中硫苷提取的影響因素研究[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報,2016,23(2):41-43.

[14] 劉絢霞,楊莉.分光光度法測定油菜籽中硫代葡萄糖甙[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2002(6):5-7.

[15] 王寧惠.油菜籽(餅粕)中硫代葡萄糖甙總量速測方法-氯化鈀法[J].青海農(nóng)林科技,2009(3):58-59.

[16] 安華明,劉明,楊曼,等.刺梨有機酸組分及抗壞血酸含量分析[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,44(10):2094-2100.

[17] 羅建,林標(biāo)聲,何玉琴,等.微生物發(fā)酵飼料中乳酸含量的測定方法比較分析[J].飼料博覽,2012(5):37-39.

[18] 張鑫,劉馨憶,李方方,等.風(fēng)味劑在豬配合飼料上的應(yīng)用[J].豬業(yè)科學(xué),2016,33(1):86-87.

[19] 魏晶石,汪正華,沈儉.菜籽粕生物降解法脫毒及綜合利用[J].西部糧油科技,1999,24(6):49-52.

[20] GRUBB C D,ABEL S.Glucosinolate metabolism and its control.[J].Trends in Plant Science,2006,11(2):89-100.

[21] 邱良偉,顧擁建,沙文鋒,等.復(fù)合微生物固態(tài)發(fā)酵菜籽粕的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2015(3):209-211.

[22] 王曉凡,王海濱,熊光權(quán),等.多菌種復(fù)合固態(tài)發(fā)酵對菜籽粕硫甙去除效果的研究[J].食品科技,2012(3):196-200.

[23] 鞠興榮,王雪峰,王立峰,等.混菌固態(tài)發(fā)酵菜籽粕制備菜籽肽的菌種篩選[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2011,37(9):104-108.

[24] TRIPATHI M K,MISHRA A S.Glucosinolates in animal nutrition:a review[J].Animal Feed Science and Technology,2007,132(1/2):1-27.

[25] JOO H S,CHANG C S.Production of an oxidant and SDS-stable alkaline protease from an alkaophilicBacillusclausiiI-52 by submerged fermentation:feasibility as a laundry detergent additive[J].Enzyme and Microbial Technology,2006,38(1/2):176-183.

[26] 付敏,何軍,余冰,等.混菌固態(tài)發(fā)酵對菜籽餅營養(yǎng)價值及抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2013,25(7):1579-1586.

[27] 顧斌,馬海樂,劉斌.菜籽粕混菌固態(tài)發(fā)酵制備多肽飼料的研究[J].中國糧油學(xué)報,2011,26(1):83-87.

[28] 張志剛,李小兵,孫國權(quán),等.動物小肽營養(yǎng)研究進展[J].飼料博覽,2008(8):15-18.

[29] 王剛,蔡國林,陸健.微生物發(fā)酵改善菜籽粕品質(zhì)的研究[J].中國油脂,2011,36(7):24-28.

[30] GILANI G S,COCKELL K A,SEPEHR E.Effects of antinutritional factors on protein digestibility and amino acid availability in foods[J].Journal of AOAC International,2005,88(3):967-987.

[31] 蔣邊.菜籽粕固態(tài)發(fā)酵制備多肽及降解硫苷的試驗研究[D].碩士學(xué)位論文.鎮(zhèn)江:江蘇大學(xué),2014.

[32] 張鑫,李方方,朱宇旌,等.飼糧中添加風(fēng)味劑對豬采食量的影響及其作用機理[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2016,28(5):1332-1338.

[33] 石寶明,單安山.飼用酸化劑的作用與應(yīng)用(續(xù))[J].飼料工業(yè),1999(2):4-7.

[34] 黃慶生,王加啟.飼料乳酸菌類益生素的作用機制和應(yīng)用[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2002,14(4):12-17.

*Corresponding author, professor, E-mail: liuguohua@caas.cn