江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、血清和肝臟生化指標(biāo)、體組成和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

郭 斌 梁萌青 徐后國(guó) 衛(wèi)育良

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島 266071；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306)

近年來(lái)，全球水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量增長(zhǎng)迅速，養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大增加了對(duì)水產(chǎn)飼料的需求。魚(yú)粉是水產(chǎn)飼料中蛋白質(zhì)的主要來(lái)源，但近年由于過(guò)度捕撈、環(huán)境污染及厄爾尼諾現(xiàn)象等不良?xì)夂虻挠绊?，魚(yú)粉資源日益減少，魚(yú)粉價(jià)格不斷上漲[1]。因此，對(duì)于水產(chǎn)飼料行業(yè)，節(jié)約魚(yú)粉的用量并開(kāi)發(fā)合適的蛋白質(zhì)替代源顯得極為重要。

植物蛋白質(zhì)因其來(lái)源廣、產(chǎn)量穩(wěn)定、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，一直作為替代魚(yú)粉的蛋白質(zhì)來(lái)源，傳統(tǒng)的植物蛋白質(zhì)雖然在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用研究已有很多[2-5]，但由于植物蛋白質(zhì)含有抗?fàn)I養(yǎng)因子[6]，并缺乏魚(yú)類(lèi)所需的一些必需氨基酸和促生長(zhǎng)成分，因此不能完全替代魚(yú)粉。海藻是生活在海洋中含有葉綠素的一類(lèi)自養(yǎng)植物，與陸生植物相比，海藻含有豐富的礦物質(zhì)、維生素、海藻多糖、不飽和脂肪酸、游離氨基酸以及具有誘食作用的一些物質(zhì)，可以補(bǔ)充陸生植物蛋白質(zhì)大量替代魚(yú)粉所造成的營(yíng)養(yǎng)缺乏[7-8]。我國(guó)海域遼闊，海藻資源十分豐富，但這些海藻資源還未充分利用，如果可以充分利用海藻中的蛋白質(zhì)資源，對(duì)于解決水產(chǎn)飼料的蛋白質(zhì)來(lái)源有著重要意義。因此，本研究以常見(jiàn)的2種低值海藻(江蘺、滸苔)和2種工業(yè)下腳料(海帶提取褐藻膠后的藻渣、土曲霉發(fā)酵生產(chǎn)衣康酸后的菌渣)與植物蛋白質(zhì)配合成混合植物蛋白質(zhì)替代大菱鲆幼魚(yú)飼料中部分魚(yú)粉，探究其對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、血清和肝臟生化指標(biāo)、體組成和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響，以期為海藻及工業(yè)下腳料在大菱鲆飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)共配制5種等氮等脂的試驗(yàn)飼料，首先以魚(yú)粉為主要蛋白質(zhì)源、魚(yú)油為脂肪源配制含60%魚(yú)粉基礎(chǔ)飼料(魚(yú)粉組，作為對(duì)照組)，然后分別將10%的江蘺、滸苔、藻渣(海帶提取褐藻膠后的廢渣)、菌渣(土曲霉發(fā)酵生產(chǎn)衣康酸后的廢渣)與植物蛋白質(zhì)谷朊粉、玉米蛋白粉、豆粕配合后替代基礎(chǔ)飼料中35%的魚(yú)粉。所有原料測(cè)定常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分后，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)80目篩網(wǎng)，按配方稱(chēng)量原料，逐級(jí)混勻，然后加魚(yú)油混勻，加30%水?dāng)嚢杈鶆?，用制粒機(jī)制成直徑為2 mm的顆粒飼料，55 ℃鼓風(fēng)干燥12 h后置于-20 ℃冷庫(kù)保存。江蘺、滸苔、藻渣和菌渣的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1，試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2，試驗(yàn)飼料氨基酸組成見(jiàn)表3。

表1 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表2 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表2項(xiàng)目Items組別Groups魚(yú)粉Fishmeal江蘺Gracilariaverrucosa滸苔Enteromorphaprolifera藻渣Algaeresidue菌渣Fungiresidue磷脂Phospholipid1．501．501．501．501．50膽堿Choline1．001．001．001．001．00魚(yú)油Fishoil5．007．007．007．007．00磷酸二氫鈣Ca(H2PO4)21．501．501．501．501．50維生素預(yù)混料Vitaminpremix1)1．501．501．501．501．50礦物質(zhì)預(yù)混料Mineralpremix2)1．501．501．501．501．50合計(jì)Total100．00100．00100．00100．00100．00營(yíng)養(yǎng)水平Nutrientlevels粗蛋白質(zhì)Crudeprotein49．8648．5748．7849．4349．84粗脂肪Crudelipid11．8810．7610．5310．1510．44粗灰分Ash13．7313．1111．3710．5012．40

1)每千克維生素預(yù)混料含有 Contained the following per kg of vitamin premix：VA 375 000 IU，VD375 000 IU，VE 3 000 mg，VK3900 mg，VB1600 mg，VB2600 mg，VB6600 mg，VB123.7 mg，D-泛酸鈣D-calcium pantothenate 2 400 mg，煙酸胺 niacinaminde 4 500 mg，葉酸 folic acid 185 mg，D-生物素D-biotin 7.5 mg，肌醇 inositol 3 000 mg，VC 10 500 mg。

2)每千克礦物質(zhì)預(yù)混料含有Contained the following per kg of mineral premix：Zn 1 750 mg，Mn 1 050 mg，Cu 410 mg，F(xiàn)e 1 150 mg，Co 60 mg，I 50 mg，Se 15 mg。

表3 試驗(yàn)飼料氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表3氨基酸Aminoacids組別Groups魚(yú)粉Fishmeal江蘺Gracilariaverrucosa滸苔Enteromorphaprolifera藻渣Algaeresidue菌渣Fungiresidue半胱氨酸Cys0．330．680．520．680．57酪氨酸Tyr1．531．911．661．591．62?；撬酺au0．460．300．230．210．23總非必需氨基酸ΣNEAA21．5426．5423．0923．2222．91總必需氨基酸/總非必需氨基酸ΣEAA/ΣNEAA0．910．750．730．730．72

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在山東省煙臺(tái)市天源水產(chǎn)有限公司進(jìn)行，試驗(yàn)所用大菱鲆幼魚(yú)取自天源水產(chǎn)有限公司。試驗(yàn)開(kāi)始前先使用對(duì)照組飼料暫養(yǎng)1周，使其適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境和飼料的大小、硬度。試驗(yàn)采用自然光照，養(yǎng)殖模式為流水養(yǎng)殖，水源為深井海水，水溫保持在12～14 ℃，溶氧濃度在5.5 mg/L左右，鹽度在35‰左右，pH 7.5～8.0。

試驗(yàn)開(kāi)始前停食24 h，然后隨機(jī)選取健康、規(guī)格一致的大菱鲆幼魚(yú)，初始體重為(16.00±0.11) g，隨機(jī)分配到15個(gè)容積為150 L的塑料養(yǎng)殖桶中，每個(gè)桶中投放25尾。將15個(gè)養(yǎng)殖桶隨機(jī)分為5組，每組3個(gè)養(yǎng)殖桶，每組隨機(jī)投喂1種試驗(yàn)飼料。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間每天早、晚各表觀飽食投喂1次，投喂0.5 h后對(duì)每個(gè)桶內(nèi)的殘餌計(jì)數(shù)，根據(jù)每100粒飼料的平均質(zhì)量，計(jì)算殘餌質(zhì)量。試驗(yàn)時(shí)間為2016年9月至2016年11月，養(yǎng)殖周期共77 d。

1.3 樣品采集與分析

試驗(yàn)開(kāi)始前隨機(jī)取20尾大菱鲆幼魚(yú)作為初始魚(yú)，用于常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析。試驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h，對(duì)每桶魚(yú)進(jìn)行計(jì)數(shù)、稱(chēng)重。每桶隨機(jī)取3尾魚(yú)，尾靜脈取血，用1%肝素鈉抗凝，4 ℃靜置4 h后3 500 r/min離心10 min取上層血清，置于液氮中保存；采血后的魚(yú)稱(chēng)重并測(cè)量體長(zhǎng)，解剖分離內(nèi)臟團(tuán)和肝臟并稱(chēng)重，用于計(jì)算肥滿(mǎn)度、肝體比和臟體比，取肝臟置于液氮中保存；每尾魚(yú)去掉皮，取背部同一部位的肌肉置于液氮中保存，用于肌肉氨基酸組成的測(cè)定。每桶另隨機(jī)取3尾魚(yú)用于體成分分析。每桶再隨機(jī)取1尾魚(yú)，解剖后取其前腸和中腸，置于Davidson’s固定液(95%乙醇330 mL、甲醛220 mL、冰醋酸115 mL、純水335 mL)，固定24 h后轉(zhuǎn)移至70%乙醇中保存待測(cè)。

飼料和魚(yú)體常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析參考AOAC(1995)的方法。其中，水分含量測(cè)定采用105 ℃烘干至恒重法，粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用凱氏定氮法(VELP凱氏定氮儀，UDK-142 Automatic Distillation Unit，意大利)，粗脂肪含量測(cè)定采用索氏抽提法，以石油醚作為抽提液(SOXTEC2050 FOSS脂肪測(cè)定儀，瑞典)，粗灰分含量采用馬弗爐(550 ℃)灼燒6 h測(cè)得。

血清中甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、丙二醛(MDA)和總膽汁酸(TBA)含量，超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性以及肝臟中GOT、GPT活性均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

飼料和肌肉中氨基酸組成的測(cè)定參考GB/T 18246—2000的方法，使用L-8900全自動(dòng)氨基酸分析儀(Hitachi，日本)測(cè)定。檢測(cè)了飼料和魚(yú)體肌肉中9種必需氨基酸、7種非必需氨基酸和?；撬岬暮浚彼嵋蛩崴馄茐亩礄z測(cè)。

腸道組織結(jié)構(gòu)分析：采用石蠟包埋和蘇木精-伊紅(HE)染色的方法制作石蠟切片，并在顯微鏡(80i，Nikon，日本)下觀察，拍照，利用Photoshop CC 2017軟件測(cè)量黏膜皺襞高度、上皮細(xì)胞高度和微絨毛高度。

1.4 計(jì)算公式

成活率(survival rate，SR，%)=100×
終末魚(yú)尾數(shù)/初始魚(yú)尾數(shù)；攝食率(feed intake，F(xiàn)I，%/d)=100×
攝食飼料干重/[試驗(yàn)天數(shù)×(初始體重+
終末體重)/2]；增重率(weight gain rate，WGR，%)=100×
(終末體重-初始體重)/初始體重；特定生長(zhǎng)率(special growth rate，SGR，%/d)=
100×(ln終末體重-ln初始體重)/試驗(yàn)天數(shù)；飼料效率(feed efficiency ratio，F(xiàn)ER)=
(終末體重-初始體重)/攝食飼料干重；蛋白質(zhì)沉積率(protein productive value，PPV，%)=
100×魚(yú)體蛋白質(zhì)沉積量/總飼料蛋白質(zhì)攝入量；蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio，PER)=
(終末體重-初始體重)/總飼料蛋白質(zhì)攝入量；肝體比(heaptosomatic index，HSI，%)=
100×肝臟重/體重；臟體比(viscerosomatic index，VSI，%)=
100×內(nèi)臟團(tuán)重/體重；肥滿(mǎn)度(condition factor，CF，g/cm3)=
100×體重/體長(zhǎng)3。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理，采用單因素方差分析(one-way ANOVA)程序進(jìn)行方差分析，若存在顯著差異(P<0.05)則采用Duncan氏法進(jìn)行組間的多重比較。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示。

2 結(jié) 果

2.1 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響

江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響如表4所示。各組大菱鲆幼魚(yú)的存活率均介于92%～96%，組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；江蘺、藻渣、菌渣組的增重率和特定生長(zhǎng)率與魚(yú)粉組均無(wú)顯著差異(P>0.05)，滸苔組顯著低于魚(yú)粉組(P<0.05)，菌渣和滸苔組顯著低于藻渣組(P<0.05)，江蘺組與滸苔、藻渣、菌渣組均沒(méi)有顯著差異(P>0.05)；滸苔和藻渣組的攝食率顯著高于魚(yú)粉和江蘺組(P<0.05)，菌渣組顯著高于江蘺組(P<0.05)，菌渣、江蘺組與魚(yú)粉組無(wú)顯著差異(P>0.05)；魚(yú)粉與江蘺組的飼料效率和蛋白質(zhì)效率無(wú)顯著差異(P>0.05)，但顯著高于滸苔、藻渣、菌渣組(P<0.05)；魚(yú)粉和江蘺組的蛋白質(zhì)沉積率顯著高于滸苔和藻渣組(P<0.05)，江蘺組與菌渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

魚(yú)粉組臟體比顯著低于藻渣組(P<0.05)，與江蘺、滸苔和菌渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)；各組的肝體比和肥滿(mǎn)度無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無(wú)字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)血清和肝臟生化指標(biāo)的影響

江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)血清TG、TC、HDL-C、LDL-C和TBA含量的影響如表5所示。各組血清中TG、LDL-C和TBA的含量無(wú)顯著差異(P>0.05)；滸苔組血清中TC含量顯著低于藻渣組(P<0.05)，顯著高于魚(yú)粉和菌渣組(P<0.05)，與江蘺組無(wú)顯著差異(P>0.05)；滸苔和藻渣組血清中HDL-C含量顯著高于魚(yú)粉和菌渣組(P<0.05)，與江蘺組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表5 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)血清甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和總膽汁酸含量的影響

江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆血清和肝臟中GPT和GOT活性的影響如表6所示。各組血清中GPT和GOT活性和肝臟中GOT活性無(wú)顯著差異(P>0.05)；魚(yú)粉組肝臟GPT活性顯著高于菌渣和江蘺組(P<0.05)，與滸苔和藻渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表6 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)血清和肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)血清非特異性免疫和抗氧化指標(biāo)的影響如表7所示。江蘺、滸苔、藻渣和菌渣組血清中ACP活性與魚(yú)粉組均無(wú)顯著差異(P>0.05)，藻渣組顯著高于滸苔組(P<0.05)；各組血清中AKP活性和MDA含量無(wú)顯著差異(P>0.05)；江蘺、滸苔、藻渣和菌渣組血清中SOD活性與魚(yú)粉組均無(wú)顯著差異(P>0.05)，江蘺和藻渣組顯著高于滸苔和菌渣組(P<0.05)。

表7 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)血清非特異性免疫和抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)體組成和肌肉氨基酸組成的影響

江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)體組成的影響如表8所示。江蘺、滸苔、藻渣和菌渣組魚(yú)體的水分和粗灰分含量與魚(yú)粉組相比均無(wú)顯著差異(P>0.05)；魚(yú)粉組魚(yú)體粗蛋白質(zhì)含量顯著高于江蘺、滸苔組(P<0.05)，與藻渣和菌渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)；藻渣和菌渣組魚(yú)體粗脂肪含量顯著高于魚(yú)粉組(P<0.05)，與江蘺和滸苔組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表8 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)體組成的影響

江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)肌肉氨基酸組成的影響如表9所示。魚(yú)粉組肌肉賴(lài)氨酸含量顯著高于滸苔、藻渣組(P<0.05)，與江蘺和菌渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)；魚(yú)粉組肌肉組氨酸和?；撬岷匡@著高于江蘺、滸苔、藻渣和菌渣組(P<0.05)；江蘺組肌肉丙氨酸含量顯著高于魚(yú)粉和菌渣組(P<0.05)，與滸苔和藻渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)；各組肌肉其他氨基酸含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。魚(yú)粉組肌肉總必需氨基酸含量顯著高于滸苔和藻渣組(P<0.05)，與江蘺和菌渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)；各組肌肉總非必需氨基酸含量無(wú)顯著差異(P>0.05)；魚(yú)粉組總氨基酸含量顯著高于藻渣組(P<0.05)，與江蘺、滸苔和菌渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表9 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)肌肉氨基酸組成的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

2.4 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

各組大菱鲆幼魚(yú)的中腸橫切面結(jié)構(gòu)如圖1所示。

江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響如表10所示。藻渣組前腸皺襞高度顯著高于魚(yú)粉組(P<0.05)，顯著低于菌渣組(P<0.05)，與江蘺、滸苔組無(wú)顯著差異(P>0.05)；藻渣組前腸上皮細(xì)胞高度顯著高于魚(yú)粉、江蘺和滸苔組(P<0.05)，與菌渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)；各組前腸微絨毛高度無(wú)顯著差異(P>0.05)。菌渣組中腸皺襞高度顯著高于魚(yú)粉組(P<0.05)，與江蘺、滸苔和藻渣組無(wú)顯著差異(P>0.05)；各組中腸上皮細(xì)胞高度和微絨毛高度均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

3 討 論

3.1 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

關(guān)于海藻在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用已有許多報(bào)道，主要包括紅藻門(mén)的江蘺、石花菜、紫菜，綠藻門(mén)的石莼、滸苔，褐藻門(mén)的海帶等多種常見(jiàn)海藻[9-14]。相當(dāng)一部分研究表明，飼料中添加少量的海藻(2.5%～10.0%)有利于魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)，可以提高生長(zhǎng)性能，增加攝食率和飼料效率，提高生理活性、抗病力和應(yīng)激能力[9-12]。

MF：黏膜皺襞；EH：腸上皮細(xì)胞；MV：微絨毛。A、a：魚(yú)粉組；B、b：江蘺組；C、c：滸苔組；D、d：藻渣組；E、e：菌渣組。A、B、C、D和E的比例尺為400 μm，a、b、c、d和e的比例尺為40 μm。

MF: mucosal fold; EH: enterocyte; MV: microvillu. A and a: fish meal group; B and b:Gracilariaverrucosagroup; C and c:Enteromorphaproliferagroup; D and d: algae residue group ; E and e: fungi residue. The scale bar of A, B, C, D and E was 400 μm and the scale bar of a, b, c, d and e was 40 μm.

圖1各組大菱鲆幼魚(yú)中腸橫切面結(jié)構(gòu)

Fig.1 The midgut transection structure of juvenile turbot in each group

本試驗(yàn)中，將江蘺、滸苔和藻渣與植物蛋白質(zhì)配合替代飼料中部分魚(yú)粉后，江蘺組飼料中各主要必需氨基酸含量與魚(yú)粉組相比沒(méi)有顯著降低(表3)，而滸苔組飼料中賴(lài)氨酸、蛋氨酸和組氨酸含量大大低于魚(yú)粉組，這可能是江蘺組大菱鲆幼魚(yú)生長(zhǎng)速度、飼料效率、蛋白質(zhì)沉積率優(yōu)于滸苔組的主要原因。本研究發(fā)現(xiàn)藻渣組大菱鲆幼魚(yú)的生長(zhǎng)效果優(yōu)于滸苔組而與魚(yú)粉組無(wú)顯著差異，雖然藻渣組飼料的必需氨基酸含量與魚(yú)粉組飼料相比有不同程度地降低，其可能的原因是藻渣含有褐藻糖膠、巖藻多糖、褐藻淀粉以及褐藻膠等多糖[15]，這些多糖促進(jìn)了大菱鲆幼魚(yú)的生長(zhǎng)，這與林建斌等[16]報(bào)道的飼料中添加0.6%的海帶多糖可以提高珍珠龍膽石斑魚(yú)的生長(zhǎng)，降低飼料系數(shù)的結(jié)果一致。對(duì)于其他魚(yú)種也有類(lèi)似發(fā)現(xiàn)，楊晴等[17]報(bào)道飼料中有效濃度為0.10%的褐藻糖膠可以提高黃顙魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率，并能提高胃和腸道脂肪酶的活性。

表10 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

本研究發(fā)現(xiàn)，滸苔和藻渣組的攝食率顯著高于魚(yú)粉和江蘺組。滸苔和藻渣提高大菱鲆幼魚(yú)攝食率可能與其中具有誘食作用的物質(zhì)有關(guān)，有研究表明海藻中普遍存在一些具有誘食作用的物質(zhì)，如二甲基-β-丙酸噻亭(DMPT或DMSP)[18-19]，可以增加攝食率。但本試驗(yàn)中江蘺組大菱鲆幼魚(yú)的攝食率并沒(méi)有提高，反而出現(xiàn)下降，這可能是因?yàn)榻y中含有的誘食成分較少，因本研究未對(duì)相關(guān)誘食成分進(jìn)行測(cè)定，具體原因還有待進(jìn)一步研究。雖然江蘺組大菱鲆幼魚(yú)的攝食率低，但其生長(zhǎng)效果較好，這除了與飼料中必需氨基酸含量高有關(guān)外，飼料中的?；撬釋?duì)魚(yú)體生長(zhǎng)可能也起到促進(jìn)作用。有研究表明，牛磺酸可以調(diào)節(jié)消化酶的活性，增強(qiáng)魚(yú)體對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高飼料效率[20]。江蘺組飼料中?；撬岬暮扛哂跐G苔和藻渣組，這可能也是江蘺組大菱鲆幼魚(yú)雖然攝食率低但并沒(méi)有影響其生長(zhǎng)性能的原因之一

在以往的利用植物蛋白質(zhì)替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆影響的研究中，飼料中植物蛋白質(zhì)替代魚(yú)粉的比例較低。有研究表明，大豆?jié)饪s蛋白只能替代飼料中17%的魚(yú)粉而不影響大菱鲆生長(zhǎng)[21]；玉米蛋白粉可替代大菱鲆飼料中21%的魚(yú)粉而不影響其生長(zhǎng)性能和飼料效率[22]；復(fù)合植物蛋白質(zhì)替代大菱鲆飼料中20.7%的魚(yú)粉會(huì)顯著降低其生長(zhǎng)性能[23]；以酶解動(dòng)物軟骨蛋白粉與植物蛋白質(zhì)復(fù)合后可替代大菱鲆幼魚(yú)飼料中24%魚(yú)粉而不影響其生長(zhǎng)與攝食[24]。對(duì)于其他魚(yú)類(lèi)的研究也有類(lèi)似的結(jié)果。王國(guó)霞等[25]發(fā)現(xiàn)豆粕可以替代飼料中16%的魚(yú)粉而不影響花鱸生長(zhǎng)；吳莉芳等[26]發(fā)現(xiàn)豆粕替代飼料中13.4%的魚(yú)粉時(shí)沒(méi)有影響黃金鱸的生長(zhǎng)；崔存河等[27]發(fā)現(xiàn)菜籽粕可以替代飼料中13.5%的魚(yú)粉而不影響虹鱒的生長(zhǎng)性能和飼料利用。在本試驗(yàn)中，江蘺、滸苔、藻渣、菌渣與植物蛋白質(zhì)配合后替代了飼料中35%的魚(yú)粉，而江蘺、藻渣和菌渣組大菱鲆幼魚(yú)并未因植物蛋白質(zhì)大量替代魚(yú)粉而顯著降低生長(zhǎng)性能。這說(shuō)明，與傳統(tǒng)陸生植物蛋白相比，江蘺、藻渣作為一種海洋性植物蛋白質(zhì)來(lái)源，對(duì)因植物蛋白質(zhì)大量替代魚(yú)粉而造成的大菱鲆生長(zhǎng)性能的下降有一定改善作用；菌渣是富含真菌蛋白的一類(lèi)蛋白質(zhì)來(lái)源，其中含有的一些物質(zhì)對(duì)大菱鲆的生長(zhǎng)也起到了一定的促進(jìn)作用。

3.2 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)脂肪代謝和非特異性免疫能力的影響

血清中HDL-C和LDL-C含量反映了血清中高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量的多少。高密度脂蛋白含量增加可以使血液中更多的膽固醇被轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟，低密度脂蛋白含量增加可以使更多的膽固醇和甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)到血液[28]，二者的綜合作用影響了血清中TC和TG的含量。在本試驗(yàn)中，血清TG含量的變化趨勢(shì)和LDL-C一致，與魚(yú)粉組相比，江蘺和滸苔組血清中LDL-C和TG含量都有所降低，同時(shí)滸苔和藻渣組血清中HDL-C含量均顯著升高，說(shuō)明飼料中添加江蘺、滸苔和藻渣對(duì)增加血清中的高密度脂蛋白含量、降低血清中的低密度脂蛋白含量有一定作用，有利于大菱鲆的血脂健康。

MDA是自由基氧化的終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性，在生物體內(nèi)可引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，在生物體外影響線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合物及線(xiàn)粒體內(nèi)關(guān)鍵酶活性[12]。血清中MDA含量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的過(guò)氧化程度，間接反映組織細(xì)胞的氧化損傷程度[12,29]。SOD對(duì)機(jī)體氧化與抗氧化平衡起著重要作用，能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。本試驗(yàn)中，江蘺、滸苔、藻渣和菌渣組血清MDA含量和SOD活性與魚(yú)粉組均無(wú)顯著差異，說(shuō)明江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆機(jī)體的抗氧化能力沒(méi)有造成不良影響。

血清中GPT、GOT活性的變化是判斷肝臟損傷程度的主要依據(jù)之一。GPT和GOT主要存在于肝臟中，正常情況下血清中這2種酶的活性很低，當(dāng)肝臟組織受損時(shí)，細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，GPT和GOT會(huì)進(jìn)入血液，導(dǎo)致血清中GPT和GOT活性上升，因此血清中GPT和GOT的活性可反映肝臟的損傷情況[30]。在本試驗(yàn)中，各組大菱鲆幼魚(yú)血清中GPT與GOT活性均無(wú)顯著差異，說(shuō)明江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)的肝臟沒(méi)有造成不良影響。飼料氨基酸主要通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用和脫氨基作用在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化，魚(yú)類(lèi)則主要通過(guò)聯(lián)合脫氨基作用滿(mǎn)足機(jī)體需要，GPT和GOT是魚(yú)類(lèi)氨基酸代謝中的2個(gè)關(guān)鍵酶，它們?cè)诟闻K中活性的高低反映了氨基酸代謝程度的強(qiáng)弱和肝臟功能的正常與否[30]。在本試驗(yàn)中，江蘺和菌渣組的肝臟GPT活性顯著低于魚(yú)粉組，說(shuō)明江蘺和藻渣組大菱鲆氨基酸代謝較慢，這可能與魚(yú)體對(duì)氨基酸的吸收有關(guān)，由于飼料中氨基酸組成略有差異，不同氨基酸吸收速度不同，這可能影響了魚(yú)體對(duì)氨基酸的代謝，從而影響了肝臟GPT活性。

水生動(dòng)物的特異性免疫機(jī)制不具備抗體生成的二次反應(yīng)，非特異性免疫在水生動(dòng)物的免疫防御中起著至關(guān)重要的作用[30]。魚(yú)類(lèi)血清中ACP、AKP等是評(píng)價(jià)魚(yú)類(lèi)非特異性免疫的重要指標(biāo)，在提高魚(yú)體的抗病力以及抗應(yīng)激力中發(fā)揮促進(jìn)作用[30-32]。ACP是溶酶體的標(biāo)志酶，主要參與磷酸酯的代謝調(diào)節(jié)、信號(hào)傳導(dǎo)以及能量轉(zhuǎn)化，而AKP可以直接參與生物體磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝[30]。在本研究中，江蘺、滸苔、藻渣、菌渣組大菱鲆幼魚(yú)血清中ACP、AKP活性與魚(yú)粉組無(wú)顯著差異，說(shuō)明以江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)的非特異性免疫力無(wú)不良影響，并且藻渣組血清中ACP和AKP的活性還高于魚(yú)粉組，這可能是藻渣中的多糖和寡糖起到了一定的增強(qiáng)非特異性免疫力的作用。有研究表明，褐藻多糖硫酸酯可以提高小鼠的免疫力和抗病毒能力[33-34]；褐藻酸寡糖可以提高大菱鲆的非特異性免疫力[32]。

3.3 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)體組成和肌肉氨基酸組成的影響

本研究中，各組魚(yú)體的體組成存在一定的差異，這可能與飼料中?；撬岷坑嘘P(guān)。周銘文等[35]發(fā)現(xiàn)，?；撬峥梢栽黾有睅唪~(yú)全魚(yú)蛋白質(zhì)沉積，降低全魚(yú)脂肪沉積；張圓琴等[36]發(fā)現(xiàn)，在高植物蛋白質(zhì)飼料中添加?；撬峥山档痛罅怫音~(yú)體的脂肪沉積；齊國(guó)山[37]發(fā)現(xiàn)，牛磺酸增加了初始體重為6.3和48.0 g大菱鲆的蛋白質(zhì)沉積，降低了脂肪沉積，但對(duì)初始體重為165.9 g的大菱鲆同時(shí)增加了蛋白質(zhì)和脂肪沉積。?；撬釋?duì)魚(yú)體蛋白質(zhì)沉積的調(diào)節(jié)是通過(guò)調(diào)節(jié)與蛋白質(zhì)合成代謝相關(guān)的激素的分泌來(lái)進(jìn)行的[35]，有研究發(fā)現(xiàn)，在鯉魚(yú)飼料中添加?；撬崮軌虼龠M(jìn)甲狀腺激素分泌[38]，而甲狀腺激素能夠促進(jìn)組織分化、生長(zhǎng)和發(fā)育，加速蛋白質(zhì)與各種酶的生成。?；撬釋?duì)脂肪沉積的調(diào)節(jié)則是通過(guò)絡(luò)合膽汁酸，從而刺激膽汁酸分泌來(lái)實(shí)現(xiàn)的，膽汁酸的分泌可以增加脂肪酸的氧化和能量消耗[39]。在本試驗(yàn)中，魚(yú)粉組飼料和魚(yú)體肌肉中的?；撬岷枯^高，血清中總膽汁酸含量也較高，這與相關(guān)研究結(jié)果一致，可能是魚(yú)粉組魚(yú)體粗蛋白質(zhì)含量較高、粗脂肪含量較低的原因之一。

本研究對(duì)魚(yú)體肌肉氨基酸組成進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆營(yíng)養(yǎng)的肌肉氨基酸組成存在影響，這主要是受飼料氨基酸組成的影響，有研究表明機(jī)體組織的必需氨基酸組成與飼料氨基酸組成存在明顯的相關(guān)關(guān)系[40]。

3.4 江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

黏膜皺襞高度、上皮細(xì)胞高度、微絨毛高度是評(píng)價(jià)腸道組織形態(tài)變化的重要指標(biāo)，腸道的皺襞高度和微絨毛高度擴(kuò)大了腸道面積，決定了腸道吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力。在本研究中，江蘺、滸苔、藻渣和菌渣替代魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)的腸道發(fā)育均起到一定的促進(jìn)作用，尤其是藻渣和菌渣，這2組大菱鲆幼魚(yú)的腸道發(fā)育非常好，這可能與藻渣和菌渣中的一些糖類(lèi)物質(zhì)有關(guān)。藻渣中含有海帶多糖，以及一些寡糖如甘露糖，菌渣是土曲霉菌發(fā)酵生產(chǎn)衣康酸的下腳料，其中含有一些構(gòu)成真菌細(xì)胞的聚糖如幾丁質(zhì)，而殼聚糖是部分或完全脫乙酸基的幾丁質(zhì)的衍生物，被殼聚糖酶水解可得到殼寡糖。有研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加海帶粗多糖可以提高斜帶石斑魚(yú)腸道絨毛長(zhǎng)度[41]；潘金露[42]發(fā)現(xiàn)，飼料中添加殼寡糖可以提高大菱鲆腸道皺襞高度和微絨毛高度；田娟等[43]發(fā)現(xiàn)，殼寡糖可以促進(jìn)吉富羅非魚(yú)腸道發(fā)育；于朝磊等[44]報(bào)道，在飼料中添加甘露寡糖可以提高半滑舌蹋的腸道皺襞高度，促進(jìn)腸道微絨毛發(fā)育。本研究中藻渣和菌渣中含有的多糖和寡糖可能是促進(jìn)大菱鲆幼魚(yú)腸道發(fā)育的原因之一。

4 結(jié) 論

① 將10%的江蘺、藻渣和菌渣與植物蛋白質(zhì)配合替代飼料中35%的魚(yú)粉對(duì)大菱鲆幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能無(wú)不良影響，以10%的滸苔與植物蛋白質(zhì)配合替代飼料中35%的魚(yú)粉則降低了大菱鲆幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能。

② 藻渣和菌渣可改善大菱鲆幼魚(yú)的腸道組織結(jié)構(gòu)。

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*Corresponding author, professor, E-mail: liangmq@ysfri.ac.cn