孕馬血清采集分離操作示范

尹聶生

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團第二師二十一團畜牧中心841111）

孕馬血清促性腺激素（PMSG）也叫馬絨毛膜促性腺激素，是從懷孕早期的母馬血清中提取出的一種促性腺激素。隨著近年來不斷深入分析高新生物技術(shù)，PMSG最開始在動物誘導(dǎo)發(fā)情、人畜生殖器官疾患與超數(shù)排卵治療中廣泛應(yīng)用。目前在生物工程技術(shù)領(lǐng)域得到應(yīng)用，如細胞培養(yǎng)、胚胎移植。因此，PMSG市場需求量越來越大，市場生產(chǎn)規(guī)模越發(fā)不能滿足，原材料供應(yīng)不足占據(jù)主導(dǎo)原因。本試驗旨在研究孕馬血清采集與分離的有效方法，為提取高效價、較高純度的PMSG成品提供原材料。

1 孕馬血清采集與分離工藝流程

1.1 工藝流程

檢疫合格的馬匹→受孕→確定受孕→試血（效價檢測）→采血（采血針頭、導(dǎo)引管、采血瓶、血清瓶等滅菌準備）→離心→分離、配制還輸液（葡萄糖生理鹽水還輸液滅菌準備）→血清→加防腐劑、取樣檢測、無菌試驗→入庫→馬匹休息→進入下次采血。

1.2 具體操作方法

1.2.1 孕馬檢查

在孕馬妊娠40d時進行檢查，高峰數(shù)值出現(xiàn)在60d時，隨后維持到大約第120天開始降低。畜牧技術(shù)員需要對準母馬妊娠天數(shù)進行了解，對馬號及妊娠天數(shù)進行記錄。

1.2.2 試血

采集摸排好妊娠馬匹頸靜脈血液進行檢測。選擇ELISA法對血清開展測定以及對效價進行確定，對合格馬匹進行編號之后才可以采血。

1.2.3 采血

孕馬保定之后對頸部皮膚利用75%酒精棉球檫拭與碘伏進行消毒，找準頸動脈血管，用采血針頭插入，將膠管的一端與針頭鏈接，另一端伸入離心瓶中，緊貼瓶壁。離心瓶按1OOOml血液加入20ml20%的枸櫞酸鈉的比例抗凝，并記下瓶號，瓶蓋蓋上后傾斜離心瓶大約45°之后進行緩慢搖轉(zhuǎn)，保障注射液全面覆蓋離心瓶的內(nèi)壁；將靠近心端止血鉗取出，經(jīng)采血管流血液進入到離心瓶，接滿血后蓋上瓶蓋；采血過程需要嚴格消毒，處理采血針頭、還輸瓶、離心瓶、膠管等器具，避免發(fā)生污染。還輸瓶、離心瓶編號需要與采血馬匹的編號要進行對應(yīng)，將記錄工作做好。

注意事項：（1） 依據(jù)1000ml血液融入20ml20%枸櫞酸鈉進行抗凝，實際上就是建設(shè)等滲環(huán)境，不會改變血液滲透壓，也不會破壞紅細胞導(dǎo)致發(fā)生溶血。（2）在38℃水浴箱內(nèi)促使接血瓶中血液進行均勻受熱，析出不穩(wěn)定蛋白，促進離心、析出血清，血清采集之后外觀呈現(xiàn)出透亮且黃色的現(xiàn)象。

1.2.4 離心

將接滿血的離心瓶按先后順序放置于38℃水浴箱中，間隔10min進行一次觀察，0.5h之后間隔5min進行一次觀察，直到開始析出血清時取出；自水浴箱中將離心瓶取出之后放置于離心機中，分離速度為每分鐘4000轉(zhuǎn)，進行25～30min的離心，此時黃色透亮的血清大量析出，將血清緩緩倒入加過防腐劑的存儲器中迅速封裝并置于-2～-8℃的冷庫加以保存。

1.2.5 對采過血的馬匹進行血球還輸

將事先配置好的葡萄糖生理鹽水與相對應(yīng)馬匹的血漿置于還輸瓶內(nèi)（配置的量為采血量），將膠管的一端與針頭鏈接，另一端伸入離心瓶中，找準頸動脈血管，將針頭刺入并舉起還輸瓶輸完為止。

注意事項：對采集過血的馬匹須立即做血球還輸能降低損傷馬匹血球細胞的程度，減少孕馬死亡率，提升采血次數(shù)與采血量，提高馬匹免疫力、馬駒成活率。

1.2.6 采血后管理

馬匹休息并加強飼養(yǎng)管理，準備下次采血。

2 采血孕馬的管理技術(shù)要點

2.1 添加適當(dāng)精料

采血前后對孕馬的飼養(yǎng)管理既要保證孕馬本身營養(yǎng)良好，又要兼顧胎兒生長發(fā)育、胎兒不流產(chǎn)、分娩順利。孕馬膘度在中上的進行采血，膘度較差的禁止采血。所以，此時對孕馬除了加強放牧（農(nóng)區(qū)要多給些優(yōu)質(zhì)青干草）以外，還要提供蛋白質(zhì)含量較高的精料。通過試驗研究，采血的孕馬要從確定懷孕后就開始添加精料，添加量為2.5kg/d（添加的過多，收益不明顯，浪費成本），精料種類為豆粕、玉米和全價料， 其比重為 3∶5∶8。

2.2 采血次數(shù)、間隔時間及采血量

通過試驗表明，孕馬從妊娠40～120d時采血最適。滿膘的孕馬采血次數(shù)可控制在10次，間隔8d采血一次，次采血量控制在5kg；中上膘度的孕馬采血次數(shù)應(yīng)控制在8次，間隔10d采血一次，次采血量為4.5kg。這樣既可充分發(fā)揮和利用采血期間的孕馬，使其產(chǎn)生的效益最大化，又可以保護孕馬本身及其胎兒不受影響。

2.3 注射適量含鐵制劑

為了使孕馬在采血后能及時恢復(fù)自身血容量，最大限度的恢復(fù)自身體況及保護胎兒的生長發(fā)育，并不影響下次采血量，孕馬除了發(fā)揮自身正常的造血功能外，還需人為注射適當(dāng)?shù)暮F制劑-右旋糖酐鐵VB12注射液。孕馬在每次采血后，根據(jù)孕馬膘度情況按照每千克體重肌肉注射0.1～0.12ml右旋糖酐鐵VB12注射液，膘度好可提高用量，反之亦然。切忌超量使用，否則產(chǎn)生不良反應(yīng)帶來不必要的損失。