生活飲用水微生物檢驗方法及評價標(biāo)準(zhǔn)探討

□ 程 賀 本溪滿族自治縣疾控中心

在民生問題中，飲用水衛(wèi)生受到了大眾的關(guān)注，政府以及相關(guān)部門均十分重視居民的飲用水的衛(wèi)生，多次修改、頒布飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[1]。人體中70%是由水構(gòu)成的，正常人可以一周不進食，但是一天之內(nèi)不可無水，因此干凈的飲用水變得尤為重要。飲用水微生物污染在我國是最大的污染問題之一，在貧困地區(qū)尤為明顯。

1 飲用水微生物指標(biāo)

生活中的飲用水已經(jīng)過沉淀、過濾、加氯消毒等處理，因此微生物含量很少，但當(dāng)水源水不潔或者在進行處理的適合水質(zhì)并未達到制定的相關(guān)要求，因此飲用水仍含有很多致病性微生物或者一定量的微生物。供水管破損、二次供水環(huán)節(jié)之中也極有可能導(dǎo)致飲用水污染。我國制定的生活飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定細菌總數(shù)每毫升低于100個，總大腸菌群不可檢出[2]。

2 總大腸菌群進行檢驗的相關(guān)方法

2.1 應(yīng)用多管發(fā)酵法進行總大腸菌群檢驗

多管發(fā)酵法適用于總大腸菌群的測定，總大腸菌群多是在37 ℃下進行24 h產(chǎn)酸產(chǎn)氣、發(fā)酵乳糖、兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌，多管發(fā)酵法需要應(yīng)用試劑和培養(yǎng)基，乳糖蛋白動培養(yǎng)液、伊紅美藍培養(yǎng)基、二倍濃縮乳糖蛋白培養(yǎng)液、革蘭氏染色液。檢驗需要應(yīng)用顯微鏡、培養(yǎng)箱、天平、試管、冰箱、平皿、分度吸管、錐形瓶、載玻片以及小倒管。將10 mL的水樣接種至10 mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1 mL的水樣加入9 mL滅菌生理鹽水，將試管混勻后，將1 mL水樣加入單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（共10 mL）中，每一稀釋度均需要接種5管。取處理的出廠自來水作為水樣，每日進行一次檢驗，直接取5份10 mL的雙料培養(yǎng)基，每一份均需要接種10 mL水樣。若檢測的水源污染比較嚴(yán)重，則需加大實驗的稀釋度，接種 1 mL、0.1 mL、0.01 mL， 每 一個稀釋度據(jù)均需要接種5管，每一份水樣接種15管。在接種1 mL水樣時，需進行10倍遞增稀釋，之后接種1 mL，每遞增均需要一次稀釋，并且需要滅菌刻度吸管的更換。接種管置入35～37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，乳糖蛋白胨培養(yǎng)管在試驗結(jié)果中不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則總大腸菌群的檢測結(jié)果呈陰性；若結(jié)果產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需要將發(fā)酵罐轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂板上，在35～37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，觀察菌落形態(tài)，挑選出有金屬光澤、深紫黑色的菌落；紫黑色或稍帶金屬光澤菌落、淡紫紅色中心較深的菌落[3]。經(jīng)過染色鏡顯示未革蘭氏陰性無芽孢桿菌，接種的同時乳糖蛋白胨培養(yǎng)，在35～37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22～26 h，若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則證實有總大腸菌。

2.2 濾膜法

濾膜法也適用于生活飲用水和水源水中總大腸菌群的測定，總大腸菌群應(yīng)用濾膜法進行測量需要應(yīng)用孔徑為0.45 μm微孔濾膜過濾水樣，之后把濾膜貼于添加乳糖選擇性培養(yǎng)基上37 ℃培養(yǎng)24 h，可形成特征性菌落需氧、革蘭氏陰性無芽孢桿菌應(yīng)用在水中展開總大腸桿菌群的檢測。選用培養(yǎng)基、有品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基以及乳糖蛋白胨培養(yǎng)液。應(yīng)用濾膜、無齒鑷子、濾器、抽濾設(shè)備以及其他儀器通多管發(fā)酵法。①水樣滅菌，分為濾器滅菌、濾膜滅菌兩種滅菌方式。濾膜滅菌主要是把濾膜放置在燒杯中，在試驗之中加入蒸餾水，至于沸水浴之中煮沸滅菌3次，每次時間約15 min。前兩次煮沸之后需要用水洗滌2～3次，將殘留溶劑去除。濾器滅菌主要是點燃酒精棉球火焰滅菌，在蒸汽滅菌器中高壓滅菌20 min。②水樣過濾。應(yīng)用無菌鑷子夾取滅菌濾膜的邊緣部位，時刻將粗糙面保持向上，將貼于已滅菌濾床，進行濾器的固定，將100 mL水樣注入濾器，將濾器閥門打開，在-0.5大氣壓的狀態(tài)下展開抽濾[4]。③水樣的培養(yǎng)。水樣過濾之后，需要再抽氣5 s，把濾器的閥門關(guān)好，取下濾器，并且應(yīng)用滅菌鑷子夾取濾膜的邊緣部分，并移動其放置在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，將濾膜截留于細菌面，濾膜需與培養(yǎng)基完全貼緊，不可留有氣泡，將平皿倒置，放置在37 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)。

3 結(jié)語

多管發(fā)酵法和濾膜法均可應(yīng)用在飲用水總大腸菌群的檢測，多管發(fā)酵法適合應(yīng)用多種樣品的檢測中，實驗時間長。濾膜法則適合雜質(zhì)較少的水樣，操作簡單，結(jié)果精密，兩種檢驗結(jié)果數(shù)值和數(shù)目不同，因此需要按照實際狀況選擇檢測方式，或者兩種方式相結(jié)合，以便于取得準(zhǔn)確的檢驗結(jié)果。