超高效液相法測定涼果類食品中的EDTA-2Na含量

□ 高 恒 朱玲玲 王 姣 曹程程 王秀娟 楊桂霞 山東中質(zhì)華檢測試檢驗(yàn)有限公司

1 引言

EDTA-2Na又叫做乙二胺四乙酸二鈉，是一種絡(luò)合能力很強(qiáng)的食品添加劑和重要的人造有機(jī)多元酸[1]，其主要功能是作為穩(wěn)定劑、凝固劑和防腐劑，因其能與各種金屬陽離子穩(wěn)定絡(luò)合，防止金屬引起的變質(zhì)和氧化損失，另外還可提高油脂的抗氧化性[2]，進(jìn)而延長食品的存儲周期。

涼果類食品是指經(jīng)腌制、糖熬浸漬、干燥后的瓜果制品，是傳統(tǒng)美食，深受喜愛。但最近食品安全通報部分食品中EDTA-2Na違法添加的事件，引人關(guān)注。國家標(biāo)準(zhǔn)《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760-2014）詳細(xì)規(guī)定了醬菜、罐頭及飲料等食品的EDTA-2Na限量值；明確指出果脯食品僅地瓜果脯允許添加[3]。對于EDTA的測定，常見有比色法、滴定法[4]和高效液相色譜法、離子色譜法等。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，滴定法和比色法很難將EDTA和金屬離子的絡(luò)合物和其他絡(luò)合物區(qū)分開，達(dá)不到測定精確[5]。液相色譜法是通過檢測絡(luò)合物計算樣品中EDTA的含量。通過比對兩種常見絡(luò)合物發(fā)現(xiàn)，EDTA-Fe在液相中的檢測靈敏度遠(yuǎn)大于EDTA-Cu， 如圖1所示，故本文選取EDTA-Fe作為絡(luò)合劑。

2 試驗(yàn)部分

2.1 儀器和試劑

2.1.1 試劑

甲醇、正己烷，色譜純；氯化鐵、無水乙酸鈉、四丁基溴化銨、磷酸；EDTA-2Na標(biāo) 準(zhǔn) 品（CAS：6381-92-6）；水均為超純水。

2.1.2 儀器設(shè)備

Agilent 1260 Infinity II超高效液相色譜儀（配紫外檢測器）、電子天平（0.01 mg/kg/0.01 g）、 XW-80A旋渦混合器、KQ-500V型超聲波清洗器、振蕩混合器、超純水儀、3-18KS冷凍離心機(jī)。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 溶液配制

氯化鐵溶液：稱取0.2 7g三氯化鐵，溶于90 mL水，加入0.05 mL鹽酸，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。

緩沖液：稱取6.45 g四丁基溴化銨、1.64 g乙酸鈉，加1 000 mL水超聲攪拌溶解，用磷酸調(diào)pH值為3。

圖1 兩種絡(luò)合物液相色譜圖的比對

EDTA-2Na標(biāo)液：準(zhǔn)確稱取0.100 0 g標(biāo)準(zhǔn)品，用水定容至100 mL，得到1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，冷藏避光保存。

2.2.2 色譜條件

色譜柱Venusil SAX（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為甲醇∶緩沖液15∶85；流速1.0 mL/min；檢測波長258 nm；進(jìn)樣量10 μL；柱溫30 ℃。

2.2.3 前處理

將去核后的涼果類試樣均勻搗碎，準(zhǔn)確稱取2.500 g試樣于50 mL離心管中，加入水和正己烷，旋渦超聲離心各5 min，冷卻至室溫。將正己烷層棄去，將水層轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中。向管中加入20 mL水復(fù)提取離心一次，并將提取液并入容量瓶中。向容量瓶中加入5 mL氯化鐵溶液，用水定容至刻度線。搖勻后旋渦10 min靜置，過0.45 μm微孔濾膜，待測。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇

在溶液中，金屬離子與EDTA發(fā)生螯合反應(yīng)。條件穩(wěn)定常數(shù)l g KMY值是體現(xiàn)螯合過程中產(chǎn)物生成的標(biāo)志。文獻(xiàn)顯示，在pH值為3～6時，F(xiàn)e3+的l g KMY值達(dá)到最大[6]。Fe3+結(jié)合氫氧根的能力較強(qiáng)，且在酸性環(huán)境中不產(chǎn)生沉淀，故選取緩沖液的pH值為3。對比甲醇∶緩沖液分別為15∶85、20∶80、25∶75條件下，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)物隨著流動相中甲醇所占比例的提高，出峰時間會發(fā)生后移，且在峰面積基本相同的情況下，峰高逐步降低，如圖2所示。由此本試驗(yàn)最終選取流動相比例為甲醇∶緩沖液=15∶85。試驗(yàn)通過對螯合物EDTA-Fe進(jìn)行掃描后，得出目標(biāo)物在波長258 nm處有最大吸收。

圖2 流動相比例為15∶85，20∶80，25∶75下目標(biāo)物的響應(yīng)

3.2 衍生化方式以及時間的確定

本試驗(yàn)選取超聲、振蕩、漩渦三種輔助衍生方式進(jìn)行對比。如圖3所示，旋渦提取的回收率要高于其他方式的回收率。當(dāng)旋渦時間達(dá)到10 min后回收率無明顯提高。因此本試驗(yàn)選取最佳衍生方式為渦旋，衍生時間10 min。

3.3 線性關(guān)系

以EDTA-2Na標(biāo)準(zhǔn)品含量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如圖4所示。

3.4 方法檢出限、回收率和精密度

采用空白基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)，分別進(jìn)行回收率和精密度試驗(yàn)，以S/N=3計算方法檢出限，得EDTA-2Na的檢出

圖3 不同衍生方式和時間對試驗(yàn)回收率影響

圖4 EDTA-2Na標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 涼果食品樣品的空白基質(zhì)加標(biāo)回收率

限為5.0 mg/kg。準(zhǔn)確稱取同一種基質(zhì)空白的涼果食品樣品，平行稱取21份，每份2.500 g，進(jìn)行三個水平的加標(biāo)試驗(yàn)，每水平做7次平行試驗(yàn)。按上述前處理方法進(jìn)行處理，最終定容體積為50 mL，結(jié)果見表1。平均回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在97.1%～99.6%和1.104%～3.872%。

3.5 實(shí)際樣品的測定

選取30份市面上的涼果類食品利用本試驗(yàn)方法進(jìn)行測定，其中兩個樣品檢出值分別為7.35 mg/kg、9.15 mg/kg為陽性。結(jié)果表明，本試驗(yàn)方法適用于涼果類食品中EDTA-2Na的含量測定。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法檢測涼果類食品中的EDTA-2Na添加量，利用紫外光譜進(jìn)行定性和外標(biāo)法定量。乙二胺四乙酸二鈉在5～100 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，其線性相關(guān)系數(shù)為0.999 97，加標(biāo)回收率在97.1%～99.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.104%～3.872%的相關(guān)范圍內(nèi)。該方法快捷、準(zhǔn)確、實(shí)用性高，為涼果類食品中添加劑乙二胺四乙酸二鈉的高效快速檢測提供了試驗(yàn)依據(jù)，為保障食品安全檢測的順利實(shí)施提供了準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。