環(huán)境因子對(duì)冬青衛(wèi)矛白粉病菌分生孢子萌發(fā)的影響

高國(guó)偉+周小林+岳弘辰+遲夢(mèng)宇+黃金光

摘要：自2014年以來，青島地區(qū)冬青衛(wèi)矛白粉病日趨嚴(yán)重，近三年發(fā)病率均在70%以上，對(duì)園林景觀造成嚴(yán)重影響。粉狀白粉菌（Erysiphe alphitoides）是引起冬青衛(wèi)矛白粉病的病原菌，為進(jìn)一步研究粉狀白粉菌分生孢子生物學(xué)性狀，在室內(nèi)對(duì)分生孢子不同溫度、碳源、時(shí)間等條件下的萌發(fā)率進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，粉狀白粉菌分生孢子在28℃黑暗條件下置于清水中培養(yǎng)36 h萌發(fā)率最高。

關(guān)鍵詞：冬青衛(wèi)矛白粉病；粉狀白粉菌；孢子萌發(fā)；環(huán)境因子

中圖分類號(hào)：S436.8+5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2017）12-0090-03

Abstract Euonymus japonicas powdery mildew has occurred seriously in Qingdao region since 2014 with the incidence rate up to 70%， which has serious impacts on landscape. Erysiphe alphitoides infecting E.japonicas in China was firstly reported in 2017.The rate of spore germination was investigated under different temperature， carbon sources and culture time. The results showed that the germination rate of E.alphitoides conidia was the highest in distilled water at 28℃ under darkness conditions for 36 hours.

Keywords Powdery mildew of Euonymus japonicas；Erysiphe alphitoides；Spore germination；Environmental factors

冬青衛(wèi)矛（Euonymus japonicas Thunb）又名大葉黃楊、正木，常用作綠籬、綠球及各種造型，在全國(guó)分布廣泛，是重要的常綠觀賞植物。冬青衛(wèi)矛白粉病能夠引起葉片皺縮，新梢變白、畸形、生長(zhǎng)受阻，嚴(yán)重時(shí)造成葉片和嫩枝干枯死亡。此病在日本、美國(guó)、歐洲等都有分布。在國(guó)內(nèi)，1948年，凌立曾記載四川有冬青衛(wèi)矛白粉病[1]。1991年，馮紅對(duì)四川冬青衛(wèi)矛白粉病進(jìn)行了初步研究并鑒定其病原菌為Oidium euonymi-japonicae（Arcang.） Sacc.[2]。1995年，李士竹等首次在山東泰安市發(fā)現(xiàn)報(bào)道了冬青衛(wèi)矛白粉病，其病原菌亦為O.euonymi-japonicae，但未發(fā)現(xiàn)其有性時(shí)期[3]。2001年，姜淑霞等對(duì)冬青衛(wèi)矛白粉病的有性時(shí)期進(jìn)行了室內(nèi)誘發(fā)，發(fā)現(xiàn)了其有性階段，并通過鏡檢確定為叉絲殼屬（Microsphaera）（子囊菌亞門，核菌綱，白粉菌目）[4]，但在田間仍未發(fā)現(xiàn)有性階段。2014—2017年，冬青衛(wèi)矛白粉病在青島地區(qū)發(fā)病嚴(yán)重，發(fā)病率高達(dá)70%以上。為有效地防控冬青衛(wèi)矛白粉病，作者通過病原形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)方法首次明確了冬青衛(wèi)矛白粉病病原菌為粉狀白粉菌（Erysiphe alphitoides），首次發(fā)現(xiàn)了冬青衛(wèi)矛白粉病病原菌自然條件下的有性階段，為冬青衛(wèi)矛白粉病的綜合治理提供了一個(gè)新的理論依據(jù)[5]。為進(jìn)一步研究粉狀白粉菌分生孢子生物學(xué)性狀，本研究在室內(nèi)對(duì)分生孢子不同溫度、時(shí)間、碳源等條件下的萌發(fā)率進(jìn)行研究，以期為后續(xù)化學(xué)藥劑及生防因子的篩選奠定基礎(chǔ)，也為青島地區(qū)冬青衛(wèi)矛白粉病防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試病原材料為青島市城陽區(qū)內(nèi)公路兩側(cè)綠籬自然發(fā)病且病斑新鮮的冬青衛(wèi)矛葉片。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)組采用懸滴法進(jìn)行孢子萌發(fā)試驗(yàn)[6]。根據(jù)孢子萌發(fā)需求設(shè)置不同溫度、時(shí)間、碳源條件，每隔12 h進(jìn)行觀察和統(tǒng)計(jì)，記錄孢子萌發(fā)率。分生孢子萌發(fā)率（%）=（萌發(fā)孢子總數(shù)/被查孢子總數(shù)）×100[7]。

1.2.1 溫度對(duì)孢子萌發(fā)影響的試驗(yàn) 用無菌水沖下冬青衛(wèi)矛病葉上產(chǎn)生的分生孢子，配制成濃度為104～105個(gè)/mL的孢子懸浮液[8]，滴于凹面載玻片上，然后置于23、25、28℃培養(yǎng)箱中黑暗條件下保濕培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次，每隔12 h進(jìn)行鏡檢并統(tǒng)計(jì)分生孢子萌發(fā)率。

1.2.2 碳源對(duì)孢子萌發(fā)影響的試驗(yàn) 將冬青衛(wèi)矛病葉上的分生孢子分別使用不同碳源：2%蔗糖溶液、2%葡萄糖溶液、冬青衛(wèi)矛葉片煮沸液和清水配制成濃度為104～105個(gè)/mL的孢子懸浮液，滴于凹面載玻片上，置于28℃培養(yǎng)箱中黑暗條件下保濕培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次，每隔12 h進(jìn)行鏡檢并統(tǒng)計(jì)分生孢子萌發(fā)率。

1.2.3 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)孢子萌發(fā)影響的試驗(yàn) 將冬青衛(wèi)矛病葉上的分生孢子用無菌水配制成濃度為104～105個(gè)/mL的孢子懸浮液，滴于凹面載玻片上，置于28℃培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)，在12、24、36、48 h分別觀察統(tǒng)計(jì)分生孢子萌發(fā)率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度對(duì)孢子萌發(fā)的影響

培養(yǎng)36 h后，白粉菌孢子芽管過長(zhǎng)，孢子懸浮液內(nèi)有其它雜菌菌絲生長(zhǎng)，不再便于計(jì)數(shù)，所以孢子培養(yǎng)至36 h。孢子萌發(fā)率如圖1所示，22℃和25℃條件下孢子萌發(fā)率并無太大差異，28℃條件下孢子萌發(fā)率最高，36 h時(shí)可達(dá)32%左右。表明，孢子最適萌發(fā)溫度是28℃。

2.2 不同碳源對(duì)孢子萌發(fā)的影響

不同碳源營(yíng)養(yǎng)條件下，36 h培養(yǎng)過程中孢子萌發(fā)率如圖2 所示，清水處理孢子萌發(fā)率最高，2%葡萄糖次之，葉片煮沸液中孢子萌發(fā)率最低。表明無任何營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的清水中孢子萌發(fā)率最高，碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)于孢子的萌發(fā)沒有影響。endprint

2.3 不同時(shí)間對(duì)孢子萌發(fā)的影響

不同時(shí)間記錄的孢子萌發(fā)率如圖3所示，培養(yǎng)后孢子萌發(fā)率逐漸增加，且12～24 h時(shí)間段內(nèi)增加較快，24～36 h時(shí)間段內(nèi)萌發(fā)率增加較慢，36 h后萌發(fā)率幾乎不再增加。所以冬青衛(wèi)矛白粉病菌分生孢子培養(yǎng)以36 h為宜。

3 討論與結(jié)論

冬青衛(wèi)矛作為栽植面積大、分布廣泛的綠化植物，對(duì)于改善生態(tài)環(huán)境有重要作用。近年來，冬青衛(wèi)矛白粉病危害逐年加重[10，11]。通過分析環(huán)境因子對(duì)白粉病菌分生孢子萌發(fā)的影響，明確白粉病菌孢子萌發(fā)的條件，便于下一步針對(duì)白粉病進(jìn)行室內(nèi)藥效測(cè)定。而白粉病菌作為專性寄生菌，不能在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，必須分離到室外發(fā)病植株上的白粉病菌分生孢子進(jìn)行試驗(yàn)。室外環(huán)境復(fù)雜多樣，孢子懸浮液中難免會(huì)混有雜菌，雜菌菌絲生長(zhǎng)在一定程度上會(huì)影響孢子萌發(fā)的觀察。且野外生長(zhǎng)的不同植株不同葉片上的孢子，其成熟度有差異，所以室內(nèi)試驗(yàn)必須使用同一批次采自室外同一葉片上的分生孢子。

本研究結(jié)果表明，培養(yǎng)36 h是孢子萌發(fā)高峰；28℃為孢子萌發(fā)最適溫度；清水中孢子萌發(fā)率最高，碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)于孢子的萌發(fā)沒有影響。前期研究結(jié)果表明，隨著相對(duì)濕度的增加，孢子萌發(fā)率隨之增高[9]。而不同碳源營(yíng)養(yǎng)液有不同的相對(duì)濕度，在以上幾種孢子培養(yǎng)液中，每100 g水種蔗糖溶解度為199.4 g，葡萄糖為87.67 g，可知相對(duì)濕度清水>2%葡萄糖>2%蔗糖，所以清水最利于孢子萌發(fā)。綜上所述，白粉病菌分生孢子在28℃黑暗條件下置于清水中培養(yǎng)36 h后可得到最大萌發(fā)率。

參 考 文 獻(xiàn)：

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[3] 李士竹，劉振寧，陸燕君. 山東新紀(jì)錄——大葉黃楊白粉病[J].山東林業(yè)科技，1995（1）：40-42.

[4] 姜淑霞，賈文，李存華，等. 冬青衛(wèi)矛白粉病菌有性階段初報(bào)[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32（3）：377-378.

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