10種化合物對(duì)胡椒瘟病菌的抑菌活性測(cè)定

茍亞峰+高圣風(fēng)++孫世偉++桑利偉++王政++孟倩倩++劉愛(ài)勤

摘 要 以胡椒瘟病菌（Phytophthora capsici）為供試病原菌，用生長(zhǎng)速率法測(cè)試了10種化合物對(duì)其離體抑菌活性。結(jié)果表明，當(dāng)供試濃度為2 000 mg/L時(shí)，腈菌唑、戊唑醇、三環(huán)唑和嘧霉胺的抑菌活性均達(dá)到了60%以上，其中腈菌唑和三環(huán)唑抑菌活性最高，抑菌率分別達(dá)到了85.16%和100%，對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，該兩種化合物值得進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)。

關(guān)鍵詞 化合物 ；胡椒瘟病菌 ；抑菌活性

中圖分類(lèi)號(hào) S482.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2017.11.010

Antifungal Activity of Phytophthora Capsici of 10 Compounds

GOU Yafeng GAO Shengfeng SUN Shiwei WANG Zheng LIU Aiqin*

（Research Institute of Spice and Beverage Crops，CATAS，Wanning，Hainan 571533）

Abstract The antifungal activity of 10 compounds were tested by growth rate method with Phytophthora capsici. The results showed that when the concentration were 2000 mg/L， Myclobutanil， Tebuconazole，Tricyclazole and Pyrimethanil antifungal activity were more than 60%， Myclobutanil and Tricyclazole had high inhibitory rate to 85.16% and 100%，respectively. These two compounds had obvious inhibition to the growth of Phytophthora capsici mycelia. It was worth to have further research.

Keywords compound ； Phytophthora capsici ； antifungal activity

胡椒瘟病又稱(chēng)疫霉根腐病、速枯病、速死病，是一種氣候依賴(lài)性病害，是世界胡椒種植區(qū)最重要的胡椒病害。在海南它是由辣椒疫霉（Phytophthora capsici）引起的最為嚴(yán)重的一種土傳病害，以主蔓基部受害最大，常引起整株胡椒萎蔫和死亡[1-3]。在高溫多雨季節(jié)，特別是臺(tái)風(fēng)雨后或連續(xù)降雨，該病發(fā)生流行嚴(yán)重，給我國(guó)胡椒生產(chǎn)造成了嚴(yán)重?fù)p失。國(guó)內(nèi)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上藥劑防治還主要以波爾多液、三乙膦酸鋁或硫酸銅溶液等為主，由于這些藥劑防治藥效慢、處理時(shí)間長(zhǎng)，長(zhǎng)期使用不但容易引起抗藥性，而且對(duì)胡椒園的生態(tài)環(huán)境、胡椒的品質(zhì)等方面帶來(lái)不利影響[4]。

隨著農(nóng)業(yè)病蟲(chóng)害綜合防控技術(shù)以及人們對(duì)食品質(zhì)量安全意識(shí)的不斷提高，傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥毒性大、殘留量高，長(zhǎng)期使用會(huì)對(duì)環(huán)境和人類(lèi)健康造成嚴(yán)重威脅，破壞生態(tài)平衡。因此，應(yīng)用生物防治、物理防治和篩選高效、低毒、低殘留農(nóng)藥等綠色防控技術(shù)對(duì)病蟲(chóng)害進(jìn)行綜合防控的需求越來(lái)越緊迫[5-6]。為此，本研究以胡椒瘟病菌為供試病原菌，測(cè)試了10種化合物的抑菌活性，以期篩選出抑菌活性較好的化合物，為低毒、高效的殺菌劑研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試化合物

供試10種化合物，均購(gòu)于市場(chǎng)。見(jiàn)表1。

1.1.2 供試菌種

胡椒瘟病菌（Phytophthora capsici），由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所病蟲(chóng)害防控研究室提供。

1.2 方法

采用含毒介質(zhì)法中的生長(zhǎng)速率法測(cè)定供試化合物對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用[7]。具體操作步驟為：（1）稱(chēng)取0.2 g不同化合物，先用1 mL丙酮溶解，再用無(wú)菌蒸餾水定容至100 mL，制成濃度為2 000 mg/L的母液；（2）用無(wú)菌蒸餾水采用倍半稀釋法制成濃度為1 000 mg/L的供試濃度；（3） 將培養(yǎng)基融化并冷卻至50℃左右，把定量3 mL不同濃度的化合物分別與定量27 mL/瓶的PDA培養(yǎng)基混合，搖勻后分裝于3個(gè)直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，待其凝固后，取菌落直徑為5 mm、培養(yǎng)7d的胡椒瘟病菌的外層菌塊放置于培養(yǎng)皿中，以加入等體積丙酮滅菌水的PDA培養(yǎng)平板為對(duì)照，每個(gè)處理做3個(gè)重復(fù)；（4）接種后，在人工氣候培養(yǎng)箱（25～28℃）下培養(yǎng)72 h后采用十字交叉法分別測(cè)量菌落大小，求其平均值，分別計(jì)算出各種化合物每種濃度的抑制率。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試10種化合物對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生長(zhǎng)抑菌率測(cè)定

在濃度為2 000和1 000 mg/L時(shí)，10種化合物對(duì)胡椒瘟病菌抑菌率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

從表2中可以看出，10種化合物在供試濃度為1 000 mg/L時(shí)，腈菌唑和三環(huán)唑的抑菌率均達(dá)到了60%以上，分別為61.42%和66.37%；供試濃度為2 000 mg/L時(shí)，腈菌唑、戊唑醇、三環(huán)唑和嘧霉胺的抑菌率均達(dá)到了60%以上，其中腈菌唑和三環(huán)唑的抑菌率較高，分別達(dá)到了85.16%和100%，具有較高的開(kāi)發(fā)利用前景。

2.2 腈菌唑和三環(huán)唑?qū)肺敛【“邤U(kuò)展的抑制作用

分別稱(chēng)取一定量腈菌唑和三環(huán)唑兩種化合物，先用丙酮溶解，再用無(wú)菌蒸餾水定容制成濃度為1 600 mg/L的供試濃度，采用“1.2”的方法，接種后在人工氣候培養(yǎng)箱（25～28℃）下培養(yǎng)，4 d后采用十字交叉法分別測(cè)量菌落（含菌餅直徑）大小，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1。endprint

從圖1可看出，三環(huán)唑和腈菌唑處理的含毒培養(yǎng)基中胡椒瘟病菌菌落明顯比對(duì)照菌落要小，可見(jiàn)三環(huán)唑和腈菌唑?qū)肺敛【“邤U(kuò)展具有明顯的抑制作用。進(jìn)一步測(cè)定三環(huán)唑和腈菌唑在供試濃度為1 600 mg/L時(shí)對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用，結(jié)果見(jiàn)表3。

從表3可看出，在供試濃度為1 600 mg/L時(shí)，三環(huán)唑和腈菌對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率均達(dá)到了70%以上，分別為84.11%和71.32%，可見(jiàn)三環(huán)唑的抑菌效果比腈菌唑好，有望進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。

3 討論

從供試的10種化合物對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生長(zhǎng)抑制活性測(cè)定結(jié)果可以看出，三環(huán)唑和腈菌唑在供試濃度為2 000 mg/L時(shí)，對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率分別達(dá)到了100%和85.16%，較其他化合物抑菌活性較高。三環(huán)唑是一種具有較強(qiáng)的內(nèi)吸性的保護(hù)性殺菌劑，中等毒性，主要是抑制附著孢黑色素的形成，從而抑制孢子萌發(fā)和附著孢形成，阻止病菌侵人和減少稻瘟病菌孢子的產(chǎn)生。有研究報(bào)道，75%三環(huán)唑可濕性粉劑對(duì)防治水稻穗期葉瘟有一定的防治效果，對(duì)水稻稻瘟病有很好的防效，對(duì)作物安全[8-9]。腈菌唑是一類(lèi)具保護(hù)和治療活性的內(nèi)吸性三唑類(lèi)殺菌劑，低毒，主要對(duì)病原菌的麥角甾醇的生物合成起抑制作用，對(duì)子囊菌、擔(dān)子菌均具有較好的防治效果。因此，這兩種化合物具有進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)的價(jià)值。

目前我國(guó)農(nóng)藥創(chuàng)新研究開(kāi)發(fā)能力十分薄弱，農(nóng)藥工業(yè)中存在量大質(zhì)次、品種老化、污染嚴(yán)重等問(wèn)題。因此，研發(fā)環(huán)境相容性好、安全高效的農(nóng)藥是該領(lǐng)域發(fā)展的必然方向。在篩選低毒、高效殺菌劑時(shí)要結(jié)合離體和活體實(shí)驗(yàn)結(jié)果共同評(píng)價(jià)供試藥劑的活性，但本研究?jī)H限于室內(nèi)離體條件下測(cè)定了供試藥劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性，存在一定局限性。因此，為進(jìn)一步明確三環(huán)唑和腈菌唑?qū)肺敛【囊志钚?，?yīng)結(jié)合測(cè)定該藥劑對(duì)胡椒瘟病菌孢子萌發(fā)抑制作用以及對(duì)活體胡椒上胡椒瘟病的防治效果等多種方法，為全面篩選出防治胡椒瘟病的高效殺菌劑提供支撐。

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