高效液相色譜法測定丹參注射液中丹酚酸B含量

許曉君

(荊州市第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 荊州 434000)

[引著格式]許曉君. 高效液相色譜法測定丹參注射液中丹酚酸B含量[J].長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版), 2017,14(24):4～6.

高效液相色譜法測定丹參注射液中丹酚酸B含量

許曉君

(荊州市第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 荊州 434000)

目的：通過高效液相色譜法(HPLC)測定丹參注射液中丹酚酸B的含量，為其質(zhì)量控制提供可靠方法依據(jù)。方法：丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)溶液作為外標(biāo)溶液，采用高效液相色譜法測定丹酚酸B的含量。結(jié)果：丹酚酸B在0.0986～0.9860mg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。結(jié)論：高效液相色譜法測定丹參注射液中丹酚酸B的含量，范圍廣、分辨率高、數(shù)據(jù)處理速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、誤差小，可作為測定丹參注射液水溶性成分質(zhì)量的方法。

丹酚酸B；高效液相色譜法(HPLC)；含量測定

丹參是一種傳統(tǒng)的中藥，祛瘀活血，清心通絡(luò)，是我國中醫(yī)胸痹心痛辨證治療中的常用藥物[1]。藥效學(xué)研究結(jié)果表明:丹參水溶性成分和脂溶性成分均有明顯的心血管活性，對缺血心肌有保護(hù)作用[2]。丹參的有效成分主要是丹酚酸類和丹參酮兩大類有機(jī)物，丹參酸屬于水溶性組分，丹參酮屬于脂溶性組分[3],前者以抗氧化、抗凝血和細(xì)胞保護(hù)作用為主，而丹參酮類化合物以改善血液循環(huán)[4]、抗菌和抗炎作用為主[5]，并具有顯著的抗菌和適度的性激素樣作用[6]。丹參水溶性酚酸類成分中主是要丹參素、丹酚酸B等是主要起藥物療效的物質(zhì)[7]。許多研究文獻(xiàn)在評測丹參類注射液的質(zhì)量控制指標(biāo)成分時(shí)，僅以丹參素和原兒茶醛作為指標(biāo), 是不足以全面反映該制劑臨床療效的，也應(yīng)對丹參酚的含量進(jìn)行測評。故本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法(HPLC)對丹參注射液中的丹酚酸B進(jìn)行含量測定，并對該實(shí)驗(yàn)的方法進(jìn)行考察，使該丹參類注射液的質(zhì)量控制指標(biāo)成分評價(jià)指標(biāo)體系具有科學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 儀器

紫外可見分光光度計(jì)(日本島津UV-240型)；高效液相色譜儀(島津LC10AT)；紫外檢測器(PDA-100)；色譜工作站(浙大N2000)；色譜柱(島津C18色譜柱diamonsil@(鉆石)C18, 250mmx4．6mm，5μm)；100μL微量進(jìn)樣器 (上海高鴿)；電子分析天平(OHAUS CP114 )0.45μm微孔濾膜。

1.2 藥品及試劑

樣品：丹參注射液(四川宜賓制藥廠 10mL/支 批號100206)；對照品：丹酚酸B對照品(20mg/支批號111562-201514)；對照品均購自中國食品藥品檢定研究所，供含量測定用；甲醇(色譜純)，水為屈臣氏蒸餾水，其它試劑均為分析純。

1.3 對照品和供試品的制備

精密稱取對照品，加70%甲醇溶液制成含丹酚酸B 0.986mg/mL的溶液對照品溶液，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾即得。取適量丹參注射液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾即得供試品。

1.4 檢測波長的選擇

以水為空白溶液，分別取丹酚酸B對照品溶液，在200～400nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，最大吸收波長為282.8、280.4、286.8nm，比較丹參注射液在不同檢測波長下的色譜圖, 確定樣品測定波長為282nm。

1.5 HPLC色譜條件

色譜柱：選擇C18反相色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；檢測波長：282nm；流速：0.8mL/min；洗脫時(shí)間：約40min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。

1.6 方法學(xué)考察

丹酚酸B對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相儀，記錄色譜圖。由保留時(shí)間確定各物質(zhì)相應(yīng)的色譜峰，確定參照峰。

精密量取1、2、4、6、8、10mL混合對照品溶液分別置于10mL量瓶中，加70%甲醇至刻度稀釋搖勻，在波長：282nm；流速：0.8mL/min；洗脫時(shí)間：約40min；柱溫：室溫條件下分別進(jìn)樣10μL，分別記錄色譜圖、峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察結(jié)果

取丹酚酸B對照品溶液10μL，注入高效液相儀，記錄色譜圖，結(jié)果如圖1、2所示。從圖中可以看出丹酚酸B對照品色譜峰的保留時(shí)間tR約為36min，可以確定峰3-為丹酚酸B。另兩峰為已知成分為丹參素鈉、原兒茶醛。

圖1 丹酚酸B對照品HPLC色譜圖 圖2 丹參注射液HPLC色譜圖

2.2 線性關(guān)系

將稀釋后的對照品取10μL進(jìn)樣，以峰面積為橫坐標(biāo)，對照品溶液的量(μg)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求回歸方程，丹酚酸B在0.0986～0.9860mg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。結(jié)果見表1、圖3。

表1 丹酚酸B線性關(guān)系考察數(shù)據(jù)表

圖3 丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

按已確定的色譜條件，測定峰面積，采用外標(biāo)法求出丹酚酸B的含量，并計(jì)算回收率，所測得的回收率為均在95%～105%之內(nèi)，符合方法學(xué)考察要求。見表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定丹參注射液中丹酚酸B水溶性成分含量, 使丹參類注射液的質(zhì)量控制指標(biāo)成分評價(jià)指標(biāo)體系具有科學(xué)意義。

由于溫度和pH對丹參注射液中水溶性有效成分丹酚酸B的回收率影響比較大，而現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)制備工藝中沒有明確規(guī)定在水沉醇沉?xí)r的溫度，因此在開展實(shí)驗(yàn)前要對丹參注射液進(jìn)行必要的優(yōu)化。丹參注射液生產(chǎn)廠家眾多，市面上生產(chǎn)丹參注射的廠家眾多，有香丹注射液、丹紅注射(滴注)液、丹參多酚酸鹽、注射用丹參(凍干)等多種品種。不同廠家的丹參注射液由于生產(chǎn)工藝有所不同，還有使用的原料也不盡相同，導(dǎo)致其質(zhì)量可能存在較大差異。因此必須嚴(yán)格控制丹參的原藥材來源的單一性，最終才能保證產(chǎn)品的療效和質(zhì)量的可靠、均一性。丹參水溶性成分主要是酚酸類化合物[8], 與丹參藥材相比，丹參注射液的化學(xué)成分研究比較薄弱，廠家評測丹參注射液時(shí)僅僅評測丹參素和原兒茶醛來評估注射液的效果是不科學(xué)的，難以保證其臨床使用的安全性和有效性，制約了其長期的健康發(fā)展。針對目前這一的狀況，可采用高效液相色譜法方法對丹參制劑中的系列化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步的測定，重點(diǎn)對其酚酸類活性如丹酚酸B，進(jìn)行定量的研究，對藥品質(zhì)量工藝控制，保障病人用藥安全都具有深遠(yuǎn)的意義。

表2 丹酚酸B回收率測定結(jié)果

[1]王之羽, 王友群, 李明. 302例丹參注射液臨床不良反應(yīng)分析[J]. 中國藥房, 2010, 21(32):3035～3036.

[2] 曹媛, 曹婉雯, 陳淵成,等.丹參水溶性成分抗心肌缺血的作用機(jī)制[J].藥學(xué)進(jìn)展, 2010,34(6):248～250.

[3] 王元文,張翔,蔡建國,等.超臨界流體洗脫樹脂上的丹參酚酸研究[A].上海：上?；瘜W(xué)化工學(xué)術(shù)學(xué)會，2005.

[4] 杜冠華, 張均田. 丹參現(xiàn)代研究概況與進(jìn)展(續(xù)一)[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2004, 23(6):355～360.

[5] 吳杲, 何招兵, 吳漢斌, 等. 丹參酮的藥理作用研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2005, 14(10):1382～1385.

[6] 周立運(yùn), 朱曉新. 丹參及其化學(xué)成分藥代動(dòng)力學(xué)研究的進(jìn)展[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2005, 6(2):23～25.

[7] Tan M K, Zhang J T. Salvianolic acid B inhibits fibril formation and neurotoxicity of amyloid betaprotein invitro[J]. Acta Pharmacol Sin, 2001,22(4):380～384.

[8] 孟銳, 任曉宇, 藍(lán)培元. 中藥注射劑入選國家基本藥物目錄存在問題的分析——以丹參注射液為例[J]. 中國藥房,2010,21(28):2606～2608.

2017-04-28

許曉君(1965-)，女，主管護(hù)師，主要從事臨床護(hù)理工作，409720909@qq.com。

R285.5；R927.2

A

1673-1409(2017)24-0004-03

[編輯] 一凡