高良姜不同提取物降尿酸及對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究

薛雪梅，徐鑫，尹超，胡雋 王倫，鄒榮，許漢林

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

[引著格式]薛雪梅，徐鑫，尹超，等. 高良姜不同提取物降尿酸及對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版), 2017,14(24):1～3,22.

高良姜不同提取物降尿酸及對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究

薛雪梅，徐鑫，尹超，胡雋 王倫，鄒榮，許漢林

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

目的：探討高良姜不同提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠的影響。方法：分別以高良姜不同提取物(3.12g/kg)、別嘌醇(40mg/kg)、苯溴馬隆(20mg/kg)給小鼠灌胃，1次/d，連續(xù)8d，在最后一次給藥后分別采用腹腔注射氧嗪酸鉀(模型A)和次黃嘌呤(模型B)的方法建立兩種小鼠急性高尿酸血癥模型，檢測(cè)小鼠血清尿酸(UA)、肝臟黃嘌呤氧化酶活性(XOD)。結(jié)果：高良姜水提物、醇提物及揮發(fā)油(3.12g/kg)均能顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平和XOD活性(P<0.05)，且高良姜揮發(fā)油(3.12g/kg)對(duì)尿酸排泄的促進(jìn)作用最為明顯(P<0.01)，高良姜55%醇提組(3.12 g/kg)對(duì)尿酸生成的抑制作用最為明顯。結(jié)論：高良姜水提物、醇提物及揮發(fā)油(3.12g/kg)均可通過促進(jìn)尿酸排泄和抑制尿酸生成來達(dá)到減少尿酸的作用。

高良姜；高尿酸血癥；尿酸；黃嘌呤氧化酶

高尿酸血癥是由于嘌呤代謝紊亂和尿酸排泄障礙而引起的一種代謝性疾病，尿酸生成過多和排泄減少均可促進(jìn)尿酸升高而導(dǎo)致高尿酸血癥[1,2]。高良姜為姜科植物高良姜的干燥根莖，主要含黃酮類、揮發(fā)油和二芳基庚烷類化合物。有報(bào)道顯示，高良姜還有顯著的黃嘌呤氧化酶(XOD)抑制劑的作用，而XOD是催化人體嘌呤類物質(zhì)代謝成尿酸的關(guān)鍵酶，抑制其活性可以降低體內(nèi)尿酸濃度，治療高尿酸血癥[3,4]。筆者首次分別采用氧嗪酸鉀和次黃嘌呤建立了兩種小鼠急性高尿酸血癥模型，對(duì)高良姜不同提取物進(jìn)行了降尿酸和抗XOD的藥效研究，以期探討高良姜降尿酸作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1)儀器 BP121S電子分析天平(萬分之一，德國Sartorius公司)，BIO-RAD xMark酶標(biāo)儀(美國伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司)，1580R型高速離心機(jī)(基因有限公司)，手提式高速分散器(寧波新芝制造廠)，超純水器(四川優(yōu)普超純科技有限公司)

2)試藥 高良姜(安徽省亳州永剛飲片廠有限公司，批號(hào)170228)，尿酸檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20170526)，黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20170513)，別嘌醇片(世貿(mào)天階制藥(江蘇)有限責(zé)任公司，批號(hào)：201610212)，苯溴馬隆片(德國赫曼大藥廠，批號(hào)：1608091)，氧嗪酸鉀(SIGMA-ALDRICH公司生產(chǎn)，批號(hào)：STBF6610V)，次黃嘌呤(SIGMA-ALDRICH公司生產(chǎn)，批號(hào)：SLBH5921V)，水為雙蒸水。

3)動(dòng)物 KM小鼠150只，雄性，體重20～23g，由湖北省疾病控制中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)許可證號(hào)：SYXK(鄂)2012-0068。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品溶液制備

1.2.1 高良姜不同提取物制備

1)高良姜水提物 取高良姜50g加500mL水加熱回流提取2次，每次2h,過濾，合并兩次濾液，旋蒸濃縮成稠膏，60℃減壓干燥，研成細(xì)粉。

2)高良姜55%醇提物、高良姜75%醇提物、高良姜95%醇提物 取3份高良姜各50g分別用55%乙醇、75%乙醇、95%乙醇各500mL加熱回流提取，方法同1)。

3)高良姜揮發(fā)油 取高良姜500g用5000mL水提取6h,得到揮發(fā)油。

1.2.2 受試藥的配制

取高良姜水提物、55%醇提物、75%醇提物、95%醇提物、高良姜揮發(fā)油，加水均配制為濃度0.312g/mL。

1.2.3 陽性藥溶液配制

精密稱取適量已研成粉末狀的別嘌醇和苯溴馬隆，分別加雙蒸水配制成混懸液。

1.3 給藥及檢測(cè)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)A(氧嗪酸鉀致小鼠高尿酸血癥)

將小鼠80只隨機(jī)分成8組，每組10只，即空白對(duì)照組(實(shí)驗(yàn)A和B共用同一空白對(duì)照組)、模型A組、高良姜水提物組、高良姜55%醇提物組、高良姜75%醇提物組、高良姜95%醇提物組、高良姜揮發(fā)油組、苯溴馬隆對(duì)照組。其中，高良姜各提取物組給藥劑量均為3.12g/kg，苯溴馬隆組灌胃濃度為20mg/kg,空白對(duì)照組和模型A組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。連續(xù)給藥8d，1次/d，最后一次給藥后1h，給正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，其余各組腹腔注射500mg/kg氧嗪酸鉀，造模后1h摘眼球取血，解剖小鼠，取肝臟組織。待血液靜置2h后，將其離心(3000r/min,10min)。取血清，按試劑盒所示測(cè)定尿酸含量。取適量剪碎后的肝臟組織,移入離心管內(nèi),加入9倍質(zhì)量分?jǐn)?shù)的冷生理鹽水,在冰浴中以勻漿機(jī)攪拌3～5 min直至離心管內(nèi)變成混懸液而無可見肝臟組織碎片,最后于離心機(jī)上,以3500r/min、20 ℃離心15 min, 取上清液。根據(jù)試劑盒說明書檢測(cè)組織勻漿的吸光度值，求出肝組織勻漿蛋白的含量。再根據(jù)黃嘌呤氧化酶(XOD)試劑盒說明書測(cè)定XOD活性。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)B(次黃嘌呤致小鼠高尿酸血癥)

將小鼠70只隨機(jī)分成7組，每組10只，即模型B組、高良姜水提物組、高良姜55%醇提物組、高良姜75%醇提物組、高良姜95%醇提物組、高良姜揮發(fā)油組、別嘌醇對(duì)照組。除了別嘌醇組灌胃濃度為40mg/kg,其余給藥方法同模型A. 最后一次給藥后1h,給正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，其余各組腹腔注射次黃嘌呤1000mg/kg，造模后30min摘眼球取血，解剖小鼠，取肝臟組織，其余取材及檢測(cè)指標(biāo)方法同模型A。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 高良姜不同提取物對(duì)氧嗪酸鉀所誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥的影響

結(jié)果如表1所示，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清尿酸水平和XOD活性顯著升高(P<0.01)，表明造模成功。與模型組相比較，高良姜水提物組、55%醇提物組、75%醇提物組、95%醇提物組、揮發(fā)油組和苯溴馬隆組血清尿酸水平和XOD活性均顯著降低(P<0.05或P<0.01)，表明苯溴馬隆和高良姜不同提取物均能在一定程度抑制肝臟XOD活性而降低血清尿酸水平。

2.2 高良姜不同提取物對(duì)次黃嘌呤所誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥的影響

結(jié)果如表2所示，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清尿酸水平和XOD活性顯著升高(P<0.01)，表明造模成功。與模型組相比較，高良姜水提物組、55%醇提物組、75%醇提物組、95%醇提物組、揮發(fā)油組和別嘌呤組血清尿酸水平和XOD活性均顯著降低(P<0.05或P<0.01)，表明別嘌呤和高良姜不同提取物均可通過抑制肝臟XOD活性而降低血清尿酸水平。

表1 高良姜不同提取物對(duì)氧嗪酸鉀所誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥的影響

注：與空白對(duì)照組比較：**P<0.01；與模型組比較：*P<0.05，**P<0.01。

表2 高良姜不同提取物對(duì)次黃嘌呤所誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥的影響

注：與空白對(duì)照組比較：**P<0.01；與模型組比較：**P<0.01。

3 討論

近年來研究顯示，高血壓、高脂血癥、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化、代謝綜合征等疾病的發(fā)生和人體尿酸過高有著密切的關(guān)系[5]。可以說，高尿酸血癥已成為威脅人類健康的主要代謝性疾病之一，已引起醫(yī)藥研究人員的極大關(guān)注[6]。

本研究中氧嗪酸鉀是一種尿酸酶抑制劑，通過抑制尿酸分解，促進(jìn)體內(nèi)血清尿酸水平升高，造成高尿酸血癥[7]。苯溴馬隆是近曲小管強(qiáng)效而可逆性的血尿酸-陰離子交換劑，可阻斷腎小管對(duì)血尿酸的重吸收，從而促進(jìn)尿酸排泄，使治療后的血尿酸保持正常[8]。次黃嘌呤是生成尿酸的前體物質(zhì)，可促進(jìn)體內(nèi)尿酸生成，進(jìn)而引起體內(nèi)血清尿酸水平升高，造成高尿酸血癥[9]。別嘌醇可抑制黃嘌呤氧化酶和黃嘌呤脫氫酶來減少尿酸的生成[10]。本研究首次通過利用氧嗪酸鉀可促進(jìn)尿酸生成和次黃嘌呤抑制尿酸排泄減少的作用來制備與臨床發(fā)病機(jī)制相似的小鼠高尿酸血癥模型，通過前期研究基礎(chǔ)確定了合適的造模給藥途徑和劑量，并根據(jù)苯溴馬隆與別嘌醇降尿酸的不同機(jī)理，分別選擇其作為適用于各相應(yīng)模型的陽性藥。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型中肝臟的XOD活性升高，而高良姜各提取物組均表現(xiàn)出XOD活性被抑制，因此可推測(cè)，小鼠體內(nèi)尿酸的減少均是XOD被抑制的結(jié)果。與利尿藥苯溴馬隆相比，高良姜揮發(fā)油的降尿酸效果更佳，而與別嘌醇相比，高良姜各部位降尿酸作用均弱，這表明高良姜在促進(jìn)尿酸排泄方面具有一定的優(yōu)勢(shì)，但對(duì)于尿酸生成方面，其抑制作用稍弱。

綜上所述，高良姜不同提取物可通過抑制尿酸生成、促進(jìn)尿酸排泄這兩條途徑對(duì)高尿酸血癥小鼠發(fā)揮降尿酸作用，且相較于利尿劑苯溴馬隆，高良姜揮發(fā)油在促進(jìn)尿酸排泄方面彰顯出了極大的優(yōu)勢(shì)。后續(xù)可圍繞其降尿酸作用，對(duì)高良姜不同提取物的有效劑量及作用機(jī)制進(jìn)行深入探討，有望開發(fā)可預(yù)防高尿酸血癥的新型保健品。

[1]谷雨明,徐云生.高尿酸血癥的中醫(yī)藥研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2016,122(4):124～125.

[2]苗志敏,趙世華,王顏剛.山東沿海居民高尿酸血癥及痛風(fēng)的流行病學(xué)調(diào)查[J].中華分泌代謝雜志,2006,22(5):421.

[3]戴立珍.中草藥中黃嘌呤氧化酶抑制劑的篩選及制劑研究[D].武漢：武漢工程大學(xué),2010.

[4] Quan H, Ka Q, Feng Z. Hyperuricemia induces endothelial dysfunc～tion via mitochondrialNa+/Ca2+exchanger-mediated mitochondrial calcium overload[J].Cell Calcium,2012,51(50):402～410.

[5]Baker J F ,Krishnan E, Chen L,et al.Serum uric acid and cardiovas～cular desease:recent developments,and where do they leave us[J].Am J Med,2005,118(8):816～826.

[6]Feig D L, Kang D H, Johnson R J.Uric Acid and Cardiovascular Risk[J].N Engl J Med,2008,359(17):1811～1821.

[7]牛艷芬,高麗輝,劉旭,等.芒果苷對(duì)氧嗪酸鉀所致慢性高尿酸血癥大鼠尿酸及肝腎功能的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào), 2012, 28(11):1578～1581.

[8] 宋艷玲.苯溴馬隆治療高尿酸血癥和痛風(fēng)的療效觀察[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊,2014(5):858～859.

[9]單海麗,單瑞平,傅旭春.穿山龍醇提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠的治療作用[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2015,38(1):49～53.

[10]鄭志萍,黃幼霞.小鼠高尿酸血癥模型的建立[J].海峽藥學(xué),2011,23(9):28～29.

2017-09-27

科技部科技基礎(chǔ)專項(xiàng)(2014FY111100-2)；湖北省老年病中藥新產(chǎn)品協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目。

薛雪梅(1992-)，女，碩士生，主要從事中藥新制劑、新劑型的研究工作；通信作者：許漢林，xhl4201@sina.com。

R285.5

A

1673-1409(2017)24-0001-03

[編輯] 一凡