鉤菊膠囊質量標準研究

朱和平　韓曉珂　王權

[摘要] 目的 建立鉤菊膠囊的質量標準。 方法 薄層色譜法對鉤藤、淫羊藿進行定性鑒別；UV-HPLC對淫羊藿苷進行含量測定。采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（25∶75）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長為270 nm。 結果 薄層色譜中斑點清晰，陰性均無干擾；淫羊藿苷在15～150 μg/mL范圍內線性關系良好（r=0.9996），平均回收率為100.9%（RSD=2.77%）。 結論 本試驗結果準確、簡便，易控，可作為鉤菊膠囊的質量標準。

[關鍵詞] 鉤菊膠囊；薄層鑒別；淫羊藿苷；含量測定

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）10（a）-0031-04

[Abstract] Objective To establish the quality standard of Gouju Capsules. Methods The main ingredients of Ramudus Uncaria Cum Uncis， Epimedium were identified by TLC. Content of icariin was determined by UV-HPLC. The content of the berberine was determined by HPLC； the column of Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm， 5 μm） was used. The mobile phase was ocetonitrile-water （25∶75）， the column temperature of 30℃， at the flow of 1.0 mL/min and detection wavelength was 270 nm. Results The spots on TLC plates were distinct， without interference. A good linearity of icariin was in the ranges of 15-150 μg/mL （r=0.9996）. The average recovery was 100.9% （RSD =2.77%）. Conclusion The results of this experiment are accurate， simple and easy to control. It can be used as a quality standard for Gouju Capsules.

[Key words] Gouju Capsules； TLC； Icariin； Content determination

近年來，隨著人們物質生活水平的不斷提高，高血壓的患病率也逐年升高，因此，開發(fā)有效治療高血壓的藥物具有重要意義，臨床常用的各類西藥降壓藥需終生服藥，且存在血壓易反彈、波動，毒副作用大等缺點，不利于高血壓患者的康復，對人體具有極大的危害性，而中藥作為民族的瑰寶，在治療高血壓方面有其優(yōu)越性。

鉤菊膠囊（原名：山菊穩(wěn)壓膠囊）是根據蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院名老中醫(yī)鄭梅生主任的臨床經驗總結的降壓穩(wěn)壓方，在臨床運用多年，療效顯著，毒副作用小，降壓平穩(wěn)和緩，得到廣大患者的一致好評；擬將本方研發(fā)注冊成為醫(yī)療機構制劑，更好地應用于臨床，方便患者使用，本文的質量標準研究作為該制劑研究的一部分，為該藥品的質量提供保證。本方由野菊花、鉤藤、羅布麻葉、淫羊藿藥味組成，具有平肝熄風、清熱降火的作用，癥見頭脹頭痛、面赤、眩暈、煩躁失眠等。作者對本方中鉤藤、淫羊藿進行了薄層鑒別，以淫羊藿苷為指標性成分對制劑進行了含量測定。

1 儀器與試藥

安捷倫1200高效液相色譜儀（Agilent Technologies）；KQ-500DB超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；XP-205電子天平（Metiler Toledo）；淫羊藿苷（中國藥品生物制品檢定研究院，110737-201516）；鉤藤對照藥材（中國藥品生物制品檢定研究院，批號121190-201204）；淫羊藿對照藥材（中國藥品生物制品檢定研究院，批號121632-201502）；硅膠G薄層板（由青島海洋化工廠提供），乙腈（HPLC/Spectro，Tedia公司）；水為超純水；其他試劑均為分析純[1]。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 鉤藤鑒別 本品20粒，取內容物約3 g，加70%乙醇超聲，1 h后，濾過，蒸干濾液，殘渣加乙醇2 mL，溶解，得到供試品溶液。另取鉤藤對照藥材1 g，同上法得到對照藥材溶液[2-5]。取除鉤藤外的其他味藥材飲片，按鉤菊膠囊的處方工藝制成陰性樣品，以與制備供試品溶液相同的方法制得陰性對照品液。按照《中國藥典》2015年版薄層色譜法，吸取上述三種溶液各10 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（19∶1）作為展開劑展開，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加熱至斑點清晰。供試品色譜與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色斑點，陰性色譜相應位置上無此斑點。見圖1。

2.1.2 淫羊藿鑒別 取本品內容物5 g，加入50 mL乙醇，超聲30 min，濾過，將濾液蒸干，所得的殘渣加水60 mL，振搖使其溶解，然后用水飽和的正丁醇萃取4次，每次均為40 mL，合并正丁醇萃取液，用5%氫氧化鈉溶液洗滌2次，每次均為50 mL，再用水洗滌2次，每次均為30 mL，洗滌后的正丁醇萃取液水浴下蒸干，剩下的殘渣加入2 mL甲醇，使其溶解，即為供試品溶液。稱取淫羊藿苷對照品適量，加入一定量的甲醇，制成淫羊藿苷濃度為1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液[6-12]。取除淫羊藿外的其他味藥材飲片，按照鉤菊膠囊的處方工藝制成陰性樣品，用與制備供試品溶液相同的方法，制得陰性對照液。按照《中國藥典》2015年版薄層色譜法，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，將三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）混合，振搖，放于10℃下靜置，以該靜置液的下層溶液作為展開劑，展開，噴以10%硫酸乙醇液，在105℃下加熱至斑點清晰。供試品色譜與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色斑點，陰性色譜相應位置上無此斑點。見圖2。endprint

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（25∶75）為流動相；檢測波長為270 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min，理論塔板數按淫羊藿苷峰計算應不低于2000[13-19]。

2.2.2 對照品溶液 取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加入甲醇制成淫羊藿苷濃度為30 μg/mL的溶液。

2.2.3 供試品溶液 精密稱定1 g本品內容物，置錐形瓶中，加入25 mL的50%乙醇溶液，密塞，稱定重量，超聲30 min后，冷卻，再稱定重量，用50%乙醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 陰性對照溶液 按本品制法，除處方中淫羊藿，制成陰性樣品，然后按照“2.2.3”項下相同的方法制成陰性對照溶液。

2.2.5 專屬性試驗 吸取供試品溶液，淫羊藿苷對照品溶液和陰性對照溶液各適量，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖3，結果顯示，淫羊藿苷的峰與其他組分峰的分離度>1.5。圖譜顯示，陰性對照溶液在相應位置未出現色譜峰，證明該方法專屬性較好，測定無干擾。

2.2.6 線性關系考察 取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，15.00 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，搖勻，即得150 μg/mL的對照品溶液。從對照儲備液（150 μg/mL）中分別精密移取對照品各0.5、1、2、3、4 mL置5 mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，搖勻，配成6種濃度的對照品溶液，分別為15、30、60、90、120、150 μg/mL，取適量，用0.45 μm微孔濾膜濾過，進樣量10 μL。以進樣溶液的濃度為橫坐標（X），液相所得的峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線?；貧w方程為Y=34.716X-52.024，r2=0.9991，結果表明淫羊藿苷在15～150 μg/ml范圍內呈現良好的線性關系。

2.2.7 日內精密度試驗 精密吸取供試品溶液10 μL，于1 d內連續(xù)進樣6次，測定色譜峰峰面積。結果色譜峰峰面積的RSD值為0.6%。試驗證明日內精密度良好。

2.2.8 日間精密度試驗 精密吸取供試品溶液10 μL，連續(xù)進樣3 d，每天進樣3次，測定色譜峰峰面積。結果色譜峰峰面積的RSD值為0.8%。試驗結果證明該方法的日間精密度良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣，測定色譜峰峰面積。結果色譜峰峰面積的RSD值為0.6%。試驗結果表明該供試品溶液在10 h內穩(wěn)定。

2.2.10 重復性試驗 取同一批次的鉤菊膠囊，按樣品測定下的方法測定樣品中淫羊藿苷的含量。結果淫羊藿苷含量的平均值（n=6）為1067.1 μg/g，RSD值為0.68%。試驗證明重復性良好。

2.2.11 加樣回收試驗 取裝量差異項下的本品內容物，6份，各約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入150 μg/mL的淫羊藿苷對照品溶液3.5 mL，按“2.2.3”項下方法制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，分別進樣，測定淫羊藿苷的含量，計算淫羊藿苷的加樣回收率，試驗結果見表1。結果表明，用本法測定樣品中淫羊藿苷的含量回收率良好。

2.2.12 鉤菊膠囊樣品的含量測定 取三個不同批次的鉤菊膠囊樣品各適量，按“2.2.3”項下的方法，制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，分別進樣，計算含量，結果見表2。

3 討論

在試驗過程中，選用了Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）和Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）兩種不同色譜柱進行液相測定，結果均有較好的分離度，且峰形較好，表明該方法的耐用性良好；在色譜條件的研究摸索過程中，曾考察以乙腈-水（27∶73）為流動相，結果淫羊藿苷分離度達不到要求；考察以乙腈-水（27∶73）為流動相，分離度達到要求，但是保留時間較短，考慮到前面雜質峰在檢測過程中可能對基線造成影響，故又選擇考察以乙腈-水（25∶75）為流動相，結果分離度及基線均符合要求；對照品打開后，放置時間較長，有輕微的吸濕，造成加樣回收率的測定結果稍微偏高。

鉤菊膠囊為治療陰虛陽亢型高血壓病的有效方劑，朱琳等[20]曾指導研究本制劑對自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用，結果本制劑有平穩(wěn)降壓、降低血壓黏度、改善心肌肥厚等作用，且對肝腎功能無明顯毒副作用。

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（收稿日期：2017-06-07 本文編輯：李亞聰）endprint