桃核承氣湯預(yù)防動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴(kuò)張術(shù)后再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究

于文慧，徐恒，張百亮，趙鋼*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

桃核承氣湯預(yù)防動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴(kuò)張術(shù)后再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究

于文慧1，徐恒2，張百亮1，趙鋼1*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

目的：觀察桃核承氣湯對動脈硬化閉塞癥家兔模擬球囊擴(kuò)張術(shù)后再狹窄的預(yù)防作用。方法：24只家兔造模成功后，全部進(jìn)行球囊擴(kuò)張術(shù)手術(shù)治療，隨機(jī)分為中藥組和對照組，中藥組采用桃核承氣湯治療；對照組采用同劑量的生理鹽水，治療4周后采集血樣檢測AT-Ⅱ、ET-1、TXB2、NO、6-K-PGF1α、CGRP水平，與造模成功后的血液樣本比較。結(jié)果: 桃核承氣湯能有效提高CGRP、NO、PGF1α水平(P<0.01)，降低ET-1、AT-II、TXB2水平(P<0.01),治療效果優(yōu)于空白對照組(P<0.01)。結(jié)論：桃核承氣湯對動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴(kuò)張術(shù)后再狹窄有顯著預(yù)防作用。

桃核承氣湯；動脈硬化閉塞癥；球囊擴(kuò)張；再狹窄

動脈硬化閉塞癥(ASO)是發(fā)生在動脈系統(tǒng)的常見疾病，發(fā)病率逐年上升，死亡率、截肢率居高不下，引發(fā)眾多臨床醫(yī)生關(guān)注。治療動脈硬化閉塞癥的有效方法首推球囊擴(kuò)張術(shù)，但球擴(kuò)后出現(xiàn)動脈再狹窄，一直是困擾臨床的難題，嚴(yán)重制約了這一技術(shù)的發(fā)展。再狹窄的形成是機(jī)體出現(xiàn)血管損傷后出現(xiàn)應(yīng)對反應(yīng)的病理生理復(fù)雜的過程，牽涉到多個(gè)因素與眾多過程[1]。面對球囊擴(kuò)張術(shù)后出現(xiàn)動脈再狹窄這一前所未有的病理過程，中醫(yī)理論面臨著全新的機(jī)遇與挑戰(zhàn)。中醫(yī)學(xué)理論體系如何解釋？如何利用中醫(yī)藥干預(yù)?切入點(diǎn)在哪里? 能取得怎樣的效果？目前仍然是一片空白。本課題在建立家兔股動脈閉塞癥模型的基礎(chǔ)上，進(jìn)行球囊擴(kuò)張，并應(yīng)用桃核承氣湯進(jìn)行預(yù)防性治療，應(yīng)用中醫(yī)藥理論指導(dǎo)臨床實(shí)踐，對這一全新的領(lǐng)域進(jìn)行初探。

桃核承氣湯載于《傷寒論》，主治下焦蓄血證，為活血化瘀代表方劑。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)曾對這一方劑重新解讀，認(rèn)為古方所載蓄血證與目前臨床的微循環(huán)不暢有關(guān),常在血流動力學(xué)、流變學(xué)方面發(fā)生變化從而出現(xiàn)問題。而桃核承氣湯具有活血化瘀作用，可以通暢血流，消除瘀滯，改善血液流變學(xué)和血流動力學(xué)的異常指標(biāo)，促進(jìn)血黏度及血液成分動態(tài)平衡。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用桃核承氣湯預(yù)防動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴(kuò)張術(shù)后再狹窄，探討中藥防治再狹窄的思路。

1 材料、試劑與藥物

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

家兔(新西蘭兔)，質(zhì)量(2.0±0.5)kg，雄性，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物許可證號：SYXK(黑)2016004。

1.2 試劑

6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2試劑盒(弘博生物科技公司)；血漿血管緊張素Ⅱ試劑盒(北京福瑞生物工程公司)；降鈣素基因相關(guān)肽試劑盒(弘博生物科技公司)；血漿血內(nèi)皮素、一氧化氮試劑盒(弘博生物科技公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

膽固醇(北京化學(xué)試劑公司)；牛血清白蛋白(中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司)；桃核承氣湯(桃仁∶大黃∶桂枝∶甘草∶芒硝=2∶2∶1∶1∶1，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)制劑室制作)。

1.4 儀器設(shè)備

752C紫外可見分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)；Qwin550CW圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司)；球囊導(dǎo)管2.5 mm×40 mm、3.0 mm×40 mm、0.018 in×300 cm導(dǎo)絲和壓力泵等(美敦力公司)。

2 方法

2.1 高脂飼料

在基礎(chǔ)飼料中混入2%大豆油，同時(shí)加入膽固醇1 g/(d·只)。

2.2 動脈硬化閉塞癥家兔模型

根據(jù)李令根[2]文獻(xiàn)，采用高脂飼料喂養(yǎng)—股動脈環(huán)縮—免疫損傷方法制成“股動脈硬化閉塞癥家兔”改良模型。高脂飼料喂養(yǎng)新西蘭大白兔3 d，在10%烏拉坦麻醉下(5 mL/kg)，進(jìn)行股動脈環(huán)縮手術(shù)，于右側(cè)腹股溝股動脈搏動明顯處縱形切口，暴露股動脈，在無血管分支處，手術(shù)線環(huán)繞動脈將其口徑縮至約2/3(先將手術(shù)線繞動脈2周，標(biāo)記。將標(biāo)記的長度再環(huán)繞3周)，清洗、縫合切口。第7 d靜脈注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)制作免疫損傷動脈內(nèi)膜。繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，共8周，制成“家兔股動脈硬化閉塞癥”模型。

2.3 實(shí)驗(yàn)分組及處置方法

全部24只“家兔股動脈硬化閉塞癥”模型隨機(jī)分為2組，空白對照組，桃核承氣湯治療組，每組12只，全部進(jìn)行球囊擴(kuò)張治療。經(jīng)兔耳緣靜脈烏拉坦作全身麻醉，仰位固定在兔臺上，右腹股溝術(shù)區(qū)剪毛，形成約直徑5cm術(shù)區(qū)，術(shù)區(qū)常規(guī)消毒，鋪無菌孔巾。在無菌條件下，沿血管走形切開皮膚，分離皮下組織及肌肉顯露右股動脈。直視下股動脈逆行穿刺，成功后，置入穿刺針外鞘，借助外鞘置入0.018 in×300 cm導(dǎo)絲，交換外鞘，沿導(dǎo)絲插入2.5 mm×40 mm球囊，使球囊位于第一次手術(shù)結(jié)扎線下進(jìn)行球囊擴(kuò)張。維持壓力泵壓力6～8個(gè)大氣壓，并緩慢回拉球囊，有明顯阻力時(shí)表明球囊直徑與血管吻合，如阻力較小，則換用3.0 mm×40 mm的球囊，持續(xù)2 min，反復(fù)操作3次。退出球囊及導(dǎo)絲，縫合動脈，慶大霉素8萬單位沖洗縫合切口。術(shù)后3天各組兔肌注青霉素80萬U抗感染。

2.4 給藥方式

術(shù)后第2日開始給藥，空白對照組給予生理鹽水2 ml/kg灌胃,桃核承氣湯組給予2 ml/kg灌胃(含生藥0.8 g)，連續(xù)治療4周。

2.5 指標(biāo)檢測及取血方法

造模成功后及分組治療4周后，各組禁食12 h，空腹采血，檢測AT- Ⅱ、ET-1、TXB2、NO、6-K-PGF1α、CGRP水平。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

造模成功后，動脈硬化閉塞癥家兔ET-1、AT-II、TXB2水平顯著提高，CGRP、NO、PGF1α水平明顯降低，通過球囊擴(kuò)張治療后，空白對照組各個(gè)細(xì)胞因子變化不明顯，與模型組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。通過桃核承氣湯治療后，可提高CGRP、NO、6-k-PGF1α，降低ET-1、AT-II、TXB2水平， 與模型組比較，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。桃核承氣湯治療組與空白組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療效果優(yōu)于空白對照組 (P<0.01)。結(jié)果見表1、表2。

表1 各組治療后CGRP、ET-1、NO水平的變化情況比較

注：與模型組比較，*P<0.01;與空白對照組比較，△P<0.01。

表2 各組治療后AT-Ⅱ、TXB2、PGF1α水平的變化情況比較

注：與模型組比較，*P<0.01;與空白對照組比較，△P<0.01。

4 討論

球囊擴(kuò)張后再狹窄是一個(gè)復(fù)雜的病理過程， 啟動因素是內(nèi)膜損傷，關(guān)鍵因素是平滑肌細(xì)胞增殖， 重要環(huán)節(jié)是細(xì)胞生長因子分泌異常，整個(gè)過程復(fù)雜曲折，涉及到多個(gè)病理環(huán)節(jié)。因此，只有選擇具有多方面綜合性調(diào)節(jié)作用的藥物，才可能針對各個(gè)環(huán)節(jié)過程作出調(diào)節(jié)，取得防治再狹窄形成的效果[3]。中醫(yī)學(xué)具有獨(dú)特的辨證論治理論體系，中藥制劑具有特殊的復(fù)方制劑系統(tǒng)，可集抑制平滑肌細(xì)胞增殖、防止細(xì)胞外基質(zhì)堆積、抑制血小板聚集、防止血栓形成、降脂、降糖、抗過氧化損傷、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長因子分泌作用于一體，實(shí)現(xiàn)綜合性調(diào)治,其優(yōu)勢是某種單一西藥或單味中藥無法比擬的[4]。

動脈硬化的過程實(shí)際是動脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血管活性因子分泌失調(diào)，導(dǎo)致動脈管徑持續(xù)痙攣、平滑肌細(xì)胞增生及單核細(xì)胞內(nèi)皮浸潤，吞噬脂質(zhì)，形成泡沫細(xì)胞，并與平滑肌細(xì)胞組成粥樣斑塊，出現(xiàn)缺血性情況。一氧化氮(NO)已經(jīng)被證實(shí)具有抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖，使血管舒張，阻止血管重構(gòu)等作用。ET具有很強(qiáng)的收縮血管作用，ET1主要在血管內(nèi)皮表達(dá)，ET1升高，損傷動脈內(nèi)皮細(xì)胞功能，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖，導(dǎo)致動脈硬化形成。降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)是一種神經(jīng)肽，由37個(gè)氨基酸殘基組成。主要在脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中合成，由感覺神經(jīng)末梢釋放，廣泛分布于體內(nèi)整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)。CGRP參與多項(xiàng)病理、生理的調(diào)控，通過與不同的受體結(jié)合，發(fā)揮作用。與受體-1的結(jié)合發(fā)揮強(qiáng)大的舒張血管作用，被稱為最強(qiáng)的血管舒張劑[5]。TXB2的升高與6-K-PGF1α的下降可導(dǎo)致自由基平衡失調(diào)，誘發(fā)中、小動脈動脈硬化，繼發(fā)血栓形成，引起微循環(huán)障礙。TXA2與PGI2能改善血小板功能，對血管提供保護(hù)的重要因子。動脈內(nèi)膜細(xì)胞損傷，合成PGI2減少，使TXA2/PGI2失調(diào)，激活血小板黏附性，增加釋放PDGF，刺激平滑肌及結(jié)締組織增生，血管壁增厚，導(dǎo)致微循環(huán)障礙，其穩(wěn)定代謝產(chǎn)物TXB2和6-K-PGF1α的檢測可以間接反應(yīng)此過程。本實(shí)驗(yàn)證實(shí),模型組ET-1、AT-II、TXB2顯著提高，CGRP、NO、PGF1α明顯降低，經(jīng)過桃核承氣湯治療后，能有效提高CGRP、NO、PGF1α水平，降低ET-1、AT-II、TXB2水平，促進(jìn)TXB2/6-K-PGF1α、ET-1/NO的平衡,治療效果優(yōu)于空白對照組。

再狹窄的中醫(yī)病機(jī)為氣陰兩虛、血瘀痰阻[6]，因此益氣養(yǎng)陰、活血祛瘀、化痰通脈為基本治則。桃核承氣湯組成中通經(jīng)散瘀藥有桂枝，瀉熱軟堅(jiān)祛瘀藥有大黃、芒硝，活血化瘀藥有桃仁，益氣藥有甘草[7]。方中大黃與芒硝相須配伍，瀉熱祛瘀；桃仁與桂枝相使配伍，破血通經(jīng)；桃仁與大黃、芒硝相使配伍，桃仁助大黃、芒硝軟堅(jiān)祛瘀，大黃、芒硝助桃仁破血化瘀；桃仁與甘草相反相使配伍，相反者，補(bǔ)瀉同用，桃仁破血，甘草益氣，相使者，益氣帥血行瘀。方藥相互為用，以奏瀉熱祛瘀，通經(jīng)益氣之效。

中醫(yī)藥在解決球囊擴(kuò)張術(shù)后再狹窄方面有良好的前景，但目前對復(fù)方的研究較少，相對滯后，今后應(yīng)采用整體造模，對中藥復(fù)方作用從細(xì)胞、分子、基因水平多方面，由淺入深，分層次，利用現(xiàn)代化的先進(jìn)方法深入研究，闡明球囊擴(kuò)張術(shù)后再狹窄發(fā)病機(jī)制的各個(gè)病理生理過程，可能會在這一研究領(lǐng)域取得重大進(jìn)展。

[1] Kanamasa K,Ogawa I,Hayashi T,et al.Prevention of coronary arterial renarrowing by continuous 3-day infusion of tissue plasminogen activator after successful PTCA:a randomized,double blind,placebo-controlled study[J].Angiology,2000,51(5):367-375.

[2] 李令根,徐恒,許宇飛,等.康脈注射液對股動脈硬化閉塞癥家兔血管內(nèi)皮細(xì)胞活性因子的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2003,8(9):263-264.

[3] 郭鈺琪,齊冬梅,郝鈺,等.三七皂苷R1調(diào)節(jié)炎性T細(xì)胞亞群保護(hù)血管內(nèi)皮的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2012,28(2):240-244.

[4] 劉桂林,竇迎春,喬云,等.三七總皂苷對動脈粥樣硬化血管內(nèi)皮的保護(hù)作用[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2013,11(9):1094-1096.

[5] 趙鋼,吳明遠(yuǎn),田旭升,等.蓬子菜沖劑對降鈣素基因相關(guān)肽和腎上腺髓質(zhì)素水平的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2007,13(2):66-68.

[6] 毛丹.益氣活血通絡(luò)法防治冠狀動脈支架術(shù)后再狹窄的臨床研究[J].中醫(yī)藥信息,2016,33(3):102-105.

[7] 王付.桃核承氣湯的理論探索與實(shí)踐[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,8(1):211-213.

PreventionofRestenosisbyTaoheChengqiDecoctioninArteriosclerosisObliteransRabbitsafterBalloonDilatation

YU Wen-Hui1, XU Heng2, ZHANG Bai-Liang1, ZHAO Gang1*

(1.TheFirstAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China; 2.HeilongjiangProvincialHospital,Harbin150001,China)

Objective: To observe the preventive effect of Taohe Chengqi decoction for restenosis in arteriosclerosis obliterans rabbits after balloon dilatation. Methods:24 model rabbits were randomly divided into the Chinese medicine group and the control group after being performed balloon dilatation. Chinese medicine group was treated with Taohe Chengqi decoction, whereas the control group was fed with normal saline. After 4 weeks, the levels of AT-II, ET-1, TXB2,NO, 6-K-PGF1α,and CGRP were tested and compared to those before treatment. Results: Taohe Chengqi decoction significantly reduced ET, TXB2and AT-Ⅱand increased NO, CGRP, 6-K-PGF1α(P<0.01), which were better than the control group(P<0.01). Conclusion: Taohe Chengqi decoction has a remarkable preventive effect for restenosis in arteriosclerosis obliterans rabbits after balloon dilatation.

Taohe Chengqi decoction; Atherosclerosis obliterans; Balloon dilatation; Resteonsis

R285.5

A

1002-2406(2017)06-0032-03

中華人民共和國教育部春暉計(jì)劃(No.Y-41)

于文慧(1976-)，女，副主任醫(yī)師，主要研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療周圍血管疾病。

趙鋼*(1958-)，男，教授，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療周圍血管疾病。

2016-09-01

修回日期：2016-10-10