• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法直接測(cè)定水中10種藻類毒素

    2017-11-06 03:04:41徐瀟穎朱炳祺梁晶晶陳萬(wàn)勤羅金文
    分析化學(xué) 2017年11期
    關(guān)鍵詞:藻類檢出限毒素

    徐瀟穎 劉 柱 朱炳祺 梁晶晶 陳萬(wàn)勤 羅金文

    (浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院, 杭州 310052)

    在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法直接測(cè)定水中10種藻類毒素

    徐瀟穎 劉 柱 朱炳祺 梁晶晶 陳萬(wàn)勤 羅金文*

    (浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院, 杭州 310052)

    建立了全自動(dòng)在線固相萃取-超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法直接測(cè)定水中10種藻類毒素的方法。利用程序?qū)崿F(xiàn)多次進(jìn)樣,通過(guò)在線固相萃取對(duì)藻類毒素進(jìn)行富集,然后切換六通閥,將富集的目標(biāo)物沖洗至分析柱進(jìn)行分離后,進(jìn)入線性離子阱質(zhì)譜檢測(cè)。10種藻類毒素在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,檢出限在0.0015~0.0050 μg/L之間,3個(gè)濃度水平(0.02、0.10和1.00 μg/L)的加標(biāo)回收率為83.7%~98.5%。結(jié)果表明,在線固相萃取極大簡(jiǎn)化了前處理過(guò)程,線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法提高了痕量藻類毒素測(cè)定的靈敏度,增強(qiáng)子離子掃描(EPI)譜庫(kù)的建立為藻類毒素的確證提供保障。本方法適用于水體中多種藻類毒素的快速確證和定量測(cè)定。

    藻類毒素; 在線固相萃取; 超高效液相色譜-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜; 水樣

    2017-05-27收稿; 2017-08-29接受

    本文系浙江省食品藥品監(jiān)管系統(tǒng)科技計(jì)劃項(xiàng)目(No. SP201704)資助

    * E-mail: luojw31@163.com

    1 引 言

    近年來(lái),水體富營(yíng)養(yǎng)化所導(dǎo)致的水華現(xiàn)象頻頻出現(xiàn)。水體出現(xiàn)富營(yíng)養(yǎng)化現(xiàn)象時(shí),藻類大量繁殖,同時(shí)代謝產(chǎn)生氰毒素類化合物,主要包括為肝毒素、神經(jīng)毒素和脂多糖內(nèi)毒素[1]。肝毒素包括微囊藻毒素(MCs)、節(jié)球藻毒素(NOD)和柱孢藻毒素(CYN)[2~4]。其中微囊藻毒素由一個(gè)環(huán)七肽和特殊的芳香族氨基酸側(cè)鏈-AD-DA構(gòu)成,由于環(huán)七肽中含有兩個(gè)可變氨基酸基團(tuán),導(dǎo)致其具有多種異構(gòu)體,迄今為止被報(bào)道的微囊藻毒素已達(dá)到100多種[5~7]。MC-LR作為一種最常見(jiàn)的微囊藻毒素,世界衛(wèi)生組織規(guī)定其在水中最高允許量為1 μg/L[8],我國(guó)制定的相關(guān)飲用水標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其的限量為1.0 μg/L[9]。

    藻類毒素在水體中極低的含量大大增加了分析難度。在常規(guī)的液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法中,需通過(guò)固相萃取(SPE)柱對(duì)大體積的樣品進(jìn)行富集后,才能達(dá)到HPLC分析的靈敏度,該方法前處理耗費(fèi)大量時(shí)間,難以實(shí)現(xiàn)大批量樣品的快速分析[10,11],且檢出限較高。為簡(jiǎn)化樣品前處理過(guò)程,馮桂學(xué)等[12]采用全自動(dòng)在線固相萃取(Online SPE),實(shí)現(xiàn)了樣品的自動(dòng)化在線處理和測(cè)定,節(jié)約時(shí)間的同時(shí)避免了大量有機(jī)試劑的接觸;而對(duì)于采用HPLC進(jìn)行測(cè)定時(shí)存在靈敏度低的問(wèn)題,研究者多選用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)代替HPLC[13,14], 如趙起越等[13]采用LC-MS/MS直接進(jìn)樣,對(duì)水中藻類毒素進(jìn)行測(cè)定,檢出限達(dá)到0.007~0.047 μg/L。

    本研究采用全自動(dòng)在線固相萃取-超高效液相色譜(Online SPE -UHPLC)系統(tǒng)結(jié)合線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(LIT-MS/MS)進(jìn)行樣品分析。 通過(guò)直接進(jìn)樣,在Online SPE-UHPLC系統(tǒng)中[15,16]分別實(shí)現(xiàn)連續(xù)的自動(dòng)化在線固相萃取和洗脫分離的過(guò)程。離子阱(Qtrap)功能是通過(guò)最后一級(jí)四極桿切換的切換,在保留傳統(tǒng)三重四極桿功能的同時(shí)對(duì)給定條件的目標(biāo)離子進(jìn)行阱集,提高靈敏度[17]。本方法較傳統(tǒng)方法極大簡(jiǎn)化了前處理操作,提高了檢測(cè)效率,并且降低了檢出限。此外,利用增強(qiáng)子離子掃描(EPI)建立的藻毒素二級(jí)譜庫(kù)可為痕量檢測(cè)提供判定依據(jù),為水體藻類毒素的監(jiān)管提供科學(xué)的依據(jù)。

    2 實(shí)驗(yàn)部分

    2.1儀器與試劑

    AB Qtrap5500質(zhì)譜儀(美國(guó)AB Sciex公司);Ultimate 3000雙三元超高效液相色譜(美國(guó)Thermo Fisher公司);Milli-Q超純水器(美國(guó)Millipore公司);XBridge C18Direct Connect HP 色譜柱(30 mm × 2.1 mm, 10 μm),Oasis HLB Direct Connect HP 色譜柱(30 mm × 2.1 mm, 20 μm);Waters Cortecs C18色譜柱(100 mm × 2.1 mm, 2.7 μm)。

    甲醇-乙腈(質(zhì)譜純,德國(guó)Merck公司);甲酸銨、 乙酸銨(分析純,國(guó)藥試劑公司);甲酸(質(zhì)譜純,美國(guó)Sigma Aldrich公司);微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)品MC-LY、MC-LW、MC-YR、MC-WR、MC-LA、MC-LF、MC-RR、MC-LR(濃度均為10 μg/mL,北京振翔公司);CYN、NOD(純度均≥95%,加拿大TRC公司)。

    2.2混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

    分別稱取適量CYN和NOD固體標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解,配制5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;分別準(zhǔn)確移取適量CYN、NOD標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和其它8種微囊藻毒素液體標(biāo)準(zhǔn)品,用20%(V/V)甲醇溶液稀釋配制為1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液,于18℃下保存。

    2.3在線固相萃取高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析條件

    在線固相萃取超高效液相色譜條件:在全自動(dòng)Online-SPE以及分析系統(tǒng)中均采用甲醇為流動(dòng)相A,5 mmol/L甲酸銨為流動(dòng)相B。進(jìn)樣量400 μL(采用變色龍軟件連續(xù)進(jìn)樣2次實(shí)現(xiàn),每次進(jìn)樣200 μL),上樣泵對(duì)應(yīng)在線富集過(guò)程流速為0.8 mL/min,分析泵對(duì)應(yīng)目標(biāo)物在分析柱上的洗脫分離過(guò)程流速為0.4 mL/min,柱溫35℃,通過(guò)六通閥切換來(lái)實(shí)現(xiàn)在線富集以及洗脫分離過(guò)程的連續(xù)進(jìn)行,梯度程序及閥切換時(shí)間表見(jiàn)表1。0~2 min,分析泵進(jìn)行分析柱平衡,上樣泵通過(guò)連續(xù)進(jìn)樣后完成富集過(guò)程,比例閥位置于1~2,如圖1; 2 min時(shí),六通閥切換至6~1,對(duì)富集柱進(jìn)行反相洗脫,6 min后六通閥切回初始位置,此過(guò)程中分析泵通過(guò)改變流動(dòng)相的比例,對(duì)進(jìn)入分析柱的目標(biāo)物進(jìn)行分離,最后流入檢測(cè)器。

    表1 在線固相萃取梯度洗脫程序及閥切換時(shí)間

    Table 1 Gradient elution program and valve-switching time of online solid phase extraction (SPE)

    上樣泵Loadingpump時(shí)間Time(min)流動(dòng)相BMobilephaseB(%)分析泵Analyticalpump時(shí)間Time(min)流動(dòng)相BMobilephaseB(%)閥切換Valveswitching時(shí)間Time(min)閥位置Valveposition0.01000.0800.01~22.01002.0802.06~13.1104.0556.01~26.0106.0556.11008.04520.010011.54512.02514.02516.08020.080

    圖1 全自動(dòng)在線固相萃取流路示意圖Fig.1 Flow schematic illustration of fully automated SPE

    質(zhì)譜分析條件:電噴霧正離子模式,噴霧電壓4.5 kV,霧化器壓力(GS1)40 psi,輔助器壓力(GS2)40 psi,離子溫度450℃,氣簾氣壓力(CUR)35 psi;優(yōu)化后各目標(biāo)物的母離子、子離子、碰撞能量和錐孔電壓的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表2。

    采用MRM-信息依賴性采集(IDA)-EPI模式檢測(cè),建立在線EPI譜庫(kù)定性分析,IDA參數(shù):?jiǎn)?dòng)EPI閾值為5000 CPS,采用動(dòng)態(tài)背景扣除模式;EPI參數(shù):掃描速度10000 Da/s,掃描范圍m/z100~1100,采用動(dòng)態(tài)填充阱集時(shí)間,且不大于1 ms,EPI碰撞能量:(35 ± 15)eV。

    表2 藻類毒素的質(zhì)譜分析條件

    Table 2 ESI-MS/MS parameters for algal toxins analysis

    化合物Compounds母離子Parention(m/z)定量子離子Quantitativeproduction(m/z)碰撞能Collisionenergy(eV)錐孔電壓Conevoltage(V)定性子離子Qualitativeproduction(m/z)碰撞能Collisionenergy(eV)錐孔電壓Conevoltage(V)MC?LR498.5135.11730482.34342MC?RR519.9135.13628103.24028MC?YR523.2135.11554213.03442MC?LW1025.5517.23511375.43511MC?LF986.5478.53412375.14730MC?LY1002.6494.33432375.14520MC?LA910.5375.14623776.43224MC?WR534.9135.01826103.15524CYN416.1194.34933176.14830NOD825.4227.26320135.26127MC?XZreferstodifferentkindsofmicrocystine.Here,MCreferstomicrocystine.AsforX,Lisleucine,Risarginine,Yistyrosine,Wistryp?tophan.AsforZ,Risarginine,Wistryptophan,Aisalanine.CYN,cylindrospermopsin.NOD,nodularin

    3 結(jié)果與討論

    3.1固相萃取色譜柱的選擇

    在線固相萃取過(guò)程中,富集柱的正確選擇至關(guān)重要。理想的富集柱需要在低有機(jī)相條件下實(shí)現(xiàn)基質(zhì)中目標(biāo)物的有效捕集,而在閥切換啟動(dòng)洗脫程序后,富集柱中的目標(biāo)物可以迅速被洗脫,并進(jìn)入分析柱,而不存在因難以洗脫而導(dǎo)致的拖尾等問(wèn)題。在對(duì)微囊藻毒素進(jìn)行大體積水樣離線富集過(guò)程中多采用C18和HLB固相萃取柱[18~21],故在本實(shí)驗(yàn)中選用HLB和C18富集柱進(jìn)行比較,結(jié)果表明,在最終實(shí)驗(yàn)條件下,以100%水相富集2 min時(shí),C18柱和HLB柱對(duì)目標(biāo)物的捕集回收率分別為92.5%~97.8%和95.8%~96.9%,均能滿足固相萃取過(guò)程對(duì)目標(biāo)化合物的富集要求。在反沖過(guò)程中,隨著有機(jī)相比例逐漸升高,因?yàn)镠LB trap柱對(duì)藻類毒素的保留效果優(yōu)于C18柱,易造成目標(biāo)物的色譜峰拖尾,定量積分不準(zhǔn)確。故在本實(shí)驗(yàn)中選用XBridge C18Direct Connect HP作為富集柱。

    3.2流動(dòng)相選擇

    實(shí)驗(yàn)考慮閥切換后,富集柱中的目標(biāo)物以及流動(dòng)相最終進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行定性與定量檢測(cè),所以需選用揮發(fā)性較好的流動(dòng)相,流動(dòng)相B分別采用0.1%甲酸-水和5 mmol/L甲酸銨代替液相色譜分析藻類毒素時(shí)常用的K2PO4(pH 2.5)進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明,5 mmol/L甲酸銨所獲得的目標(biāo)物峰形及響應(yīng)優(yōu)于0.1%甲酸-水,主要是由于酸性緩沖溶液提高離子強(qiáng)度,有助于改善峰形。在甲醇和乙腈中,流動(dòng)相A選用甲醇,主要是因?yàn)橐译嫦疵撃芰?qiáng),會(huì)在反沖過(guò)程中使擴(kuò)散于富集柱中的目標(biāo)物出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。而在線固相萃取條件中,采用100%水相,10種藻類毒素可在XBridge C18Direct Connect HP 富集柱上得到良好富集,隨有機(jī)相升高至40%,目標(biāo)物逐漸被洗脫,流動(dòng)相中緩沖鹽含量以及酸堿度對(duì)洗脫效果未造成顯著影響。本實(shí)驗(yàn)中,為防止富集與分離時(shí)流動(dòng)相的不同對(duì)分離過(guò)程的影響,在線固相萃取時(shí),液相色譜的流動(dòng)相與分析過(guò)程中的液相流動(dòng)相一致。

    3.3質(zhì)譜掃描模式的建立

    3.3.1MRM條件優(yōu)化分別利用大氣壓化學(xué)電離源(APCI)、電噴霧離子源(ESI)正、負(fù)離子檢測(cè)模式(ESI+、ESI)對(duì)10種藻類毒素進(jìn)行考察。結(jié)果表明,使用APCI時(shí)未見(jiàn)信號(hào)響應(yīng);使用ESI時(shí)信號(hào)極低,其中MC-LW、MC-WA未見(jiàn)信號(hào);而使用ESI+模式時(shí),10種藻類毒素響應(yīng)均顯著優(yōu)于ESI模式。文獻(xiàn)[22,23]中采用ESI+模式,主要是因?yàn)镸Cs的極性結(jié)構(gòu)使其易于形成正離子,其中MC-LR、MC-YR、MC-RR離子容易結(jié)合兩個(gè)H+,并在m/z498.5[M + 2H]2+、519.9 [M + 2H]2+、523.2 [M + 2H]2+產(chǎn)生較高響應(yīng),因此選擇上述離子作為母離子,得到的10種藻類毒素的MRM色譜圖見(jiàn)圖2 。

    圖2 10種藻類毒素的色譜圖Fig.2 Chromatograms of 10 kinds of algal toxins

    3.3.2MRM-IDA-EPI掃描模式和EPI譜庫(kù)的建立由于藻類毒素在水體中含量低,采用MRM法進(jìn)行分析時(shí),質(zhì)譜絕對(duì)響應(yīng)值較低,目標(biāo)分析物容易受到基質(zhì)干擾的影響,定性離子和定量離子豐度比率易超出容許范圍,影響定性判定,造成假陽(yáng)性或假陰性的情況。而Qtrap可將滿足MRM模式的目標(biāo)物的離子進(jìn)行阱集,經(jīng)過(guò)累積的離子在一定碰撞能下獲得更多二級(jí)碎片離子,隨后進(jìn)入檢測(cè)器掃描獲得EPI譜圖。對(duì)增強(qiáng)二級(jí)碎片離子的EPI掃描,可以在LC-MS/MS的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度,通過(guò)一次進(jìn)樣可得到用于定量的MRM色譜圖和用于定性的增強(qiáng)二級(jí)全掃描質(zhì)譜圖,更有利于痕量目標(biāo)化合物的準(zhǔn)確定性分析。

    采用優(yōu)化后的MRM條件進(jìn)行EPI促發(fā),啟動(dòng)閾值為1000 CPS,選擇動(dòng)態(tài)背景扣除模式,掃描速度為10000 Da/s,設(shè)置的掃描范圍為m/z100~1100 Da,動(dòng)態(tài)阱集時(shí)間不大于1 ms,EPI碰撞能量為35 eV,對(duì)0.5 ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,結(jié)果見(jiàn)圖3。在該碰撞能下除NOD外均能獲得包含各目標(biāo)物特征碎片的信息,而NOD則需將碰撞能提高至50 eV才能獲得足夠的信息碎片。將獲得的子離子增強(qiáng)二級(jí)質(zhì)譜圖編輯譜庫(kù),補(bǔ)充對(duì)應(yīng)的目標(biāo)物名稱、相對(duì)分子量、CAS號(hào)以及化學(xué)結(jié)構(gòu)圖,在進(jìn)行樣品中痕量藻類毒素測(cè)定時(shí),可利用MRM-IDA-EPI掃描模式獲取樣品中疑似目標(biāo)物的EPI譜圖進(jìn)行定性譜庫(kù)檢索,特別是在檢出限濃度附近進(jìn)行質(zhì)譜庫(kù)檢索時(shí),其匹配度均大于85%這一功能是線性離子阱所特有的。

    3.4方法學(xué)驗(yàn)證

    3.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限及定量限取混合標(biāo)準(zhǔn)使用液, 用初始比例流動(dòng)相進(jìn)行逐級(jí)稀釋,得到濃度在0.005~8.0 μg/L范圍內(nèi)的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,以目標(biāo)物的峰面積y為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度x(μg/L)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性擬合,并以色譜峰信噪比(S/N)≥3計(jì)算方法檢出限(LOD),S/N≥10確定方法定量

    限(LOQ),結(jié)果見(jiàn)表3,各藻類毒素在線性濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)>0.99,本方法中各藻類毒素的檢出限為0.0015~0.0050 μg/L,遠(yuǎn)低于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的0.1 μg/L[9],優(yōu)于同類文獻(xiàn)中的結(jié)果[13]。Online SPE-UHPLC-MS/MS-QTRAP方法靈敏度高,可以滿足對(duì)水中痕量藻毒素檢測(cè)的要求。

    表3 10種藻類毒素的標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限

    Table 3 Linear equations, linear ranges, correlation coefficients and LODs for 10 kinds of algal toxins

    化合物名稱Compounds線性范圍Linearrange(μg/L)回歸方程Regressionequation相關(guān)系數(shù)Correlationcoefficient(R2)檢出限LOD(μg/L)定量限LOQ(μg/L)MC?LR0.005~2.0y=561298x-2990.99930.00150.0060MC?RR0.005~2.0y=1200800x-68070.99950.00150.0060MC?YR0.005~2.0y=896169x-81060.99900.00150.0060MC?LW0.02~8.0y=2247x+4600.99870.00500.015MC?LF0.01~4.0y=2084x+8610.99620.00250.0080MC?LY0.01~4.0y=12787x-5990.99940.00250.0080MC?LA0.01~4.0y=105488x-41750.99210.00300.010MC?WR0.01~4.0y=219298x-66490.99080.00300.010CYN0.02~8.0y=882x+14680.99790.00500.015NOD0.02~8.0y=97125x+6070.99450.00500.015

    3.4.2方法的精密度及準(zhǔn)確性在陰性礦泉水水樣中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,加標(biāo)水平為0.02、0.10和1.00 μg/L,按本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化方法對(duì)每個(gè)水平樣品平行測(cè)定6次,計(jì)算回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見(jiàn)表4。在0.02 μg/L的加標(biāo)水平下,10種藻類毒素的回收率在83.7%~90.2%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.8%~4.7%;在0.10 μg/L的加標(biāo)水平下的回收率在90.5%~97.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.1%~3.2%;在1.00 μg/L的加標(biāo)水平下的回收率在92.8%~98.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.8%~3.2%。結(jié)果表明,本方法的準(zhǔn)確度和精密度良好,滿足水中藻類毒素的測(cè)定。

    表4 10種藻類毒素的回收率及精密度(n=6)

    Table 4 Recoveries and RSDs of 10 kinds of algal toxins(n=6)

    化合物Compounds加標(biāo)水平Spiked0.02μg/L回收率Recovery(%)RSD(%)加標(biāo)水平Spiked0.10μg/L回收率Recovery(%)RSD(%)加標(biāo)水平Spiked1.00μg/L回收率Recovery(%)RSD(%)MC?LR88.63.697.52.198.51.8MC?RR89.23.196.82.897.72.1MC?YR88.72.896.72.998.12.2MC?LW90.23.393.13.294.23.0MC?LF84.54.692.63.694.41.7MC?LY87.73.190.52.993.62.2MC?LA85.14.792.62.892.82.9MC?WR83.74.593.13.293.53.2CYN84.63.991.12.895.43.2NOD90.43.395.52.593.61.9

    3.5實(shí)際樣品分析

    于2017年5月15~17日,對(duì)浙江省內(nèi)包括杭州、湖州、金華地區(qū)不同地點(diǎn)的表層水體進(jìn)行采樣,采樣時(shí)間集中在15~17點(diǎn),采集29份湖泊水樣、 11份河流水樣,此外收集20份市售預(yù)包裝飲用水(包括礦泉水、純凈水、蒸餾水),使用本方法進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表5。 20個(gè)品牌市售飲用水中均未檢出藻類毒素,根據(jù)飲用水中MC-LR、NOD、CYN均不得超過(guò)1.0 μg/L安全濃度的規(guī)定[8,24],所測(cè)定樣品均未超標(biāo)。

    表5 10種藻類毒素在表層水樣中的測(cè)定結(jié)果

    Table 5 Determination of 10 kinds of algal toxins in surface water samples

    采樣點(diǎn)SamplesitesMC?RR(μg/L)MC?LR(μg/L)MC?YR(μg/L)MC?LA(μg/L)MC?LY(μg/L)MC?LW(μg/L)MC?WR(μg/L)MC?LF(μg/L)NOD(μg/L)CYN(μg/L)Lake?40.00760.00960.0028/0.0090//0.0100.016/Lake?10/0.0021/0.0013//////Lake?240.00540.0077/////0.0096//Lake?250.00680.0120.0083///////River?9/0.0052////////

    4 結(jié) 論

    本研究建立了Online SPE-UHPLC-MS/MS-QTRAP分析水樣中10種藻類毒素的方法。 Online SPE的應(yīng)用使前處理過(guò)程實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化,縮短了前處理的時(shí)間,減少了有機(jī)試劑使用量;利用UHPLC-MS/MS-QTRAP建立了10種藻類毒素的EPI質(zhì)譜庫(kù),實(shí)現(xiàn)了MRM定量檢測(cè)和在線EPI譜庫(kù)定性確證的雙重功能,很好地解決了傳統(tǒng)串聯(lián)四極桿制譜對(duì)低濃度樣品定性的問(wèn)題。Online SPE與UHPLC-MS/MS-QTRAP聯(lián)用進(jìn)行水樣中痕量藻類毒素測(cè)定時(shí),與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和已報(bào)道的方法相比,成本更低、分析時(shí)間更短、靈敏度更高,檢出限可達(dá)到0.0015~0.0050 μg/L之間,為藻類毒素的準(zhǔn)確定性和定量分析提供了新方法。

    1 Bormans M, Lengronne M, Brient L, Duval C.Bull.Environ.Contam.Toxicol.,2014, 92(2): 243-247

    2 Chorus I, Bartram J, Falconer I R, Fitzgerald J.Limnol.Oceanogr.,1999, 45(5): 1212-1212

    3 Li Xiao-Yu.StudyonMicrocystinsandItsToxicology. Beijing: Science Press,2007

    李效宇. 微囊藻毒素及其毒理學(xué)研究. 北京: 科學(xué)出版社,2007

    4 Chen J, Li S C, Guo X C, Xie P, Fan H H, Yu D Z, Zeng C, Chen L.Environ.Toxicol.,2015, (22): 19273-19284

    5 Salvador D, Churro C, Valerio E.J.Microbiol.Methods,2016, 123: 4-12

    6 Bláhová L, Sejnohová L, Marsálek B, Sejnohová L, Simek Z, Bláha L.Toxicon,2009, 53(5): 519-524

    7 Meng G, Sun Y, Fu W, Guo Z, Xu L.Toxicology,2011, 290: 218-229

    8 WHO Guidelines for Drinking Watr Quality. Addendum to Volume 2, Health Criteria and Other Supporting Information. 3nd ed. Geneva: World Health Organzaton,2004.

    9 GB/T 5749-2006. Standard for Drinking Water Quality. National Standards of the People's Republic of China

    生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn). 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. GB/T 5749-2006.

    10 Singh S, Srivastava A, 10 Oh H M, Agn C Y, Choi G G, Asthana R K.Toxicon,2012, 60 : 878-894

    11 LIANG Li-Li, GONG Ai-Jun, LI Hong-Mei, CAO Yan-Qiu, LI Bao-Qin.ChineseJ.Anal.Chem.,2010, 38(5): 740-742

    梁麗麗, 弓愛(ài)君, 李紅梅, 曹艷秋, 李寶芹. 分析化學(xué),2010, 38(5): 740-742

    12 FENG Gui-Xue, LIU Li, WANG Ming-Quan, SUN Shao-Hua, JIA Rui-Bao.ChemicalAnalysisandMeterage,2014, (6): 34-36

    馮桂學(xué), 劉 莉, 王明泉, 孫韶華, 賈瑞寶. 化學(xué)分析計(jì)量,2014, (6): 34-36

    13 ZHAO Qi-Yue, ZHAO Hong-Shuai, LIU Bao-Xian, LUO Yang.ChineseJ.Anal.Chem.,2015, 43(4): 594-598

    趙起越, 趙紅帥, 劉保獻(xiàn), 駱 昉. 分析化學(xué),2015, 43(4): 594-598

    14 LAN Ji-Rong, YANG An-Ping, WU Lai-Yan, WANG Song-Bo, JIANG Juan-Juan, WANG Xue-Wu.JournalofInstrmentalAnalysis,2015, 34(6): 664-669

    藍(lán)際榮, 楊安平, 吳來(lái)燕, 王松波, 蔣娟娟, 王學(xué)武. 分析測(cè)試學(xué)報(bào),2015, 34(6): 664-669

    15 Axel M, Ewelina K, Jenny-Maria B, Leif K.Environ.Sci.Pollut.Res.Inter.,2017, 24(9): 8692-8699

    16 Pensi D, Nicolo A D, Pinon M, Pisciotta C, Calvo P L, Nonnato A, Romagnoli R, Tandoi F, Perri G D, Avolio A D.J.MassSpectrom.,2017, 52(3): 187-195

    17 LIU Zhu, HUA Ying, XU Xiao-Ying, CHEN Wan-Qin, ZHAO Chao-Qun, LUO Jin-Wen.ChineseJ.Anal.Chem.,2016, 44(11): 1728-1734

    劉 柱, 華 穎, 徐瀟穎, 陳萬(wàn)勤, 趙超群, 羅金文. 分析化學(xué),2016, 44(11): 1728-1734

    18 Zhang L, Ping X, Yang Z.Talanta,2014, 62(1): 191-198

    19 ZHANG Xiao-Mei, ZHANG Zhu-Qing, HUANG Wen-Peng.ChineseJournalofPublicHealthEngineering,2010, (3): 223-224

    張曉梅, 張竹青, 黃文鵬. 中國(guó)衛(wèi)生工程學(xué),2010, (3): 223-224

    20 Mekebri A, Blondina G J, Crane D B.J.Chromatogr.A,2009, 1216(15): 3147-3155

    21 LIN Shan-Shan, CHEN Meng, LUO Dong-He.The6thNationalConferenceonEnvironmentalChemistry,2011

    林珊珊, 陳 猛, 駱和東. 第六屆全國(guó)環(huán)境化學(xué)大會(huì)暨環(huán)境科學(xué)儀器與分析儀器展覽會(huì),2011

    22 YANG Zhen-Yu, ZHOU Yao.JournalofChineseMassSpectrometrySociety,2014, 5(35): 447-453

    楊振宇, 周 瑤. 質(zhì)譜學(xué)報(bào),2014, 5(35): 447-453

    23 Yao Jin-Ting, Hao Hong-Yuan, Guo Yin, Dong Heng-Tao, Watanbe Kyoko, Huang Tao-Tong, Kawano Shin-ichi, Hashi Yuki. Shimadzu ASMA 2013 WP-033

    24 Drinking Water Quality Standards of New Zealand. New Zealand Ministry of Health,2005

    SimultaneousDeterminationof10KindsofAlgalToxinsin
    WaterSamplesbyOnlineSolidPhaseExtrationCoupled
    withUltraHighPerformanceLiquidChromatography-
    QuadrupoleLinearIonTrapMassSpectrometry

    XU Xiao-Ying, LIU Zhu, ZHU Bing-Qi, LIANG Jing-Jing , CHEN Wan-Qin, LUO Jin-Wen*
    (ZhejiangInstituteforFoodandDrugControl,Hangzhou310052,China)

    An online solid phase extraction (online-SPE) combined with ultra high performance liquid chromatography-quadrupole linear ion trap mass spectrometry (UHPLC-MS/MS-Qtrap) was established for the simultaneous identification and determination of 10 kinds of algal toxins in water samples. Multiple injections of water samples were controlled by a preset program, and the target analytes were enriched by trap column. The six-way valve was switched subsequently, and the algal toxins in the trap column were back-flushed to the analytical column for separation and analysis. The results showed that the online SPE significantly simplified pretreatment process, and the linear ion trap tandem mass spectrometry improved the sensitivity of the determination. Moreover, the establishment of enhanced product ion (EPI) scan library provided evidence for the confirmation of algal toxins. The 10 kinds of algal toxins showed a good linear relationship with correlation coefficientR2>0.99. The limits of detection (LOD) were 0.0015-0.0050 μg/L. The mean recoveries at three spiked levels of 0.02, 0.1, 1.0 μg/L were from 83.7% to 98.5%. The method was suitable for the rapid confirmation and quantitative determination of various algal toxins in water.

    Algal toxins; Online-solid phase extraction; Ultra performance liquid chromatography-quadrupole linear ion trap mass spectrometry; Water

    27 May 2017; accepted 29 August 2017)

    10.11895/j.issn.0253-3820.170339

    猜你喜歡
    藻類檢出限毒素
    環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果低于最低檢出限數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理方法
    定量NMR中多種檢出限評(píng)估方法的比較
    藻類水華控制技術(shù)及應(yīng)用
    What Makes You Tired
    一類具有毒素的非均勻chemostat模型正解的存在性和唯一性
    細(xì)菌和藻類先移民火星
    軍事文摘(2020年20期)2020-11-16 00:31:40
    吃蔬菜有個(gè)“321模式” 三兩葉菜類,二兩其他類,一兩菌藻類
    毒蘑菇中毒素的研究進(jìn)展
    浮游藻類在水體PAHs富集與降解中的研究
    嚴(yán)苛標(biāo)準(zhǔn)方能清洗校園“毒素”
    国产麻豆69| 国产精品久久久久久精品古装| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 91精品三级在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 香蕉国产在线看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美大码av| 精品久久久精品久久久| 自线自在国产av| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 老司机午夜十八禁免费视频| 美女福利国产在线| 久久久久久人人人人人| www.999成人在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 在线观看免费午夜福利视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 一级片免费观看大全| 热99re8久久精品国产| www.精华液| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产免费现黄频在线看| 日韩有码中文字幕| 国产99久久九九免费精品| 99国产精品一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 国产av一区二区精品久久| 国产男女超爽视频在线观看| 操美女的视频在线观看| 色播在线永久视频| 少妇粗大呻吟视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 精品国产乱码久久久久久男人| 日韩欧美三级三区| 久久人妻熟女aⅴ| 99国产精品免费福利视频| 一a级毛片在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 极品教师在线免费播放| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久99一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频| 一区二区三区精品91| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产区一区二久久| 最新在线观看一区二区三区| 色综合婷婷激情| 12—13女人毛片做爰片一| 在线观看免费视频网站a站| videosex国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日韩三级视频一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品电影一区二区三区 | 精品熟女少妇八av免费久了| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 欧美日韩乱码在线| 成年女人毛片免费观看观看9 | 精品国产美女av久久久久小说| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲免费av在线视频| 精品高清国产在线一区| 不卡一级毛片| 深夜精品福利| 中文字幕人妻熟女乱码| 高潮久久久久久久久久久不卡| 婷婷成人精品国产| 女性生殖器流出的白浆| 国产精华一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 99国产精品一区二区三区| videos熟女内射| 成在线人永久免费视频| 国产单亲对白刺激| 欧美日韩精品网址| 久热这里只有精品99| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久国产成人免费| 黄片播放在线免费| 午夜视频精品福利| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产在线精品亚洲第一网站| 激情视频va一区二区三区| 国产高清激情床上av| 中亚洲国语对白在线视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜福利欧美成人| 亚洲一区二区三区欧美精品| 免费在线观看日本一区| 国产成人欧美| 亚洲熟妇熟女久久| 日本一区二区免费在线视频| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久国产欧美日韩av| 最近最新中文字幕大全免费视频| 免费av中文字幕在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 黄片播放在线免费| 老司机靠b影院| 亚洲久久久国产精品| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产在视频线精品| 精品久久久久久,| 大陆偷拍与自拍| 精品国产一区二区久久| 香蕉久久夜色| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 欧美激情高清一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品久久久久久久毛片微露脸| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美成狂野欧美在线观看| e午夜精品久久久久久久| 中文字幕最新亚洲高清| 国产在视频线精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美精品一区二区免费开放| 777米奇影视久久| av网站在线播放免费| 啦啦啦免费观看视频1| 无遮挡黄片免费观看| 另类亚洲欧美激情| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产欧美亚洲国产| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品午夜福利视频在线观看一区| av不卡在线播放| 麻豆乱淫一区二区| 午夜激情av网站| 男人舔女人的私密视频| 国产在线一区二区三区精| 午夜91福利影院| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 人妻 亚洲 视频| 91成年电影在线观看| 视频区图区小说| 黄片播放在线免费| 欧美激情久久久久久爽电影 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 人妻久久中文字幕网| 亚洲专区字幕在线| 美女午夜性视频免费| 亚洲一码二码三码区别大吗| 制服诱惑二区| 最新美女视频免费是黄的| 水蜜桃什么品种好| 巨乳人妻的诱惑在线观看| www.999成人在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 高清毛片免费观看视频网站 | 视频在线观看一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 免费看a级黄色片| 久久久久久久午夜电影 | 精品国产一区二区久久| 久久热在线av| 国产精品免费视频内射| 天天影视国产精品| 老司机影院毛片| 中出人妻视频一区二区| 欧美日韩av久久| 宅男免费午夜| 老司机午夜福利在线观看视频| 在线观看免费视频日本深夜| 露出奶头的视频| 国产成人欧美在线观看 | 中文字幕人妻熟女乱码| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产在线观看jvid| 久久性视频一级片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 老鸭窝网址在线观看| 搡老乐熟女国产| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产免费现黄频在线看| 色尼玛亚洲综合影院| 妹子高潮喷水视频| 日韩视频一区二区在线观看| 9色porny在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| tocl精华| 欧美激情久久久久久爽电影 | 久热这里只有精品99| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 色播在线永久视频| 国产一卡二卡三卡精品| 两人在一起打扑克的视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产色视频综合| 色综合婷婷激情| 人妻 亚洲 视频| 黄色片一级片一级黄色片| 超碰成人久久| 成人免费观看视频高清| av天堂久久9| 十八禁高潮呻吟视频| 69av精品久久久久久| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜福利视频在线观看免费| 欧美成狂野欧美在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产av一区二区精品久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 一级黄色大片毛片| 女性生殖器流出的白浆| 黄色a级毛片大全视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 九色亚洲精品在线播放| 久久久国产精品麻豆| 国产男女内射视频| 亚洲美女黄片视频| 亚洲人成电影免费在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 视频区欧美日本亚洲| 大码成人一级视频| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美成狂野欧美在线观看| 女性被躁到高潮视频| 岛国毛片在线播放| 国产在线精品亚洲第一网站| av在线播放免费不卡| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品国产高清国产av | 女性被躁到高潮视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产精品sss在线观看 | 一区在线观看完整版| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产精品.久久久| 黑人猛操日本美女一级片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 最近最新免费中文字幕在线| 成年人午夜在线观看视频| 天堂动漫精品| 午夜成年电影在线免费观看| 精品亚洲成国产av| 在线观看免费日韩欧美大片| 老司机亚洲免费影院| 啦啦啦 在线观看视频| 久久久国产一区二区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产午夜精品久久久久久| 欧美日韩视频精品一区| 国产精品一区二区精品视频观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 成人国产一区最新在线观看| 69av精品久久久久久| 真人做人爱边吃奶动态| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久国产成人精品二区 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 在线观看舔阴道视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 日本黄色日本黄色录像| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 丁香六月欧美| 91麻豆av在线| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品免费大片| 成年版毛片免费区| 午夜福利一区二区在线看| 国产成人欧美在线观看 | 国产av精品麻豆| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 丰满的人妻完整版| av免费在线观看网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲少妇的诱惑av| 久久久久国内视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 99国产精品免费福利视频| 免费av中文字幕在线| 久久久国产欧美日韩av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 999精品在线视频| 免费少妇av软件| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久国产成人免费| 十八禁网站免费在线| 男女之事视频高清在线观看| 无人区码免费观看不卡| 日韩三级视频一区二区三区| 中文字幕色久视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 免费不卡黄色视频| 嫩草影视91久久| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 丰满饥渴人妻一区二区三| 十八禁网站免费在线| 乱人伦中国视频| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久人人人人人| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 18禁观看日本| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美日韩精品网址| 两个人看的免费小视频| 美女国产高潮福利片在线看| 午夜福利免费观看在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 久久午夜综合久久蜜桃| 女警被强在线播放| 成人精品一区二区免费| 欧美黄色淫秽网站| 丝袜在线中文字幕| 高清视频免费观看一区二区| 午夜两性在线视频| а√天堂www在线а√下载 | av一本久久久久| 久久国产乱子伦精品免费另类| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久久香蕉精品热| xxx96com| 亚洲人成电影免费在线| 人人澡人人妻人| 国产极品粉嫩免费观看在线| av国产精品久久久久影院| 啦啦啦免费观看视频1| 女人被狂操c到高潮| 免费看a级黄色片| 在线观看免费视频日本深夜| 国产高清国产精品国产三级| 美女 人体艺术 gogo| 欧美成人午夜精品| 久久热在线av| 亚洲一区高清亚洲精品| 大型av网站在线播放| e午夜精品久久久久久久| 少妇 在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 99riav亚洲国产免费| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 一进一出好大好爽视频| 99国产精品一区二区蜜桃av | 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产97色在线日韩免费| 91av网站免费观看| 国产不卡av网站在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 免费观看精品视频网站| 国产不卡一卡二| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品免费大片| 美女 人体艺术 gogo| 久久99一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 不卡av一区二区三区| 国产又爽黄色视频| 在线观看免费视频日本深夜| 99精品在免费线老司机午夜| 99久久人妻综合| 一二三四在线观看免费中文在| 丰满的人妻完整版| av线在线观看网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产男女超爽视频在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲av日韩在线播放| 免费日韩欧美在线观看| 国产成人精品无人区| 亚洲色图av天堂| 人成视频在线观看免费观看| 下体分泌物呈黄色| 超色免费av| 国产精品久久久久久精品古装| 久9热在线精品视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 热99re8久久精品国产| 午夜免费成人在线视频| 日本wwww免费看| 99国产极品粉嫩在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 国产深夜福利视频在线观看| 免费观看a级毛片全部| 九色亚洲精品在线播放| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美成人午夜精品| 电影成人av| 99久久99久久久精品蜜桃| 大陆偷拍与自拍| 中文字幕高清在线视频| 男女之事视频高清在线观看| 久热爱精品视频在线9| 免费看十八禁软件| 国产成人欧美| 99热网站在线观看| 午夜福利欧美成人| 伦理电影免费视频| 黄色视频不卡| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美成狂野欧美在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 精品久久久久久电影网| 国产又色又爽无遮挡免费看| 最新美女视频免费是黄的| 久久久久精品人妻al黑| 咕卡用的链子| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 99香蕉大伊视频| 悠悠久久av| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产在线观看jvid| av天堂久久9| 一二三四社区在线视频社区8| 一级毛片精品| 极品教师在线免费播放| 精品福利观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 十八禁高潮呻吟视频| 欧美成人免费av一区二区三区 | 欧美激情高清一区二区三区| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲一区高清亚洲精品| 黄色 视频免费看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| av国产精品久久久久影院| 久久久久精品人妻al黑| 成熟少妇高潮喷水视频| a级片在线免费高清观看视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产97色在线日韩免费| 午夜福利一区二区在线看| 黄色a级毛片大全视频| 五月开心婷婷网| 又黄又粗又硬又大视频| 又大又爽又粗| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产成人免费观看mmmm| 国产免费av片在线观看野外av| 精品久久久久久久久久免费视频 | 久久久久久久精品吃奶| 亚洲三区欧美一区| 免费在线观看亚洲国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美激情久久久久久爽电影 | 午夜福利在线观看吧| 国产一区二区三区视频了| 视频区图区小说| 在线观看一区二区三区激情| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲av成人av| 超碰成人久久| 两性夫妻黄色片| 日本五十路高清| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 人妻一区二区av| 午夜日韩欧美国产| 天天操日日干夜夜撸| 国产一区二区三区视频了| 性少妇av在线| 丰满的人妻完整版| 看片在线看免费视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲五月色婷婷综合| 一进一出抽搐动态| 亚洲国产看品久久| 国产99久久九九免费精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美成人午夜精品| 欧美成狂野欧美在线观看| 麻豆成人av在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 大香蕉久久网| 最新美女视频免费是黄的| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99久久综合精品五月天人人| 人妻一区二区av| 欧美乱码精品一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 18禁观看日本| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品九九99| 超碰成人久久| 男人操女人黄网站| 亚洲美女黄片视频| xxx96com| 国产伦人伦偷精品视频| 精品国产亚洲在线| 十分钟在线观看高清视频www| 一进一出好大好爽视频| 色综合婷婷激情| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 18禁观看日本| 国产精品永久免费网站| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 一本大道久久a久久精品| 电影成人av| 好男人电影高清在线观看| 午夜久久久在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 手机成人av网站| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 黄频高清免费视频| 热re99久久精品国产66热6| 女人被狂操c到高潮| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 99国产精品一区二区三区| 国产av又大| 国产一区在线观看成人免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产主播在线观看一区二区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲av熟女| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲avbb在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 水蜜桃什么品种好| 欧美日韩福利视频一区二区| 久热这里只有精品99| 亚洲国产欧美网| a在线观看视频网站| 新久久久久国产一级毛片| 两个人看的免费小视频| 天堂中文最新版在线下载| 丝袜在线中文字幕| 亚洲精品国产一区二区精华液| 女性生殖器流出的白浆| 又紧又爽又黄一区二区| 女警被强在线播放| 在线永久观看黄色视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久性视频一级片| 国产一区在线观看成人免费| 看片在线看免费视频| 免费看十八禁软件| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲情色 制服丝袜| 男女免费视频国产| 三上悠亚av全集在线观看| 国产激情久久老熟女| 国产三级黄色录像| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 在线av久久热| 成年人免费黄色播放视频| 九色亚洲精品在线播放| 精品国产一区二区久久| 亚洲第一青青草原| 757午夜福利合集在线观看| 女警被强在线播放| 1024香蕉在线观看| 国产精品久久久久成人av| 亚洲人成电影免费在线| 另类亚洲欧美激情| 欧美乱色亚洲激情| 中文字幕人妻熟女乱码| 丰满的人妻完整版| 国产免费男女视频| 99热国产这里只有精品6| 人妻 亚洲 视频| 一本综合久久免费| 99精品久久久久人妻精品| 在线永久观看黄色视频| 一本大道久久a久久精品| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜免费观看网址| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久这里只有精品19| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜激情av网站| 国产区一区二久久| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品乱久久久久久| av有码第一页| 亚洲中文字幕日韩| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产av精品麻豆| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 成人影院久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 在线观看免费午夜福利视频| 欧美午夜高清在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片|