24個油棕品種對3種真菌性葉斑病的抗病性評價及生防細(xì)菌的分離、篩選

鄭 麗，張海鵬，林 江，王嬌嬌，李夢倩，潘登浪，李 靜，曾憲海

（1.農(nóng)業(yè)部橡膠樹生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地——海南省熱帶作物栽培生理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部儋州熱帶作物科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站/農(nóng)業(yè)部儋州油棕種質(zhì)資源圃，海南 儋州 571737；2. 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣州實(shí)驗(yàn)站，廣東 廣州 510140；3. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣東 廣州 510642；4. 海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院，海南 儋州 571737）

24個油棕品種對3種真菌性葉斑病的抗病性評價及生防細(xì)菌的分離、篩選

鄭 麗1，2，3，張海鵬3，林 江4，王嬌嬌4，李夢倩4，潘登浪1，李 靜2，曾憲海1

（1.農(nóng)業(yè)部橡膠樹生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地——海南省熱帶作物栽培生理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部儋州熱帶作物科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站/農(nóng)業(yè)部儋州油棕種質(zhì)資源圃，海南 儋州 571737；2. 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣州實(shí)驗(yàn)站，廣東 廣州 510140；3. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣東 廣州 510642；4. 海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院，海南 儋州 571737）

通過針刺接種方法，將24個油棕品種對3種病原菌（YZ-4、YZ-6和 YZ-8）的抗病性進(jìn)行評價，發(fā)現(xiàn)對YZ-4抗病性較強(qiáng)的油棕品種為RY-2和RY-6，對YZ-6抗病性較強(qiáng)的油棕品種為RY-9、RY-14、RY-15、RY-31、RY-37、RY-38，對YZ-8抗病性較強(qiáng)的油棕品種為RY-38；可見不同品種對病原菌的抗性存在差異。針對3種病原菌進(jìn)行生防菌株的分離和篩選，從不同生境（根、葉、土壤）中分離到138株細(xì)菌，測定其幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、纖維素酶、葡聚糖酶活性，以及產(chǎn)生吲哚乙酸和嗜鐵素等次生代謝物能力，采用平板對峙法進(jìn)行頡頏活性測定。結(jié)果表明，138株菌株產(chǎn)生長素的菌株最多，比例達(dá)75.36%；無產(chǎn)幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶的菌株；產(chǎn)蛋白酶、纖維素酶和嗜鐵素的比例分別為67.39%、58.70%和63.04%。AR156對YZ-4具有很強(qiáng)頡頏性，綜合賦值總分為13；HNLE-4-2和3BS3對YZ-6具有最好頡頏效果，其綜合賦值總分為10；3BS3對YZ-8具有最好的頡頏效果，綜合賦值總分為10。

油棕；抗性評價；頡頏；水解酶；篩選

油棕（Elaeis guineensisJacq.） 屬棕櫚科，別名油椰子，是熱帶地區(qū)重要的木本油料作物，除食用外，也可用于工業(yè)和生物柴油的生產(chǎn)［1-4］。綜合利用價值比較高，是我國長期生產(chǎn)效率最高的油料植物，因此油棕作為“綠色的能源”、“可再生的能源”，具有很好的發(fā)展前景［5］。

近10年來，油棕果產(chǎn)量保持穩(wěn)定，種植面積不斷擴(kuò)大，對維護(hù)中國糧油安全、促進(jìn)農(nóng)民增收以及推動中國熱帶農(nóng)業(yè)“走出去”戰(zhàn)略具有重要意義［6］。隨著種植面積的增大、植株的調(diào)運(yùn)以及面臨新環(huán)境植株會有新病害的威脅，解決該植物病害引起的損失已經(jīng)成為油棕發(fā)展的主要內(nèi)容。油棕葉斑病主要危害新老葉片，發(fā)病初期黃色小斑點(diǎn)，逐漸擴(kuò)大至橢圓形至圓形，后期葉片焦枯、死亡、脫落［7］。據(jù)報道，炭疽菌是引起葉斑病的重要病原物之一［8］。嚴(yán)重為害植株葉片的病害有擬盤多毛孢屬，次要葉部病害有長蠕孢葉斑病、炭疽病、葉斑病、黑斑病、藻斑病等［9-12］。2011 年牛曉慶等［13］鑒定出油棕葉斑病病原物擬莖點(diǎn)霉屬以及Nakarin［14］報道的由茶擬盤多毛孢引起油棕葉斑病。

油棕葉斑病是目前油棕生產(chǎn)中的主要病害，盡管化學(xué)藥劑的使用對油棕葉斑病的防治起了一定成效，但隨之而來的環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留超標(biāo)及病原菌抗藥性等問題也引起高度關(guān)注［15］。具備改善環(huán)境、環(huán)境友好型、獲得長期的良好防治效益和對人畜安全的生防菌應(yīng)運(yùn)而生，符合當(dāng)前植物病害預(yù)防控制的發(fā)展方向［16］。研究表明，生防菌分泌的抗生素、酶類物質(zhì)或類植物激素是生防物質(zhì)。用于防治棉花黃萎病的內(nèi)生細(xì)菌可產(chǎn)生蛋白酶降解毒素或產(chǎn)生抑制物抑制致病因子［17］。幾丁質(zhì)酶可通過降解真菌菌絲生長末端新合成的幾丁質(zhì)而破壞菌絲端部生長，達(dá)到抑制病原真菌生長的目的［18］。纖維素酶中的β-1，3-葡聚糖酶直接攻擊真菌菌絲上的葡聚糖，抑制真菌的生長［19］。嗜鐵素通過配基的螯合使環(huán)境中的鐵濃度降低，從而使病原微生物缺鐵而不能生長繁殖，進(jìn)而達(dá)到控制植物病害的目的［20］。

本研究針對本研究室前期從油棕苗期植株上分離的3種真菌性葉斑病病原物擬盤多毛孢菌、炭疽菌和草莖點(diǎn)霉菌，在油棕上測定新引進(jìn)的24個油棕品種對3種病原菌的抗病性，隨后開展生防菌株篩選，擬尋找到最具潛力的生防菌，為下一步的田間防效測評提供優(yōu)選材料和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

植物材料：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所油棕試驗(yàn)基地種植的24種2齡油棕，分別為：RY-1、RY-2、RY-3、RY-4、RY-5、RY-6、RY-7、RY-8、RY-9、RY-10、RY-11、RY-12、RY-14、RY-15、RY-31、RY-32、RY-33、RY-34、RY-35、RY-36、RY-37、RY-38、RY-39和 RY-40。

病原物：熱科院廣州實(shí)驗(yàn)站植保實(shí)驗(yàn)室保存，小孢擬盤多毛孢菌Pestalotiopsis microspora（YZ-4）、炭疽菌Anthracnosespp.（YZ-6）、草莖點(diǎn)霉菌Phoma herbarum（YZ-8）。

7個頡頏細(xì)菌 AR156、Ze90、XY21、DS22、HS10、IBS4、3BS3來自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)郭堅華教授的綠色防控植保實(shí)驗(yàn)室。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 品種抗病性測定 參照李超萍［21］的方法測定24種油棕對其苗期3種真菌性病害的致病力。采用針刺法將已純化的病原菌接種于田間盆栽的健康油棕葉片上，具體方法為：用脫脂棉蘸70%的酒精少許，在葉片接種部位涂拭消毒，晾干后用滅菌的束針刺傷葉片形成傷口，再將預(yù)先準(zhǔn)備的直徑為5 mm的菌餅貼于傷口，接種完成后表面覆蓋已滅菌的吸水紙，保濕培養(yǎng)，采用保鮮膜纏繞保濕，以無菌瓊脂塊接種為對照。5～7 d后觀察記錄發(fā)病情況并拍照。

1.2.2 樣品采集 參照Morris等［22］的方法，從海南儋州紅衛(wèi)農(nóng)場的8齡油棕8個生境采集樣品。

1.2.3 頡頏菌株分離 參照楊敬輝等［23］的方法，就以上采集的樣品進(jìn)行生防菌的分離，保存于-70℃超低溫冰箱，備用。

1.2.4 平板頡頏活性測定 采用Berg等［24］的方法，采用平板對峙培養(yǎng)法測定菌株的平板頡頏活性。病原菌于PDA平板預(yù)培養(yǎng)6～7 d，在菌落邊緣取直徑為5 mm的菌餅，接種于水瓊脂培養(yǎng)基中央，然后以病原菌為中心，呈十字狀接種細(xì)菌，細(xì)菌接種處距離菌餅約2.7 cm，每平板接種細(xì)菌4次，每個處理3次重復(fù)。以僅接種病原菌的作為對照，28℃培養(yǎng)7 d觀察抑菌圈，記錄數(shù)據(jù)并拍照。

1.2.5 產(chǎn)酶和代謝物活性測定 水解酶活性測定：參照楊敬輝等［23］的方法測定蛋白酶活性，參照Roberts等［25］的方法測定幾丁質(zhì)酶活性，參考Ghose［26］的方法測定纖維素酶活性; 參照Shin等［27］的方法測定產(chǎn)嗜鐵素活性，參照楊威［28］的方法測定產(chǎn)吲哚乙酸活性測定，參照Sarwar等［29］的方法測定β-1，3-葡聚糖酶活性。

1.2.6 抗病性分級 對3種病原菌進(jìn)行抗病性接種，每個菌株重復(fù)3次，參照徐杰［31］的方法根據(jù)病斑大小制定對應(yīng)抗病性評價標(biāo)準(zhǔn)（表1）。

表1 抗病性分級標(biāo)準(zhǔn)（mm）

1.2.7 賦值評估 參照Berg等［30］的方法賦值。根據(jù)抑菌圈/水解圈（頡頏圈外徑與內(nèi)徑之差）大小分為4級：0級，無頡頏/水解活性；1級，頡頏圈/水解圈大小在1～3 mm之間（含3 mm）；2級，頡頏圈/水解圈大小在3～6 mm之間（含6 mm）；3級，頡頏圈/水解圈大小在6 mm以上。賦予的值分別為0、1、2、3。其中吲哚乙酸活性根據(jù)液面顏色變化賦值：0，不變色；1，變?yōu)闇\紅色；2，變?yōu)榧t色；3，變成深紅色。

采用Microsoft Excel對平板的抑菌圈、酶活等數(shù)據(jù)進(jìn)行處理、分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗病性測定結(jié)果

3種病原菌接種在不同油棕品種上致病性見圖1（封三），不同品種的抗性表現(xiàn)見表2。其中YZ-4接種24個油棕品種后，表現(xiàn)出強(qiáng)感病性的品種主要有RY-1和RY-5，病斑平均直徑均為7.70 mm，而RY-2和RY-6則表現(xiàn)出高抗病性，病斑平均直徑分別為2.40、2.50 mm。YZ-6接種不同油棕品種后，RY-7、RY-8和RY-11表現(xiàn)出強(qiáng)感病性，病斑平均直徑分別達(dá)7.90、10.80、7.80 mm；表現(xiàn)出強(qiáng)抗病性的品種有6個，分別為 RY-9、RY-14、RY-15、RY-31、RY-37和RY-38。YZ-8接種24個油性品種后，表現(xiàn)出強(qiáng)感病性和強(qiáng)抗病性的品種各有1個分別為RY-4和RY-38，病斑平均直徑為10.90、3.86 mm。以上結(jié)果顯示，同一病原菌對不同油棕品種的致病能力是不一樣的，不同病原菌對同一油棕品種的致病能力也存在一定差異。

表2 24個油棕品種對3種病原菌的抗病性測定（ mm）

圖1 病原菌接種油棕葉片的發(fā)病情況

2.2 菌株分離結(jié)果

樣品分離結(jié)果顯示，不同生態(tài)位菌落的豐富性存在差異（表3）。無病害苗圃的健康植株-葉-外生菌（HNLP）微環(huán)境分離得到的細(xì)菌數(shù)量最多，為16株，占分離菌株總數(shù)的11.59%；病害地塊健康植株的根圍土（DR）和病害地塊染病植株的根圍土（DHR）微環(huán)境分離得到的細(xì)菌數(shù)量僅次于HNLP微環(huán)境，均為15株，占分離菌株總數(shù)的10.87%。而病害地塊的健康植株-葉-外生菌（DLP）微環(huán)境分離得到的細(xì)菌數(shù)量最少，只有2株，占分離菌株總數(shù)的1.45%。

2.3 頡頏細(xì)菌產(chǎn)酶、次生代謝物及頡頏活性測定結(jié)果

初步測定145個頡頏細(xì)菌對3種病原菌（YZ-4、YZ-6和YZ-8）的平板頡頏活性，發(fā)現(xiàn)對YZ-4頡頏活性較好的菌株為HR-6-1、HNLP-6-6、HNLE-4-2、DS22、IBS4和 Ze90；對YZ-6頡頏效果較好的菌株為HR-5-2、DHR-4-4、DS22、AR156、HS10、IBS4、Ze90和XY21，其中活性最好的菌株為DS22和AR156；對YZ-8具頡頏活性的菌株為HR-5-2、HNLP-6-6、HNLE-4-2、DS22、AR156、HS10、IBS4、Ze90和XY21（圖2，封三）。

圖2 平板頡頏活性測定結(jié)果

將獲得的細(xì)菌菌株進(jìn)行頡頏活性測定，結(jié)果（表4）表明，具有頡頏活性的菌株有5株，占總菌株數(shù)的3.62%，這些菌株主要來自HR、DHR、HNLP和HNLE等4個生境。其中來自HR的菌株占具有頡頏活性菌株數(shù)的40%，DHR、HNLP 和HNLE中分離到的頡頏菌株均占具有頡頏活性菌株數(shù)的20%。

對頡頏細(xì)菌的產(chǎn)酶活性和次生代謝產(chǎn)物分析，結(jié)果（表4）顯示，所有生境中分離得到的菌株都無葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶能力，分離的菌株中產(chǎn)IAA的菌株所占比例最高，為75.36%，產(chǎn)蛋白酶的菌株比例為67.39%，產(chǎn)纖維素酶和嗜鐵素的菌株占菌株總數(shù)的58.70%和63.04%，而DLP生境中分離的菌株均不產(chǎn)生纖維素酶。

2.4 頡頏菌株綜合賦值評價

對7株外來生防菌株和5株分離得到的菌株進(jìn)行病原菌頡頏性評估，結(jié)果（表5）表明，

AR156對YZ-4具有很強(qiáng)頡頏性，綜合賦值總分為13；HNLE-4-2和3BS3對YZ-6具有最好頡頏效果，其綜合賦值總分為10，是這種病原菌潛在的生防菌；3BS3對YZ-8具有最好的頡頏效果，綜合賦值總分為10。分離得到的5個菌株的綜合賦值總分平均值為11.6，而其他來源的7個菌株的綜合賦值總分為10.4，由此可以看出從這些病原菌的生境中分離得到的菌株具有更好的生防效果。根據(jù)菌株對病原菌的綜合賦值得分，擬選擇其中拮抗效果和綜合賦值總分較高的菌株開展后續(xù)溫室防效試驗(yàn)。

表3 不同生境頡頏菌的分布情況

表4 5株生防菌的酶活和次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)情況

表5 13株生防潛力菌株綜合賦值

3 結(jié)論與討論

將3種真菌性病原菌分別接種于24個不同油棕品種，結(jié)果表明同一品種油棕對不同病原菌抗病性存在差異，不同品種油棕對同一病原菌的抗病性也存在差異，這與大多數(shù)學(xué)者的研究結(jié)果是一致的，如曹世勤等［32］發(fā)現(xiàn)將條銹菌接種于26個不同品種小麥上，不同品種小麥表現(xiàn)出不一樣的抗病性；劉振陽等［33］將細(xì)菌性潰瘍病原菌接種于10個不同楊樹品種上，不同楊樹品種表現(xiàn)出不同的抗病性；高潤蕾［34］將丁香假單胞菌黃瓜致病變種接種于不同的哈密瓜品種上，發(fā)現(xiàn)高感品種有10個、中感品種23個、中抗品種10個；胡俊等［35］也報道過不同哈密瓜品種對細(xì)菌性果斑病的抗病性存在差異。張自啟等［36］發(fā)現(xiàn)不同病原菌對同一油葵品種具有不同的致病力；據(jù)報道，將不同的條銹菌接種于小麥上，不同品種的小麥表現(xiàn)出不一樣的抗病性［32］；張丹丹［37］將多個地區(qū)獲得的菌株接種于玉米上，發(fā)現(xiàn)玉米對不同病原菌的抗病性存在差異，對禾谷鐮刀菌的抗病性最差。

本研究就分離的138株菌株和其他來源的7個菌株進(jìn)行對3種病原物的頡頏活性測定，結(jié)果表明不同菌株的頡頏效果存在差異，可能與不同菌株采集的地理位置、產(chǎn)酶條件以及適宜的培養(yǎng)基類型有關(guān)，如徐杰［31］、金迪等［38］的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)對應(yīng)細(xì)菌只有在溫度、pH、培養(yǎng)時間合適時才能最好發(fā)揮好的活性。此外，本研究采用其他來源的菌株，發(fā)現(xiàn)其頡頏活性較好。可見，生防菌株來源可以多樣化，并不僅僅局限于從油棕生境分離的細(xì)菌。

本研究結(jié)果表明不同生防菌菌株可能會產(chǎn)生不同類型的代謝產(chǎn)物。研究表明，多數(shù)生防細(xì)菌能夠在其生長發(fā)育過程中產(chǎn)生多種頡頏性或競爭性的代謝產(chǎn)物，通過直接或間接作用，達(dá)到阻礙或殺死病原菌的效果；能夠產(chǎn)生拮抗物質(zhì)的細(xì)菌種類很多，且產(chǎn)生的頡頏物質(zhì)也是多種多樣，不僅同一種細(xì)菌相同菌株可以產(chǎn)生多種拮抗物質(zhì)，且一種拮抗物質(zhì)也可從多株細(xì)菌的代謝產(chǎn)物中檢測到［39］。Yoshida 等［40］發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌作為生防菌時能夠產(chǎn)生一種拮抗炭疽菌的物質(zhì)；Kim等［41］發(fā)現(xiàn)某些大腸桿菌可以用作生防菌抑制炭疽菌，主要是該菌會產(chǎn)生一種脂酶抑制炭疽菌的附著胞形成，從而達(dá)到控制病害發(fā)展的效果。

本研究在試驗(yàn)過程中均只采用了單菌株的平板活性測試，可能可以考慮在復(fù)合生防菌的利用過程中加入適當(dāng)?shù)念R頏性中等或頡頏性弱的生防菌，從而提高生防效果［42］?？紤]加入某些生防真菌，以增強(qiáng)相應(yīng)生防菌的頡頏作用［43］。

本研究后續(xù)工作將抗性品種進(jìn)行田間試驗(yàn)，并測定油棕各類抗性品種受到病原菌入侵時，抗病相關(guān)酶活的變化情況。此外，將篩選得到的12株細(xì)菌測定其溫室盆栽防效試驗(yàn)，篩選到穩(wěn)定、持續(xù)防效的生防菌株。

［1］Cao H X，Sun C X，Shao H B，et al. Effects of low temperature and drought on the physiological and growth changes in oil palm seedlings［J］.African Journal of Biotechnology，2011，10（14）：2630-2637.

［2］Corley R H V，Tinker P B. The oil palm（Fourth Edition）［M］. John Wiley ＆Sons，Hoboken，NJ，2003.

［3］林位夫. 中國油棕種植利用現(xiàn)狀及其發(fā)展前景分析［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2010.

［4］曹建華，林位夫，張以山. 中國油棕發(fā)展戰(zhàn)略研究［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.

［5］艷，王必尊，劉立云，等. 我國油棕研究現(xiàn)狀與發(fā)展對策［J］. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007（23）：216-217.

［6］雷新濤，曹紅星. 油棕［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2013.

［7］牛曉慶，唐慶華，余鳳玉，等. 油棕葉斑病的病原鑒定及其生物學(xué)特性［J］. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2011（11）：103-105，108.

［8］鄭麗，沈會芳，李靜，等. 油棕病害調(diào)查及葉部病害的病原真菌初步鑒定［J］. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，41（14）：66-69.

［9］Aderungboye F O，張開明. 油棕的病害［J］. 世界熱帶農(nóng)業(yè)信息，1979（4）：31-43.

［10］Chinchilla C，Escobar R. Red ring and other diseases of the oil palm in central and south America［J］. ASD Oil Palm，2007，30：1-27.

［11］巴希，吳恭恒. 油棕的蟲害與動物害［J］. 世界熱帶農(nóng)業(yè)信息，1963，3（2）：64-66.

［12］謝龍蓮. 沙撈越州發(fā)現(xiàn)油棕新病害［J］. 世界熱帶農(nóng)業(yè)信息，2006（9）：23-24.

［13］牛曉慶，唐慶華，余鳳玉，等. 油棕葉斑病的病原鑒定及其生物學(xué)特性［J］. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2011，23（11）：103-105.

［14］Nakarin S，Kanaporn S，Jaturong K，et al. First report of leaf spot disease on oil palm caused by Pestalotiopsis the-aein in Thailand［J］. J Gen Plant Pathol，2013，79：277-279.

［15］韓長志. 植物病害生防菌的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢［J］. 中國森林病蟲，2015（1）：33-37，25.

［16］蘇琴. 化學(xué)防治與生物防治的優(yōu)缺點(diǎn)淺析［J］.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2011（6）：84-85，132.

［17］孔慶科，丁愛云. 內(nèi)生細(xì)菌作為生防因子的研究進(jìn)展［J］. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2001（2）：256-260.

［18］王焰玲，秦敏，周青，等. 抑制稻瘟病菌生長的幾丁酶產(chǎn)生菌的分離和鑒定［J］. 植物保護(hù)學(xué)報，1998（4）：289-294.

［19］孫娣，汪洋，張麗娟，等. β-1，3-葡聚糖酶及其抗真菌作用［J］. 黑龍江醫(yī)藥，2005（6）：416-417.

［20］譚周進(jìn)，肖羅，謝丙炎，等. 假單胞菌的微生態(tài)調(diào)節(jié)作用［J］. 核農(nóng)學(xué)報，2004（1）：72-76.

［21］超萍. 國內(nèi)木薯病害調(diào)查與細(xì)菌性枯萎病防治技術(shù)研究［D］.?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2011.

［22］Morris S J，Zink T，Conners K，et al. Comparison between fluorescein diacetate and differential fluorescent staining procedures for determining fungal biomass in soils［J］. Applied Soil Ecology，1997（6）：161–167.

［23］Yang J H，Liu H X，Zhu，G M，et al. Diversity analysis of antagonists from rice-associated bacteria and their application in biocontrol of rice diseases［J］. Journal of Applied Microbiology，2008，104：91–104.

［24］Berg G，F(xiàn)ritze A，Roskot N，et al. Evaluation of potential biocontrol rhizobacteria from different host plants ofVerticillium dahliaeKleb［J］.Journal of Applied Microbiology，2001，91（6）：963–971.

［25］Roberts W K，Selitrennikoff C P. Plant and bacterial chitinases differ in antifungal activity［J］. Journal of General Microbiology，1988，134：169-176.

［26］Ghose T K. Measurement of cellulase activities［J］. Pure and Applied Chemistry，1987，59：257-268.

［27］Shin S H，Lim Y，Lee S E，et al. CAS agar diffusion assay for the measurement of siderophores in biological fluids［J］. Journal of Microbiological Methods，2001，44（1）：89-95.

［28］楊威. 姜青枯病的生物防治及生防菌株對土壤環(huán)境的影響研究［D］. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

［29］Sarwar M，Kremer R J. Determination of bacterially derived auxins using a microplate method［J］. Letter Applied Microbiology，1992，20：282-285.

［30］Berg G，Krechel A，Ditz M，et al. Endophytic and ectophytic potato associated bacterial communities differ in structure andantagonistic function against plant pathogentic fungi［J］.FEMS Microbiology Ecology，2005，51：215-229.

［31］徐杰. 水稻秸稈降解放線菌的分離鑒定及其降解機(jī)理研究［D］. 哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學(xué)，2011.

［32］曹世勤，呂小歡，黃瑾，等. 甘肅省26個春小麥品種（系）苗期抗條銹基因分析及成株期抗病性評價［J］. 麥類作物學(xué)報，2013（4）：771-776.

［33］劉振陽. 不同抗性楊樹品種對歐美楊細(xì)菌性潰瘍病抗病性的初步研究［D］. 北京：北京林業(yè)大學(xué)，2015.

［34］高潤蕾. 哈密瓜細(xì)菌性葉斑病病原鑒定及不同品種抗病性測定［D］. 呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［35］胡俊，黃俊霞，劉雙平，等. 不同哈密瓜品種對細(xì)菌性果斑病抗病性及發(fā)展動態(tài)的研究［J］.華北農(nóng)學(xué)報，2006（6）：107-110.

［36］張自啟，劉長營，段愛菊. 油葵不同品種田間病害調(diào)查及成株期抗病性鑒定［J］. 安徽農(nóng)學(xué)通報（上半月刊），2009（21）：106-107.

［37］張丹丹. 河南省玉米莖基腐病病原菌種類鑒定及致病性測定［D］. 鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

［38］金迪，彭清靜，易浪波，等. 一株纖維素降解細(xì)菌的篩選、鑒定及產(chǎn)酶條件分析［J］. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，2010（4）：289-292，295.

［39］海峰. 枯草芽孢桿菌7Ze3次生代謝產(chǎn)物研究［D］. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［40］Yoshida S，Hiradate S，Tsukamoto T，et al. Anfimicrobiol acdvity of culture filtrate ofBacillus amyloliquefaciens RC-2 isolated from mulberry leaves［J］.Phytopathology，2001，91（2）：181-187.

［41］Kim P I，Chung K C. Production of an antifungal protein for control ofColletotrichum lagenariumbyBacillus amyloliquefaciens［J］. FEMS Microbiol Lett，2004，234：177-183.

［42］Roberts D P，Lohrke S M，Meyerb S L F，et al.Biocontrol agents applied individually and in combination for suppression of soilborne diseases of cucumber［J］. Crop Protection，2005，24（2）：141-155.

［43］譚兆贊，林捷，劉可星，等. 復(fù)合微生物菌劑對番茄青枯病和土壤微生物多樣性的影響［J］.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2007，28（1）：45-49.

Resistance evaluation of 24 oil palm species to three fungal pathogens and the isolation and screening of biological control agents

ZHENG Li1，2，3，ZHANG Hai-peng3，LIN Jiang4，WANG Jiao-jiao4，LI Meng-qian4，PAN Deng-lang1，LI Jing2，ZENG Xian-hai1
（1. Opening Project Fund of Key Laboratory of Rubber Biology and Genetic Resource Utilization，Ministry of Agriculture / State Key Laboratory Breeding Base of Cultivation ＆Physiology for Tropical Crops / Danzhou Investigation & Experiment Station of Tropical Crops，Ministry of Agriculture/Germplasm Repository of Oil Palm， Danzhou City，Ministry of Agriculture，Danzhou 571737，China； 2. Guangzhou Experimental Station，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Guangzhou 510140，China；3. College of Agriculturure，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；4. Institute of Tropical Agriculture and Forestry，Hainan University，Danzhou 571737，China）

The resistances of 24 oil palm species to pathogens of YZ-4，YZ-6 and YZ-8 were evaluated by the method of needle inoculation. The results showed that different cultivars behaved different resistances to different pathogens. RY-2 and RY-6 had higher disease resistance to YZ-4. RY-9，RY-14，RY-15，RY-31，RY-37 and RY-38 showed good resistance to YZ-6，and YZ- 8 showed weak pathogenicity to RY-38. In addition，the antagonistic activity，production of hydrolytic enzymes and secondary metabolites was carried out on 138 strains isolated from different habitats （roots，leaves，soil）. Results showed that strains produced IAA had the largest percentage according to 75.36 percent and no strain produced chitinase and Glucanase，the strains producing protease，cellulase and siderophore were 67.39% ，58.70% and 63.04%，respectively. Further result showed that AR156 and 3BS3 were proved to have antagonistic activity on YZ-4 and YZ-8，which reached to 13 and 10 scores respectively. HNLE-4-2 and 3BS3 showed well antagonistic activity on YZ-6 and comprehensive score was 10. The results provide the preliminary research foundation for obtaining high quality of biocontrol bacteria resources.

oil palm；resistance evaluation；antagonistic；hydrolytic enzymes；screening

S765.5

A

1004-874X（2017）07-0096-08

鄭麗，張海鵬，林江，等.24個油棕品種對3種真菌性葉斑病的抗病性評價及生防細(xì)菌的分離、篩選［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（7）：96-103.

2017-04-20

中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題（RRI-KLOF201508)；農(nóng)業(yè)部熱作種質(zhì)資源保護(hù)項(xiàng)目（151721301354052014)；中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（1630112017002）

鄭麗（1984-），女，在職博士生，助理研究員，E-mail：catas_lzheng@163.com

曾憲海（1976-），男，博士，副研究員，E-mail：zxh200888@126.com

（責(zé)任編輯 楊賢智）