不同廠(chǎng)家柏子養(yǎng)心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛含量考察

吳軍紅，趙群濤，李啟彬

(1．河南省駐馬店市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 駐馬店 463000； 2．河南省信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 信陽(yáng) 464000)

不同廠(chǎng)家柏子養(yǎng)心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛含量考察

吳軍紅1，趙群濤2，李啟彬1

(1．河南省駐馬店市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 駐馬店 463000； 2．河南省信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 信陽(yáng) 464000)

目的建立同時(shí)測(cè)定柏子養(yǎng)心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Agilent Eclipse SBC18柱（250 mm ×4．6 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈（A） －0．1% 磷酸溶液（B），梯度洗脫，流速 1．0 mL ／min，檢測(cè)波長(zhǎng) 290 nm，柱溫 30 ℃。結(jié)果阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛進(jìn)樣量分別在 0．093 8 ～1．876 0 g(r＝0．999 9)，0．059 9 ～1．198 0 g(r＝0．999 9)，0．127 ～2．540 g(r＝0．999 9)范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好；平均回收率分別為 98．65% ，98．67% ，99．02% ，RSD 分別為 0．88% ，1．12% ，1．04% （n ＝ 6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于柏子養(yǎng)心丸的質(zhì)量控制，測(cè)定結(jié)果反映出不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的柏子養(yǎng)心丸質(zhì)量有差異。

柏子養(yǎng)心丸；阿魏酸；肉桂酸；桂皮醛；含量測(cè)定

柏子養(yǎng)心丸為常用中藥丸劑[1]，由柏子仁、黨參、炙黃芪、川芎、肉桂、當(dāng)歸、酸棗仁、醋五味子等中藥組方，用于心氣虛寒、心悸易驚、失眠多夢(mèng)、健忘等，具有補(bǔ)氣、養(yǎng)血、安神的功效。方中川芎、肉桂具有活血、行氣、補(bǔ)火助陽(yáng)、引火歸元，祛風(fēng)、散寒、止痛，活血通經(jīng)的功效，用于陽(yáng)痿宮冷、腰膝冷痛、腎虛作喘、虛陽(yáng)上浮、眩暈?zāi)砍?、心腹冷痛、胸痹心痛，可改善心肌缺血[2－6]，作為主要藥味及調(diào)和諸藥，糾正各藥偏性，其主要活性成分為阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛。目前，川芎和肉桂野生資源枯竭，多為人工栽培，不同產(chǎn)地藥材含量差異較大，不同生產(chǎn)廠(chǎng)家采用不同產(chǎn)地的藥材會(huì)影響柏子養(yǎng)心丸質(zhì)量。原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，且未見(jiàn)同時(shí)測(cè)定柏子養(yǎng)心丸中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛的文獻(xiàn)報(bào)道。為保證藥品質(zhì)量及患者的用藥安全，有必要對(duì)市場(chǎng)上不同廠(chǎng)家柏子養(yǎng)心丸進(jìn)行考察，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；超聲波清洗器（功率為250 W，頻率為33 kHz，昆山市超聲儀器公司）；BP211D型電子天平（十萬(wàn)分之一，德國(guó)賽多利斯公司）。

1．2 試藥

阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)為 110773－201313，含量為99．6% ），肉桂酸對(duì)照品（批號(hào)為 110786 －200503），桂皮醛對(duì)照品（批號(hào)為 110710－201016，含量為 98．6%）均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；柏子養(yǎng)心丸為市售品；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：AgilentEclipseSB－C18柱（250mm×4．6mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A） － 0．1% 磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，10% ～20%A；10～20 min，20% ～30%A；20～30 min，30% ～36%A；30～35 min，36% ～32%A）；檢測(cè)波長(zhǎng)：290 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：30 ℃。

2．2 溶液制備

對(duì)照品溶液：稱(chēng)取阿魏酸對(duì)照品18．76 mg、肉桂酸對(duì)照品 11．98 mg、桂皮醛對(duì)照品 25．40 mg，精密稱(chēng)定，同置200 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每 1 mL中含阿魏酸 0．093 8 mg、肉桂酸0．059 9 mg、桂皮醛 0．127 0 mg 的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取本品水蜜丸適量，粉碎，取約5．0 g，或取質(zhì)量差異項(xiàng)下大蜜丸或小蜜丸5．0 g，剪碎，精密稱(chēng)定，加等量硅藻土，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，超聲處理（功率為 250 W，頻率為 33 kHz）30 min，放冷至室溫，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：除去處方中的川芎、肉桂，將其余藥味按柏子養(yǎng)心丸制備工藝制備的陰性樣品5．0 g，精密稱(chēng)定，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按擬訂色譜條件，自動(dòng)進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液 1．0，2．0，5．0，10．0，20．0 μL，按擬訂色譜條件自動(dòng)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程。結(jié)果見(jiàn)表1。

精密度試驗(yàn)：精密吸取上述對(duì)照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛峰面積的 RSD 分別為 0．20%，0．21%，0．15%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為16093021）6份，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果每片樣品中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛含量的平均值分別為 0．090，0．031，0．289mg／g，RSD 分別為 1．01%，0．95%，1．03%（n ＝6），表明方法重復(fù)性良好。

表1 線(xiàn)性關(guān)系考察結(jié)果

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品（批號(hào)為16093021）溶液，按擬訂色譜條件，分別于 0，1，3，6，9，12，18 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果供試品溶液中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛含量的 RSD 分別為 0．96%，1．22%，1．42%（n ＝6），表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛對(duì)照品適量，制成含阿魏酸 0．091 6 g／L、肉桂酸 0．031 0 g／L、桂皮醛0．225 0 g／L的混合對(duì)照品溶液。取樣品（批號(hào)為16093021），依法制備供試品溶液，平行取樣6份，各約5．0 g，精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，再精密加入上述混合對(duì)照品溶液5 mL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

2．4 樣品含量測(cè)定

取20批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件，對(duì)20批樣品中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

3．1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

通過(guò)對(duì)阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)其最大吸收波長(zhǎng)分別為319，286，290 nm。故將阿魏酸、肉桂酸在290 nm處作為檢測(cè)波長(zhǎng)[7]；而桂皮醛在290 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)靈敏度也較高，重復(fù)性、峰形和分離度也較好。因此選擇290 nm作為測(cè)定3個(gè)活性成分的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3．2 流動(dòng)相選擇

曾考察了乙腈－0．1%磷酸溶液[8]、乙腈 －0．2%磷酸溶液[9]、乙腈 －0．1%甲酸[10]、甲醇 －水 4種不同流動(dòng)相系統(tǒng)，等度洗脫，樣品目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰有部分重疊，導(dǎo)致儀器重復(fù)性較差，因此選擇梯度洗脫。分別比較了乙腈－0．1%磷酸溶液、乙腈 －0．2%磷酸溶液、乙腈 －0．1%甲酸 3個(gè)系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)乙腈（A）－0．1%磷酸溶液（B），按梯度洗脫（0～10 min，10% ～20%A；10～20 min，20% ～30%A；20～30 min，30% ～36%A；30～35 min，36% ～32%A）出峰時(shí)間較為合適，分離度好，理論板數(shù)高，陰性無(wú)干擾，故以此為流動(dòng)相洗脫條件。

3．3 提取方法和溶劑選擇

桂皮醛在甲醇中不穩(wěn)定，在乙腈中較穩(wěn)定[11]。提取過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，乙腈提取阿魏酸含量較低；但甲醇和乙腈提取肉桂酸、桂皮醛差異不大，為了全面考慮，選擇甲醇作為提取溶劑，并盡量縮短測(cè)樣時(shí)間。曾比較超聲提取和加熱回流、索氏提取3種提取方式，結(jié)果表明，超聲提取率高于加熱回流和索氏提取，因此采用超聲提取作為提取方法。

表3 20批樣品中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛含量測(cè)定結(jié)果（n＝6）

3．4 不同廠(chǎng)家產(chǎn)品分析

近年來(lái)，關(guān)于測(cè)定柏子養(yǎng)心丸中川芎有效成分含量較少，藁本內(nèi)酯作為川芎中含量較高的成分，缺乏穩(wěn)定性，對(duì)照品難以保存[12]。本研究中測(cè)定穩(wěn)定的對(duì)照品阿魏酸用以比較制劑中川芎質(zhì)量差異。目前，對(duì)柏子養(yǎng)心丸中肉桂的控制主要是測(cè)定肉桂酸和桂皮醛，梯度洗脫，同時(shí)測(cè)定其含量。結(jié)果表明，不同廠(chǎng)家柏子養(yǎng)心丸中阿魏酸、肉桂酸和桂皮醛的含量差異較大，說(shuō)明市售柏子養(yǎng)心丸存在質(zhì)量差異。同時(shí)，反映出不同廠(chǎng)家所用的中藥材質(zhì)量有差異，藥材在制備過(guò)程中干燥、粉碎、消毒等操作環(huán)節(jié)及內(nèi)部質(zhì)量控制方面存在一定差異，故有必要對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。

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Content Investigation of Ferulic Acid,Cinnamic Acid and Cinnamic Aldehyde in Baizi Yangxin Pills from Different Manufacturers

Wu Junhong1,Zhao Quntao2,Li Qibin1
(1．Zhumadian Institute for Food and Drug Control,Zhumadian,Henan,China 463000; 2．Xinyang Institute for Food and Drug Control,Xinyang Henan,China 464000)

Objective To establish an HPLC method for the simultancous determination of the contents of ferulic acid,cinnamic acid and cinnamic aldehyde in Baizi Yangxin Pills．Methods The chromatographic column was the Agilent Eclipse SB － C18column(250 mm×4．6 mm,5 μm)．The mobile phase consisted acetonitrile(solvent A) － 0．1% phosphoric acid(solvent B)with gradient elution,the flow rate was 1．0 mL ／min,the detection wavelength was 290 nm,the temperature of column was 30 ℃．Results Ferulic acid,cinnamic acid and cinnamic aldehyde showed good linear in the range of 0．093 8 － 1．876 0 μg(r＝ 0．999 9),0．059 9 －1．198 0 μg(r＝ 0．999 9),0．127 －2．540 μg(r＝0．999 9),respectively．The average recoveries were 98．65%,98．67%,99．02%,RSDs were 0．88%,1．12%,1．04%(n ＝ 6),respectively．Conclusion The method is simple,accurate,reproducible,which can be used for the quality control of Baizi Yangxin Pills．The results of content determination showed that the quality of Baizi Yangxin Pills varied from different manufactures．

Baizi Yangxin Pills;ferulic acid;cinnamic acid;cinnamic aldehyde;content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)19－0030－04

10．3969 ／j．issn．1006 － 4931．2017．19．008

吳軍紅，男，大學(xué)本科，主管藥師，主要從事中藥檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和制訂工作，（電子信箱）48042557＠qq．com。

2017－07－16)