• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    清肺方對(duì)結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺炎模型大鼠抗纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究

    2017-11-01 16:35:52錢(qián)康范永升
    關(guān)鍵詞:方組強(qiáng)的松間質(zhì)性

    錢(qián)康 范永升

    1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬杭州第一醫(yī)院 杭州 310006 2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)

    清肺方對(duì)結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺炎模型大鼠抗纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究

    錢(qián)康1范永升2

    1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬杭州第一醫(yī)院 杭州 310006 2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)

    [目的]通過(guò)博來(lái)霉素(bleomycin,BLM)誘導(dǎo)建立結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺炎大鼠模型,探討清肺方對(duì)間質(zhì)性肺炎大鼠的抗纖維化作用。[方法]清潔級(jí)SD大鼠48只,雄性,體質(zhì)量為180~200g,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,分為正常對(duì)照組、間質(zhì)性肺炎模型組、強(qiáng)的松組和清肺方組,每組12只。除正常對(duì)照組外,其余各組通過(guò)氣管內(nèi)灌注5mg·kg-1BLM誘導(dǎo)建立大鼠間質(zhì)性肺炎動(dòng)物模型。用藥28d后,對(duì)比清肺方組與間質(zhì)性肺炎模型組、強(qiáng)的松組、正常對(duì)照組之間的肺組織染色及纖維化評(píng)分,檢測(cè)肺組織羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)。[結(jié)果]①病理染色發(fā)現(xiàn):與正常對(duì)照組比較,間質(zhì)性肺炎模型組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)破壞,重度炎性細(xì)胞浸潤(rùn),大塊的纖維組織增生實(shí)變,肺泡腔內(nèi)分布膠原纖維病灶;與間質(zhì)性肺炎模型組比較,清肺方組大鼠肺組織損害減輕,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少,纖維組織增生減少,膠原相對(duì)面積較模型組明顯減少。②與正常對(duì)照組比較,各模型組大鼠肺組織HYP含量明顯升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與間質(zhì)性肺炎模型組相比,清肺方組大鼠肺組織HYP含量明顯降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。③與正常對(duì)照組比較,各模型組大鼠肺組織勻漿TNF-α、IL-6、TGF-β1濃度明顯升高(P<0.05,P<0.01);與間質(zhì)性肺炎模型組比較,清肺方組大鼠肺組織勻漿TNF-α、IL-6、TGF-β1濃度明顯降低(P<0.05,P<0.01)。[結(jié)論]1.清肺方對(duì)BLM誘導(dǎo)的大鼠間質(zhì)性肺炎、肺纖維化有抑制作用。2.清肺方對(duì)BLM誘導(dǎo)的大鼠間質(zhì)性肺炎的抑制作用機(jī)制可能與TNF-α、IL-6、TGF-β1有關(guān)。

    清肺方;結(jié)締組織病;間質(zhì)性肺炎;抗纖維化;HYP;TNF-α;TGF-β1;IL-6

    結(jié)締組織疾病(connective tissue disease,CTD)是以機(jī)體針對(duì)自身抗原產(chǎn)生多種自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞,通過(guò)各種途徑引起機(jī)體組織損傷或功能異常的一類自身免疫性疾病。不同類型的結(jié)締組織疾病累及組織或器官的數(shù)量和損傷程度不盡相同,但幾乎均可累及呼吸系統(tǒng)。其中,合并間質(zhì)性肺炎(interstitial lung disease,ILD)是影響CTD預(yù)后、增加死亡風(fēng)險(xiǎn)的重要因素[1]。近年,隨著基礎(chǔ)研究的深入與臨床檢查水平的不斷提高,結(jié)締組織疾病伴發(fā)間質(zhì)性肺炎(connective tissue disease-interstitial lung disease, CTD-ILD)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),晚期則表現(xiàn)為彌漫性肺間質(zhì)纖維化引起以低氧血癥為主的呼吸衰竭癥狀。CTD患者合并ILD發(fā)病隱匿,機(jī)制復(fù)雜,晚期糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑效果較差,相對(duì)特發(fā)性間質(zhì)性肺炎預(yù)后較差。因此,對(duì)于結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺炎的診治研究就具有非常重要的意義。同時(shí),在對(duì)該病治療的實(shí)驗(yàn)研究中,動(dòng)物模型的選擇至關(guān)重要。有研究表明,結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺疾病最常見(jiàn)的病理類型是普通型間質(zhì)性肺炎(usual interstitial pneumonitis,UIP)[2-3],因而在動(dòng)物造模中常參考UIP的動(dòng)物模型進(jìn)行研究。在前期研究中,研究組研究了多種建立間質(zhì)性肺炎動(dòng)物模型的方法,并發(fā)現(xiàn)向大鼠氣管內(nèi)灌注博來(lái)霉素(bleomycin,BLM)的方法能夠成功建立間質(zhì)性肺炎動(dòng)物模型[4]。

    本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比清肺方組與間質(zhì)性肺炎模型組的肺組織病理及肺組織羥脯氨酸(hydroxyproline, HYP)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)等變化,研究清肺方對(duì)大鼠間質(zhì)性肺炎抗纖維化的作用,并初步探討其可能的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 清潔級(jí)SD大鼠48只,雄性,體質(zhì)量160~180g,飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SYXK(浙)2016-0115。動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,將大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法抽出12只為正常對(duì)照組,其余大鼠用BLM造模后,按照隨機(jī)數(shù)字表法,將動(dòng)物隨機(jī)分為間質(zhì)性肺炎模型組、強(qiáng)的松對(duì)照組、清肺方組,每組各12只。經(jīng)單因素方差檢驗(yàn)分析,各組大鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑藥品 清肺方由太子參12g、沙參15g、麥冬15g、冬瓜子15g、山慈菇30g、浙貝母12g、僵蠶10g、石見(jiàn)穿15g、蘆根15g、蒲公英30g組成,所含中藥均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬杭州第一醫(yī)院中藥房提供,并由藥劑室將上述中藥加8~10倍純水浸泡30min,武火煎開(kāi)后,再文火煎煮30min,過(guò)濾,剩余藥渣加入3~5倍純水再次煎25min,藥液過(guò)濾后取過(guò)濾液,將2次過(guò)濾液濃縮成含生藥濃度為1.6g·mL-1的溶液,分裝滅菌,-20℃保存?zhèn)溆?。鹽酸博來(lái)霉素,日本化藥株式會(huì)社,批號(hào):H20090885;強(qiáng)的松,西安利君沙制藥股份有限公司生產(chǎn),批號(hào):090302;HYP測(cè)試盒,購(gòu)自南京建成生物工程研究所,產(chǎn)品編號(hào)A030-2;Masson染色試劑盒,購(gòu)自上海博谷生物科技有限公司,產(chǎn)品編號(hào):PT003;10%水合氯醛,批號(hào):浙藥制字H020100240,浙江中醫(yī)藥大學(xué)校附屬醫(yī)院提供;TNF-α ELISA試劑盒(批號(hào):ab100747),IL-6 ELISA試劑盒(批號(hào):ab100722),TGF-β1ELISA試劑盒(批號(hào):ab119557)均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

    1.3 造模方法 大鼠按 0.35mL·100g-1劑量腹腔注射 10%水合氯醛進(jìn)行麻醉,取頸前正中切口,切開(kāi)皮膚,逐層分離暴露氣管,氣管插管后,按5mg·kg-1劑量向套管針內(nèi)緩慢注入濃度為3mg·mL-1的BLM溶液,正常對(duì)照組氣管內(nèi)灌注同等體積的生理鹽水,迅速直立并旋轉(zhuǎn),使藥液均勻分布于兩肺,縫合創(chuàng)口,動(dòng)物清醒后常規(guī)喂養(yǎng)。造模24h后每組隨機(jī)取1只大鼠進(jìn)行肺組織病理切片,出現(xiàn)肺間質(zhì)病變改變,則造模成功。

    1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)給藥方法 造模成功24h后開(kāi)始灌胃,按照人與動(dòng)物體表面積換算方法換算,清肺方濃度為1.6g·mL-1,大鼠1mL·100g-1/d體質(zhì)量進(jìn)行灌胃。強(qiáng)的松組將藥物稀釋為每mL含強(qiáng)的松含量0.6mg的混懸液,每只大鼠的給藥劑量均為1mL·100g-1體質(zhì)量;正常對(duì)照組與間質(zhì)性肺炎模型組則均給予等體積的0.9%氯化鈉注射液灌胃。各組大鼠均連續(xù)灌胃28d,2次/d。

    1.5 取材及病理標(biāo)本制作 造模后連續(xù)灌胃給藥28d,末次給藥后禁食不禁水。末次給藥后24h,大鼠腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉,劑量為0.35mL· 100g-1體質(zhì)量。麻醉后,大鼠心尖部取血,離心分離血清,置于-80℃冰箱保存,以備后續(xù)檢測(cè)。沿氣管打開(kāi)胸腔,暴露肺組織,切除雙肺。10%中性甲醛固定后送病理。左肺剪成30mg大小組織塊,準(zhǔn)備HYP測(cè)定。右肺置于-80℃冰箱保存,準(zhǔn)備病理切片染色。

    1.6 肺組織HYP測(cè)定 HYP的測(cè)定按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。簡(jiǎn)而言之,取60mg肺組織,加入1mL水解液在100℃裂解20min,用活性炭吸附有色雜質(zhì)后,離心,取上清1mL,依次加入試劑1、2、3,充分反應(yīng)后,取上清lmL在550nm處測(cè)光密度(optical density,OD)。

    1.7 肺組織TGF-β1、IL-6及TNF-α濃度的測(cè)定肺組織勻漿TGF-β1、IL-6及TNF-α濃度的測(cè)定按照Abcam公司試劑盒說(shuō)明書(shū)中的操作步驟操作。測(cè)量450nm及630nm波長(zhǎng)處各個(gè)孔的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔的OD值及濃度,使用Curve Expert1.3擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得公式,代入各樣品孔的OD值,計(jì)算濃度,并乘以稀釋倍數(shù),求得樣本濃度。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS18.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。檢驗(yàn)數(shù)據(jù)正態(tài)性,符合正態(tài)分布,數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。組間比較用單因素方差分析(One-way ANOVA)。方差齊性時(shí)用LSD-t檢驗(yàn)組間兩兩比較分析,方差不齊時(shí)用Dunnett's T3檢驗(yàn)比較分析。以P<0.05作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

    2 結(jié)果

    2.1 肺組織病理HE染色 正常對(duì)照組大鼠肺組織病理HE染色可見(jiàn)肺泡結(jié)構(gòu)清晰完好,肺泡間隔細(xì)且均勻,無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、充血及水腫,無(wú)明顯纖維組織增生。間質(zhì)性肺炎模型組大鼠肺組織病理HE染色可見(jiàn)肺組織結(jié)構(gòu)破壞,重度炎性細(xì)胞浸潤(rùn),大塊的纖維組織增生實(shí)變,肺間質(zhì)纖維化明顯,可見(jiàn)實(shí)變病灶,局部有充血。清肺方組及強(qiáng)的松組大鼠肺組織病理HE染色均可見(jiàn)肺組織損害減輕,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少,纖維組織增生減少,無(wú)實(shí)變病灶。說(shuō)明清肺方及強(qiáng)的松均能抑制大鼠肺間質(zhì)纖維化。見(jiàn)圖1。

    圖1 各組大鼠肺組織HE染色(400×)Fig.1 HE staining in lung tissue of rats in each group(400×)

    2.2 肺組織病理Masson染色 光鏡下可見(jiàn)正常對(duì)照組大鼠肺泡間隔無(wú)明顯膠原纖維增生,血管及氣道壁少量深色膠原纖維沉積;間質(zhì)性肺炎模型組大鼠肺組織可見(jiàn)支氣管、血管周邊大量深色膠原沉積,肺泡腔內(nèi)分布膠原纖維病灶,有大量的深色膠原沉積,深色膠原相對(duì)面積較正常對(duì)照組明顯增加;與間質(zhì)性肺炎模型組相比,清肺方組及強(qiáng)的松組肺泡間隔及血管、支氣管周邊可見(jiàn)少量深色膠原纖維沉積,膠原相對(duì)面積較間質(zhì)性肺炎模型組明顯減少??梢?jiàn)清肺方及強(qiáng)的松均能抑制BLM誘導(dǎo)的大鼠肺間質(zhì)纖維化。見(jiàn)圖2。

    圖2 各組大鼠肺組織Masson染色(400×)Fig.2 Masson staining in lung tissue of rats in each group(400×)

    2.3 肺組織HYP含量 與正常對(duì)照組比較,各模型組大鼠肺組織HYP含量明顯升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與間質(zhì)性肺炎模型組相比,清肺方組、強(qiáng)的松組大鼠肺組織HYP含量明顯降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。清肺方組與強(qiáng)的松組大鼠肺組織HYP含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說(shuō)明清肺方及強(qiáng)的松均能抑制BLM誘導(dǎo)的大鼠間質(zhì)性肺纖維化。見(jiàn)表1。

    表1 各組大鼠肺組織HYP含量比較(±s,μg·mg-1,n=11)Tab.1 Comparison of the Hydroxyproline content in lung tissue in each group(±s,μg·mg-1,n=11)

    表1 各組大鼠肺組織HYP含量比較(±s,μg·mg-1,n=11)Tab.1 Comparison of the Hydroxyproline content in lung tissue in each group(±s,μg·mg-1,n=11)

    注:與正常對(duì)照組比較,▲▲P<0.01;與間質(zhì)性肺炎模型組比較,**P<0.01。Note:Compared with normal group,▲▲P<0.01;Compared with model group,**P<0.01.

    2.4 肺組織TGF-β1、TNF-α、IL-6檢測(cè)

    2.4.1 肺組織TGF-β1檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較,間質(zhì)性肺炎模型組、清肺方組、強(qiáng)的松組大鼠肺組織勻漿TGF-β1濃度明顯升高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。與間質(zhì)性肺炎模型組比較,清肺方組、強(qiáng)的松組TGF-β1濃度均明顯降低,且差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。清肺方組與強(qiáng)的松組之間肺組織勻漿TGF-β1濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)??梢?jiàn)清肺方及強(qiáng)的松均能抑制BLM誘導(dǎo)的間質(zhì)性肺炎大鼠的肺組織TGF-β1,其抑制大鼠肺纖維化的作用機(jī)制與肺組織TGF-β1有關(guān)。見(jiàn)表2。

    表2 各組大鼠肺組織TGF-β1濃度比較(±s,pg·mL-1,n=11)Tab.2 Comparison of the TGF-β1in lung tissue in each group(±s,pg·mL-1,n=11)

    表2 各組大鼠肺組織TGF-β1濃度比較(±s,pg·mL-1,n=11)Tab.2 Comparison of the TGF-β1in lung tissue in each group(±s,pg·mL-1,n=11)

    注:與正常對(duì)照組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01;與間質(zhì)性肺炎模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。Note:Compared with normal group,▲P<0.05,▲▲P<0.01;Compared with model group,*P<0.05,**P<0.01.

    組別肺組織T G F -β 1濃度正常對(duì)照組間質(zhì)性肺炎模型組強(qiáng)的松組清肺方組2 8 9 9 7 5 8 7 ± 5 6 4 2 . 1 1 3 6 7 5 8 2 . 6 3 1 ± 7 8 4 3 . 2 5 5▲▲4 8 6 5 3 . 6 2 2 ± 9 6 7 3 . 4 6 8▲▲* 4 8 0 3 6 . 5 2 4 ± 8 7 6 6 . 5 9 7▲**

    2.4.2 肺組織TNF-α檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較,間質(zhì)性肺炎模型組、清肺方組、強(qiáng)的松組大鼠肺組織勻漿TNF-α濃度明顯升高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與間質(zhì)性肺炎模型組比較,清肺方組、強(qiáng)的松組TNF-α濃度均明顯降低,且差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。清肺方組與強(qiáng)的松組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示清肺方及強(qiáng)的松均能抑制BLM誘導(dǎo)的間質(zhì)性肺炎大鼠的肺組織TNF-α,其抑制大鼠肺纖維化的作用機(jī)制與肺組織TNF-α有關(guān)。見(jiàn)表3。

    表3 各組大鼠肺組織TNF-α濃度比較(±s,pg·mL-1,n=11)Tab.3 Comparison of the TNF-α in lung tissue in each group(±s,pg·mL-1,n=11)

    表3 各組大鼠肺組織TNF-α濃度比較(±s,pg·mL-1,n=11)Tab.3 Comparison of the TNF-α in lung tissue in each group(±s,pg·mL-1,n=11)

    注:與正常對(duì)照組相比,▲P<0.05;與間質(zhì)性肺炎模型組相比,**P<0.01。Note:Compared with normal group,▲P<0.05;Compared with model group,**P<0.01.

    組別T N F -α濃度正常對(duì)照組間質(zhì)性肺炎模型組強(qiáng)的松組清肺方組1 8 2 . 7 6 9 ± 2 . 8 2 1 1 9 4 . 3 6 3 ± 5 . 7 4 1▲1 8 7 . 9 2 8 ± 4 . 5 5 1▲** 1 8 7 . 6 1 9 ± 2 . 7 5 0▲**

    2.4.3 肺組織IL-6檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較,間質(zhì)性肺炎模型組、清肺方組、強(qiáng)的松組大鼠肺組織勻漿IL-6濃度明顯升高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。與間質(zhì)性肺炎模型組比較,清肺方組、強(qiáng)的松組IL-6濃度均明顯降低,且差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。清肺方組與強(qiáng)的松組之間肺組織勻漿IL-6濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)??梢?jiàn)清肺方及強(qiáng)的松均能抑制BLM誘導(dǎo)的間質(zhì)性肺炎大鼠的肺組織IL-6,其抑制大鼠肺纖維化的作用機(jī)制與肺組織IL-6有關(guān)。見(jiàn)表4。

    表4 各組大鼠肺組織IL-6濃度比較(±s,pg·mL-1,n=11)Tab.4 Comparison of the IL-6 in lung tissue in each group(±s,pg·mL-1,n=11)

    表4 各組大鼠肺組織IL-6濃度比較(±s,pg·mL-1,n=11)Tab.4 Comparison of the IL-6 in lung tissue in each group(±s,pg·mL-1,n=11)

    注:與正常對(duì)照組相比,▲P<0.05,▲▲P<0.01;與間質(zhì)性肺炎模型組相比,**P<0.01。Note:Compared with normal group,▲P<0.05,▲▲P<0.01;compared with model group,**P<0.01.

    組別I L -6濃度正常對(duì)照組間質(zhì)性肺炎模型組強(qiáng)的松組清肺方組3 0 6 7 . 1 7 6 ± 7 2 3 . 4 3 8 6 2 3 4 . 6 3 ± 1 7 6 4 . 3 2 9▲▲5 0 2 2 . 3 9 8 ± 1 3 2 7 . 3 5 7▲▲** 4 7 2 8 . 2 2 9 ± 1 6 7 4 . 7 9 1▲**

    3 討論

    結(jié)締組織病相關(guān)間質(zhì)性肺炎的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。當(dāng)代多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為,結(jié)締組織病合并間質(zhì)性肺炎可以歸為中醫(yī)“肺痹”“肺痿”的范疇[5]。清肺方是根據(jù)導(dǎo)師在臨床治療風(fēng)濕病相關(guān)間質(zhì)性肺炎的經(jīng)驗(yàn)中總結(jié)出的方劑,以“培土生金”為主要治法,太子參益氣健脾,生津潤(rùn)肺;沙參養(yǎng)陰清肺,益胃生津;麥冬養(yǎng)陰潤(rùn)肺,益胃生津;冬瓜子潤(rùn)肺化痰,消癰利水;山慈菇清熱解毒,化痰散結(jié);浙貝母清熱散結(jié),化痰止咳;僵蠶息風(fēng)止痙,祛風(fēng)止痛,化痰散結(jié);石見(jiàn)穿活血化瘀,清熱利濕,散結(jié)消腫;蘆根清熱生津,除煩止嘔,利尿;蒲公英清熱解毒,利尿散結(jié),全方共奏益氣養(yǎng)陰、活血祛瘀、化痰散結(jié)之效。契合結(jié)締組織病伴間質(zhì)性肺炎之氣陰兩虛,痰瘀互結(jié)之病機(jī)?,F(xiàn)代藥理研究證明,太子參[6]、北沙參[7]、麥冬[8]、冬瓜子[9]等均具有一些明顯的抗氧化作用的成分,抑制肺纖維化的形成。

    HYP是膠原纖維中的特有成分,約占膠原蛋白13.4%,其他除彈性蛋白含少量HYP(約1%)外,均不含HYP,因此HYP含量的測(cè)定已成為研究組織膠原代謝的重要方法。膠原是器官纖維化時(shí)細(xì)胞處基質(zhì)(extracellular matrixc,ECM)的主要成分,所以組織中HYP含量能反應(yīng)器官纖維化的程度,可作為衡量其膠原組織代謝的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)中清肺方組大鼠肺組織病理改變明顯輕于間質(zhì)性肺炎模型組,且清肺方組大鼠肺組織HYP含量低于間質(zhì)性肺炎模型組,說(shuō)明清肺方可抑制大鼠肺組織纖維化。

    TGF-β1、TNF-α、IL-6等是與肺間質(zhì)纖維化發(fā)病密切相關(guān)的細(xì)胞因子。TGF-β1可以通過(guò)Smads通路促進(jìn)成纖維細(xì)胞分裂增殖并合成大量膠原蛋白,造成ECM調(diào)節(jié)失衡,因此抑制TGF-β1可以抑制肺纖維化的形成及發(fā)展[10]。同時(shí),TGF-β1和氧化損傷、炎癥因子密切相關(guān)。一項(xiàng)研究報(bào)道[11],TGF-β1可刺激上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞(EMT),從而促進(jìn)纖維化發(fā)展。而且,在TGF-β1等細(xì)胞因子的刺激下,成纖維細(xì)胞分化形成肌成纖維母細(xì)胞(myofibroblast),不僅僅使產(chǎn)生膠原的能力大大提高,合成大量膠原蛋白,而且具有收縮性,造成ECM調(diào)節(jié)失衡[12],肺組織結(jié)構(gòu)破壞[13]。因此抑制TGF-β1可以抑制肺纖維化的形成及發(fā)展。CTD-ILD患者的血清TNF-α濃度高于RA患者,可見(jiàn)CTD并發(fā)ILD也與TNF-α有關(guān),但其發(fā)生機(jī)制尚不明確。有研究表明博來(lái)霉素導(dǎo)致的肺纖維化與TNF-α有關(guān)[14]。IL-6由T、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和幾種腫瘤細(xì)胞等產(chǎn)生。現(xiàn)在認(rèn)為是一種多功能細(xì)胞因子,可調(diào)節(jié)急性期反應(yīng)、免疫應(yīng)答和炎癥。臨床及實(shí)驗(yàn)結(jié)果均證實(shí)在間質(zhì)性肺炎中IL-6是一種促炎癥反應(yīng)因子。在患有間質(zhì)性肺炎的人和動(dòng)物中均發(fā)現(xiàn),IL-6的含量增多。Madam等[15]研究證明血漿中IL-1,IL-6,IL-8和IL-10的水平與CTD-ILD相關(guān)。肺組織中TGF-β1、TNF-α和IL-6的水平逐漸升高,這就說(shuō)明肺組織中這些因子表達(dá)比其血漿水平更加直接反應(yīng)問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明清肺方對(duì)博來(lái)霉素誘導(dǎo)的大鼠間質(zhì)性肺炎的作用機(jī)制與肺組織TGF-β1、TNF-α、IL-6濃度有關(guān)。由此可見(jiàn),清肺方降低TGF-β1、TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子的表達(dá),可能是減輕間質(zhì)性肺炎、抗肺纖維化的分子機(jī)制。

    [1]Tachikawa R,Tomii K,Ucda H,et al.Clinical features and outcome of acute exacerbation of interstitial pneumonia: collagen vasculardiseases-related versusidiopathic[J]. Respiration,2012,83(1):20-27.

    [2] Fernandez PER,Daniels CE,Schroeder DR,et al.Incidence,prevalence,and clinical course of idiopathic pul-monary fibrosis:a population-based study[J].Chest,2010, 137(1):129-137.

    [3] Tanaka N,Kim J S,Newell J D,et al.Rheumatoid arthritis-related lung diseases:CT findings[J].Radiology,2004, 232(1):81-91.

    [4] Cavagna L,Monti S,Urosso V,et al.The multifaceted aspects of interstitial lung disease in rheumatoid arthritis[J]. BioMed Research International,2013,2013(4):759-760.

    [5] 崔紅生,邱冬梅,武維屏.肺間質(zhì)纖維化從絡(luò)病辨治思路[N].中國(guó)中醫(yī)藥報(bào),2004-06-03. CUI Hongsheng,QIU Dongmei,WU Weipin.Pulmonary interstitial fibrosis from the differentiation and treatment of collateral disease[N].Chinese Journal of traditional Chinese Medicine,2004-06-03.

    [6] 余國(guó)奠,劉峻,陳喻,等.6個(gè)不同產(chǎn)地的太子參對(duì)超氧自由基清除作用的研究[J].中國(guó)野生植物資源,2000,19(4):7-9,19. YU Guodian,LIU Jun,CHEN Yu,et al.Effect of Radix Pseudostellariae from Six different regions on superoxide radical scavenging[J].Chinese Wild Plant Resources,2000, 19(4):7-9,19.

    [7] Ng TB,Liu F,Wang HX.The antioxidant effects of aqueous and organic extract of panaxquin quefolium , panaxnotogiseng,codonopsis pilosula,pseudostellaria heterophylla and glehnia littoralis[J].J Ethno,2004,93(2):285-288.

    [8] 袁春麗,孫立,袁勝濤,等.麥冬有效成分的藥理活性及作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志,2013,22(21):2496-2502. YUAN Chunli,SUN Li,YUAN Shengtao,et al.Advances and mechanisms of effective in pharmacological activities and constituents of Ophiopogon japonicus[J].Chinese Journal of New Drugs,2013,22(21):2496-2502.

    [9] 周清,江浩,高云濤,等.冬瓜籽水提物抗氧化作用研究[J].微量元素與健康研究,2010,27(5):22-23. ZHOU Qing,JIANG Hao,GAO Yuntao,et al.Study on Antioxidation of water extract of wax gourd seed[J].Studies of Trace Elements and Health,2010,27(5):22-23.

    [10]Scotton CJ,Chambers RC.Molecular targets in pulmonary fibrosis:the myofibroblast in focus[J].Chest,2007,132(4): 1311-1321.

    [11]Camara J,Jarai G.Epithelial-mesenchymal transition in primary human bronchial epithelial cells is Smad-dependent and enhanced by fibronectin and TNF-alpha[J].Fibrogenesis Tissue Repair,2010,3(1):2.

    [12]楊雅茹,黃艷,李俊.TGF-β1介導(dǎo)的Smads與ERK通路在肺纖維化中的作用及相互關(guān)系[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2010, 26(5):561-563. YANG Yaru, HUANG Yan,LI Jun.The relationship between TGF-β1 mediated smads and ERK in the progression of pulmonary fibrosis[J].Chinese Pharmacological Bulletin,2010,26(5):561-563.

    [13]Phan SH.Biology of fibroblasts and myofibroblasts[J].Proc Am Thorac Soc,2008,5(3):334-337.

    [14]Klingsberg RC,Mutsaers SE,Joseph A.Current clinical trials for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis[J]. Respirology,2010,15(1):19-31.

    [15]Mohd-Noor N,Mohd-Shahrir MS,Shahid MS,et al.Clinical and high resolution computed tomography characteristics of patients with rheumatoid arthritis lung disease[J].Int J Rheum Dis,2009,12(2):136-144.

    Experimental Study on the Effect of Qingfei Decoction in Antifibrosis in Rats with Connective Tissue Disease Related Interstitial Pneumonia

    QIAN Kang1,F(xiàn)AN Yongsheng21.Hangzhou First Peoples`Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310006),China;2.Zhejiang Chinese Medical University

    [Objective]To establish a rat model of connective tissue disease associated interstitial pneumonia induced by bleomycin,and explore the effect of Qingfei Decoction on interstitial pneumonia and its effect on antifibrosis.[Methods]48 male SD rats,weight 180~200g.All the rats were fed adaptivelly for one week and the rat model of interstitial lung disease were established by means of pour 5mg·kg-1BLM into trachea.Divided these rats into 4 groups: the normal control group,the interstitial pneumonia model group,the predmisone group and the Qingfei Decoction group.In addition,each group 12 rats. After 28 days’medication,compare the pathological difference between Qingfei Decoction group with the interstitial pneumonia model group,the predmisone group and the normal control group,and the difference in the expressions of TNF-α,IL-6,TGF-β1in lung tissue,and the expression of hydroxyproline in lung tissue.[Result]①Pathological staining showed that:compared with the normal control group,the destruction of lung tissue structure of rats pneumonia,severe inflammatory cell infiltration,fibrous tissue hyperplasia massive consolidation,alveolar distribution of collagen fiber lesions in model groups;compared with interstitial pneumonia model group,Qingfei Decoction group reduced lung tissue damage,reduce inflammation cell infiltration,fibrous tissue hyperplasia reduced collagen relative area decreased compared with model group.②Compared with normal control group,the lung tissue of HYP rats was significantly increased,and the difference was statistically significant the model group(P<0.01);Compared with interstitial pneumonia in the model group,the content of HYP in lung tissue of rats Qingfei Decoction group decreased significantly,and the difference was statistically significant(P<0.01).③Compared with normal control group,the model group of rat lung tissue IL-6,TNF-alpha,TGF-beta1concentration increased significantly(P<0.05,P<0.01);compared with the model group,interstitial pneumonia,Qingfeifang lung tissue homogenate TNF-alpha,TGF-beta 1,IL-6 concentration decreased significantly(P<0.05,P<0.01).[Conclusion]1.Qingfei Decoction has inhibition effect to the bleomycin induced interstitial pneumonia.2.The treatment mechanism of Qingfei Decoction to BLM-ILD maybe related to TNF-α,IL-6,TGF-β1.

    Qingfei Prescription;connective tissue disease;interstitial lung disease;antifibrosis;hydroxyproline;tumor necrosis factor-α;transforming growth factor-β1;interleukin-6

    R331 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1005-5509(2017)10-0784-06

    10.16466/j.issn1005-5509.2017.10.002

    杭州市衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目(2017A02)

    Fund project:Program on medical and health technology of Hangzhou(2017A02)

    范永升,E-mail:fyszjtcm@163.com

    2017-05-08)

    猜你喜歡
    方組強(qiáng)的松間質(zhì)性
    門(mén)純德臨證思維淺析——從時(shí)間醫(yī)學(xué)角度探究“聯(lián)合方組”作用機(jī)制
    具有自身免疫特征的間質(zhì)性肺炎的臨床特點(diǎn)
    認(rèn)識(shí)間質(zhì)性肺炎
    祛痰、化瘀和祛痰化瘀方對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及凋亡功能的影響?
    活血益氣方及其拆方對(duì)大鼠心肌梗死邊緣區(qū)Spred1及血管新生的影響
    霉酚酸酯和環(huán)磷酰胺治療IV型伴V型狼瘡性腎炎的臨床療效比較
    特發(fā)性間質(zhì)性肺炎中醫(yī)內(nèi)科治療臨床分析
    強(qiáng)的松長(zhǎng)期應(yīng)用的不良反應(yīng)及合理應(yīng)用
    補(bǔ)腎解毒方對(duì)輻射小鼠外周血白細(xì)胞及脾臟NF-κBp65的影響
    138例結(jié)締組織病相關(guān)性間質(zhì)性肺疾病臨床特點(diǎn)的回顧性分析
    日日撸夜夜添| 另类亚洲欧美激情| 亚洲欧美精品自产自拍| 十分钟在线观看高清视频www| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久人人爽人人片av| 老女人水多毛片| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 一级毛片 在线播放| 日日摸夜夜添夜夜爱| 激情视频va一区二区三区| av视频免费观看在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 人人澡人人妻人| 一级a爱视频在线免费观看| av线在线观看网站| 精品酒店卫生间| 观看av在线不卡| 久久ye,这里只有精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 婷婷色综合www| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 最近的中文字幕免费完整| 如何舔出高潮| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产免费又黄又爽又色| 国产不卡av网站在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 18禁动态无遮挡网站| 男女午夜视频在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 老汉色av国产亚洲站长工具| 人体艺术视频欧美日本| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 中文天堂在线官网| 久久99精品国语久久久| 欧美日韩成人在线一区二区| 成人黄色视频免费在线看| 最近最新中文字幕免费大全7| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| √禁漫天堂资源中文www| 国产av国产精品国产| 丰满少妇做爰视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | av免费观看日本| 十分钟在线观看高清视频www| av天堂久久9| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲美女搞黄在线观看| 成年动漫av网址| 国产高清不卡午夜福利| 各种免费的搞黄视频| 性色avwww在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 国产福利在线免费观看视频| 丰满乱子伦码专区| 国产日韩欧美视频二区| 在线天堂中文资源库| 中文字幕人妻熟女乱码| 一级毛片我不卡| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品av久久久久免费| 日日撸夜夜添| 九色亚洲精品在线播放| 日韩电影二区| 久久99精品国语久久久| 国产av国产精品国产| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产一区二区激情短视频 | h视频一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91 | 久久精品久久精品一区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲av电影在线进入| 搡女人真爽免费视频火全软件| 午夜福利视频精品| 少妇精品久久久久久久| 久久人妻熟女aⅴ| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 日本欧美国产在线视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 精品少妇内射三级| 美女午夜性视频免费| 精品福利永久在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 麻豆乱淫一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 曰老女人黄片| 在线精品无人区一区二区三| 国产麻豆69| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久欧美国产精品| 亚洲美女黄色视频免费看| 天美传媒精品一区二区| 老女人水多毛片| 在线看a的网站| 国产成人精品婷婷| 亚洲一区中文字幕在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 最新中文字幕久久久久| 五月天丁香电影| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 高清不卡的av网站| 老女人水多毛片| 欧美精品一区二区大全| 精品第一国产精品| 伊人久久国产一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 日日爽夜夜爽网站| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品自拍成人| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美少妇被猛烈插入视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 91精品三级在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产在视频线精品| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲一区二区三区欧美精品| 毛片一级片免费看久久久久| 精品一品国产午夜福利视频| 中文欧美无线码| 毛片一级片免费看久久久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 建设人人有责人人尽责人人享有的| 99re6热这里在线精品视频| 欧美bdsm另类| 一本久久精品| 午夜免费观看性视频| 一区二区三区精品91| 91在线精品国自产拍蜜月| 极品少妇高潮喷水抽搐| 只有这里有精品99| 亚洲国产欧美网| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品自拍成人| 9191精品国产免费久久| 久热这里只有精品99| 在线观看免费日韩欧美大片| av国产久精品久网站免费入址| 男女无遮挡免费网站观看| av在线观看视频网站免费| 一区二区三区四区激情视频| 成年动漫av网址| 国产一区二区三区av在线| 丝袜美足系列| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲av成人精品一二三区| 一本大道久久a久久精品| 欧美变态另类bdsm刘玥| 性少妇av在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 韩国高清视频一区二区三区| 熟女电影av网| 天堂8中文在线网| 老熟女久久久| 久久99精品国语久久久| 春色校园在线视频观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲精品乱久久久久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人亚洲精品一区在线观看| 免费av中文字幕在线| 国产一级毛片在线| 国产男女超爽视频在线观看| av天堂久久9| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 99久久精品国产国产毛片| 考比视频在线观看| 国产一区二区在线观看av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久久久精品人妻al黑| √禁漫天堂资源中文www| 黄色 视频免费看| 免费观看在线日韩| 久久 成人 亚洲| 一级爰片在线观看| 99香蕉大伊视频| 国产精品久久久久成人av| 热99久久久久精品小说推荐| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久人人爽人人片av| 午夜福利在线免费观看网站| 两个人看的免费小视频| 免费少妇av软件| 大香蕉久久成人网| 亚洲一区中文字幕在线| 黄色一级大片看看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久久久久国产电影| 亚洲av国产av综合av卡| 婷婷色综合www| 亚洲男人天堂网一区| 最近最新中文字幕免费大全7| 日韩一区二区三区影片| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久久久精品精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩伦理黄色片| 曰老女人黄片| 香蕉丝袜av| 黄片播放在线免费| 久久这里有精品视频免费| 亚洲欧洲国产日韩| 蜜桃国产av成人99| 国产精品 国内视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 18+在线观看网站| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 在线观看免费视频网站a站| 久久久久精品久久久久真实原创| 老司机影院成人| 黄色配什么色好看| √禁漫天堂资源中文www| 韩国精品一区二区三区| 午夜av观看不卡| 欧美人与性动交α欧美软件| 伦理电影大哥的女人| 色哟哟·www| 国产在线一区二区三区精| 婷婷色麻豆天堂久久| 日韩欧美精品免费久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 多毛熟女@视频| 亚洲精品一区蜜桃| 99香蕉大伊视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 日本av手机在线免费观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 大香蕉久久成人网| 欧美日韩精品网址| 免费观看在线日韩| 午夜老司机福利剧场| 伦精品一区二区三区| 高清av免费在线| 老熟女久久久| 男人操女人黄网站| 韩国高清视频一区二区三区| 男女边摸边吃奶| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品一区二区在线不卡| 久热这里只有精品99| 亚洲av.av天堂| 久久久久久免费高清国产稀缺| 在线看a的网站| 国产精品久久久久久av不卡| 黄色配什么色好看| 日本av手机在线免费观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | videos熟女内射| 国产熟女午夜一区二区三区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲欧洲日产国产| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲国产av新网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲四区av| 大香蕉久久网| 久久久久久久精品精品| 欧美+日韩+精品| 男女边吃奶边做爰视频| 精品视频人人做人人爽| 少妇的丰满在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美精品亚洲一区二区| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 我的亚洲天堂| 伦精品一区二区三区| 一级毛片电影观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品国产一区二区久久| 一区二区三区激情视频| a级毛片在线看网站| 我要看黄色一级片免费的| 国产在线视频一区二区| 在线观看国产h片| 午夜影院在线不卡| 十分钟在线观看高清视频www| 香蕉精品网在线| a级毛片在线看网站| 我要看黄色一级片免费的| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲,一卡二卡三卡| 熟女av电影| 国产精品免费大片| 亚洲三级黄色毛片| 国产男人的电影天堂91| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲美女视频黄频| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲美女黄色视频免费看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品 国内视频| av不卡在线播放| 色网站视频免费| 一二三四中文在线观看免费高清| 九草在线视频观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品不卡视频一区二区| 91久久精品国产一区二区三区| 波多野结衣av一区二区av| 久久久久精品久久久久真实原创| 免费黄网站久久成人精品| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 视频区图区小说| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲天堂av无毛| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲精品自拍成人| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品偷伦视频观看了| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久99一区二区三区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产av码专区亚洲av| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲av电影在线进入| 国产成人a∨麻豆精品| 国产探花极品一区二区| 中文字幕av电影在线播放| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品二区激情视频| 色视频在线一区二区三区| 亚洲国产精品999| 国产精品免费大片| 考比视频在线观看| 中国国产av一级| 考比视频在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲国产精品一区三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 黄片播放在线免费| 成年人免费黄色播放视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 五月开心婷婷网| 国产av国产精品国产| www.av在线官网国产| 高清不卡的av网站| 免费高清在线观看日韩| 美女福利国产在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 99精国产麻豆久久婷婷| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久影院123| 国产精品不卡视频一区二区| 日本av手机在线免费观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久久久精品人妻al黑| 国产成人a∨麻豆精品| 90打野战视频偷拍视频| 丰满少妇做爰视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲精品日本国产第一区| 男女下面插进去视频免费观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲精品视频女| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲精品在线美女| 久久久久精品久久久久真实原创| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲av.av天堂| 欧美av亚洲av综合av国产av | 下体分泌物呈黄色| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久精品久久久久久久性| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品蜜桃在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 大片电影免费在线观看免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久国内精品自在自线图片| 免费观看av网站的网址| 一二三四在线观看免费中文在| 香蕉丝袜av| 女性被躁到高潮视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 少妇熟女欧美另类| 制服诱惑二区| 亚洲av在线观看美女高潮| 色吧在线观看| 久热这里只有精品99| 搡老乐熟女国产| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产成人精品一,二区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 日韩电影二区| 亚洲国产看品久久| 国产人伦9x9x在线观看 | 午夜福利影视在线免费观看| 中文天堂在线官网| 亚洲成人一二三区av| 日韩伦理黄色片| 国产日韩欧美亚洲二区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 精品人妻在线不人妻| 伦理电影免费视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产在视频线精品| 男女啪啪激烈高潮av片| 飞空精品影院首页| 成人国语在线视频| 午夜福利一区二区在线看| 久久综合国产亚洲精品| 五月开心婷婷网| 亚洲精品国产av成人精品| 中文天堂在线官网| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲综合色惰| 久热这里只有精品99| 天堂8中文在线网| 久久久久久久久久久免费av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 91国产中文字幕| 成年av动漫网址| 少妇的丰满在线观看| 考比视频在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产精品av久久久久免费| 亚洲国产色片| 精品酒店卫生间| 久久精品国产综合久久久| 满18在线观看网站| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲av成人精品一二三区| 午夜影院在线不卡| 中国国产av一级| 伦理电影大哥的女人| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 一区二区三区乱码不卡18| 久久99一区二区三区| 国产乱来视频区| 最黄视频免费看| 在线观看人妻少妇| 中文字幕最新亚洲高清| videosex国产| av女优亚洲男人天堂| 街头女战士在线观看网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲男人天堂网一区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男女下面插进去视频免费观看| 国产精品一二三区在线看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费少妇av软件| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲成色77777| 美女国产高潮福利片在线看| 男人操女人黄网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 成人漫画全彩无遮挡| 90打野战视频偷拍视频| a 毛片基地| 男人操女人黄网站| 一级爰片在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲成人av在线免费| 日韩 亚洲 欧美在线| 99香蕉大伊视频| 一级爰片在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 九色亚洲精品在线播放| 最新中文字幕久久久久| 精品一品国产午夜福利视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 制服丝袜香蕉在线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产午夜精品一二区理论片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 男女下面插进去视频免费观看| 超碰97精品在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 国产精品国产av在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 满18在线观看网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产男人的电影天堂91| 亚洲精品美女久久av网站| 日本欧美国产在线视频| 男人操女人黄网站| 美女午夜性视频免费| 观看美女的网站| 国产精品av久久久久免费| 少妇熟女欧美另类| 桃花免费在线播放| 国产成人午夜福利电影在线观看| 99九九在线精品视频| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲av在线观看美女高潮| 男女国产视频网站| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久精品国产自在天天线| 成年动漫av网址| 黄色毛片三级朝国网站| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久久久久久国产电影| 欧美中文综合在线视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 乱人伦中国视频| 久久久精品94久久精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久人人爽人人片av| 日日撸夜夜添| 国产成人一区二区在线| av国产久精品久网站免费入址| 丝袜人妻中文字幕| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲成人一二三区av| 亚洲国产欧美在线一区| www.av在线官网国产| 欧美日韩精品网址| 亚洲天堂av无毛| 男女无遮挡免费网站观看| 久久 成人 亚洲| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲伊人色综图| 青春草亚洲视频在线观看| 日本免费在线观看一区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日韩中文字幕视频在线看片| 成年人免费黄色播放视频| 国产 精品1| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 两个人免费观看高清视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 婷婷色麻豆天堂久久| 在线观看人妻少妇| 日本av手机在线免费观看| 人成视频在线观看免费观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 免费高清在线观看日韩| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线观看三级黄色| 看十八女毛片水多多多| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精品久久蜜臀av无| 亚洲国产日韩一区二区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 99久久中文字幕三级久久日本| 91精品三级在线观看| 丝袜脚勾引网站| 极品人妻少妇av视频| 亚洲,欧美,日韩| 下体分泌物呈黄色| 美女国产视频在线观看| 人妻一区二区av| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩精品有码人妻一区| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品熟女久久久久浪| 人人妻人人澡人人看| 亚洲第一青青草原| 老司机影院成人| 日本wwww免费看| 亚洲,欧美,日韩| 黄色视频在线播放观看不卡| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 免费观看av网站的网址| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久99一区二区三区| 99久久人妻综合| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲av在线观看美女高潮| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 电影成人av| tube8黄色片| 午夜福利视频精品| 国产精品成人在线|