藏藥印度獐芽菜石油醚部位化學(xué)成分及體外活性研究

尤蓉蓉+陳雪晴+何丹丹+黃長高+金陽+錢士輝+鞠建明+范君婷

[摘要] 采用各種柱色譜以及重結(jié)晶等方法對印度獐芽菜石油醚萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分研究。通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)分析鑒定了15個(gè)化合物，包括8個(gè)酮，2個(gè)三萜，1個(gè)裂環(huán)烯醚萜，1個(gè)香豆素和3個(gè)其他類化合物，分別為1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮（1）、1-羥基-3，7，8-三甲氧基酮（2）、1，8-二羥基-3，5，7-三甲氧基酮（3）、1-羥基-3，5，7，8-四甲氧基酮（4）、1，5，8-三羥基-3-甲氧基酮（5）、1-羥基-3，7-二甲氧基酮（6）、1，8-二羥基-3，7-二甲氧基酮（7）、1-羥基-3，5-二甲氧基酮（8）、古柯二醇（9）、齊墩果酸（10）、（±）-龍膽內(nèi)酯（11）、東莨菪內(nèi)酯（12）、芥子醛（13）、丁香醛（14）、β-谷甾醇（15）。其中化合物3，4，9，11～14為首次從該植物中分離得到，化合物9和12為首次從獐芽菜屬中發(fā)現(xiàn)。對5個(gè)量大酮1，2，5，7，8進(jìn)行體外活性測試，結(jié)果顯示其在最高濃度50 μmol·L-1對胰腺癌細(xì)胞SW1990和BxPC-3的增殖和過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的人臍靜脈融合細(xì)胞EA.hy926氧化應(yīng)激損傷均無明顯作用。

[關(guān)鍵詞] 印度獐芽菜； 酮； 石油醚部位； 化學(xué)成分； 胰腺癌細(xì)胞； 氧化應(yīng)激損傷

[Abstract] The present work is to study the chemical constituents from petroleum ether fraction of Tibetan medicine Swertia chirayita by column chromatography and recrystallization. The structures were identified by physical and chemical properties and spectral data as swerchirin （1）， decussatin （2）， 1，8-dihydroxy-3，5，7-trimethoxyxanthone （3）， 1-hydroxy-3，5，7，8-tetramethoxyxanthone （4）， bellidifolin （5）， 1-hydroxy-3， 7-dimethoxyxanthone （6）， methylswertianin （7）， 1-hydroxy-3，5-dimethoxyxanthone （8）， erythrodiol （9）， oleanolic acid （10）， gnetiolactone （11）， scopoletin （12）， sinapaldehyde （13）， syringaldehyde （14）， and β-sitosterol （15）. Compounds 3， 4， 9， 11-14 were isolated from S. chirayita for the first time. Compounds 9 and 12 were firstly isolated from the genus Swertia. The cytotoxic activities of compounds 1， 2， 5， 7 and 8 against human pancreatic cancer cell lines SW1990 and BxPC-3，and the protective effects of these compounds against hydrogen peroxide （H2O2）-induced oxidative stress in human endothelium-derived EA.hy926 were investigated in vitro. The results showed no obvious effect at the high concentration of 50 μmol·L-1

[Key words] Swertia chirayita； xanthone； petroleum ether fraction； chemical constituents； pancreatic cancer cells； oxidative stress damage

印度獐牙菜Swertia chirayita （Roxb. ex Fleming） H. Karst.，藏語名“甲蒂”，為龍膽科植物印度獐牙菜的干燥全草，主要分布在克什米爾至不丹的喜馬拉雅溫帶地區(qū)，主產(chǎn)于印度、尼泊爾和不丹，是藏醫(yī)藥治療肝膽疾病的首選藥物，在印度傳統(tǒng)醫(yī)藥中也廣泛應(yīng)用^[1]。藏藥經(jīng)典著作《月王藥診》、《四部醫(yī)典》、《晶珠本草》及《藍(lán)琉璃·論說續(xù)》等均收載其清肝利膽、退諸熱的功效，臨床上用于治療肝炎，肝硬化，膽囊炎，膽結(jié)石等疾病^[2]。目前印度獐牙菜化學(xué)成分研究很少，主要報(bào)道了酮、環(huán)烯醚萜及少量三萜、甾醇等^[3-5]?，F(xiàn)代藥理作用研究表明其具有抗肝炎、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、降血糖等作用^[6-8]。為了進(jìn)一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究應(yīng)用現(xiàn)代分離分析技術(shù)，對其85%乙醇提取物的石油醚萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分分離，得到并鑒定15個(gè)化合物，包括8個(gè)酮，表明酮類是石油醚部位的主要成分。另外，7個(gè)化合物從該種首次分離，2個(gè)化合物從獐芽菜屬首次分離。本研究還對其中5個(gè)主要酮進(jìn)行體外腫瘤細(xì)胞毒和抗氧化應(yīng)激損傷的活性篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無明顯作用。

1 材料

Agilent Technologies 6410 Triple quad LC/MS液質(zhì)聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；BRUKER AVANCE Ⅲ-600型核磁共振儀（德國Bruker 公司）；SGW-1型自動旋光儀（上海儀電物理光學(xué)儀器有限公司）；LNC自動純化系統(tǒng)（美國LNC）；Sephadex LH-20（美國Pharmacia公司）；MCI填充材料（Wharton Scientific，南京元寶峰醫(yī)藥科技有限公司）；薄層色譜硅膠GF254（青島海洋化工廠）；柱色譜硅膠（青島美高集團(tuán)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A （上海亞榮生化儀器廠）；DMEM（美國Hyclone公司）；MTT（美國Thermo公司）；胎牛血清（以色列Biological industries公司）；Multiskan FC全自動酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）；細(xì)胞株SW1990細(xì)胞、BxPC-3細(xì)胞和EA.hy926細(xì)胞購自中科院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。常規(guī)試劑均為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

印度獐芽菜購自西藏多雄拉藏藥有限公司（批號201411011），經(jīng)江蘇省中醫(yī)藥研究院錢士輝研究員鑒定為龍膽科植物印度獐牙菜S. chirayita的干燥全草。藥材標(biāo)本存放于江蘇省中醫(yī)藥研究院標(biāo)本室。

2 提取與分離

印度獐芽菜的干燥全草30 kg，粉粹后用10倍量的85%乙醇回流提取2次，每次3 h，提取液經(jīng)減壓回收乙醇，濃縮得浸膏約3 kg。將浸膏混懸于水中，分別用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑濃縮得到石油醚部位52 g、醋酸乙酯部位432 g、正丁醇部位1 094 g。其中石油醚部位浸膏（52 g），經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（100∶1～0∶1）梯度洗脫，得到18個(gè)組分（Fr.1～Fr.18）。Fr.10（7.4 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（20∶1～0∶1）梯度洗脫，得到13個(gè)組分（Fr.10.1～Fr.10.13）。Fr.10.10（1.0 g）經(jīng)甲醇重結(jié)晶后，得到化合物1（610 mg），母液減壓濃縮（0.3 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-二氯甲烷（3∶1）等度洗脫，得到化合物7（50 mg）和8（80 mg）。Fr.10.11（0.35 g），經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（15∶1～0∶1）梯度洗脫，得到化合物15（35 mg）。Fr.10.13（20 mg）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物6（8 mg）。Fr.12（2.3 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（60∶1～10∶1）梯度洗脫，得到14個(gè)組分（Fr.12.1～Fr.12.14）。Fr.12.9（1.2 g）經(jīng)MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（40∶60～100∶0）梯度洗脫，得到15個(gè)組分（Fr.12.9.1～Fr.12.9.15）。Fr.12.9.4（0.4 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-醋酸乙酯（6∶1～0∶1）梯度洗脫，得到化合物2（25 mg）和9（5 mg）。Fr.13（0.3 g）經(jīng)MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（40∶60～100∶0）梯度洗脫，得到4個(gè)組分（Fr.13.1～Fr.13.4）。Fr.13.2（50 mg）為甲醇-水（60∶40）流分，經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-二氯甲烷（3∶1～1∶1）梯度洗脫，得到化合物3（8 mg）和4（10 mg）。Fr.13.3（0.1 g）為甲醇-水（80∶20）流分的白色絮狀物，過濾干燥得到化合物10（20 mg）。Fr.15（2.8 g）經(jīng)MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（0∶100～100∶0）梯度洗脫后，得到6個(gè)組分（Fr.15.1～Fr.15.6）。Fr.15.4（0.7 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（10∶1～0∶1）梯度洗脫，得到化合物5（120 mg）。Fr.16（1.1 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（50∶1～1∶1）梯度洗脫，得到3個(gè)組分（Fr.16.1～Fr.16.3）。Fr.16.2（0.2 g）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物14（10 mg）。Fr.16.3（0.1 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（5∶1～1∶1）洗脫，得到化合物13（5 mg）。Fr.17（0.5 g）經(jīng)MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（0∶100～100∶0）梯度洗脫后，得到9個(gè)組份（Fr.17.1～Fr.17.9）。Fr.17.1（150 mg）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（0∶1～1∶1）洗脫，得到3個(gè)組份（Fr.17.1.1～Fr.17.1.3）。Fr.17.1.2（56 mg）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（5∶1）等度洗脫，得到化合物11（7 mg）。Fr.17.7（35 mg）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物12（10 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 287 [M-H]-。1H-NMR （CDCl3，600 MHz） δ： 11.92 （1H，s，1-OH），11.33 （1H，s，8-OH），7.16 （1H，d，J=8.9 Hz，H-6），6.65 （1H，d，J=8.9 Hz，H-7），6.48 （1H，d，J=2.0 Hz，H-4），6.28 （1H，d，J=2.0 Hz，H-2），3.89 （3H，s，5-OCH3），3.82 （3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR （CDCl3，150 MHz） δ： 161.8 （C-1），96.9 （C-2），166.4 （C-3），92.1 （C-4），156.7 （C-4a），144.3 （C-4b），138.8 （C-5），119.2 （C-6），108.3 （C-7），153.0 （C-8），107.1 （C-8a），101.8 （C-8b），183.5 （C-9），55.0（3-OCH3），56.3（5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[9-10]對比，鑒定為1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮。

化合物2 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 303 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 13.19（1H，s，1-OH），7.26（1H，d，J=9.2 Hz，H-6），7.09（1H，d，J=9.2 Hz，H-5），6.26（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.23（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.93（3H，s，8-OCH3），3.86（3H，s，7-OCH3），3.80（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 164.0（C-1），97.0（C-2），166.6（C-3），92.2（C-4），157.3（C-4a），151.1（C-4b），113.0（C-5），120.5（C-6），149.4（C-7），149.0（C-8），115.9（C-8a），104.2（C-8b），181.4（C-9），56.0（3-OCH3），57.3（7-OCH3），62.0（8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[9]對比，鑒定為1-羥基-3，7，8-三甲氧基酮。

化合物3 黃色粉末。ESI-MS m/z 319 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 11.97（1H，s，1-OH），11.57（1H，s，8-OH），7.03（1H，s，H-6），6.50（1H，d，J=2.1 Hz，H-4），6.33（1H，d，J=2.1 Hz，H-2），3.97（3H，s，-OCH3），3.95（3H，s，-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 162.8（C-1），97.7（C-2），167.5（C-3），92.9（C-4），157.9（C-4a），139.3（C-4b），139.1（C-5），108.0（C-6），142.0（C-7），143.4（C-8），108.2（C-8a），102.5（C-8b），184.9（C-9），57.5（-OCH3），56.0（-OCH3），57.8（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[11-12]對比，鑒定為1，8-二羥基-3，5，7-三甲氧基酮。

化合物4 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 333 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 13.20（1H，s，1-OH），6.98（1H，s，H-6），6.47（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.32（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），4.01（3H，s，8-OCH3），3.95（3H，s，5-OCH3），3.93（3H，s，7-OCH3），3.87（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 163.6（C-1），97.4（C-2），166.4（C-3），92.1（C-4），156.9（C-4a），141.5（C-4b），148.7（C-5），105.2（C-6），141.1（C-7），144.5（C-8），116.1（C-8a），104.2（C-8b），181.1（C-9），55.8（3-OCH3），56.9（5-OCH3），57.7（7-OCH3），61.9（8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[13]對比，鑒定為1-羥基-3，5，7，8-四甲氧基酮。

化合物5 黃色粉末。ESI-MS m/z 273 [M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz） δ： 11.88（1H，s，1-OH），11.05（1H，s，8-OH），9.68（1H，s，5-OH），7.24（1H，d，J=8.8 Hz，H-6），6.62（1H，d，J=8.8 Hz，H-7），6.58（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.37（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.88（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz） δ： 161.9（C-1），97.5（C-2），167.1（C-3），93.0（C-4），157.4（C-4a），143.4（C-4b），137.3（C-5），123.8（C-6），109.5（C-7），151.8（C-8），107.5（C-8a），102.1（C-8b），184.1（C-9），56.2（3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[14]對比，鑒定為1，5，8-三羥基-3-甲氧基酮。

化合物6 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 273 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.88（1H，s，1-OH），7.61（1H，d，J=3.0 Hz，H-8），7.37（1H，d，J=9.1 Hz，H-5），7.31（1H，dd，J=9.1，3.0 Hz，H-6），6.43（1H，d，J=2.1 Hz，H-4），6.36（1H，d，J=2.1 Hz，H-2），3.91（3H，s，7-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 163.4（C-1），97.0（C-2），166.6（C-3），92.5（C-4），157.8（C-4a），156.0（C-4b），119.0（C-5），124.9（C-6），150.8（C-7），105.2（C-8），120.9（C-8a），103.7（C-8b），180.6（C-9），55.8（3-OCH3），55.9（7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[15]對比，鑒定為1-羥基-3，7-二甲氧基酮。

化合物7 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 289[M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.09（1H，s，8-OH），11.95（1H，s，1-OH），7.25（1H，d，J=9.0 Hz，H-6），6.83（1H，d，J=9.0 Hz，H-5），6.37（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.31（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.93（3H，s，7-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 162.9（C-1），97.2（C-2），167.4（C-3），92.9（C-4），158.1（C-4a），149.6（C-4b），105.6（C-5），120.3（C-6），142.9（C-7），150.1（C-8），107.7（C-8a），102.3（C-8b），185.0（C-9），55.9（3-OCH3），57.0（7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[9，16]對比，鑒定為1，8-二羥基-3，7-二甲氧基酮。

化合物8 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 273[M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.82（1H，s，1-OH），7.80（1H，br d，J=7.9 Hz，H-8），7.29（1H，t，J=7.9 Hz，H-7），7.22（1H，br d，J=7.9 Hz，H-6），6.55（1H，d，J=1.8 Hz，H-4），6.35（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），4.02（3H，s，3-OCH3），3.88（3H，s，5-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ：163.3（C-1），97.5（C-2），166.7（C-3），92.8（C-4），157.5（C-4a），146.2（C-4b），148.2（C-5），115.6（C-6），123.6（C-7），116.7（C-8），121.5（C-8a），103.9（C-8b），180.8（C-9），55.3（3-OCH3），56.4（5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[17]對比，鑒定為1-羥基-3，5-二甲氧基酮。

化合物9 白色粉末。ESI-MS m/z 443 [M+H]+，487.4 [M+COO]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.19（1H，t，J=3.4 Hz，H-12），3.55（1H，d，J=11.0 Hz，H-28a），3.21（1H，d，J=11.0 Hz，H-28b），3.21（1H，m，H-3），1.16（3H，s，H-27），0.99（3H，s，H-24），0.94（3H，s，H-26），0.93（3H，s，H-25），0.89（3H，s，H-30），0.87（3H，s，H-29），0.79（3H，s，H-23）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 38.6（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），38.8（C-4），55.1（C-5），18.3（C-6），32.5（C-7），39.8（C-8），47.6（C-9），36.9（C-10），23.5（C-11），122.4（C-12），144.2（C-13），41.7（C-14），25.5（C-15），22.0（C-16），36.9（C-17），42.3（C-18），46.4（C-19），30.9（C-20），34.1（C-21），31.0（C-22），28.1（C-23），15.6（C-24），15.5（C-25），16.7（C-26），25.9（C-27），69.7（C-28），33.2（C-29），23.6（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[18]對比，鑒定為古柯二醇。

化合物10 白色粉末。ESI-MS m/z 455 [M-H]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.21（1H，t，J=3.1 Hz，H-12），3.15（1H，dd，J=11.3，4.1 Hz，H-3），2.75（1H，dd，J=13.6，3.6 Hz，H-18），1.06（3H，s，H-27），0.91（3H，s，H-23），0.86（3H，s，H-30），0.84（3H，s，H-25），0.83（3H，s，H-29），0.70（3H，s，H-24），0.68（3H，s，H-26）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 38.6（C-1），27.3（C-2），79.2（C-3），38.9（C-4），55.4（C-5），18.5（C-6），32.6（C-7），39.4（C-8），47.8（C-9），37.3（C-10），23.1（C-11），122.8（C-12），143.8（C-13），41.8（C-14），27.9（C-15），23.6（C-16），46.7（C-17），41.1（C-18），46.1（C-19），30.9（C-20），34.0（C-21），32.8（C-22），28.3（C-23），15.8（C-24），15.5（C-25），17.3（C-26），26.1（C-27），183.8（C-28），33.3（C-29），23.8（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[19]對比，鑒定為齊墩果酸。

化合物11 無色方晶（氯仿），[α]27D 0.0（c 0.1，CHCl3）。ESI-MS m/z 211 [M-H]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.25（1H，br d，J=16.4 Hz，H-3a），5.02（1H，dt，J=16.4，3.0，H-3b），4.53（1H，m，H-7a），4.48（1H，m，H-7b），3.57（1H，s，9-OH），2.83（1H，m，H-6a），2.66（1H，m，H-6b），1.87（1H，dq，J=14.8，7.5 Hz，H-8a），1.73（1H，dq，J=14.8，7.5 Hz，H-8b），1.01（3H，t，J=7.5 Hz，H-10）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 172.8（C-1），66.9（C-3），119.9（C-4），153.7（C-5），22.8（C-6），66.8（C-7），31.0（C-8），72.4（C-9），7.9（C-10），161.8（C-11）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[20]對比，鑒定為（R）-（-）-龍膽內(nèi)酯和（S）-（+）-龍膽內(nèi)酯的混晶[（±）-龍膽內(nèi)酯]。

化合物12 白色粉末。ESI-MS m/z 191 [M-H]-。1H-NMR（CD3OD，600 MHz） δ： 7.85（1H，d，J=9.4 Hz，H-4），7.11（1H，s，H-5），6.76（1H，s，H-8），6.20（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），3.90（3H，s，6-OCH3）； 13C-NMR（CD3OD，150 MHz） δ： 164.1（C-2），112.6（C-3），146.1（C-4），112.6（C-4a），109.9（C-5），147.1（C-6），152.9（C-7），103.9（C-8），151.4（C-8a），56.8（6-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[21]對比，鑒定為東莨菪內(nèi)酯。

化合物13 白色無定型粉末。ESI-MS m/z 207 [M-H]-。1H-NMR （C5D5N，600 MHz） δ： 9.87（1H，d，J=7.8 Hz，H-9），7.54（1H，d，J=15.7 Hz，H-7），7.14（2H，s，H-2，H-6），6.97（1H，dd，J=15.7，7.8 Hz，H-8），3.87（6H，s，3-OCH3，5-OCH3）； 13C-NMR（C5D5N，150 MHz） δ： 125.5（C-1），107.7（C-2，6），149.8（C-3，5），142.0（C-4），154.7（C-7），127.0（C-8），194.0（C-9），56.9（3-OCH3，5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[22]對比，鑒定為芥子醛。

化合物14 白色粉末。ESI-MS m/z 181 [M-H]-，183 [M+H]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz） δ： 9.74（1H，s，H-7），7.22（2H，s，H-2，6），3.91（6H，s，3-OCH3，5-OCH3）； 13C-NMR（CD3OD，150 MHz） δ：129.2（C-1），108.2（C-2，6），149.6（C-3，5），143.7（C-4），56.8（3-OCH3，5-OCH3），192.9（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道^[23]對比，鑒定為丁香醛。

化合物15 白色粉末，易溶于氯仿，難溶于甲醇，熔點(diǎn)mp136～138 ℃，TLC鑒定，在3種溶劑系統(tǒng)下與β-谷甾醇對照品在相同Rf處呈現(xiàn)相同的斑點(diǎn)，10%硫酸乙醇溶液顯紫紅色斑點(diǎn)，混合熔點(diǎn)不下降，鑒定為β-谷甾醇。

4 體外抗腫瘤活性

MTT法考察化合物1，2，5，7，8對胰腺癌細(xì)胞SW1990和BxPC-3的增殖的影響。取對數(shù)生長期的胰腺癌SW1990或BxPC-3細(xì)胞按照每孔約5×103個(gè)接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。待細(xì)胞貼壁后棄去舊培養(yǎng)基，設(shè)置3組：①溶劑對照組：加入含有0.1% DMSO的DMEM培養(yǎng)基；②陽性對照組：阿霉素；③給藥組：加入含有終濃度為1，5，10，25，50 μmol·L-1的各化合物的培養(yǎng)基，每組6個(gè)復(fù)孔。置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h后，每孔加入20 μL終濃度為5 g·L-1的MTT溶液，置于培養(yǎng)箱孵育4 h，小心吸出孔內(nèi)的上清液，每孔加入150 μL DMSO，水平搖床輕度振蕩10～15 min，待孔內(nèi)藍(lán)紫色甲臜結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀以570 nm波長為檢測波長，測定各孔吸光度（A），重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，按公式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率：抑制率（IR）=（對照組A-給藥組A）/對照組A×100%。結(jié)果顯示化合物1，2，5，7，8對胰腺癌細(xì)胞SW1990和BxPC-3在所測試的終濃度范圍內(nèi)均無抑制作用（IR<50%）。

5 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷

MTT法考察化合物1，2，5，7，8對H2O2誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響。按照文獻(xiàn)[24]建立H2O2誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞過氧化損傷模型，設(shè)置對照組和H2O2組篩選出最佳造模濃度為300 μmol·L-1和造模時(shí)間為24 h（細(xì)胞存活率為54.1%）。取對數(shù)生長期的EA.hy926細(xì)胞按照每孔約1×104個(gè)接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，培養(yǎng)24 h，設(shè)置3個(gè)組：①溶劑對照組：含0.1% DMSO的DMEM培養(yǎng)基；②H2O2模型組：含300 μmol·L-1 H2O2的培養(yǎng)基；③給藥組：含300 μmol·L-1H2O2和不同濃度的化合物（1，5，10，25，50 μmol·L-1）的培養(yǎng)基。按照4項(xiàng)所述MTT法，測定各孔吸光度（A），按公式細(xì)胞存活率=（實(shí)驗(yàn)組A /對照組A）×100%，計(jì)算EA.hy926細(xì)胞存活率。結(jié)果顯示化合物1，2，5，7，8對H2O2誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷無明顯影響。

6 討論

本研究對藏藥印度獐芽菜85%乙醇提取物的石油醚萃取部位進(jìn)行分離純化，得到15個(gè)化合物，其中8個(gè)為酮類化合物，表明酮類化合物是石油醚部位的主要化學(xué)成分，可能是其具有保肝，降血糖等藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)^{[4-5，25-26]}。本研究中對5個(gè)量大酮進(jìn)行體外抗腫瘤和抗氧化應(yīng)激損傷活性篩選，發(fā)現(xiàn)其在最高濃度為50 μmol·L-1時(shí)均無明顯作用。因此，有關(guān)酮類化合物的其他藥理活性有待進(jìn)一步研究。

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[責(zé)任編輯 丁廣治]