復(fù)合羥固醇無機小牛骨塊修復(fù)犬下頜骨臨界骨缺損的組織學(xué)研究*

胡曉，劉威，吳王喜，桂媛媛，周磊

[南方醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院（廣東省口腔醫(yī)院），廣東 廣州 510280]

復(fù)合羥固醇無機小牛骨塊修復(fù)犬下頜骨臨界骨缺損的組織學(xué)研究*

胡曉，劉威，吳王喜，桂媛媛，周磊

[南方醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院（廣東省口腔醫(yī)院），廣東 廣州 510280]

目的比較復(fù)合羥固醇無機小牛骨塊（羥固醇骨塊）和無機小牛骨粉在比格犬下頜骨臨界骨缺損動物模型早期愈合階段的成骨效應(yīng)。方法選取健康雄性比格犬4只，拔除雙側(cè)下頜第3和第4前磨牙以及第1磨牙（P3-M1）后，雙側(cè)下頜骨各復(fù)制2個5 mm×10 mm×10 mm標準化箱型臨界骨缺損。4周愈合期后，按半口對照設(shè)計，隨機將羥固醇骨塊和無機小牛骨粉植入骨缺損。術(shù)后4周處死，切取標本制作石蠟和硬組織切片，行組織學(xué)觀察及組織形態(tài)學(xué)測量。結(jié)果實驗動物愈合良好，羥固醇骨塊組及無機小牛骨粉組均見臨界骨缺損邊緣及骨材料-宿主骨交界處明顯的成骨細胞及新骨形成。HE染色組織形態(tài)學(xué)測量結(jié)果顯示羥固醇骨塊組和無機小牛骨粉組新生骨面積比分別為（37.22±2.16）%和（34.70±2.66）%，兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；羥固醇骨塊組成骨細胞數(shù)[（31.13±2.85）]與無機小牛骨粉組[（24.88±2.95）]比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。硬組織切片亞甲基藍-酸性品紅染色組織形態(tài)學(xué)測量結(jié)果顯示羥固醇骨塊及無機小牛骨粉骨材料新生骨面積相對百分比分別為（20.13±1.32）%和（19.28±0.82）%，骨材料相對存留率分別為（30.80±1.16）%和（29.69±1.12）%，兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論羥固醇骨塊在犬下頜骨臨界骨缺損早期骨愈合階段具有類似于小牛骨粉的成骨效果。由于羥固醇骨塊具有良好的空間維持能力，更適合于臨床大面積骨缺損的修復(fù)。

小牛骨；骨誘導(dǎo)性；成骨細胞；骨缺損

Abstract:ObjectiveTo compare osteogenic effect of oxysterols coated bovine bone blocks(OBB)and bovine bone particles(BBP)in critical-sized dog mandible defects at the early stage of bone healing.MethodsFour Beagle dogs were selected.Following extraction of the third and fourth mandibular premolars as well as the first molar(P3-M1),two standardized box-shaped defects(5×10×10 mm)were created at the alveolar ridge in each quadrant(4 defects per animal,a total of 16).After 4 weeks of healing period,the defects were reshaped and randomly allocated in a split-mouth design to either OBB(8 defects)or BBP(8 defects)group.All animals were euthanized after 4 weeks.The specimens were dehydrated for hematoxylin and eosin staining and non-decalcified sectioning.ResultsThe postoperative healing was good.OBB exhibited abundant osteoblasts and new bone formation in the defect area. Histomorphometrical analysis(HE staining)revealed that the percentage of new bone was(37.22±2.16)%in theOBB group and(34.70±2.66)%in the BBP group,there was no significant difference between the two groups(P＞0.05);and the number of osteoblasts was(31.13±2.85)in the OBB group which was significantly larger than(24.88±2.95)in the BBP group(P＜0.05).Histomorphometrical analysis(methylene blue-acidic fuchsin staining)revealed that the rate of new bone formation was(20.13±1.32)%in the OBB group and(19.28±0.82)%in the BBP group, the degradation rate was(30.80±1.16)%in the OBB group and(29.69±1.12)%in the BBP group,the differences were not statistically significant(P＞0.05).ConclusionsOBB have similar osteogenic effect as BBP at the early stage of bone healing.Because OBB have good space maintaining property,they are more suitable for the repair of large bone defects.

Keywords:bovine bone;osteoinductivity;osteoblast;bone defect

創(chuàng)傷、腫瘤、疾病等導(dǎo)致的嚴重骨缺損給口腔種植及骨外科臨床修復(fù)重建帶來巨大挑戰(zhàn)。骨移植已經(jīng)成為臨床治療骨缺損最常用的手段，自體骨移植被認為是骨移植與修復(fù)治療的金標準[1]。然而由于自體骨移植來源有限，附加手術(shù)損傷，增加患者不適感，其臨床應(yīng)用受限。因此，人工骨移植替代材料的使用已經(jīng)成為臨床骨缺損修復(fù)重建最常用的一種方法。無機小牛骨粉因其具有天然多孔結(jié)構(gòu)及與人骨相似的理化結(jié)構(gòu)，良好的骨引導(dǎo)性能和生物相容性，獲得了較好的臨床效果[2]。但是，顆粒狀骨移植材料穩(wěn)定性和空間維持能力欠佳，不適用于較大范圍的骨缺損，而塊狀骨移植材料即使使用在大面積缺損中也具有極強的易塑性和空間維持能力。但無機小牛骨塊至今仍未能在臨床上廣泛應(yīng)用，有研究發(fā)現(xiàn)[3]骨缺損修復(fù)過程中，塊狀骨移植材料較顆粒狀骨移植材料表現(xiàn)出較差的骨引導(dǎo)性和骨誘導(dǎo)性，因此成骨效果不甚理想。鑒于此，提高骨塊移植的成骨效應(yīng)，有利于提高其在臨床大面積骨缺損修復(fù)治療中的應(yīng)用。已有大量的體外和動物實驗報道了羥固醇在誘導(dǎo)成骨細胞分化和成骨方面的促進作用，但目前尚無無機小牛骨塊作為支架材料負載羥固醇后在體內(nèi)成骨效應(yīng)觀察的相關(guān)報道。本實驗以無機小牛骨塊為支架材料，通過物理吸附的方法復(fù)合羥固醇，期望其具有較好的骨修復(fù)能力。本文旨在比較復(fù)合羥固醇無機小牛骨塊（羥固醇骨塊）及無機小牛骨粉在比格犬的下頜骨臨界骨缺損動物模型早期骨愈合階段的成骨效應(yīng)，為羥固醇骨塊的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取成年雄性比格犬4只，犬齡（16.8±2.4）歲，體重12～15 kg，由廣東省實驗動物監(jiān)測所提供。健康良好，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實驗，實驗期間喂食軟食。實驗過程中對動物的處置符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標準。

1.2 實驗材料

無機小牛骨塊、無機小牛骨粉（煙臺正海生物技術(shù)有限公司），羥固醇（美國Sigma-Aldrich公司）。

1.3 羥固醇與無機小牛骨塊的體外復(fù)合

將無機小牛骨塊浸入配制成的羥固醇/乙醇溶液（1 mg/ml）中，非共價物理吸附羥固醇，靜置1/2 h后低溫?zé)o菌保存。

1.4 實驗方法

1.4.1 第1階段 速眠新肌內(nèi)注射（肌注）鎮(zhèn)靜（0.2 ml/kg），3%戊巴比妥那溶液（0.3 ml/kg）靜脈注射全身麻醉成功后，常規(guī)術(shù)區(qū)備皮、消毒、鋪巾。分根微創(chuàng)拔除雙側(cè)下頜第3和第4前磨牙以及第1磨牙（P3～M1），沿牙槽嵴頂縱向切開黏骨膜，翻瓣，0.9%無菌生理鹽水冷卻下，使用裂鉆、小球鉆定位并切透雙側(cè)下頜骨的頰側(cè)骨皮質(zhì)，使用骨鑿劈開骨皮質(zhì)塊，完整保留舌側(cè)骨板，碳化硅磨頭塑形。下頜兩邊分別制備出2個標準化箱型臨界骨缺損（4個/只，n=16），大小5 mm×10 mm×10 mm（頰舌向距離為5 mm，牙合齦向距離10 mm，近遠中向距離為10 mm），缺損間隔5 mm；黏骨膜瓣復(fù)位，絲線間斷縫合。

1.4.2 第2階段 術(shù)后愈合4周，全身麻醉下重新沿牙槽嵴頂縱向切開黏骨膜，翻瓣，去除獲得的慢性骨缺損內(nèi)的肉芽組織并重新塑形，按照半口對照設(shè)計，隨機一側(cè)植入羥固醇骨塊（n=8），另一側(cè)植入無機小牛骨粉（n=8），制作減張切口，黏骨膜瓣復(fù)位，絲線間斷縫合。術(shù)后每天軟食喂養(yǎng)，術(shù)后7 d肌注青霉素（80×106u/d），口腔局部碘甘油上藥，觀察比格犬生活狀態(tài)、術(shù)區(qū)創(chuàng)口愈合情況。處死前13和14 d皮下注射10 mg/ml鹽酸四環(huán)素?zé)晒鈩?0 mg/kg），處死前3和4 d注射10 mg/ml鈣黃綠素?zé)晒鈩?0 mg/kg）。

1.5 檢測指標

2次手術(shù)后4周處死實驗動物，進行如下指標觀察。

1.5.1 大體標本觀察 觀察骨材料移植區(qū)牙槽嵴的外形，及有無骨移植材料暴露、脫落、黏膜紅腫、感染等表現(xiàn)。

1.5.2 HE染色組織學(xué)檢測及組織形態(tài)學(xué)分析 切取完整植入術(shù)區(qū)和周圍2 mm骨組織，10%甲醛固定。將固定好的標本頰舌向正中切割為兩半，一半制作硬組織切片，另一半制作脫鈣切片。14%EDTA脫鈣后，蘇木精-伊紅染色（HE），光鏡觀察。每個標本取3張脫鈣切片，每張切片在高倍鏡（×200）隨機選取3個視野用Image Pro Plus 6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)作骨形態(tài)計量學(xué)分析。①新生骨面積比（新生骨面積/計量總面積×100%）；對每張切片的3個視野進行圖像采集并計量新生骨面積，累計總和計算新生骨面積，每個標本取3張切片的平均值。②為了檢測羥固醇在成骨過程中可能的作用，對成骨細胞計數(shù)。對每張切片的3個視野進行圖像采集并計量成骨細胞數(shù)，取3個視野平均值，每個標本取3張切片的平均值。

1.5.3 硬組織切片熒光觀察 激光共聚焦顯微鏡低倍鏡（×20）對硬組織切片進行熒光檢測，觀察兩組新生骨的分布情況。

1.5.4 硬組織切片亞甲基藍-酸性品紅染色組織學(xué)檢測及組織形態(tài)學(xué)分析 每個標本取2張亞甲基藍-酸性品紅染色硬組織切片，每張切片在高倍鏡（×100）觀察并隨機選取3個視野用Image Pro Plus 6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)作骨形態(tài)計量學(xué)分析，每張切片取3個視野平均值，每個標本取2張切片的平均值。①新生骨面積相對百分比（新生骨面積/測量區(qū)域面積×100%）；②骨材料相對存留率（未降解骨代用品存留面積/測量區(qū)域面積×100%）。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.2統(tǒng)計軟件對組織形態(tài)學(xué)測量數(shù)據(jù)進行分析，結(jié)果均以均數(shù)±標準差（±s）表示，對組織形態(tài)學(xué)測量數(shù)據(jù)進行正態(tài)分布和方差齊性檢驗，若正態(tài)分布和方差齊則采用兩獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大體情況

實驗動物愈合良好，各組均見牙槽骨豐滿，黏膜完整，未見紅腫、暴露、感染等表現(xiàn)。

2.2 組織形態(tài)學(xué)測量結(jié)果

2.2.1 組織學(xué)觀察結(jié)果 4周時，臨界骨缺損邊緣及骨材料-宿主骨交界處見明顯新骨形成，骨材料起到支架作用，可見新骨由缺損邊緣向骨材料內(nèi)部生長表現(xiàn)，大量新生不成熟的骨組織和纖維組織覆蓋骨缺損。高倍鏡下見新生骨組織主要是不規(guī)則的編織骨，在新生骨小梁周圍可見成排的成骨細胞圍繞。同時，可以見到不成熟的新生血管。在羥固醇骨塊組新生骨小梁和成骨細胞表現(xiàn)的更為密集。見圖1。

2.2.2 新生骨面積比 羥固醇骨塊及無機小牛骨粉新生骨面積比分別為（37.22±2.16）%和（34.70±2.66）%，統(tǒng)計數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，Levene's test檢查：F=0.076，方差齊；經(jīng)兩獨立樣本t檢驗，兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.057，P=0.057）。

2.2.3 成骨細胞數(shù) 羥固醇骨塊及無機小牛骨粉成骨細胞數(shù)分別為（31.13±2.85）和（24.88±2.95）個，統(tǒng)計數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，Levene's test檢查：F= 0.096，方差齊；經(jīng)兩獨立樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.310，P=0.001），羥固醇骨塊成骨細胞數(shù)高于無機小牛骨粉。

2.3 硬組織切片熒光觀察結(jié)果

原宿主舊骨無明顯標記，新生骨組織螯合鹽酸四環(huán)素呈現(xiàn)黃色，螯合鈣黃綠色呈現(xiàn)亮綠色，羥固醇骨塊和無機小牛骨粉組在4周時均可見熒光呈網(wǎng)狀分布在骨材料周邊尤其是近宿主骨-骨材料交界面處，而在骨材料內(nèi)部也可見少量不均勻的熒光分布。熒光結(jié)果提示：臨界骨缺損中心新生骨少于骨缺損-骨材料交界處。見圖2。

2.4 硬組織切片亞甲基藍-酸性品紅染色組織形態(tài)學(xué)測量結(jié)果

2.4.1 組織學(xué)觀察結(jié)果 羥固醇骨塊和無機小牛骨粉組在骨缺損內(nèi)部仍可見大量未被降解的淡紅染色骨材料，在骨缺損邊緣及骨材料表面可見被染為深紅色的新生骨組織，而缺損中心部位深紅色染色區(qū)域較少，深紅染色新生骨組織外圍可見細胞核深藍染色的成骨細胞。骨材料孔隙周圍還可見纖維組織充填。見圖3。

2.4.2 新生骨面積相對百分比 羥固醇骨塊及無機小牛骨粉新生骨面積相對百分比分別為（20.13±1.32）%和（19.28±0.82）%，統(tǒng)計數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，Levene's test檢查：F=3.089，方差齊；經(jīng)兩獨立樣本t檢驗，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.533，P=0.148）。

2.4.3 骨材料相對存留率 羥固醇骨塊及無機小牛骨粉骨材料相對存留率分別為（30.80±1.16）%和（29.69±1.12）%，統(tǒng)計數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，Levene'stest檢查：F=0.211，方差齊；經(jīng)兩獨立樣本t檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.965，P=0.07）。

圖1 組織學(xué)觀察結(jié)果 （HE染色×200）

圖2 硬組織切片熒光觀察結(jié)果 （×20）

圖3 硬組織切片亞甲基藍-酸性品紅染色觀察結(jié)果（×100）

3 討論

近年來，已有大量文獻報道了羥固醇在兔顱頂骨的臨界骨缺損中具有促進新骨生成的作用。臨界骨缺損是指無法自行愈合的關(guān)鍵尺寸骨缺損，更適用于較大范圍骨缺損的塊狀人工骨的移植研究[4]。本實驗采用比格犬的臨界骨缺損模型，因其具有與人類相似的結(jié)構(gòu)特征和愈合能力，且骨量充分，能準確制備標準的骨缺損模型[5]。同時采用無機小牛骨粉作為對照，能更好地為羥固醇骨塊的臨床使用提供理論依據(jù)。

大量針對無機小牛骨材料負載生長因子或小分子藥物利用其骨誘導(dǎo)性從而促進其成骨效果方面的研究取得了較好的效果。SCHWARZ等[6]在比格犬動物模型中比較顆粒狀和塊狀無機小牛骨負載rhGDF-5和rhBMP-2的成骨效果。研究結(jié)果顯示復(fù)合rhBMP-2的骨移植材料較復(fù)合rhGDF-5的骨移植材料表現(xiàn)出增多的新骨生成。BMP-2是一種存在于骨基質(zhì)中的小分子多肽，能誘導(dǎo)成骨細胞分化和骨細胞成熟[7]，但是其來源有限，價格昂貴，半衰期短，易代謝流失，為了獲得較好的成骨效果常需大劑量使用[8]，有引起不良反應(yīng)的可能。而羥固醇是一種小分子藥物，作為膽固醇內(nèi)源性細胞生物合成途徑的中間產(chǎn)物，具有高度穩(wěn)定性和骨誘導(dǎo)性[9]，理論上具有誘導(dǎo)骨細胞分化以提高塊狀骨移植材料成骨效應(yīng)的可能。

體外研究證實羥固醇可能通過非標準Wnt通路和刺猬通路促進成骨細胞增殖和分化[10]，激活的Wnt通路還可能參與維持成體組織的動態(tài)平衡[11]。本實驗組織形態(tài)學(xué)測量結(jié)果顯示，羥固醇骨塊較無機小牛骨粉表現(xiàn)出明顯增多的成骨細胞數(shù)，提示了羥固醇在骨愈合早期對成骨細胞的增殖可能具有促進作用。本實驗結(jié)果說明羥固醇骨塊具有與無機小牛骨粉相似的促進早期骨缺損修復(fù)的能力。MARIE等[12]指出成骨細胞的招募在成骨過程中具有關(guān)鍵作用，新骨的形成主要取決于成骨細胞的數(shù)量而非成骨細胞的活性。從以上實驗結(jié)果分析，羥固醇有可能通過促進成骨細胞的增殖、分化，從而有助于塊狀骨的成骨過程，但具體的作用機制還需進一步研究分析。AGHALOO[13]也報道了相似的實驗結(jié)果，骨髓間充質(zhì)干細胞與羥固醇接觸的時間越長，誘導(dǎo)成骨分化的能力越強，鼠顱骨缺損動物實驗也證實羥固醇實驗組的成骨較空白對照組快而明顯。

硬組織切片的熒光檢測結(jié)果表明，兩組的新生骨主要分布于骨缺損邊緣和骨材料-宿主骨交界處，骨缺損中心成骨明顯減少。已有較多研究發(fā)現(xiàn)邊緣和中心成骨不均勻分布的現(xiàn)象易發(fā)生在臨界骨缺損的骨愈合過程中[14-15]?？赡苁怯捎谂R界骨缺損中心部位常缺乏營養(yǎng)和氧氣，因而影響血管和骨組織的新生，進而出現(xiàn)缺損中心和外周成骨不均勻的現(xiàn)象[4，16-17]。由于不理想的局部微環(huán)境，即使已有文獻證實羥固醇具有良好的骨誘導(dǎo)性，也難以在骨缺損中心區(qū)域發(fā)揮其作用。除此之外，羥固醇從骨移植材料快速釋放也可能是骨缺損中心成骨較少的原因之一。藥物或生長因子長時有效的緩慢釋放意味著延長藥物作用時間[18]。研究發(fā)現(xiàn)骨缺損的愈合常起源于骨缺損邊緣然后隨時間延長逐漸向中心生長[19]。而羥固醇局部快速釋放后，難以長期維持有效濃度，發(fā)揮穩(wěn)定的骨誘導(dǎo)作用，因此在臨界骨缺損中的成骨作用較為局限。HOKUGO[20]研究證實生物材料中緩釋的羥固醇可以提高其在兔顱骨缺損中的成骨效果。

多種因素影響均會影響骨移植材料的降解，包括骨移植材料的成分、物質(zhì)結(jié)構(gòu)、孔隙率大小、植入?yún)^(qū)的局部環(huán)境以及動物類別等，雖然本實驗進行的是骨愈合早期初步的觀察研究，不能全面評估羥固醇骨塊的吸收及降解過程，但是本實驗結(jié)果提示羥固醇骨塊和無機小牛骨粉均有一定程度的降解，且負載羥固醇并未影響小牛骨塊的降解。

塊狀骨移植物在臨床中的使用具有顆粒狀材料無法比擬的優(yōu)勢，可以維持形態(tài)并且更加穩(wěn)定，而顆粒狀材料容易受壓變形，并不適合在大范圍的缺損及咬合受力區(qū)應(yīng)用[21]。因此，提高塊狀骨移植物在大面積骨缺損中的成骨效果具有重要的臨床意義。本實驗研究了羥固醇骨塊在比格犬的臨界骨缺損早期愈合階段的成骨效應(yīng)，觀察到明顯增多的成骨細胞數(shù)量，這一結(jié)果可能與羥固醇能促進動物體內(nèi)早期骨缺損愈合過程中成骨細胞的功能活動有關(guān)，同時本實驗結(jié)果表明在羥固醇骨塊在臨界骨缺損的修復(fù)治療時，具有與無機小牛骨粉相似的成骨效應(yīng)，鑒于其具有良好的形態(tài)和空間維持能力，更適合于大面積骨缺損及咬合受力區(qū)的修復(fù)，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。由于本實驗是首次將羥固醇骨塊應(yīng)用于比格犬的臨界骨缺損修復(fù)，難以參考相關(guān)文獻確定合適的復(fù)合羥固醇的劑量范圍，本實驗雖然證實了體外復(fù)合羥固醇/乙醇溶液劑量的有效性，但無法確定其即為最理想的濃度值，提高復(fù)合的羥固醇劑量是否可能提高其成骨效應(yīng)以及有關(guān)的成骨機制、中晚期的成骨效應(yīng)及羥固醇的緩釋是否能發(fā)揮更好的促成骨作用，需進行進一步的研究證實。

[1]MOEST T,WEHRHAN F,LUTZ R,et al.Extra-oral defect augmentation using autologous,bovine and equine bone blocks: A preclinical histomorphometrical comparative study[J].Journal of Cranio-Maxillo-Facial Surgery,2015,43(4):559-566.

[2]JAMJOOM A,COHEN R E.Grafts for ridge preservation[J]. Journal of Functional Biomaterials,2015,6(3):833-848.

[3]ROCCHIETTA I,SIMION M,HOFFMANN M,et al.Vertical bone augmentation with an autogenousblock orparticlesin combination with guided bone regeneration:a clinical and histological preliminary study in humans[J].Clin Implant Dent Relat Res,2015,18(1):19-29.

[4]DU B,GAO Y,DENG Y,et al.Local delivery of rhVEGF165 through biocoated nHA/coralblock graftsin critical-sized dog mandible defects:a histological study at the early stages of bone healing[J].International Journal of Clinical&Experimental Medicine, 2014,8(4):4940-4953.

[5]CHANG R C S,KAO A S Y.Biomechanical and histological studies of particulate hydroxylapatite implanted in femur bone defects of adult dogs[J].International Journal of Oral&Maxillofacial Surgery,2000,29(1):54-61.

[6]SCHWARZ F,ROTHAMEL D,HERTEN M,et al.Lateral ridge augmentation using particulated or block bone substitutes biocoated with rhGDF-5 and rhBMP-2:animmunohistochemical study in dogs[J].Clinical Oral Implants Research,2008,19(7): 642-652.

[7]吳凱,羅一,周琳,等.BMP-2結(jié)合納米羥基磷灰石/高分子聚合物修復(fù)兔橈骨缺損的實驗研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2012,22 (27):36-40.

[8]TANG T T,XU X L,DAI K R,et al.Ectopic bone formation of human bone morphogenetic protein-2 gene transfected goat bone marrow-derived mesenchymal stem cells in nude mice[J]. Chinese Journal of Traumatology(English Edition),2005,8(1):3-7.

[9]KHA H T,BASSERI B,SHOUHED D,et al.Oxysterols regulate differentiation of mesenchymal stem cells:pro-bone and anti-fat[J]. Journal of Bone&Mineral Research the Official Journal of the American Society for Bone& Mineral Research,2004,19(5): 830.

[10]AMANTEA C,KIM W V,TETRADIS S,et al.Oxysterol-induced osteogenic differentiation of marrow stromal cells is regulated by Dkk-1 inhibitable and PI3-kinase mediated signaling[J]. Journal of Cellular Biochemistry,2008,105(2):424-436.

[11]文軍,徐帥妹,劉影.Wnt通路抑制劑XAV-939對牙髓干細胞成脂分化的影響[J].口腔疾病防治,2016,24(8):459-463.

[12]MARIE P J.Human endosteal osteoblastic cells:relationship with bone formation[J].Calcified Tissue International,1995,1 (Suppl 1):S13-16.

[13]AGHALOO T L,AMANTEA C M,COWAN C M,et al.Oxysterols enhance osteoblast differentiation in vitro and bone healing in vivo[J].Journal of Orthopaedic Research Official Publication ofthe Orthopaedic Research Society,2007,25(11): 1488-1497.

[14]SCHWARZ F,FERRARI D,BALIC E,et al.Lateral ridgeaugmentation using equine-and bovine-derived cancellous bone blocks:a feasibility study in dogs[J].Clinical Oral Implants Research,2010,21(9):904-912.

[15]YUE X,NIU M,ZHANG T,et al.In vivo evaluation of a simvastatin-loaded nanostructured lipid carrier for bone tissue regeneration[J].Nanotechnology,2016,27(11):115708.

[16]MALDA J,ROUWKEMA J,MARTENS D E,et al.Oxygen gradients in tissue-engineered Pegt/Pbt cartilaginous constructs: measurement and modeling[J].Biotechnology&Bioengineering, 2004,86(1):9-18.

[17]MALDA J,KLEIN T J,UPTON Z.The roles of hypoxia in the in vitro engineering of tissues[J].Tissue Engineering,2007,13 (9):2153.

[18]葉漫文,方煒,石勇,等.京尼平交聯(lián)絲素蛋白-殼聚糖緩釋微球的制備與表征[J].口腔疾病防治,2016,24(2):79-87.

[19]SCHWARZ F,FERRARI D,PODOLSKY L,et al.Initial pattern of angiogenesis and bone formation following lateral ridge augmentation using rhPDGF and guided bone regeneration:an immunohistochemical study in dogs[J].Clinical Oral Implants Research,2010,21(1):90-99.

[20]HOKUGO A,SORICE S,PARHAMI F,et al.A novel oxysterol promotes bone regeneration in rabbit cranial bone defects[J]. Journal of Tissue Engineering&Regenerative Medicine,2013, 10(7):591.

[21]姚鐘雄,徐淑蘭,王朝,等.塊狀珊瑚羥基磷灰石重建下頜骨高度缺損的臨床效果[J].廣東醫(yī)學(xué),2014(8):1229-1232.

（張西倩 編輯）

Oxysterols coated bovine bone blocks used in critical-sized defects of mandible:a histomorphometric study in dogs*

Xiao Hu,Wei Liu,Wang-xi Wu,Yuan-yuan Gui,Lei Zhou
[Stomatological Hospital of Southern Medical University(Guangdong Provincial Stomatological Hospital),Guangzhou,Guangdong 510280,China]

R-332

A

2016-11-23

國家自然科學(xué)基金（No：81170998）；廣東省醫(yī)學(xué)科研基金（No：C2012034）

周磊，E-mail：zho668@263.net；Tel：020-84233801

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.22.001

1005-8982（2017）22-0001-06