百葉尖的生藥學(xué)研究

周培軍+李學(xué)芳+符德歡+蒲星宇+朱高倩

摘要：目的對(duì)百葉尖的根莖進(jìn)行生藥學(xué)研究，為其鑒別及進(jìn)一步研究開發(fā)提供參考依據(jù)。方法采用來(lái)源鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別及薄層色譜鑒別方法。結(jié)果原植物形態(tài)主要特征為葉片為一回羽狀復(fù)葉，倒披針形，側(cè)生羽片約30-50對(duì)，葉片向基部逐漸收縮。藥材性狀主要特征為根莖表面密被黃棕色、線狀披針形鱗片。顯微鑒別主要特征為根莖橫切面中柱為雙韌管狀中柱，分體中柱“U”型，木質(zhì)部由管胞組成，其內(nèi)外均有韌皮部及內(nèi)皮層；粉末特征淀粉粒甚多，單粒圓形或橢圓形，臍點(diǎn)點(diǎn)狀或裂縫狀，層紋不明顯；復(fù)粒由2～3個(gè)分粒組成；梯紋及網(wǎng)紋管胞多見。系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)表明其可能含有皂苷、還原糖、苷類、黃酮類、內(nèi)脂、甾醇、酚性成分、萜類、揮發(fā)油等成分；薄層色譜中，藥材在相應(yīng)位置上顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，重現(xiàn)性較好。結(jié)論所得結(jié)果可為百葉尖的鑒定、該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及進(jìn)一步深入研究和開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：百葉尖；生藥學(xué)；薄層色譜

中圖分類號(hào)：R932文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2017）09-0065-03

【Abstract】Objective： To make pharmacognostical study of rhizomes of Pteris vittata and to provide reference for their identification and further research and development. Methods： Source identification， character identification， microscopic identification， physical and chemical identification and thin layer chromatography were used. Results： The main features of original plant leaves were bout pinnately compound leaf， oblanceolate， lateral leaflets about 30-50 pairs， with its leaf blade gradual contraction to the base. The main features of medicinal properties for the rhizome surface were densely yellow-brown and linear lanceolate scales. The main features of microscopic identification were the mid-column of root cross-section was bicollateral siphonostele， U-type splitting column， and xylem consisted of trachea， phloem and endocarp both inside and outside. The powder characteristics were more starch grain， granular or oval， umbilical point-like or crack-like， with unclear annular striation. Complex particles constitute from 2 to 3 sub-compositions， with more ladder and reticular cells. Systemic pre-test showed it may contain saponins， reducing sugar， glycosides， flavonoids， lactones， sterols， phenolic compounds， terpenoids， volatile oil and other components. In thin layer chromatography， the medical materials displayed the same fluorescent spots in corresponding position， with better reproducibility. Conclusion： The results can provide some theoretical basis for the identification and quality standard making of Pteris vittata and its further research and development.

【Key words】Pteris vittata， pharmacognosy， thin layer chromatography

百葉尖為鳳尾蕨科植物蜈蚣草（Pteris vittata Linnaeus）的根莖。廣布于秦嶺以南各省區(qū)及臺(tái)灣，云南各地均有分布，生于海拔3100 m以下的林緣或路邊石縫中[1]。又名蜈蚣蕨、小貫眾、長(zhǎng)葉甘草蕨、肺筋草、牛肋巴等[2]，《滇南本草》有收載：“百葉尖，生山中石上，綠色，一條小葉，俗呼蜈蚣草。味酸、澀、甘。無(wú)毒。治一切跌打損傷，筋骨疼痛，四肢麻木，風(fēng)濕痿軟。泡酒服之，其效如神。敷傷亦可……”[3]。其味酸、澀、甘，性平。具祛風(fēng)除濕，舒筋活絡(luò)，解毒殺蟲之功。用于蜈蚣咬傷，痢疾，流感，風(fēng)濕疼痛，跌打損傷，無(wú)名腫痛，疥瘡[2，4]，又可作為清熱解毒及利尿通淋藥。用于防治流行性感冒，痢疾，風(fēng)濕疼痛；外用于蜈蚣咬傷[5]。

經(jīng)查閱文獻(xiàn)資料，目前對(duì)本品的研究主要集中于殺蟲、抗氧化活性等藥效學(xué)研究[6-8]，而對(duì)其進(jìn)行生藥學(xué)研究尚屬空白。百葉尖資源豐富，療效確切，為了使其得以充分的開發(fā)利用，對(duì)其進(jìn)行了初步系統(tǒng)的生藥學(xué)研究，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及深入研究和開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。endprint

1實(shí)驗(yàn)材料及儀器

1.1實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)藥材采自云南大理永平、昭通永善、怒江瀘水、普洱江城。經(jīng)云南省藥物研究所戚育芳正高級(jí)工程師鑒定為蜈蚣草Pteris vittata Linnaeus的根莖。

1.2試劑5%硫酸溶液、10%氫氧化鈉、0.5%硫酸銅溶液、0.2%茚三酮溶液、鞣酸試劑、氯化鈉明膠試劑、1%三氯化鐵乙醇溶液、5%α-萘酚乙醇溶液、堿性酒石酸銅試劑、乙醇、濃硫酸、麝香草酚蘭、2%三氯化鋁甲醇溶液、濃鹽酸、鎂粉、30%過氧化氫、10%醋酸鎂甲醇溶液、1%氫氧化鈉溶液、甲醇、3，5-二甲基苯甲酸、堿性苦味酸試劑、7%異羥胺甲醇溶液、10%氫氧化鉀甲醇、5%鹽酸、5%氫氧化鈉、0.5%碳酸鈉水溶液、冰醋酸、醋酸酐-濃硫酸試劑、氯仿、堿性氫氧化鈉乙醇液、間二硝基苯、香草醛-濃硫酸、3%碳酸鈉、重氮化試劑、三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑、5%氫氧化銨溶液、硅鎢酸試劑、碘-碘化鉀試劑、碘化鉍鉀試劑、苦味酸試劑、乙醚、無(wú)水硫酸鈉、10%硫酸乙醇、石油醚、乙酸乙酯、香草醛-濃硫酸、羧甲基纖維素鈉、70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、100%無(wú)水乙醇、TO型生物透明劑、0.1%固綠、0.5%番紅、石蠟、生物組織固定液。

1.3儀器FA2004N電子分析天平，BM-IX生物組織冷凍包埋機(jī)，CS-Ⅳ型攤片烤片機(jī)，QP-Ⅲ生物組織切片機(jī)，TS-12A生物組織自動(dòng)脫水機(jī)，MicrE400 Nikon顯微鏡，數(shù)碼顯微照相機(jī)，GZX-9030 MBE 數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱，101A-2E電熱鼓風(fēng)干燥箱，生物組織攤片烤片機(jī)（CS-Ⅳ型），生物組織刀刃磨機(jī)（MD-Ⅱ型），超聲波清洗器（SK3200LHC）、ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀。

2實(shí)驗(yàn)方法

按常規(guī)植物分類學(xué)方法和藥材鑒定方法，制作百葉尖的根莖橫切面永久裝片及粉末制片等方法進(jìn)行觀察描述和分析，并進(jìn)行化學(xué)預(yù)試驗(yàn)及薄層色譜實(shí)驗(yàn)。

3原植物鑒別

根狀莖短而直立，直徑約1～5 cm，頂端密被披針形、黃棕色鱗片；葉簇生，同型。葉柄長(zhǎng)度變化較大，通常在10～20 cm之間，基部密被披針形、黃棕色、長(zhǎng)約1cm的鱗片，向上鱗片變少和變小，葉柄上部至葉軸禾稈色，疏被毛狀鱗片。葉片一回羽狀，倒披針形，長(zhǎng)約30～80 cm，寬約10～20 cm。裂片約30～50對(duì)，互生或近對(duì)生，披針形，基部淺心形，無(wú)柄，覆蓋葉軸，頂端漸尖，邊緣有鋸齒。葉脈分離，側(cè)脈單一或二分叉，纖細(xì)而密。葉草質(zhì)，暗綠色，除葉軸和中脈疏被毛狀淺棕色鱗片外，兩面光滑無(wú)毛。孢子囊群線形，沿葉緣著生，具有由羽片邊緣反卷形成的膜質(zhì)、近全緣的假囊群蓋[1]（見圖1）。

4性狀鑒別

根莖短粗，形似蜈蚣，長(zhǎng)約6～8cm，直徑約1～2cm，表面黃棕色至棕褐色，密被黃棕色、線狀披針形鱗片，上面具多數(shù)枯葉柄及棕黑色須根。質(zhì)地堅(jiān)硬，不易折斷，斷面黃白色，可見“U”型筋脈紋或不規(guī)則脈紋。氣微腥，味甘、酸、辛、平（見圖2）。

5顯微鑒別

5.1根莖橫切面表皮細(xì)胞1列，細(xì)胞較小，外壁增厚，常脫落；下表皮為數(shù)列厚壁細(xì)胞，棕色至褐色，壁孔明顯，內(nèi)含淀粉粒；中柱為雙韌管狀中柱，分體中柱“U”型，木質(zhì)部由管胞組成，其內(nèi)外均有韌皮部及內(nèi)皮層；皮層及髓部薄壁細(xì)胞中含有淀粉粒與棕色塊（見圖3）。

5.2粉末特征根莖粉末黃棕色；①管胞多為梯紋及網(wǎng)紋，直徑25～50 μm。②淀粉粒甚多，單粒圓形或橢圓形，直徑12～30 μm，臍點(diǎn)點(diǎn)狀或裂縫狀，層紋不明顯；復(fù)粒由2～3分粒組成。③色素塊條狀、三角形或不規(guī)則形，紅棕色或深棕色（見圖4）。

6理化鑒別

經(jīng)系統(tǒng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，百葉尖含有皂苷、還原糖、苷類、黃酮類、內(nèi)脂、甾醇、酚性成分、萜類、揮發(fā)油等成分。

7薄層鑒別

系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果表明百葉尖根莖藥材含有皂苷、還原糖、苷類、黃酮類、內(nèi)脂、甾醇、酚性成分、萜類、揮發(fā)油等成分。根據(jù)理化預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選取了黃酮類、內(nèi)酯，萜類三種成分進(jìn)行薄層色譜實(shí)驗(yàn)。

參照薄層色譜法（《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部通則0502）[9]，吸取上述供試品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚：乙酸乙酯：甲醇（15：5：3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在電熱鼓風(fēng)干燥箱105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。藥材溶液在同一硅膠G板相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)（見圖5）。

8小結(jié)與討論

通過對(duì)百葉尖植物形態(tài)、藥材性狀、顯微鑒定等方面的研究，出其在各鑒定項(xiàng)中均有明顯的鑒定特征：

原植物形態(tài)側(cè)生羽片多數(shù)，通?？蛇_(dá)30-40對(duì)，向下漸縮短，不育邊緣有密細(xì)鋸齒；藥材性狀根莖短粗，形似蜈蚣，斷面可見“U”型筋脈紋或不規(guī)則脈紋；顯微橫切面特征中柱為雙韌管狀中柱，分體中柱“U”型，木質(zhì)部由管胞組成，其內(nèi)外均有韌皮部及內(nèi)皮層，粉末特征淀粉粒甚多，單粒圓形或橢圓形，臍點(diǎn)點(diǎn)狀或裂縫狀，層紋不明顯；復(fù)粒由2～3個(gè)分粒組成；梯紋及網(wǎng)紋管胞多見。

實(shí)驗(yàn)中，其脫水過程中為使組織不破碎脫落需掌握好時(shí)間；在包埋過程中要使藥材充分溶蠟，在切片過程中才能使其完整。攤片時(shí)間延長(zhǎng)，使藥材完全攤平，便于染色；其次是染色過程要把握好在番紅和固綠中染色的時(shí)間，使制作的永久制片清晰美觀。在做薄層色譜實(shí)驗(yàn)時(shí)，展開劑的選擇較為關(guān)鍵。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖片清晰，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，為該藥的鑒定、藥材標(biāo)準(zhǔn)制定、進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所編著.云南植物志[M].北京：科學(xué)出版社 2006：246-248.

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[8]侯文成，韓丹丹，陳曼麗，等.蜈蚣草甲醇提取物的抗氧化活性研究[D].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2016，42（4）：441-444.

[9]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：306-307.endprint