7種殺菌劑對抑制油菜菌核萌發(fā)及子囊盤的殺滅效果

秦虎強，胡卓群，高小寧，韓青梅，黃麗麗，陳亞菲，張 強(旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室，西北農(nóng)林科技大學(xué) 植物保護學(xué)院,陜西楊凌 712100)

7種殺菌劑對抑制油菜菌核萌發(fā)及子囊盤的殺滅效果

秦虎強，胡卓群，高小寧，韓青梅，黃麗麗，陳亞菲，張 強
(旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室，西北農(nóng)林科技大學(xué) 植物保護學(xué)院,陜西楊凌 712100)

為探討不同殺菌劑對抑制油菜菌核萌發(fā)及子囊盤的殺滅效果，采取室內(nèi)測定和田間試驗的方法，對7種常用殺菌劑的藥效以及不同外部條件對菌核萌發(fā)、子囊盤數(shù)量及其存活率的影響進行試驗研究。結(jié)果顯示，供試7種殺菌劑均能顯著抑制菌核萌發(fā)，并對子囊盤有顯著的殺滅效果，田間防效均達到70%以上；不同外部條件對菌核萌發(fā)、子囊盤數(shù)量及其存活率有顯著影響，在潮濕狀態(tài)下菌核萌發(fā)率達到64.4%，干燥狀態(tài)下能夠存活但不能萌發(fā)，水淹狀態(tài)下菌核死亡率達到90%以上，在藥劑處理條件下雖能存活但萌發(fā)率較低；殺菌劑處理對不同深度土壤中的菌核萌發(fā)的抑制效果存在明顯差異，埋土深度大于7 cm很少萌發(fā)子囊盤，小于4 cm能夠較好萌發(fā)；使用殺菌劑土表噴霧處理能顯著抑制菌核萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤，其抑制率達到66.7%以上，但隨埋土深度增加對菌核萌發(fā)抑制率明顯降低。說明多菌靈、百菌清、菌核凈及甲基托布津均可作為今后抑制油菜菌核萌發(fā)及殺滅子囊盤的較理想藥劑，同時采取稻-油輪作、播栽前土壤深翻或土表藥劑處理，能顯著降低田間菌源量，是控制病害的有效措施。

油菜菌核??；菌核；子囊盤；殺菌劑；藥效

油菜菌核病(Rape sclerotinia rot)是一種世界性病害[1]，俗稱爛稈、白稈、霉蔸等，其病原物為核盤菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib.) de Bary]，屬子囊菌亞門真菌。在中國長江流域、西南地區(qū)和陜西的南部地區(qū)危害嚴重。常年發(fā)病株率高達10%～30%，嚴重時達80%以上，一般可導(dǎo)致減產(chǎn)10%～30%，病情嚴重時減產(chǎn)達70%以上，含油量降低1%～5%[2]，嚴重影響油菜產(chǎn)量和品質(zhì)。

目前，國內(nèi)外對油菜菌核病的研究較多，尤其在油菜菌核病的致病機理、化學(xué)防治、生物防治等方面已取得重要進展。在防治方面，仍以化學(xué)藥劑防治為主，也是目前最直接、最簡便、最有效的防治手段。其主要防治藥劑有腐霉利、戊唑醇、百菌清、多菌靈、甲基托布津、咪酰胺、菌核凈等[3-4]。主要防治時期為油菜初花期至盛花期進行田間藥劑莖葉面噴霧，有利于防止田間菌核子囊孢子的萌發(fā)侵染，防病效果比較理想[4-5]，但該期施藥由于油菜植株高大，存在施藥不便、用藥困難、勞動強度大等缺點；同時，國內(nèi)外尚缺乏有關(guān)殺菌劑在抑制菌核萌發(fā)和子囊盤殺滅效果方面的研究報道[6]。為了進一步探討不同殺菌劑對抑制菌核萌發(fā)和子囊盤的殺滅效果以及不同濕度、土壤深度條件下對菌核活力、子囊盤萌發(fā)的影響，本研究采取室內(nèi)測定和田間試驗的方法，對多菌靈、百菌清、菌核凈、腐霉利、戊唑醇、咪酰胺及甲基托布津7種常用殺菌劑的藥效以及不同外部條件、土壤深度對菌核萌發(fā)、子囊盤數(shù)量及其存活率的影響進行試驗研究，觀察菌核及子囊盤對不同藥劑處理的反應(yīng)，以便為田間早期防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌源

油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorium)。油菜菌核為2014年5月中旬在陜西漢中市漢臺區(qū)油菜收獲期田間罹病的油菜莖稈中采集，經(jīng)4～10 ℃(冰箱儲藏間)低溫處理50 d后保持在室溫、保濕條件下于盆缽沙土中進行培養(yǎng)。

1.2 供試藥劑

多菌靈w=50%可濕性粉劑(WP)，山東華陽科技股份有限公司生產(chǎn)；百菌清w=75%可濕性粉劑(WP)，西安美邦藥業(yè)有限公司提供；菌核凈w=40%可濕性粉劑(WP)，山東富先達農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)；速克靈w=50%可濕性粉劑(WP)，日本住友化學(xué)株式會社生產(chǎn)；戊唑醇w=43%懸浮劑(SC)，拜耳作物有限公司生產(chǎn)；咪酰胺w=25%乳油(EC)，杭州慶豐農(nóng)化有限公司生產(chǎn)；甲基托布津w=80%可濕性粉劑(WP)，西安204所農(nóng)用化學(xué)品公司生產(chǎn)。

1.3 試劑和儀器

十二烷基硫酸鈉，化學(xué)純；冰箱；培養(yǎng)箱；培養(yǎng)皿；5 cm×5 cm培養(yǎng)缽。

1.4 研究內(nèi)容與試驗設(shè)計

1.4.1 7種殺菌劑對菌核萌發(fā)的抑制效果 供試7種殺菌劑均設(shè)5個質(zhì)量濃度梯度及清水對照(CK)(表1)。

表1 7種殺菌劑質(zhì)量濃度梯度設(shè)置Table 1 Mass concentration gradient of seven fungicides

試驗均采取菌體表面噴霧。在室溫下5 cm×5 cm培養(yǎng)缽中保濕培養(yǎng)。試驗過程采取無菌水土壤保濕措施，保鮮膜覆蓋，使土壤一直處于較潮濕狀態(tài)。每5 cm×5 cm培養(yǎng)缽中放置菌核10粒，試驗重復(fù)3次，并間隔5～7 d定期觀察菌核對不同藥劑處理的反應(yīng)及霉?fàn)€情況，統(tǒng)計菌核萌發(fā)率、萌發(fā)的子囊盤數(shù)量等，計算菌核萌發(fā)抑制效果，同時建立毒力回歸曲線方程，求出各藥劑EC50、95%置信限及毒力回歸方程相關(guān)系數(shù)。菌核萌發(fā)抑制效果計算公式如下。

抑制效果=[(總菌核數(shù) - 處理后萌發(fā)菌核數(shù))/總菌核數(shù)]×100%

1.4.2 7種殺菌劑對子囊盤的殺滅效果 試驗于室溫下5 cm×5 cm培養(yǎng)缽中進行，試驗過程采取無菌水土壤保濕措施，保鮮膜覆蓋，使土壤一直處于較潮濕狀態(tài)，菌核在土壤中埋藏深度為0～2 cm，待菌核萌發(fā)出子囊盤后開始噴施藥劑。試驗設(shè)計及藥劑處理同“1.4.1”。每處理播菌核5粒，3次重復(fù)，并定期3～5 d觀察統(tǒng)計菌核子囊盤萌發(fā)率、子囊盤對不同藥劑處理的反應(yīng)及死亡(變色或潰爛)情況，統(tǒng)計后期子囊盤萌發(fā)情況，計算子囊盤萌發(fā)率，并比較不同藥劑對子囊盤的殺滅效果，同時建立毒力回歸曲線方程，求出各藥劑EC50、95%置信限及毒力回歸方程相關(guān)系數(shù)。防效計算公式如下。

防效=處理后腐爛死亡子囊盤數(shù)/總子囊盤數(shù)×100%

1.4.3 不同濕度條件對菌核萌發(fā)及存活率的影響 試驗在室溫下培養(yǎng)皿中進行。設(shè)干燥、潮濕、淹水、多菌靈w=50% WP 3.33 mg/mL菌體表面噴霧共4個處理，每皿菌核30粒，3次重復(fù)，定期用自來水保濕，間隔5～7 d定期觀察菌核對不同處理的反應(yīng)、子囊盤萌發(fā)及死亡(變色、變軟或潰爛)情況，記載菌核萌發(fā)數(shù)量、萌發(fā)的子囊盤數(shù)量、死亡菌核數(shù)量等，統(tǒng)計菌核萌發(fā)率、死亡率等。1.4.4 不同土壤深度條件下殺菌劑對菌核萌發(fā)的抑制效果 試驗在室溫下5 cm×5 cm培養(yǎng)缽中進行，試驗過程使用無菌水采取土壤保濕措施，土壤一直處于較潮濕狀態(tài)。試驗處理設(shè)菌核在土壤中埋藏深度分別為0(土表)、2、4、7、10 cm 5個處理，每處理均采用多菌靈w=50% WP 3.33 mg/mL菌體或土表噴霧，每處理菌核5粒，3次重復(fù)，同時設(shè)相同土壤埋藏深度不用藥對照組，藥后定期3～5 d觀察菌核對不同處理的反應(yīng)及死亡情況(發(fā)黑變色、或腐爛)及后期菌核子囊盤萌發(fā)情況，統(tǒng)計菌核死亡率及菌核子囊盤萌發(fā)率。

1.4.5 不同殺菌劑對油菜菌核子囊盤的田間防效試驗 試驗地點設(shè)在漢中市漢臺區(qū)老君鎮(zhèn)付廟村(33°11′47.57″N，107°05′66.35″E)，試驗于3月上旬子囊盤萌發(fā)始盛期進行，藥劑處理見表6，并設(shè)不施藥對照，處理區(qū)面積6 m2，處理間重復(fù)3次。在藥前和施藥后15 d分別調(diào)查處理區(qū)子囊盤數(shù)及腐爛死亡子囊盤數(shù)，計算不同藥劑處理對子囊盤的殺滅效果。防效計算公式如下。

防效(%)=[PT1×(1+K)-PT2]/[PT1×(1+K)]×100%

其中：K=(對照區(qū)藥后子囊盤數(shù)-對照區(qū)藥前子囊盤數(shù)) /對照區(qū)藥前子囊盤數(shù)；K為校正系數(shù)；PT1為藥劑處理區(qū)藥前子囊盤數(shù)；PT2為藥劑處理區(qū)藥后子囊盤數(shù)。

1.5 統(tǒng)計分析

應(yīng)用唐啟義等[7]DPS 數(shù)據(jù)處理軟件對田間試驗結(jié)果進行處理和方差分析，并建立回歸方程，計算EC50；采用Duncan’s新復(fù)極差法進行差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種不同殺菌劑對菌核萌發(fā)的抑制效果

供試7種殺菌劑對菌核萌發(fā)均有顯著抑制效果(表2)。從對菌核萌發(fā)的抑制效果來看，7種殺菌劑分別以質(zhì)量濃度為3.33、2.0、3.33、3.33、1.67、1.67、0.67 mg/mL及以上時效果最好，在施藥后15 d其抑制效果均達到80.0%以上，其適宜施藥質(zhì)量濃度分別為3.33～10.0、2.0～3.33、3.33～10.0、3.33～10.0、1.67～3.33、1.11～1.67、0.67～1.0 mg/mL。經(jīng)方差分析，各藥劑不同質(zhì)量濃度處理間差異達顯著水平(P<0.05)。

從表3結(jié)果看出，殺菌劑使用質(zhì)量濃度與菌核萌發(fā)抑制效果均呈負相關(guān)。7種殺菌劑EC50相比較，以戊唑醇w=43% SC、咪酰胺w=25% EC及甲基托布津w=80% WP效果較好，百菌清w=75% WP和速克靈w=50% WP次之，而以菌核凈w=40% WP和多菌靈w=50% WP略差。

2.2 7種殺菌劑對子囊盤的殺滅效果

從殺滅效果(表4)來看，7種殺菌劑分別以施藥質(zhì)量濃度為3.33、1.43、3.33、3.33、1.67、1.67和1.0 mg/mL以上時效果較佳，殺滅效果可達到80%以上，其適宜施藥質(zhì)量濃度分別為2.0～3.33、1.43～2.0、3.33～10.0 mg/mL、1.67～3.33、1.67～3.33、1.67～3.33和1.0～2.0 mg/mL。經(jīng)方差分析，各藥劑不同質(zhì)量濃度處理間差異均達顯著水平(P<0.05)。

從表5看出，7種殺菌劑施藥質(zhì)量濃度與子囊盤的殺滅效果均呈負相關(guān)。EC50相比較，以戊唑醇w=43%SC、百菌清w=75%WP、甲基托布津w=80%WP及咪酰胺w=25%EC較好，速克靈w=50%WP次之，而以多菌靈w=50%WP及菌核凈w=40%WP略差。

表2 7種殺菌劑對抑制菌核萌發(fā)藥后15 d的效果Table 2 Antifungal effects of seven fungicides on sclerotial germination with under 15 d post treatment

注：數(shù)據(jù)為“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”。數(shù)據(jù)后同行不同小寫字母表示經(jīng)Duncan’s新復(fù)極差法檢驗差異顯著性(P<0.05)。下同。

Note:Data in the table are “mean±SD”.Data followed by different lowercase letters in the same row indicate significant difference atP<0.05 level by Duncan’s new multiple range test.The same below.

表3 7種殺菌劑對抑制菌核萌發(fā)藥后15 d的室內(nèi)毒力測定Table 3 Laboratory toxicity measurement of sclerotial germination with seven fungicides at 15 d post treatment

表4 7種藥劑對子囊盤藥后15 d的殺滅效果Table 4 Effecacy of seven fungicides on apothecial production at 15 d post treatment

表5 7種藥劑對子囊盤藥后15 d的室內(nèi)毒力測定結(jié)果Table 5 Laboratory toxicity measurement of apothecia with seven fungicides at 15 d post treatment

2.3 不同濕度條件對菌核萌發(fā)及存活率的影響

不同濕度條件對菌核的萌發(fā)率、子囊盤數(shù)量及其存活率有顯著影響(表6)。在干燥狀態(tài)下，菌核均能存活但不能萌發(fā)；在保濕狀態(tài)下，菌核能夠較好地萌發(fā)并產(chǎn)生子囊盤，菌核萌發(fā)率達到64.4%，90 d后菌核存活率達到95.6%；在水淹狀態(tài)下，菌核較少能夠萌發(fā)并產(chǎn)生子囊盤，存活率較低，僅為8.9%；多菌靈w= 50% WP 3.33 mg/mL 表面藥劑處理，菌核萌發(fā)率和子囊盤數(shù)量與水淹狀態(tài)相比相當(dāng)或略高，但明顯低于潮濕狀態(tài)，而菌核存活率較高，可達到70%以上。

表6 不同外部條件對菌核萌發(fā)及存活率的影響Table 6 Influence of different external conditions on sclerotial germination and it survival rate

注：數(shù)據(jù)后同列不同小寫字母表示經(jīng)Duncan’s新復(fù)極差法檢驗差異顯著(P=0.05)，下同。

Note：Data followed by different lowercase letters in the same column indicate significant difference atP=0.05 level by Duncan’s new multiple range test. The same below.

2.4殺菌劑對不同土壤深度條件下菌核萌發(fā)的抑制效果

采用殺菌劑處理，對不同深度土壤中的菌核萌發(fā)的抑制效果存在明顯差異(表7)。在土壤表層，菌核能夠很好的萌發(fā)，萌發(fā)率高達93.3%，而經(jīng)殺菌劑處理后，菌核未見萌發(fā)，抑制效果達到100%；菌核埋土深度2～4 cm，在不施藥情況下，菌核能夠較好的萌發(fā)，殺菌劑處理對菌核的萌發(fā)抑制率達到66.7%以上，只有部分能夠萌發(fā)，對子囊盤數(shù)量的抑制率達到73.3%以上；在菌核埋土深度7～10 cm狀態(tài)下，菌核均很少萌發(fā)，也未見產(chǎn)生子囊盤。

2.5 不同殺菌劑對子囊盤的田間殺滅效果

結(jié)果表明(表8)，7種藥劑對子囊盤均有顯著殺滅效果，防效均達到70%以上。

表7 殺菌劑土表噴霧對不同土壤深度菌核萌發(fā)的抑制效果Table 7 Fungicides inhibition effect on sclerotial germination by soil surface spray with different depths

表8 不同殺菌劑對油菜菌核子囊盤的田間殺滅效果Table 8 Effecacy of different fungicides on rape Sclerotinia Sclerotiorium apothecia in field

3 討 論

核盤菌在油菜上的侵染循環(huán)主要以氣傳的子囊孢子或分生孢子從寄主的花、衰老葉或傷口侵入，以病健組織接觸構(gòu)成再侵染[8]。而在田間，菌核萌發(fā)并釋放大量子囊孢子的時期與油菜花期基本吻合[5,9]。因此，化學(xué)防治適期為油菜初花期至盛花期，此時進行藥劑莖葉面噴霧有利于防止田間子囊孢子的萌發(fā)侵染，防病效果雖比較理想[4-5,10]，但該期施藥由于油菜植株高大，存在施藥不便、用藥困難、勞動強度大等缺點。王振榮等[6]研究認為，油菜菌核病病原子囊孢子屬近距離傳播，子囊孢子傳播距離一般在200 m范圍內(nèi)，部分可擴散300 m外，在子囊萌發(fā)始盛期，采用乙多洗復(fù)配劑對田埂子囊盤殺滅效果達95%以上，可有效地降低初侵染菌源量和油菜發(fā)病程度。謝桂英等[11]研究結(jié)果顯示，草甘膦、乙羧氟草醚、精喹禾靈、乙草胺和莠去津等5種除草劑能明顯抑制油菜菌核病菌菌絲生長和菌核萌發(fā)。本研究結(jié)果表明，供試7種殺菌劑對油菜菌核萌發(fā)均有顯著抑制效果，并對子囊盤有較好的殺滅效果。因此，對油菜連片種植區(qū)，在油菜現(xiàn)蕾初花期、菌核萌發(fā)前采用上述藥劑對田埂、地頭、側(cè)邊以及旱茬油菜田等易留落菌核之處進行地面噴霧施藥，可以有效地抑制菌核的萌發(fā)和降低子囊盤的數(shù)量；而在菌核萌發(fā)盛期，施用上述藥劑對子囊盤有較好的殺滅效果，可顯著降低田間菌源量，不僅使化學(xué)防治時期提前，克服目前花期施藥存在的缺點弊端，而且可達到防病目的。

楊謙等[12]研究認為，菌核經(jīng)干燥處理后不能萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤。本研究結(jié)果顯示，不同濕度等外部條件對菌核萌發(fā)、子囊盤數(shù)量及其存活率有顯著影響。菌核在干燥狀態(tài)下能很好地存活但不能萌發(fā)，在潮濕狀態(tài)下能夠很好的萌發(fā)，在水淹和藥劑處理下，菌核雖能萌發(fā)，但萌發(fā)率較低，潰爛死亡率顯著提高，尤其在水淹狀態(tài)下菌核潰爛死亡率達到90%以上。因此，在油菜收獲后，采取稻-油水旱輪作或藥劑土表處理，可有效降低田間菌源量，這與田間試驗結(jié)果基本一致。

殺菌劑處理對不同深度土壤中的菌核萌發(fā)的抑制效果存在明顯差異。菌核在埋土深度大于7 cm 以上很少萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤；在土壤表層和埋土深度小于4 cm條件下，能夠很好的萌發(fā)，其萌發(fā)率達73.3%以上，使用殺菌劑土表噴霧處理后，能顯著的抑制菌核的萌發(fā)并產(chǎn)生子囊盤，其抑制率達到66.7%以上，但隨埋土深度加大對菌核萌發(fā)抑制率明顯降低，這與楊謙等[12]研究結(jié)果基本一致。說明，在生產(chǎn)實際中，除菌核萌發(fā)期采用藥劑防治技術(shù)外，采取土壤深翻措施，也可大大降低當(dāng)年菌核的萌發(fā)率，從而達到降低菌源量和控制病害的目的。

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EffectofSevenFungicidesonInhibitingGerminationandApotheciaDevelopmentinSclerotiniaSclerotiorium

QIN Huqiang,HU Zhuoqun,GAO Xiaoning,HAN Qingmei,HUANG Lili,CHEN Yafei and ZHANG Qiang
(State Key Laboratory of Crop Stress Biology for Arid Areas，College of Plant Protection,Northwest A&F University,Yangling Shaanxi 712100,China)

In order to explore effect of different fungicides on inhibitingSclerotiniaSclerotiorium,we tested the germination rate of sclerotial,numbers and survival rate of apothecia treated with seven common fungicides under different conditions. The results showed that the all seven fungicides could significantly inhibit sclerotial germination and apothecia development with the control efficacy of over 70% in the field. The germination rate of sclerotia,number and survival rate of apothecia inS.Sclerotioriumhad been significantly effected under different external conditions. The germination rate of sclerotia was 64.4% under wet condition. In contrast,the sclerotia could survive but not germinate in the dry state. The death rate of sclerotia was more than 90% in the watered-out state. The germination rate of sclerotia was very low with the fungicide treatments. The inhibition effect of fungicide treatment on germination rate of sclerotia was different depending on soil depth. Few apothecia were produced when the soil depth was larger than 7 cm. By contrast,much more apothecia were produced when the soil depth was less than 4 cm. By using microbicides soil surface spray,the apothecia production inSclerotiniaSclerotioriumcan be significantly reduced to more than 66.7%. But the inhibition rate was decreased obviously along with the increase of soil depth. The results showed that the premium fungicides in controling the sclerotial germination and apothecial development of Carbendazim,Chlorothalonil,Dimetachlone and Thiophanate-methyl were used together,the effective disease management was taken in crop rotation of rice and rape,deep tilling before sowing or fungicide soil surface treatment in the field.

RapeSclerotiumRot;SclerotiniaSclerotiorium; Aspothecia; Fungicide; Efficacy

2016-08-31

2017-03-24

National Nonprofit Sector (agriculture) Research Project(No.201103016);Special Project of Sci-Tech Innovation and Achievements Transfer of Experimental and Demonstrative Stations (Base) of the Northwest A&F University(No.XNY2013-46)；Disciplines Innovation,Introducing Intelligence Plan of Institutions of Higher Learning(No. B07049).

QIN Huqiang,male,associate research fellow.Research area:plant integrated pest management.E-mail:qinhuqiang@nwsuaf.edu.cn

S435.654; S482.2

A

1004-1389(2017)09-1395-07

(責(zé)任編輯：郭柏壽Responsibleeditor:GUOBaishou)

日期：2017-09-12

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20170912.1741.034.html

2016-08-31

2017-03-24

國家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201103016)；西北農(nóng)林科技大學(xué)試驗示范站(基地)科技創(chuàng)新與成果轉(zhuǎn)化專項(XNY2013-46)；高等學(xué)校學(xué)科創(chuàng)新引智計劃(B07049)。

秦虎強，男，副研究員，研究方向為植物有害生物綜合治理。E-mail: qinhuqiang@nwsuaf.edu.cn

黃麗麗，女，教授，博士導(dǎo)師，主要從事植物病理學(xué)及病害綜合治理研究。E-mail: huanglili@nwsuaf.edu.cn

CorrespondingauthorHUANG Lili ,female,professor,doctoral supervisor. Research area:plant pathology and comprehensive treatment of plant diseases. E-mail:huanglili@nwsuaf.edu.cn