中藥槐米中蘆丁提取工藝研究

陳菊

[摘要] 目的 篩選槐米中提取蘆丁的最佳工藝。 方法 以蘆丁提取率為評價指標(biāo)，采用L9（34）正交實驗設(shè)計，以乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時間為實驗因素，確定最佳提取條件。 結(jié)果 最佳提取工藝為乙醇濃度60%，料液比1∶15，提取溫度40℃，提取時間30min。 結(jié)論 優(yōu)選的提取工藝經(jīng)濟、簡單、可行，為槐米中蘆丁的超聲提取提供實驗基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 槐米；蘆??；正交設(shè)計；超聲提取

[中圖分類號] R284.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）15-51-03

[Abstract] Objective To screen the best extraction technology of Rutin in Flos Sophorae. Methods The extraction rate of rutin was used as the evaluation index. L9（34） orthogonal experiment was carried on. The concentration of ethanol， the ratio of liquid to liquid， extraction temperature and extraction time were taken as experimental factors. The optimum extraction conditions were determined. Results The optimum extraction process was ethanol concentration of 60%， solid-liquid ratio of 1：15， extraction temperature of 40℃， extraction time of 30 min. Conclusion The optimal extraction process of economic is simple and feasible. It provides experimental basis for the ultrasonic extraction of Rutin from Flos sophorae.

[Key words] Sophora japonica； Rutin； Orthogonal design； Ultrasonic extraction

槐米為豆科植物槐（ Sophora japonical L.）的未開放花蕾，在中醫(yī)中用作藥用已有二千多年歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》還將其列為上品?；泵字泻卸喾N黃酮類物質(zhì)，如蘆丁、槲皮素等，其中蘆?。╮utin），又名蕓香苷，其化學(xué)名稱為：5，7，3'，4'-四羥基-3-蕓香糖苷。研究發(fā)現(xiàn)其具有涼血止血、清肝瀉火等功效，而且它還具有抗癌防癌、抗血小板聚集、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗炎、抗過敏、抗自由基及抗氧化等多種活性[1-3]。蘆丁的藥用價值開發(fā)利用較早，有關(guān)槐米中蘆丁提取曾有研究[4-8]。不同與之前的報道研究，本實驗擬采用正交設(shè)計法，同時考慮提取溶劑、料液比、提取溫度及提取時間四因素對超聲提取槐米中蘆丁的影響?，F(xiàn)將實驗結(jié)果報道如下。

1 儀器與試劑

超聲波清洗器（潔康超聲波設(shè)備有限公司），101型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱（上海雙旭儀器有限公司）。NaHCO3、95%乙醇、5%硼砂、石灰水，其他試劑均為分析純?；泵踪徲谇瓥|南州藥材公司（批號：20160201）。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素水平設(shè)計

根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，對影響蘆丁提取效果的4個因素，即乙醇濃度（A）、料液比（B）、提取溫度（C）、提取時間（D）進行考察，每個因素選取3個水平，采用L9（34）正交實驗設(shè)計進行實驗，各因素和水平見表1，正交實驗設(shè)計見表2。

2.2 蘆丁提取工藝

2.2.1 粗提 稱取槐米10g，粉碎，置入燒杯中，按表1設(shè)計，加定量不同濃度的乙醇，室溫下封口浸泡4～6h，加入15mL 8%NaHCO3溶液調(diào)節(jié)PH至中性，在超聲波中振蕩一定時間，在恒溫水溶下恒溫12h，趁熱抽濾，濾液減壓蒸餾，倒入錐形瓶中，再用9%的HCl調(diào)節(jié)pH值在3～4之間，自然冷卻析出晶體，即為蘆丁粗品。

2.2.2 精制 將粗品置于250 mL燒杯中，加入100 mL蒸餾水，邊加熱邊攪拌，再加入5mL 3%硼砂溶液，用飽和石灰水調(diào)節(jié)pH值在8～9之間，煮沸至粗品溶解后，趁熱減壓抽濾，將濾液用9%的鹽酸調(diào)節(jié)pH值在3～4之間，靜置過夜，干燥箱內(nèi)干燥，析出蘆丁晶體。計算蘆丁提取率（見表2）：

蘆丁提取率（%）=提取物質(zhì)量/槐米質(zhì)量×100

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 正交實驗結(jié)果 以蘆丁提取率為評價指標(biāo)，對正交實驗結(jié)果進行極差分析（見表2），極差分析結(jié)果顯示，影響蘆丁提取效果的因素順序為A>C>B>D，即乙醇濃度>提取溫度>料液比>提取時間。對實驗結(jié)果影響最大的是乙醇濃度，其次是提取溫度，再次是料液比和提取時間。表3方差分析可見，乙醇濃度對提取效果有極顯著影響，提取溫度對提取效果有顯著影響，料液比、提取時間對提取效果均無顯著影響。由極差分析和方差分析選出提取蘆丁的最優(yōu)方案是A1B2C2D3。

2.3.2 驗證實驗 精確稱取槐米10g，按上述最優(yōu)提取方案依據(jù)“2.2.1”和“2.2.2”方法提取，重復(fù)三次，得蘆丁提取率為7.12% ，RSD=1.05%（n=3），表明此優(yōu)方案可行。而本實驗的實際最優(yōu)組合是A1B2C2D2，即乙醇濃度60%，料液比1∶15，提取溫度40℃，提取時間20 min，蘆丁提取率為6.98%（表2）。這正體現(xiàn)了正交實驗的優(yōu)點，雖然不可能包含所有處理組合， 但仍可選擇較好的處理組合。最后確定的最佳蘆丁提取工藝為乙醇濃度60%，料液比1∶15，提取溫度40℃，提取時間30min，蘆丁提取率為7.12%。

3 討論

本實驗選用正交實驗設(shè)計優(yōu)化超聲方法提取蘆丁的工藝條件，以蘆丁提取率為考察指標(biāo)，表2方差分析結(jié)果顯示對考察指標(biāo)影響最大是乙醇濃度，且表3方差分析結(jié)果表明乙醇濃度的影響達(dá)極顯著，有顯著影響的是提取溫度。從表2，3的結(jié)果優(yōu)選出槐米中蘆丁提取的最佳工藝為乙醇濃度60%，料液比1∶15，提取溫度40℃，提取時間30min，提取率7.12%。 實驗結(jié)果說明，正交實驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析方法在天然藥物有效成分提取應(yīng)用上的優(yōu)越性，能大量減少實驗次數(shù)，從而節(jié)省了大量的人力、物力和財力。本研究若進行全部實驗， 必須采用33=27種配方，而正交實驗只需做9種，較少次數(shù)的正交實驗大體能反映全部組合實驗的效果，這在很大程度上提高了天然藥物提取工作效率與準(zhǔn)確性。

超聲提取提取是一種提取效率較高的提取技術(shù)，具有提取時間短，提取率高，節(jié)約溶劑，操作簡單，不破壞有效成分等特點。適用于多種天然植物的有效成分的提取，如黃酮化合物[9-10]，生物堿[11-13]，萜類[14]，揮發(fā)油[15]，以及油脂[16]等。蘆丁提取方法有傳統(tǒng)提取法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法、微波、超聲波協(xié)同堿提酸沉法等，其中傳統(tǒng)的堿提酸沉法蘆丁提取率最高[4]。超聲提取的蘆丁含量最高，張穎[17]研究了超聲提取、堿水酸提、水煎煮和回流4 種方法提取槐米中蘆丁，并對以上4 種提取方法所得的蘆丁進行含量測定，得到的結(jié)果依次為17.46%、9.20%、10.84%、9.44%。在本研究中選用飽和石灰水堿溶使pH值至8～9，制得濾液，再用鹽酸進行酸沉，使溶液pH值在3～4之間，靜置過夜，析出蘆丁晶體。但由于所用的超聲清洗器的超聲頻率有限（40kHz），使選擇條件范圍受到了限制，實驗結(jié)果蘆丁的提取率不是很理想，但是在現(xiàn)有的實驗條件下該實驗確實對槐米中蘆丁的超聲提取工藝起到了優(yōu)化作用。如果將超聲清洗器改為超生提取器，通過正交設(shè)計試驗優(yōu)選，蘆丁提取率會更佳。

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（收稿日期：2017-05-04）