沉淀法和超聲輔助-沉淀法提取茶多酚

馬春霓

(楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 云南 楚雄 675005)

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沉淀法和超聲輔助-沉淀法提取茶多酚

馬春霓

(楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 云南 楚雄 675005)

本實驗使用沉淀法及超聲輔助—沉淀法提取茶樹老葉中的茶多酚，以兒茶素含量為評價指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲輔助提取的提取率為0.93%，沉淀法為0.91%，兩種提取方法的提取率相差不大，但超聲輔助提取的提取率要稍高。

茶多酚；沉淀法；超聲提取

一、實驗原料

1.供試品 為峨眉山當(dāng)?shù)夭柁r(nóng)提供的茶樹老葉。

2.主要儀器 超聲清洗儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、低速大容量離心機、電熱鼓風(fēng)干燥箱、雙光束紫外可見分光光度計等。

3.試劑及對照品 50%乙醇、三氯化鋁(結(jié)晶)、碳酸氫鈉、硫酸、乙酸乙酯、香草醛，兒茶素對照品來自于中國藥品生物制品檢定所。

二、實驗方法

(一)回流-沉淀法

稱取過40目篩的茶樹老葉粉末10.0g,加入50%乙醇100ml，用恒溫水槽在60℃回流提取45min，共提取三次。然后抽濾，合并三次濾液，向濾液中加入100ml0.1mol/LAlCl3溶液(稱取AlCl3·6H2O結(jié)晶24.1g，加蒸餾水定容至1000ml)，并用1mol/LNaHCO3溶液(稱取42.0g NaHCO3于500ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，即得)調(diào)節(jié)溶液PH值至5，靜置至沉淀完全。用離心機離心，保留沉淀，用稀硫酸(取硫酸57ml，加水稀釋至1000ml，即得，本液含H2SO4為9.5%～10.5%[37])，以料：酸=1：2(V/V)在60℃水浴下轉(zhuǎn)溶15min?；旌衔镉玫润w積乙酸乙酯萃取三次，酯層在40℃下減壓濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮物在60℃下烘干，便得茶多酚。其流程圖見圖2-1。

(二)超聲輔助提取-沉淀法

稱取過40目篩的茶樹老葉粉末10.0g于500ml燒杯中,加入50%乙醇100ml，在超聲清洗儀中，用59KHz的超聲頻率提取40min，共提取兩次。然后抽濾，合并兩次濾液，向濾液中加入100ml0.1mol/LAlCl3溶液，并用1mol/LNaHCO3溶液調(diào)節(jié)溶液PH值至5，靜置至沉淀完全。用離心機離心，保留沉淀，用稀硫酸，以料：酸=1：2(V/V)在60℃水浴下轉(zhuǎn)溶15min?；旌衔镉玫润w積乙酸乙酯萃取三次，酯層在40℃下減壓濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮物在60℃下烘干，便得茶多酚。其流程圖見圖2-2。

圖2-1 回流-沉淀法流程圖

圖2-2 超聲輔助提取-沉淀法流程圖

(三)含量測定

兒茶素在酸性介質(zhì)中可以與香草醛反應(yīng)，生成在505nm處有最大吸收的有色物質(zhì)，并且在一定濃度范圍內(nèi)，濃度和光密度之間的關(guān)系遵守比耳定律[1]。采用香草醛顯色法，以茶多酚提取物中兒茶素的含量作為評價指標(biāo)來比較兩種方法對茶樹老葉中茶多酚的提取率。

1.樣品液和對照品液以及顯色劑的制備

(1)樣品液 稱取樣品0.0500g，溶解后移入50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻。

(2)對照品液 稱取兒茶素對照品0.0129g，置25ml容量瓶中，乙醇加至刻度，溶解搖勻。

(3)顯色劑 取香草醛1g，加鹽酸100ml使溶解。

2.最大吸收波長確定

吸取樣品溶液30μl、對照品溶液50.0μl，分別置于5ml容量瓶中，加水1.0ml，用1%香草醛濃鹽酸液加至刻度，搖勻，40min后，以水代替樣品液為空白，于400～700nm掃描。結(jié)果最大吸收波長均為503 nm，故確定測定波長為503nm。圖2-3兒茶素對照品光譜掃描曲線

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及樣品測定

分別精密吸取兒茶素對照液5，10，20，30，40，50，70，80，100μl于5ml容量瓶中，加水1.0ml，用1%香草醛濃鹽酸液加至刻度，搖勻，40min后于503nm波長處測定其吸光度。測定后以濃度為橫坐標(biāo)，Abs為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。取各樣品液30μl，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法顯色測定。

三、結(jié)果與討論

(一)結(jié)果

試驗分別使用了沉淀法及超聲輔助提取-沉淀法對茶樹老葉浸提了提取，并得到了茶多酚樣品。同樣以提取率作為評價指標(biāo)，對兩種方法進(jìn)行了篩選(見表2-1)。

由表中的數(shù)據(jù)可以看出沉淀法和超聲輔助提取-沉淀法提取茶多酚的提取率基本相同，但超聲輔助提取-沉淀法要稍高。表2-1 兩種提取方法提取茶多酚的提取率

方法原茶葉量(g)提取物質(zhì)量(g)取樣量(g)純度(%)平均純度(%)RSD(%)提取率(%)沉淀法10.00.31060.050129.440.050029.500.050129.4429.460.10.91超聲輔助-沉淀法10.00.43150.054321.640.050421.670.050221.5721.630.20.93

(二)討論

對兩種提取方法進(jìn)行篩選的過程中，我們發(fā)現(xiàn)兩種方法的提取率相差不大。初步分析的原因是：①兩種方法的后續(xù)純化過程均使用了Al3+沉淀茶多酚的辦法，而該法在沉淀離心及轉(zhuǎn)溶過程中的有效成分損耗較高，使得兩種提取方法的提取率都不高；②超聲波不止增大了有效物質(zhì)分子運動頻率和速度，雜質(zhì)分子的運動頻率和速度也相應(yīng)增加，因此在提取體系里雜質(zhì)分子的溶出率也會增高。

[1]魏毅,王娟,羅杰英.香莢蘭素比色法測定茶多酚口含片中兒茶素含量.中國中藥雜志，1999,24(6):347～348