HPLC法同時(shí)測定沉香舒郁丸中四種成分的含量

劉楚陽，劉 韻

HPLC法同時(shí)測定沉香舒郁丸中四種成分的含量

劉楚陽*，劉 韻

目的 建立波長切換聯(lián)合梯度洗脫HPLC法同時(shí)測定沉香舒郁丸中和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯4個(gè)成分的含量。方法 采用Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇(A)-0.5%磷酸溶液(B)為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，流速0.9 mL/min，檢測波長：294 nm(和厚樸酚、厚樸酚)，225 nm(木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯)，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果 和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯4個(gè)成分的質(zhì)量濃度分別在4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 8)、4.46～89.20 μg/mL(r=0.999 5)、5.12～102.40 μg/mL(r=0.999 9)、6.18～123.60 μg/mL(r=0.999 2)范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率及相應(yīng)的RSD分別為98.57%(1.08%)、99.93%(0.73%)、97.26%(1.24%)、97.65%(0.99%)；重復(fù)性良好，RSD≤1.75%；精密度良好，RSD≤1.06%。供試品溶液在室溫條件下24 h 內(nèi)穩(wěn)定，RSD≤1.11%。平均加樣回收率在97.26%～99.93%，RSD≤1.24%。結(jié)論 所建立的方法專屬性好，準(zhǔn)確度高，靈敏度高，快速，為沉香舒郁丸的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

沉香舒郁丸；和厚樸酚；厚樸酚；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯

0 引言

沉香舒郁丸收載于《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊，是由厚樸(姜制)、木香、沉香、陳皮、豆蔻、砂仁、枳殼(麩炒)、青皮(醋制)、香附(醋制)、延胡索(醋制)、柴胡、姜黃、甘草等13味中藥材加工而成的大蜜丸，具有舒氣開胃、化郁止痛的功效，主要用于胸腹脹滿、胃部疼痛、嘔吐酸水、消化不良、食欲不振、郁悶不舒等病癥的治療。

沉香舒郁丸現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了性狀，無任何定性和定量的檢測項(xiàng)目[1]，不能全面有效地控制本品的質(zhì)量。厚樸和木香為沉香舒郁丸的主要藥味。木香的指標(biāo)性成分為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯；厚樸的指標(biāo)性成分和厚樸酚及厚樸酚。本文采用HPLC梯度洗脫聯(lián)合波長切換法對4個(gè)成分進(jìn)行了同時(shí)測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100系列四元梯度泵高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；島津AUD 220D型電子天平(精度：0.01 mg)(日本島津公司)；KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

厚樸酚對照品(110729-201513，含量98.8%，常溫干燥保存)、和厚樸酚對照品(110730-201313，冷處保存)、木香烴內(nèi)酯對照品(111524-201509，含量99.0%，冷凍保存)均購于中國食品藥品檢定研究院，使用前均不需干燥處理；去氫木香內(nèi)酯對照品(477-43-0，含量98.0%，冷藏保存)購于上海佰世凱化學(xué)科技有限公司。沉香舒郁丸(每丸重6 g)購于天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠，批號：5970021、5970026、5970029。甲醇和乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：0.5%磷酸溶液，梯度洗脫[2-4](0～11 min，54.0%A；11～19 min,54.0%A→65.0%A；19～32 min,65.0%A→70.0%A；32～40 min,70.0%A→54.0%A)；0～19 min時(shí)在294 nm[5-6]波長下檢測厚樸酚和厚樸酚，19～40 min在225 nm[7-8]波長下檢測木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯；流速：0.9 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取對照品和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯適量，用70%甲醇溶液溶解并稀釋，制成含和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯分別為0.430、0.446、0.512、0.618 mg單一成分的對照品儲(chǔ)備溶液。再分別依次量取對照品儲(chǔ)備液適量，用70%甲醇溶液稀釋，制成含和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯分別為0.0129、0.0223、0.0256、0.0309 mg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取沉香舒郁丸適量，將其剪碎，取約2.0 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入70%甲醇溶液[9-10]45 mL，超聲提取30 min，放冷后，采用70%甲醇溶液補(bǔ)加至刻度，振搖均勻，過濾，取續(xù)濾液作為沉香舒郁丸測定用供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按照《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊中沉香舒郁丸的處方比例，分別稱取除厚樸以外的其他藥味和除木香以外的其他藥味各一份，嚴(yán)格按照沉香舒郁丸的工藝過程制成厚樸陰性樣品和木香陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，制成相應(yīng)的陰性樣品溶液。

2.3 專屬性考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對照品溶液、“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液、“2.2.3”項(xiàng)下2個(gè)陰性樣品溶液各適量，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行檢測，試驗(yàn)結(jié)果顯示，厚樸陰性樣品和木香陰性樣品溶液的色譜圖中，在所測和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對應(yīng)的位置均無干擾，且理論塔板數(shù)均>3 000。色譜圖見圖1。

2.4 線性范圍考察 分別精密吸取以上4個(gè)對照品儲(chǔ)備液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，將其置于10 mL的量瓶中，并采用70%甲醇溶液進(jìn)行稀釋至刻度，振搖均勻，即得到一系列濃度的混合對照品溶液，按照上述測定方法進(jìn)行測定，以測得的峰面積Y對質(zhì)量濃度X作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程,見表1。

圖1 色譜圖

表1 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度考察 取混合對照品溶液，按上述的色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD(n=6)分別為1.06%、1.03%、0.91%和0.83%。

2.6 重復(fù)性考察 取沉香舒郁丸樣品(批號：5970021)，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備沉香舒郁丸供試品溶液6份，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，分別計(jì)算所測各成分含量，并計(jì)算相對應(yīng)的RSD，結(jié)果所測4個(gè)組分的RSD依次為1.75%、1.63%、1.47%和1.25%。

2.7 穩(wěn)定性考察 取沉香舒郁丸樣品(批號：5970021)同一供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h來評價(jià)供試品溶液的穩(wěn)定性，按上述色譜條件測定和厚樸酚、厚樸酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的峰面積值，4個(gè)組分峰面積的RSD分別為1.11%、1.07%、1.03%和0.99%。結(jié)果顯示，供試品溶液自制備起，在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率考察 依據(jù)2015年版《中國藥典》四部藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，取已知含量的沉香舒郁丸(批號：5970021)6份，剪碎，每份約1.0 g，精密稱定，分置不同的50 mL量瓶中，精密加入混合對照品溶液25 mL、70%甲醇溶液20 mL，超聲提取30 min，放冷，用70%甲醇溶液加至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為加樣回收樣品試液。按照上述色譜條件及檢測方法測定，計(jì)算這4個(gè)組分的平均加樣回收率及RSD，結(jié)果見表2。

2.9 沉香舒郁丸樣品測定 取3批沉香舒郁丸，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備沉香舒郁丸供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的優(yōu)化 筆者在實(shí)驗(yàn)過程中曾考察了甲醇-水流動(dòng)相體系、乙腈-水流動(dòng)相體系、乙腈-0.5%磷酸溶液流動(dòng)相體系、甲醇-0.5%磷酸溶液流動(dòng)相體系，以所測各組分的分離效果、出峰時(shí)間長短、基線噪音等為指標(biāo)，優(yōu)選最佳的流動(dòng)相體系，對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以甲醇-0.5%磷酸溶液流動(dòng)相體系按照文中的梯度洗脫程序，所測各組分出峰時(shí)間較快，峰型對稱，基線平穩(wěn)。

3.2 供試品溶液制備方法的優(yōu)化 本試驗(yàn)分別考察了不同提取方式(超聲提取、加熱回流提取)對所測各組分提取效果的影響。結(jié)果顯示，超聲提取和加熱回流提取對沉香舒郁丸所測各組分的提取率效果差異不大，考慮到含量測定操作的便捷性，最終選取超聲提取作為沉香舒郁丸樣品制備的提取方式；同時(shí)在此基礎(chǔ)上對不同提取溶劑(甲醇、70%甲醇溶液、50%甲醇溶液)和不同提取時(shí)間(20、30、40 min)分別進(jìn)行了考察實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，70%甲醇溶液提取30 min，所測各組分的提取效果最佳。故沉香舒郁丸最終供試品溶液制備方法為70%甲醇溶液超聲提取30 min。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 含量測定結(jié)果(mg/g)

4 小結(jié)

本文采用HPLC梯度洗脫聯(lián)合波長切換法同時(shí)對厚樸的指標(biāo)性成分和厚樸酚及厚樸酚、木香的指標(biāo)性成分木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯進(jìn)行了測定，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，為確保臨床用藥的安全、有效控制沉香舒郁丸的質(zhì)量，提供了較有力的依據(jù)。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第十冊)[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:75.

[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:62,251.

[3] 何之源,李艷清,付大友,等.超聲波法提取川木香藥材中活性成分的工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(35):20040-20042.

[4] 鞠成國,王巍,高慧,等.HPLC測定木香檳榔丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(23):74-76.

[5] 劉曉鵬,姜寧,向東山,等.厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的提取與測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2007,27(5):694-696.

[6] 黃曉燕,衛(wèi)瑩芳,張盈嬌,等.高效液相色譜法測定厚樸葉不同采收期中厚樸酚、和厚樸酚的含量[J].中國中藥雜志,2005,30(9):717-718.

[7] 劉正清.不同產(chǎn)地和采收時(shí)間木香藥材中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的測定[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(16):116-118.

[8] 劉俊紅,李棣華,伍孝先.微波輔助提取木香有效成分的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(11):45-47.

[9] 項(xiàng)菲.高效液相色譜法測定八味痛經(jīng)片中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和芍藥苷[J].中成藥,2011,33(4):616-618.

[10]郭建華,劉佳樂,黃亮,等.高效液相色譜法同時(shí)測定厚樸提取物中厚樸酚與和厚樸酚[J].廣東化工,2014,41(17):181-182.

Simultaneous determination of the content of four constituents in Chenxiang Shuyu Pill by HPLC

LIU Chu-yang*,LIU Yun

(Department of Pharmacy,the South Hospital of Southern Medical University,Guangzhou 510515,China)

Objective To develop an HPLC gradient elution method for simultaneous determination of the content of honokiol,magnolol,costunolide and dehydrocostus lactone in Chenxiang Shuyu Pill.Methods The Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5μm) chromatographic column was adopted;the mobile phase was methanol(A)-0.5% phosphoric acid solution (B) with gradient elution,at a flow rate of 0.9 mL/min;honokiol and magnolol were detected at 294 nm,and costunolide and dehydrocostus lactone were detected at 225 nm;the column temperature was set at 30 ℃,and sample quantity was 10 μL.Results Honokiol,magnolol,costunolide and dehydrocostus lactone has a good linear relationship with peak area within the scope of concentration of 4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 8),4.46～89.20 μg/mL(r=0.999 5),5.12～102.40 μg/mL(r=0.999 9),and 6.18～123.60 μg/mL(r=0.999 2).The average recoveries and the correspondingRSDwere 98.57%(1.08%)，99.93%(0.73%)，97.26%(1.24%)and 97.65%(0.99%),respectively;the repeatability was good,RSD≤1.75%;the precision was good,RSD≤1.06%.Test solution was stable at room temperature within 24 h,RSD≤1.11%.The recovery rate was 97.26%～99.93%(RSD≤1.24%).Conclusion The established method is of good specificity,high accuracy,high sensitivity and rapidity,which can be applied to the quality control of Chenxiang Shuyu Pill.

Chenxiang Shuyu Pill;Honokiol;Magnolol;Costunolide;Dehydrocostus lactone

2016-08-30

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 510515

*通信作者

10.14053/j.cnki.ppcr.201705022