大孔吸附樹脂純化富集川芎總生物堿的工藝

蒲忠慧，王力，高宇，張瀟，彭成，*，熊亮，*，李文兵

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，教育部中藥材標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川成都611137；2.綿陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川綿陽(yáng)621006；3.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川彭州610031）

大孔吸附樹脂純化富集川芎總生物堿的工藝

蒲忠慧1，2，王力1，高宇1，張瀟1，彭成1，*，熊亮1，*，李文兵3

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，教育部中藥材標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川成都611137；2.綿陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川綿陽(yáng)621006；3.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川彭州610031）

以鹽酸川芎嗪為對(duì)照品，采用酸性染料比色法測(cè)定川芎總生物堿含量。以吸附率和解吸率為指標(biāo)，比較7種不同型號(hào)大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附與解吸附能力，考察動(dòng)態(tài)吸附與洗脫參數(shù)，篩選最佳大孔吸附樹脂純化富集川芎總生物堿的工藝條件。結(jié)果表明AB-8型大孔樹脂對(duì)川芎總生物堿的吸附與解吸性能最好，靜態(tài)吸附率為75.10%，解吸率為81.45%，靜態(tài)吸附和解吸時(shí)間分別為12 h和8 h。其動(dòng)態(tài)富集工藝條件為：最佳上樣液pH為8.0，上樣質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL，上樣量為8 BV，用13 BV去離子水除雜后，再用14 BV體積分?jǐn)?shù)85%的乙醇進(jìn)行洗脫。經(jīng)AB-8大孔樹脂純化富集后，川芎總生物堿純度提高了2.38倍，回收率為75.15%（RSD＝1.22%，n＝3）。

川芎；總生物堿；大孔吸附樹脂；純化富集

川芎始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為常用君藥，是傘形科藁本屬植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根莖，主要分布于四川都江堰、彭州、新都等地，為川產(chǎn)道地藥材[1-3]。其味辛、微苦、性溫，歸肝、膽、心包經(jīng)，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，可泡酒喝，也可泡茶喝，或者燉雞煨肉食用。在飲食及人群方面，適宜于患有月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀痛等病癥的人群[4]；還可以用于風(fēng)寒頭痛、風(fēng)熱頭痛、偏頭痛、血管神經(jīng)性頭痛等癥的人群[5]；以及有著各種瘀血阻滯之病癥的人群[6]。川芎總生物堿作為一個(gè)有效成分群，在治療心腦血管疾病方面的療效顯著[7-9]。因此，分離純化川芎總生物堿具有重要的意義。

大孔吸附樹脂具有比表面積大、吸附容量大、選擇性好、前處理簡(jiǎn)便、使用周期長(zhǎng)、且不溶于酸堿及有機(jī)溶劑等優(yōu)點(diǎn)[10-11]，尤其在分離純化生物堿類化合物的應(yīng)用中取得了很好的效果[12-13]。但目前尚未見(jiàn)有大孔吸附樹脂分離純化川芎總生物堿的研究報(bào)道。本研究在前期提取工藝基礎(chǔ)上，以富集川芎總生物堿量為目的，采用靜態(tài)吸附分離法篩選最佳型號(hào)的大孔吸附樹脂，動(dòng)態(tài)吸附分離法優(yōu)化純化工藝條件，為進(jìn)一步研究川芎總生物堿提取物的制備提供科學(xué)方法，也為川芎相關(guān)新藥的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

川芎飲片：由四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司提供，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院李敏老師鑒定為傘形科多年生草本植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的根莖?，F(xiàn)存于成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，標(biāo)本號(hào)：LC-20150910。

鹽酸川芎嗪對(duì)照品：中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)110817-201006，含量為83.9%；所用其它試劑均為市售分析純。

大孔吸附樹脂：ADS-5、ADS-7（天津浩聚樹脂科技有限公司）；HPD-100、HPD-500、HPD-600（河北滄州寶恩化工有限公司）；AB-8、D101（安徽三星樹脂科技有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

Analytikjena SPECORD/200型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、石英比色皿：德國(guó)耶拿分析儀器股份公司；FA2004B型電子天平：上海越平科學(xué)儀器有限公司；AUW220D電子分析天平：SHIMADZU CORPORATION；HX-200型高速中藥粉碎機(jī)：浙江省永康市溪岸五金藥具廠；SHZC-4263型臥式恒溫振蕩器：成都瑞昌儀器制造有限公司；PHS-25酸度計(jì)：成都世紀(jì)方舟科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用酸性染料比色法測(cè)定川芎總生物堿含量[14]。精密稱取鹽酸川芎嗪對(duì)照品12.19 mg（含量83.9%），加氯仿溶解并定容至10 mL，制得對(duì)照品儲(chǔ)備液（1.022 7 mg/mL）。分別精密吸取鹽酸川芎嗪對(duì)照品儲(chǔ)備液 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于 6 個(gè) 60 mL 分液漏斗中，分別加入含4.0 mL pH 3.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液和7.0 mL溴甲酚綠溶液。隨后以10、7、6 mL氯仿萃取3次，收集合并氯仿層，用氯仿定容至25 mL，加入1.0 g無(wú)水硫酸鈉，搖勻，除水30 min后，以不加鹽酸川芎嗪同法萃取制得空白對(duì)照，在417 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，以鹽酸川芎嗪的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 總生物堿的含量測(cè)定

精密稱取一定量的川芎粉末，按照前期研究?jī)?yōu)選的提取工藝：即加入15倍量80%乙醇100℃加熱回流提取2.5 h，將所得藥液過(guò)濾合并濃縮蒸干。殘?jiān)? mol/L的鹽酸60 mL溶解，濾過(guò)，濾液用濃氨水調(diào)pH值為9～10后，用氯仿萃取至無(wú)色，合并氯仿萃取液，濃縮蒸干，得總生物堿粗品，加氯仿溶解定容。精密吸取1 mL生物堿粗品溶液，按照“1.3.1”項(xiàng)下方法操作，以不加樣品同法萃取制得空白溶液。在417 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算總生物堿含量。

1.3.3 大孔樹脂靜態(tài)吸附性能的考察

1.3.3.1 靜態(tài)吸附與靜態(tài)解吸

參照文獻(xiàn)[15]對(duì) 7 種大孔樹脂（ADS-5、ADS-7、D101、AB-8、HPD-100、HPD-500、HPD-600）進(jìn)行預(yù)處理，采用靜態(tài)吸附與解吸法[16]篩選純化川芎生物堿的樹脂類型。具體操作如下：

靜態(tài)吸附與解吸：分別準(zhǔn)確稱取7種預(yù)處理好的大孔樹脂3份，每份各1.0 g，置于50 mL的具塞磨口三角瓶中，然后分別加入總生物堿質(zhì)量濃度為0.398 2 mg/mL的川芎水溶液35 mL，于恒溫振蕩器25℃振搖吸附24 h，充分吸附后抽濾，濾液濃縮干后氯仿定容至5 mL。取上述吸附已達(dá)飽和并沖洗濾干的樹脂，加入35 mL 95%的乙醇溶液，然后于恒溫振蕩器上25℃振蕩24 h，充分解吸后再抽濾，濾液濃縮干后氯仿定容至5 mL。分別吸取1.0 mL上述供試品溶液，按“1.3.1”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，計(jì)算各種樹脂對(duì)川芎生物堿的比吸附量與吸附率、比解吸量與解吸率，計(jì)算公式如下。

比吸附量=（C0V0-CMVM）/W；吸附率/%=（C0V0-CMVM）/C0V0×100；比解吸量=CEVE/W；解吸率/%=CEVE/（C0V0-CMVM）×100。

式中：C0為上樣液中總生物堿的質(zhì)量濃度，mg/mL；V0為上樣液的體積，mL；CM為吸附殘液中總生物堿的質(zhì)量濃度，mg/mL；VM為吸附殘液體積，mL；CE為乙醇洗脫液中總生物堿的質(zhì)量濃度，mg/mL；VE為乙醇洗脫液體積，mL；W為樹脂質(zhì)量，g。

1.3.3.2 靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)考察

精密稱取預(yù)處理的AB-8型樹脂2.5 g，置于50 mL磨口錐形瓶中，精密加入總生物堿質(zhì)量濃度為1.221 3 mg/mL的川芎水溶液25 mL，于恒溫振蕩器25 ℃下振搖，平行 3 次，分別在 2、4、6、8、10、12、24 h時(shí)吸取上清液3.0 mL，濃縮蒸干。同時(shí)將吸附24 h后的樹脂用蒸餾水沖洗后抽干，加入95%乙醇25 mL進(jìn)行解吸，25 ℃下振搖，平行 3 次，分別在 2、4、6、8、10、12、24 h時(shí)吸取上清液3.0 mL，濃縮蒸干，上述殘?jiān)謩e加氯仿溶解按“1.3.1”項(xiàng)下方法測(cè)定上清液中殘留總生物堿含量。

1.3.4 AB-8大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附與洗脫條件的考察

1.3.4.1 上樣液pH值對(duì)川芎總生物堿富集的影響

準(zhǔn)確量取5份預(yù)處理好的AB-8型大孔樹脂10 mL，濕法裝于徑高比為1∶20的玻璃柱中（直徑 2.5 cm、高50 cm），平行3份，用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl酸度計(jì)調(diào)節(jié)pH值后，分別加入pH值為 3、5、7（原液）、9、11的川芎總生物堿水溶液 50 mL進(jìn)行充分吸附12 h后將多余吸附殘液放出，先用蒸餾水洗至流出液無(wú)色，水洗液與吸附殘液合并，氯仿定容至5.0 mL容量瓶中，精密吸取0.2 mL測(cè)定吸光度，并計(jì)算吸附率。

1.3.4.2 上樣液濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響

準(zhǔn)確量取6份預(yù)處理好的AB-8型大孔樹脂10mL，置于玻璃柱中，平行3份，分別精密加入pH 9的含川芎總生物堿質(zhì)量濃度為 0.896 0、1.792 0、2.688 0、3.584 0、4.479 9、5.375 9 mg/mL水溶液，于充分吸附12 h后將多余吸附殘液放出，用蒸餾水洗脫至流出液無(wú)色，水洗液與吸附殘液合并，氯仿定容至5.0 mL容量瓶中，精密吸取0.2 mL測(cè)定吸光度，并計(jì)算吸附率。

1.3.4.3 上樣量對(duì)川芎總生物堿富集的影響

準(zhǔn)確量取預(yù)處理好的AB-8型大孔樹脂10 mL，置于玻璃柱中，平行3份，精密吸取pH 9的川芎生物堿質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL水溶液，以2 BV/h的流速通過(guò)樹脂進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，用試管收集過(guò)柱液，每1 BV（10 mL）收集1份，每管分別精密吸取0.5 mL，測(cè)定川芎總生物堿的含量。

1.3.4.4 水洗用量對(duì)川芎總生物堿富集的影響

準(zhǔn)確量取預(yù)處理好的AB-8型大孔樹脂10 mL，置于玻璃柱中，平行3份，精密吸取pH 9的川芎生物堿質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL水溶液70 mL于樹脂中進(jìn)行吸附，待充分吸附后加入去離子水，以2 BV/h的流速洗脫，流出液每1 BV收集1份，測(cè)定川芎總生物堿的質(zhì)量。

1.3.4.5 乙醇洗脫濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響

準(zhǔn)確量取5份預(yù)處理好的AB-8型大孔樹脂10mL，置于玻璃柱中，平行3份，分別加入pH 9的川芎生物堿提取液，按上樣量與樹脂體積比1∶30（g/mL）進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，吸附完成后，用13 BV去離子水洗除去雜質(zhì)，分別用體積分?jǐn)?shù)35%、55%、75%、85%、95%的乙醇溶液進(jìn)行動(dòng)態(tài)解吸附，將洗脫液濃縮蒸干，氯仿定容至5.0 mL容量瓶中，精密吸取0.1 mL測(cè)定測(cè)定總生物堿的含量。

1.3.4.6 乙醇洗脫用量對(duì)川芎總生物堿富集的影響

準(zhǔn)確量取預(yù)處理好的AB-8型大孔樹脂10 mL，置于玻璃柱中，平行3份，精密吸取pH 9的川芎生物堿質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL水溶液70 mL于樹脂中進(jìn)行吸附，待充分吸附12 h后加入先用13 BV去離子去雜質(zhì)，再加入75%乙醇，以2 BV/h的流速收集洗脫液，每1 BV收集1份，測(cè)定總生物堿的含量。

1.3.5 正交試驗(yàn)

結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取上樣液pH值（A）、上樣液濃度（B）、乙醇洗脫濃度（C）、上樣量（D）為影響因素，設(shè)計(jì)四因素三水平正交試驗(yàn)L9（34），如表1所示。根據(jù)正交設(shè)計(jì)方案（表2），以川芎總生物堿含量為考察指標(biāo)，確定大孔樹脂純化川芎總生物堿的最佳工藝條件。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表Table 1 The factors and levels of orthogonal experiment

1.3.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照正交試驗(yàn)優(yōu)選的最佳純化工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證，試驗(yàn)平行3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 川芎總生物堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線

以鹽酸川芎嗪的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.017 82X-0.029 07，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 4。結(jié)果表明，鹽酸川芎嗪在濃度 4.09 μg/mL～40.90 μg/mL 范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2 樹脂極性對(duì)川芎總生物堿分離效果的影響

本試驗(yàn)選用非極性的ADS-5、D101、HPD-100型、弱極性的AB-8型以及極性的ADS-7、HPD-500、HPD-600型7種大孔吸附樹脂，定性地考察樹脂極性對(duì)川芎總生物堿分離效果的影響。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 樹脂型號(hào)對(duì)川芎總生物堿富集的影響Fig.1 Effects of macroporous resin types on the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.

由圖1可知，7種大孔吸附樹脂的比吸附量按大小依次為 AB-8＞HPD-500 ＞HPD-600＞ADS-5＞D101＞ADS-7＞HPD-100；解吸率依次為 AB-8＞HPD-600＞HPD-100＞ADS-5＞D101＞HPD-500＞ADS-7。由于弱極性的AB-8大孔樹脂對(duì)川芎生物堿吸附解吸性能最好，因此選擇AB-8型樹脂純化川芎總生物堿。

2.3 AB-8樹脂靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)考察結(jié)果

以比吸附量和比解吸量（mg/g）對(duì)時(shí)間t（h）作圖，得到AB-8型大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附和解吸動(dòng)力學(xué)曲線見(jiàn)圖2。

圖2 AB-8型大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附和解吸動(dòng)力學(xué)曲線Fig.2 Kinetic curve of static adsorption and desorption for AB-8 macroporous resin

由圖2可知，AB-8型大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附過(guò)程中的比吸附量在4 h后增加緩慢，12 h后基本達(dá)到平衡，而在靜態(tài)解吸過(guò)程中的比解吸量在8 h后基本達(dá)到平衡。因此，選擇靜態(tài)吸附時(shí)間為12 h，解吸時(shí)間為8 h。

2.4 上樣液pH值對(duì)川芎總生物堿富集的影響

上樣液pH值對(duì)川芎總生物堿富集的影響見(jiàn)圖3。

圖3 上樣液pH值對(duì)川芎總生物堿富集的影響Fig.3 Effects of sample pH on the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.

結(jié)果表明，pH 值為 3、5、7（原液）、9、11 時(shí)，吸附率分別為 65.13%、74.24%、79.41%、88.30、58.89%（n=3）?？梢?jiàn)，上樣液pH值在3～9之間時(shí)，隨著pH值的升高，樹脂對(duì)樣品中總生物堿的吸附量增加；當(dāng)pH值超過(guò)9時(shí)，樹脂對(duì)總生物堿的吸附量降低。因此，選擇pH值9為樣液的最佳上樣pH值。

2.5 上樣液濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響

上樣液濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響見(jiàn)圖4。

由圖4可得，當(dāng)上樣濃度為0.8960、1.7920、2.6880、3.584 0、4.479 9、5.375 9 mg/mL 時(shí)，吸附率分別為66.52%、74.26%、77.73%、79.36、80.68%、80.78%（n=3）。當(dāng)上樣液質(zhì)量濃度低于3.584 0 mg/mL時(shí)，吸附率隨上樣濃度增大而上升，當(dāng)上樣液質(zhì)量濃度達(dá)到4.479 9 mg/mL時(shí)，再增加濃度（5.375 9 mg/mL）對(duì)吸附率沒(méi)有顯著影響。綜合考慮，最終選用質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL。

圖4 上樣液濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響Fig.4 Effects of sample concentration on the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.

2.6 上樣量對(duì)川芎總生物堿富集的影響

上樣量對(duì)川芎總生物堿富集的影響（泄露曲線）結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 上樣量對(duì)川芎總生物堿富集的影響Fig.5 Effects of sample volume on the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.

由圖5可見(jiàn)，當(dāng)上樣體積達(dá)到7 BV時(shí)，樹脂柱中總生物堿成分呈現(xiàn)完全泄露，大孔樹脂對(duì)樣品液中總生物堿吸附飽和。故確定最佳上樣量為7 BV，相當(dāng)于10 mL樹脂上樣70 mL總生物堿質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL的川芎提取液，即最佳上樣量與樹脂體積比約為 1∶30（g/mL）。

2.7 水洗用量對(duì)川芎總生物堿富集的影響

水洗用量對(duì)川芎總生物堿富集的影響見(jiàn)圖6。

由圖6可知，隨著水洗用量的增加，流出液中的總生物堿逐漸減少，當(dāng)水洗用量為13 BV時(shí)，流出液中的總生物堿已經(jīng)很少。因此，確定最佳的水洗用量為13BV。

2.8 乙醇洗脫濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響

乙醇洗脫濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響見(jiàn)圖7。

由圖7可見(jiàn)，當(dāng)乙醇洗脫濃度低于75%時(shí)，隨著乙醇濃度的增大，樹脂上解吸附下來(lái)的總生物堿含量隨之升高，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到85%時(shí)，樹脂上解吸附下來(lái)的總生物堿含量反而降低，以洗脫濃度為75%的乙醇解吸效果最好。因此，確定乙醇最佳洗脫濃度為75%。

2.9 乙醇洗脫量對(duì)川芎總生物堿富集的影響

乙醇洗脫量對(duì)川芎總生物堿富集的影響見(jiàn)圖8。

圖6 水洗用量對(duì)川芎總生物堿富集的影響Fig.6 Effects of the quantity of elution water on the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.

圖7 乙醇洗脫濃度對(duì)川芎總生物堿富集的影響Fig.7 Effects of the concentration of elution ethanol on the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.

圖8 乙醇洗脫用量對(duì)川芎總生物堿富集的影響Fig.8 Effects of the quantity of elution ethanolon the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.

結(jié)果表明，隨著乙醇洗脫用量的增加，樣品中總生物堿逐漸被洗脫下來(lái)，當(dāng)洗脫劑用量為14 BV時(shí)，洗脫液中的總生物堿已基本洗脫完全。因此，確定乙醇最佳洗脫用量為14 BV。

2.10 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

根據(jù)正交設(shè)計(jì)方案，按“1.3.1”項(xiàng)下方法于417 nm處測(cè)定9份試驗(yàn)樣品總生物堿含量。正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析見(jiàn)表2、表3。

表2 正交試驗(yàn)L9（34）方案及結(jié)果Table 2The results and scheme of L9（34）orthogonal experiment

表3 正交試驗(yàn)方差分析表Table 3 The table of variance analysis of orthogonal experiment

由表2中R值可以看出，影響川芎總生物堿含量的的因素主次順序依次為A＞B＞C＞D，即上樣液pH值對(duì)生物堿含量的影響最大，其次為上樣液濃度，乙醇洗脫濃度和上樣量。由表3方差分析可知，因素A的影響顯著（P＜0.1），因素B和C的影響均不顯著（P＞0.1），因素D因離均差平方和最小作為誤差估計(jì)項(xiàng)，影響最小。因此，最終確定大孔樹脂純化川芎總生物堿最佳工藝條件為A1B2C3D3。即上樣液pH 8，上樣濃度4.479 9 mg/mL，乙醇洗脫濃度85%，上樣量8 BV作為實(shí)施方案加以驗(yàn)證。

2.11 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照優(yōu)選的最佳純化工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證：即量取已處理好的AB-8大孔樹脂300 mL濕法裝柱，精密吸取pH 8的總生物堿質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL的川芎水溶液8 BV上樣，吸附12 h后，先用13 BV去離子水除雜后，再用14 BV體積分?jǐn)?shù)85%的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，蒸干，稱取一定量氯仿定容至25 mL。分別精密吸取0.1 mL，按“1.3.1”項(xiàng)下方法于417nm處測(cè)定試驗(yàn)樣品中川芎總生物堿的含量（mg/g）。另外，分別精密吸取未經(jīng)AB-8大孔樹脂純化的原提取液25 mL，以及純化后重新溶解的溶液25 mL，放置于蒸發(fā)皿烘干至恒重，稱定重量，計(jì)算浸膏中總生物堿含有量（mg/g）。試驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 AB-8大孔樹脂純化川芎總生物堿的驗(yàn)證試驗(yàn)（n=3）Table 4 Verification tests for the purification of total alkaloids from L.chuanxiong Hort.by macroporous resin（n=3）

由表4可知，經(jīng)AB-8大孔樹脂純化川芎總生物堿后，所得浸膏中總生物堿的含有量由58.30 mg/g提高到137.28 mg/g，純化后純度提高了2.38倍，回收率為75.15%（RSD=1.22%，n=3）?？梢?jiàn)AB-8大孔吸附樹脂可作為一種良好的純化川芎總生物堿的樹脂使用。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)首次采用靜態(tài)吸附分離法優(yōu)選了AB-8大孔吸附樹脂為純化川芎總生物堿的最佳型號(hào)樹脂。正交試驗(yàn)優(yōu)化了動(dòng)態(tài)富集最佳工藝條件：上樣液pH值為8.0，上樣質(zhì)量濃度為4.479 9 mg/mL，上樣量為8 BV，用13 BV去離子水除雜后，再用14 BV體積分?jǐn)?shù)85%的乙醇進(jìn)行洗脫。川芎總生物堿經(jīng)AB-8大孔樹脂純化后，所得浸膏中總生物堿的含量由58.30 mg/g提高到137.28 mg/g，純化后純度提高了2.38倍，回收率為75.15%（RSD=1.22%，n=3）。該工藝簡(jiǎn)單可行，純化富集效果較好，對(duì)大生產(chǎn)有一定指導(dǎo)作用。

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Purification and Enrichment of Total Alkaloids from Ligusticum chuanxiong Hort.by Macroporous Resin

PU Zhong-hui1，2，WANG Li1，GAO Yu1，ZHANG Xiao1，PENG Cheng1，*，XIONG Liang1，*，LI Wen-bing3
（1.Pharmacy College，Chengdu University of TCM，The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine，State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research，Development and Utilization of Chinese Medicine Resources，Chengdu 611137，Sichuan，China；2.College of Life Science and Technology，Mianyang Normal University，Mianyang 621006，Sichuan，China；3.Sichuan Neo-Green Pharmaceutical Technology Development Co.，Ltd.，Pengzhou 610031，Sichuan，China）

The content of the total alkaloids was measured by acid dye colorimetry with ligustrazine hydrochloride as reference substance.Taking the adsorption and desorption rates as index，the best macroporous resin was screened out from seven resins by static adsorption method，elution parameters were optimized by dynamic adsorption method.Results showed that AB-8 was considered the best purification and enrichment potency for total alkaloids from L.chuanxiong Hort.The static absorbtion ratio was 75.10%and desorption ratio was 81.45%.Optimal purification process conditions were as follows：the concentration of sample solution 4.4799 mg/mL with pH as 8.0，maximum sample volume 8 BV，washed by 13 BV purified water and 14 BV 85%ethanol.The purity of total alkaloids was 2.38 times higher than before enrichment，the average recovery rate was 75.15%in 3 validation tests（RSD=1.22%，n＝3）.

Ligusticum chuanxiong Hort.；total alkaloids；macroporous resin；purification and enrichment

2016-08-26

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.11.019

四川省科技支撐計(jì)劃（2015SZ0031）；科技基礎(chǔ)性工作專項(xiàng)計(jì)劃（2015FY111500-140）

蒲忠慧（1982—），女（漢），講師，在讀博士，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

*通信作者：彭成，研究員，博士生導(dǎo)師，從事中藥藥效與毒理研究；熊亮，副研究員，碩士生導(dǎo)師，從事天然藥物化學(xué)成分及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。